蒙雪雁，王成海

（1.廣西中醫(yī)藥大學藥學院，南寧 530200；2.廣東省東莞國藥集團常平醫(yī)藥公司，廣東 東莞 523560）

雞爪風（Desmos chinensislour.）為番荔枝科（Annonaceae）假鷹爪屬（Desmoslour）植物，又名碎骨王、雞香木、雞爪木、假鷹爪、酒餅藤，主要分布在廣東、廣西、云南和貴州等地。其莖作為民間習用藥材具有悠久歷史，記載于《嶺南采藥錄》，其味辛、性溫、有小毒、歸脾、肝經(jīng)；行氣消滯、祛風止痛、殺蟲；用于治療消化不良、產(chǎn)后腹痛、風濕痹痛、跌打損傷、瘧疾、水腫、魚骨梗喉、疥癬等［1-3］。雞爪風主要化學成分為黃酮類、揮發(fā)油類及生物堿類等［4］?，F(xiàn)代藥理研究表明，雞爪風具有抗腫瘤、抗艾滋病毒（HIV）、抗氧化、抗菌、強心、抑制芳香酶和脂肪氧化酶、抑制活化T細胞核因子（NFAT）轉錄等多種生物活性［5］。 本研究通過UPLC-Q-TOF-MS∕MS 技術對雞爪風莖甲醇提取物的化學成分進行定性分析，旨在為闡明雞爪風的藥效物質基礎提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器

Sciex X500R Q-TOF 液質聯(lián)用儀，美國Sciex 公司，配有ESI 源和Sciex OS 數(shù)據(jù)處理軟件；Waters Acquity Arc 超高效液相色譜儀，四元泵、自動進樣器、柱溫箱、2998PDA 檢測器、Waters 工作站，沃特世科技（上海）有限公司；SB-800DTD 型超聲波清洗機，寧波新芝生物科技股份有限公司；SQP 型十萬分之一電子分析天平，賽多利斯科學儀器有限公司。

1.2 試驗材料

試驗所用雞爪風藥材采集于廣西壯族自治區(qū)貴港市；乙腈（HPLC 級，德國Merck 集團）；甲酸（LC∕MS 級，賽默飛世爾科技公司）；甲醇（分析純，成都市科隆化學品有限公司）；水為超純水。

1.3 試驗方法

1.3.1 色譜及質譜檢測條件 色譜柱為Thermo scientific Accucore C18柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）；流動相為乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脫：0～1 min，5%乙腈；1～5 min，5%～27%乙腈；5～15 min，27%～70%乙腈；15～18 min，70%～95%乙腈；18～20 min，5%～95%乙腈；體積流量0.4 mL∕min；柱溫40.0 ℃；進樣量3 μL。

質譜條件，電噴霧電離源（ESI），正、負離子模式，掃描范圍m∕z 100～2000；碰撞能量35 eV；離子源溫度為600 ℃；噴霧電壓5500 V。通過一級質譜信息確定精確相對分子質量，二級質譜獲得裂解信息，搜索數(shù)據(jù)庫和查閱文獻推測化合物的結構式信息。

1.3.2 供試品溶液的制備 取干燥雞爪風莖粗粉0.0593 g，加甲醇至2 mL，超聲30 min。取適量提取物溶于甲醇，配制成1 mg∕mL 樣品溶液，用0.22 μm濾膜過濾，裝于液相小瓶內，待用。

2 結果與分析

采用UPLC-Q-TOF-MS∕MS 對雞爪風莖甲醇提取物進行分析，選擇正、負離子模式分別對供試品溶液進行掃描，總離子流（Total ions current，TIC）見圖1和圖2。通過SCIX OS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)查找質譜響應較高成分的精確相對分子質量，與天然產(chǎn)物高分辨質譜數(shù)據(jù)庫（natural procducts HR- MSMS 2.0）進行比對，獲得候選化合物，然后通過二級碎片離子及母離子可能的斷裂規(guī)律來確定其結構。結果顯示，從雞爪風中鑒定出27 個化學成分，各化學成分的保留時間、質譜信息見表1。通過UPLC-Q-TOF-MS∕MS聯(lián)用技術，并通過對比參考文獻對化學成分進行了初步鑒定，發(fā)現(xiàn)所含成分可分為氨基酸及其衍生物、有機酸、黃酮類、核苷類及其他5 大類成分。

