何 丹，楊銘芬，楊錦蘭，張 兵

（南寧市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，南寧 530001）

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一種急性、高度接觸性人畜共患傳染病［1］。根據(jù)A 型流感病毒的血凝素（HA）與神經(jīng)氨酸酶（NA）不同，已發(fā)現(xiàn)16 個(gè)HA 亞 型 和9 個(gè)NA 亞 型［2］。高 致 病 性 禽 流感 病毒（Highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV）給養(yǎng)禽業(yè)帶來不可估量的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重威脅到人類身體健康。針對AIV 抗原變異性強(qiáng)、抗原性逐漸變異的特點(diǎn)，科研人員不斷研制出一系列疫苗在家禽中大規(guī)模使用，并取得了理想的防控效果［3，4］。2017年9月起，原農(nóng)業(yè)部要求全國采用重組禽流感（H5+H7）疫苗對家禽進(jìn)行強(qiáng)制免疫，各地對重組疫苗進(jìn)行了一系列評估［5-7］。免疫抗體監(jiān)測是了解疫苗免疫效果的有效方法，及時(shí)掌握疫苗使用效果非常必要。本試驗(yàn)對南寧市轄區(qū)內(nèi)4 個(gè)規(guī)模雞場的樣品進(jìn)行HPAIV 抗體檢測，客觀評價(jià)疫苗臨床效果，以期制訂更合理的免疫程序，為禽流感綜合防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

分別從4 個(gè)規(guī)模雞場選擇14 日齡左右、同一批次的雞。

1.1.1 種雞 種雞A場5000羽（疫苗批號(hào)2020016），種雞B 場5000 羽（疫苗批號(hào)2020017）；對照組各100 羽。

1）免疫。試驗(yàn)組首次免疫肌肉注射疫苗0.3 mL∕羽；21 d 后第二次免疫0.5 mL∕羽。對照組以相同劑量和方式注射生理鹽水。

2）采樣。首免前采樣，首免后第1、2、3 周及二免后第2、4、6 周，首免后5、6 個(gè)月采樣。每次隨機(jī)采集50 羽免疫雞和10 羽對照雞血清，及對應(yīng)的喉頭、泄殖腔棉拭子。

1.1.2 肉雞 肉雞C 場（95 d 出欄）900 羽，肉雞D 場（70 d 出欄）900 羽，疫苗批號(hào)均為2020016；對照組各100 羽。

1）免疫。C 場試驗(yàn)組接種方法同種雞；D 場試驗(yàn)組肌肉注射疫苗0.5 mL∕羽；對照組分別以相同劑量和方式注射生理鹽水。

2）采樣。C 場首免前采樣，首免后第1、2、3 周及二免后第2、4、6 周采樣，直至出欄。D 場免疫前采樣，免疫后每周采樣，直至出欄。每次隨機(jī)采集50羽免疫雞和10 羽對照雞血清，及對應(yīng)的喉頭、泄殖腔棉拭子。

1.2 疫苗與試劑

1.2.1 疫苗 重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-11 株+Re-12 株、H7N9 H7Re-3 株），批號(hào)2020016、2020017，廣東永順生物制藥股份有限公司生產(chǎn)。

1.2.2 試劑 禽流感病毒H5 亞型（Re-11 株）血凝抑制抗原，批號(hào)20201218，哈爾濱國生生物科技股份有限公司生產(chǎn)；禽流感病毒H5 亞型（Re-12 株）血凝抑制抗原，批號(hào)20210105；禽流感病毒H7N9 亞型（Re-3 株）血凝抑制抗原，批號(hào)20210525。禽流感病毒H5 和H7 亞型雙重實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 檢測試劑盒，批號(hào)AIV-H5＆H720210531P，北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 抗體檢測

采集的血清分別檢測H7N9 H7-Re3 株和H5N1 Re-11 株、H5N1 Re-12 株抗體，按照國家標(biāo)準(zhǔn)《GB∕T 18936—2020 高致病性禽流感診斷技術(shù)》中HA、HI試驗(yàn)方法進(jìn)行。HI 抗體滴度≥4log2 為免疫抗體合格，免疫合格個(gè)體數(shù)量占群體總數(shù)的70%（含）以上為免疫合格群體。

1.4 核酸檢測

喉頭、泄殖腔棉拭子按試劑盒方法進(jìn)行禽流感病毒核酸檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 種雞

注射批號(hào)2020016 疫苗的A 場免疫后H7 效價(jià)產(chǎn)生較H5 緩慢；A 場首免后第2 周H5、H7 抗體合格率達(dá)70%以上，第3 周達(dá)90%以上；二免后第2 周能保持較高水平，平均效價(jià)均可達(dá)9log2 以上，第4 周效價(jià)有所回落，第6 周回升。注射批號(hào)2020017 疫苗的B 場抗體效價(jià)上升較A 場緩慢，二免后同樣在第4周有所回落而后又回升，但均能保持較高效價(jià)水平。A、B 場首免第5、6 個(gè)月抗體效價(jià)均有所回落，差異不大（表1）。

表1 種雞A、B 場抗體水平

2.2 肉雞

從表2、表3 可知，肉雞C 場和D 場H5 抗體產(chǎn)生快，首免第3 周合格率達(dá)100%，平均效價(jià)達(dá)8log2 以上；H7 抗體產(chǎn)生較慢，首免第3 周合格率雖上升至80%以上，但平均效價(jià)不高。C 場在二免后抗體水平穩(wěn)定，第4 周效價(jià)回落，但直至出欄抗體合格率和平均效價(jià)均保持較高水平。D 場僅免疫1 次，平均效價(jià)穩(wěn)步上升至9 log2 以上，在第6 周開始逐步下降，合格率均保持較高水平。

表2 肉雞C 場抗體水平

3 小結(jié)與討論

不同批次的該重組禽流感病毒三價(jià)滅活疫苗在免疫禽群后均能產(chǎn)生抗體，合格率可達(dá)到90%以上，二免后能保持一定水平。該疫苗首免后第3 周H5、H7 抗體均能達(dá)到較高水平，未出現(xiàn)臨床發(fā)病情況，說明該疫苗有效性較好，保護(hù)率較高。H5 抗體產(chǎn)生較H7 快且穩(wěn)定，批號(hào)2020016 疫苗產(chǎn)生抗體比批號(hào)2020017 稍快，首免或二免后抗體合格率及效價(jià)出現(xiàn)短時(shí)間不同程度的回落現(xiàn)象，但很快又回升，可能跟疫苗批次、抗原濃度、水乳化程度及禽群種類、個(gè)體差異等有關(guān)。進(jìn)行二免的禽群比只進(jìn)行1次免疫的禽群抗體水平穩(wěn)定，相應(yīng)棉拭子樣品未檢測出H5 和H7 亞型禽流感病毒核酸陽性，未見試驗(yàn)養(yǎng)殖場反映有禽只異常死亡及明顯應(yīng)激現(xiàn)象，說明該疫苗安全性較好。試驗(yàn)禽群H5 母源抗體都較高，疫苗抗原性可能受影響，對免疫效果有一定影響。疫苗免疫程序、接種日齡、接種次數(shù)、間隔時(shí)間及免疫操作規(guī)范性都會(huì)影響免疫效果，制定科學(xué)免疫程序并嚴(yán)格執(zhí)行，能夠進(jìn)一步提高免疫效果，建議對日齡較大（如120 日齡）出欄的禽群進(jìn)行三免。