韓詠梅 程翠云

產前超聲檢查作為篩查胎兒畸形的常用方法,現(xiàn)已得到臨床廣泛應用,經超聲檢查能夠有效鑒別診斷異常胎兒,若胎兒為輕度畸形,可嚴重影響家庭生活質量,同時也會對家庭經濟造成嚴重負擔；若畸形情況嚴重,則會危及胎兒生命安全［1,2］。因此,盡早明確胎兒畸形情況,對指導臨床治療、改善妊娠結局、提高優(yōu)生優(yōu)育率等具有重要作用。在胎兒超聲軟指標檢查中可見其微小結構變化情況,通常在染色體正?；虍惓Ｌ褐芯砂l(fā)生,但前者發(fā)生率更高。目前,異常胎兒診斷以羊水穿刺結果作為“金標準”,對選擇性的染色體核型進行有效分析利于降低胎兒出生缺陷率,從而提高新生兒出生質量［3,4］。現(xiàn)階段,產前診斷的重要方法為染色體核型分析,但該方法檢測時間較長,同時受到顯微鏡分辨率、實驗室顯帶技術等因素影響,極易出現(xiàn)未知染色體異常、亞顯微異常等現(xiàn)象,影響判斷結果,從而導致誤診或漏診［5］。CMA 是近年發(fā)展起來的分子生物學檢測方法,其特點是分辨率高、檢測速度快、檢測通量高,可分辨出100 KB 以上的染色體片段變異。由于該基因芯片檢測不需要進行細胞培養(yǎng),因此其適用于細胞培養(yǎng)較難成功的檢測樣本,或者有明顯癥狀但常規(guī)核型分析未檢出異常的樣本。CMA技術包括基于微陣列的比較基因組雜交(array-based Comparative Genomic Hibridization,aCGH)技術和單核苷酸多態(tài)性微陣列技術,能夠在全基因組水平進行檢測染色體不平衡的CNVs,且較染色體核型分析具有更高的分辨率和敏感度,目前廣泛應用于胎兒異常的產前診斷［6］。鑒于此,本研究分析超聲異常胎兒產前診斷及妊娠結局,現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019 年11 月～2021 年10 月于本院行產前超聲檢查且發(fā)現(xiàn)異常妊娠的產婦265 例作為研究對象,年齡22～45 歲,平均年齡(31.58±2.37)歲；孕周18～34 周,平均孕周(22.63±1.74)周。本研究獲本院倫理委員會批準。

1.2 納入及排除標準 納入標準：常規(guī)產前超聲異常妊娠產婦；單胎妊娠；產婦及家屬簽署同意書。排除標準：妊娠前或妊娠期間存在其他系統(tǒng)惡性腫瘤；凝血及造血功能障礙；產檢資料缺乏；免疫系統(tǒng)疾病；既往存在不良妊娠史,或存在家族異常妊娠史；精神疾病或意識障礙,無法配合完成本次研究者。

1.3 方法①超聲檢查：使用超聲診斷儀(西門子公司)篩查胎兒發(fā)育系統(tǒng),具體包括頸后皮膚增厚、脈絡叢囊腫、腸管強回聲、心室強回聲光點、單臍動脈、腎盂擴張、輕度側腦室增寬、鼻骨短及胎兒結構畸形等,并仔細觀察胎兒發(fā)育異常的超聲檢查結果。②羊膜腔穿刺術：在無菌環(huán)境中應用超聲做引導采集25～30 ml 羊水進行檢測,其中取20 ml 行染色體核型分析,另5～10 ml 行CMA 檢測。③染色體核型分析：對抽取的羊水樣本行離心處理,以3500 r/min 速度離心10 min,離心半徑為10 cm,獲得上層清液,將離心后的沉淀物質制備為細胞懸液,隨后將其接種于羊水培養(yǎng)基上,待培養(yǎng)7 d 后觀察培養(yǎng)基上細胞生長情況,但在此基礎上需及時更換培養(yǎng)基中液體,再經低滲、消化、固定等操作制備為細胞懸液,再行制片、G 顯帶染色,明確每個標本顯帶選擇清晰、形態(tài)適中的核型行進一步分析。④CMA：嚴格按照Affymetrix Cyto Scan 750K芯片(55 萬CNV 探針和20 萬SNP 探針)的標準操作流程進行檢測：基因組DNA 酶切、連接、聚合酶鏈式反應(PCR)擴增、純化、片段化、標記,芯片雜交、洗滌及掃描。數(shù)據(jù)結果采用Chromosome Analysis Suite (ChAS 3.1)軟件進行分析,CNV 的報告閾值為200 KB 缺失、500 KB 重復。對CMA 檢出的CNV 結果判讀,主要參考常用國際公共數(shù)據(jù)庫,如基因組變異數(shù)據(jù)庫(DGV)、美國國家生物技術信息中心(NCBI)臨床突變數(shù)據(jù)庫(Clinvar)、劑量敏感判斷數(shù)據(jù)庫(ClinGen)、拷貝數(shù)變異數(shù)據(jù)庫(Decipher)等公共數(shù)據(jù)庫及本實驗室內部數(shù)據(jù)庫進行數(shù)據(jù)分析,將CNVs 分為致病性、疑似致病性、VOUS、可能良性及良性。