表1 雞爪風化學成分的UPLC-Q-TOF-MS/MS 鑒定結果

圖1 雞爪風莖甲醇提取物正離子總離子流

2.1 氨基酸及其衍生物類

在雞爪風中共鑒定出3 個氨基酸及其衍生物（序號1、6、7）。在正離子模式下，化合物1 產(chǎn)生m∕z 266.1236［M+H］+的準分子離子峰，對應分子式C10H19NO7；其 主 要 的 二 級 碎 片 有m∕z 98.0601，194.0819，230.1023，結合數(shù)據(jù)庫匹配及其碎片信息并參考文獻［6］，鑒定為γ-氨基丁酸葡萄糖苷?；衔? 在正離子模式下產(chǎn)生294.1549［M+H］+的準分子離子峰，對應的分子式為C12H23NO7。其主要的二級碎片有m∕z 86.0970，230.1403，276.1454，結合數(shù)據(jù)庫匹配及碎片信息并參考文獻［7］數(shù)據(jù)，推測為異亮氨酸果糖苷?；衔? 在正離子模式下產(chǎn)生166.0863［M+H］+的準分子離子峰，對應的分子式為C9H11NO2。其主要的二級碎片有m∕z 103.0549，120.0814，結合數(shù)據(jù)庫匹配及碎片信息并參考文獻［7］數(shù)據(jù)，推測為苯丙氨酸。

2.2 有機酸類

在雞爪風中共鑒定出11 個有機酸類成分（序號分別為2、3、8～13、20、22、24、25），該類成分的二級質譜裂解特征通常易失去H2O、CO、CO2、CH2等中性碎片。以化合物20 為例，在正離子模式下產(chǎn)生149.0599［M+H］+的準分子離子峰，對應的分子式為C9H8O2。其主要的二級碎片有m∕z 103.0555，149.0245，結合數(shù)據(jù)庫匹配及碎片信息并參考文獻［10］數(shù)據(jù)，推測為肉桂酸，其可能裂解途徑如圖3 所示。肉桂酸在癌癥干預中有潛在的用途，其對膠質母細胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、肺癌細胞均有抑制作用［22］。

圖3 肉桂酸可能的裂解途徑

2.3 黃酮類

黃酮類化合物是中草藥常見的有效成分，本研究共鑒定出雞爪風中4 個黃酮類成分（序號分別為14～16、21）。黃酮類成分能夠減輕關節(jié)炎程度，保護關節(jié)組織，減少滑膜增生，血管翳形成，軟骨破壞和骨侵蝕改善關節(jié)組織關節(jié)翳形成，炎性細胞浸潤和骨侵蝕［23］。根據(jù)其二級碎片離子和相應文獻，分別鑒定為柚皮素、柚皮苷或異構體、槲皮素及芒柄花素。

2.4 核苷類

在雞爪風莖甲醇提取物中共鑒定出2 個核苷類成分（序號分別為4、5）?；衔? 在正離子模式下產(chǎn)生m∕z 268.1034［M+H］+的準分子離子峰，對應分子式C10H13N5O4；其主要的二級碎片離子m∕z 136.0618 分子組成與腺嘌呤堿基一致。結合數(shù)據(jù)庫匹配和二級碎片并參考文獻［7］數(shù)據(jù)，鑒定為腺苷?；衔? 在負離子模式下產(chǎn)生m∕z 282.0886［M-H］-的準分子離子峰，對應分子式C10H13N5O5；其主要的二級碎片離子m∕z 150.0440，其可能裂解過程見圖4。

圖4 鳥苷可能的裂解途

2.5 其他類

在人參配方顆粒標準湯劑中共鑒定出6 個其他類成分（序號分別為12、17～19、23、27）。其中，化合物17 在負離子模式下產(chǎn)生m∕z 623.1640［M-H］-的準分子離子峰，對應分子式C29H36O15，結合數(shù)據(jù)庫匹配并參考文獻［6］，離子m∕z 315.0532 是由分子離子依次脫去咖啡?；?、鼠李糖殘基產(chǎn)生，再繼續(xù)丟失一分子葡萄糖并脫水后得到，鑒定為毛蕊花糖苷。

3 小結

本研究鑒別出的有機酸類化合物較多，可能與提取方法有關。中藥有機酸類成分藥理作用廣泛，如抗炎癥反應，抑制血小板聚集、抗血栓，抗氧化，誘導腫瘤細胞凋亡等［24］。本研究通過UPLC-QTOFMS∕MS 分析，鑒定雞爪風莖潛在的主要成分，并查閱相關報道了解這些化合物的主要藥理活性，發(fā)現(xiàn)存在抗癌、抗炎等活性成分，與雞爪風傳統(tǒng)藥理作用一致，為以后提取分離條件提供重要參考以及后期的抗炎活性研究提供依據(jù)。