1.4 觀察指標①分析超聲異常胎兒的染色體核型分析結果；②分析超聲異常胎兒的CMA 結果；③分析超聲異常胎兒的妊娠結局。

2 結果

2.1 超聲異常胎兒的染色體核型分析結果 265 例超聲異常胎兒中,行染色體核型分析的胎兒205 例,共檢出染色體異常29 例,檢出率為14.15%(29/205)。包括染色體數(shù)目異常21 例,占比為72.41%(21/29)；結構異常8 例,占比為27.59%(8/29)。見表1。

表1 21 例染色體數(shù)目異常胎兒的超聲表現(xiàn)

2.2 超聲異常胎兒的CMA 結果 265 例超聲異常胎兒中共檢出CMA 異常56 例,檢出率為21.13%(56/265),包括染色體核型分析中檢出的染色體數(shù)目異常21 例,另發(fā)現(xiàn)致病性CNVs 9 例,占16.07%(9/56),VOUS 26 例,占46.43%(26/56)。見表2。

表2 CMA 異常胎兒的超聲表現(xiàn)

2.3 超聲異常胎兒的妊娠結局分析 所有超聲異常胎兒均接受電話隨訪,明確陽性30 例,占11.32%(30/265),引產36 例,流產或因死胎引產12 例。

3 討論

產前細胞遺傳學檢查的首選為染色體核型分析,通過該分析能夠檢出染色體非整倍體性異常及大片段的染色體結構異常等信息［7］。相關研究顯示［8,9］,常規(guī)的染色體核型分析與胎兒腦部發(fā)育、語言發(fā)育遲緩、生長發(fā)育遲緩等多種癥狀間聯(lián)系密切。

傳統(tǒng)的染色體核型分析需要經過細胞培養(yǎng)、制片、染色等復雜手段,且其分辨率一般為5～10 MB。但是很多遺傳疾病可能是由＜5 MB 的“亞顯微結構異?！睂е?常規(guī)核型分析技術難以發(fā)現(xiàn)。并且染色體培養(yǎng)的過程較困難,存在一定的細胞培養(yǎng)失敗幾率,給后期的分析和發(fā)報告帶來困難,且孕周＞26 周,羊水中胎兒脫落細胞老化,則不能行核型分析?；蛐酒瑱z測是近年發(fā)展起來的分子生物學檢測方法,其特點是分辨率高、檢測速度快、檢測通量高,可分辨出＞100 KB的染色體片段變異。由于該基因芯片檢測不需要進行細胞培養(yǎng),因此其適用于細胞培養(yǎng)較難成功的檢測樣本,或者有明顯癥狀但常規(guī)核型分析未檢出異常的樣本。基因芯片技術除了能檢出非整倍體異常,還可在全基因組范圍內檢測核型分析難以發(fā)現(xiàn)的微缺失和微重復、部分嵌合體、雜合性缺失/ 單親二倍體等,一次性同步檢測多種與出生缺陷相關的基因組異常［10］。但目前基因芯片無法分析染色體的結構變異。

本研究結果顯示,265 例超聲異常胎兒中,行染色體核型分析的胎兒205 例,共檢出染色體異常29 例,檢出率為14.15%(29/205)。包括染色體數(shù)目異常21 例,占比為72.41%(21/29)；結構異常8 例,占比為27.59%(8/29)。265 例超聲異常胎兒中共檢出CMA 異常56 例,檢出率為21.13%(56/265),包括染色體核型分析中檢出的染色體數(shù)目異常21 例,另發(fā)現(xiàn)致病性CNVs 9 例,占16.07%(9/56),VOUS 26 例,占46.43%(26/56)。所有超聲異常胎兒均接受電話隨訪,明確陽性30 例,占11.32%(30/265),引產36 例,流產或因死胎引產12 例。分析其原因可知超聲異常通常提示染色體異常,且缺乏特異性,作為產前診斷的有效指征,該項檢查可明顯提升染色體異常檢出率［11］。另在分子生物學技術與常規(guī)染色體核型分析等共同作用下,可有效提高產前遺傳學異常檢出率,有助于減少缺陷胎兒出生率［12,13］。此外,為了減少宮內感染導致的超聲異?，F(xiàn)象的發(fā)生,要求產婦于孕前行相關感染檢測,一旦明確感染情況,則需立刻給予對癥治療［14,15］。

綜上所述,產前超聲檢查能夠有效檢出胎兒異常,且其與染色體異常等因素間存在密切聯(lián)系,在臨床應用中需結合染色體核型分析與基因芯片檢測,以提高胎兒發(fā)育異常檢出率,從而改善妊娠結局,提高新生兒出生質量,并為臨床遺傳咨詢等提供可靠信息。