王 丹，裴 兵

（宿遷市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，江蘇 宿遷 223800）

原發(fā)性膽汁性膽管炎（PBC）屬于自身免疫性疾病，以肝內(nèi)膽汁淤積、肝內(nèi)小膽管進(jìn)行性炎癥損傷等為特征，可誘發(fā)乏力、瘙癢，若不及時(shí)治療，還可進(jìn)展為膽汁性肝硬化，甚至肝衰竭[1-2]。但PBC起病較為隱匿，加之發(fā)展緩慢，早期癥狀缺乏典型性，使得疾病診斷難度較大[3-4]。肝穿刺為PBC診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但其創(chuàng)傷較大，早期患者接受度低。而PBC發(fā)病過程中血液循環(huán)內(nèi)可出現(xiàn)與疾病相關(guān)的自身抗體，通過檢測該類抗體變化能夠一定程度上輔助疾病早期診斷，且操作簡單、取材便捷、無創(chuàng)傷?？购说鞍左w100（抗sp100）、抗糖蛋白210（抗gp210）、線粒體2型（AMA-2）抗體則為診斷PBC的常見抗體，當(dāng)疾病發(fā)生后可釋放進(jìn)入血液循環(huán)，易被臨床檢出，但單一檢測在敏感度、準(zhǔn)確度方面仍未能達(dá)到臨床滿意效果[5-6]。鑒于此，本研究分析抗sp100、抗gp210聯(lián)合AMA-M2抗體檢測在PBC診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2022年1月至6月宿遷市第一人民醫(yī)院收治的112例疑似PBC患者作為研究對象。其中男性61例，女性51例；年齡35～70歲，平均年齡（54.56±6.19）歲；身體質(zhì)量指數(shù)18～29 kg/m2，平均身體質(zhì)量指數(shù)（23.69±1.82）kg/m2。本研究經(jīng)宿遷市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均存在乏力、瘙癢或黃疸等表現(xiàn)；②精神狀態(tài)正常；③均行自身抗體檢測。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往明確PBC診斷；②合并惡性腫瘤；③存在肝移植手術(shù)；④存在長期酗酒史。

1.2 檢測方法所有入選患者均于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集5 mL靜脈血，以3 000 r/min速度離心5 min，取上清液待測?？箂p100、抗gp210、AMA-M2抗體以免疫印跡法檢測，均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)范和試劑說明書開展。具體操作如下：①將反應(yīng)膜條置于反應(yīng)盤內(nèi)，將1 mL配好的樣本緩沖液加至反應(yīng)盤的槽內(nèi)，完全浸潤膜條后棄去；②將血清按照1∶100稀釋后待測，取1 mL加入反應(yīng)槽內(nèi)，先于搖床內(nèi)溫育30 min，倒掉槽內(nèi)液體；③以洗滌緩沖液清洗膜條，沖洗3次，并在搖床晃動(dòng)，5 min/次；④將1 mL的酶結(jié)合物加入反應(yīng)槽內(nèi)，溫育30 min后，將槽內(nèi)液體去除；⑤再以洗滌緩沖液清洗3次，5 min/次；⑥于反應(yīng)槽內(nèi)加入1 mL酶底物，室溫下?lián)u床輕晃10 min，倒掉酶底物；⑦使用蒸餾水清洗1 min后倒掉；⑧加入1 mL終止液，在搖床上溫育5 min，輕晃終止酶反應(yīng)；⑨用濾紙將反應(yīng)膜條上水分吸干后進(jìn)行判定，肉眼可見條帶位置存在著色均勻、清晰可見顏色且顯色程度超過臨界值（CUTOFF）線，結(jié)果判定為陽性。聯(lián)合檢測中任意1項(xiàng)陽性即為聯(lián)合檢測陽性，并以肝穿刺為金標(biāo)準(zhǔn)分析診斷結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)①比較抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體單獨(dú)檢測及聯(lián)合檢測陽性率。②診斷效能：以肝穿刺為金標(biāo)準(zhǔn)，分析抗體單獨(dú)檢測及聯(lián)合檢測PBC的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值；敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%，特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%，準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）/（真陽性+真陰性+假陽性+假陰性）×100%，陽性預(yù)測值=真陽性/（真陽性+假陽性）×100%，陰性預(yù)測值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。③一致性分析：采用kappa檢驗(yàn)分析抗體單獨(dú)檢測及聯(lián)合檢測診斷PBC與手術(shù)病理的一致性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以(±s)表示，用t檢驗(yàn)；一致性采用kappa檢驗(yàn)（kappa＞0.75表明一致性極好，0.4～0.75表明一致性尚可，＜0.4表明一致性差）；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗sp100、抗gp210聯(lián)合AMA-M2抗體陽性率112例疑似患者經(jīng)肝穿刺確診為PBC患者68例，其中抗SP100陽性28例，抗gp210陽性29例，AMA-M2抗體陽性58例，聯(lián)合檢測陽性67例，見表1。

表1 抗sp100、抗gp210聯(lián)合AMA-M2抗體陽性率

2.2 診斷效能聯(lián)合檢測敏感度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值高于抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體單一檢測，AMA-M2抗體敏感度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值高于抗sp100、抗gp210，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表2 診斷效能（%）

2.3 一致性分析kappa檢驗(yàn)顯示，抗sp100與肝穿刺結(jié)果一致性差（kappa值=0.323，P＜0.001）；抗gp210與肝穿刺結(jié)果一致性差（kappa值=0.336，P＜0.001）；AMA-M2抗體與肝穿刺結(jié)果一致性尚可（kappa值=0.748，P＜0.001）；聯(lián)合檢測與肝穿刺結(jié)果一致性極好（kappa值=0.944，P＜0.001）。

3 討論

PBC病因復(fù)雜，臨床認(rèn)為與遺傳、環(huán)境、免疫系統(tǒng)紊亂等相關(guān)，多因素長期相互作用，可促使免疫系統(tǒng)紊亂，且細(xì)胞介導(dǎo)的攻擊源會(huì)損傷黏膜組織，增加黏膜通透性，并誘發(fā)局部持續(xù)炎癥反應(yīng)，隨著病程的發(fā)展大量炎癥因子侵犯并滲透至中小膽管上皮，使得膽管破壞[7-8]。而膽管組織穩(wěn)態(tài)缺失后，可造成膽汁排泄障礙，形成肝內(nèi)膽汁淤積，且該病理變化過程中細(xì)胞外基質(zhì)可持續(xù)沉積，加速周圍組織纖維化進(jìn)展，若不及時(shí)治療，肝臟可逐漸纖維化，并最終向肝硬化及肝衰竭發(fā)展，直接威脅患者生命[9-10]。臨床對于PBC多以早確診、早治療為原則，以避免病情持續(xù)進(jìn)展，減輕肝功能損害。但PBC早期發(fā)病隱匿性強(qiáng)，不易被臨床察覺，導(dǎo)致漏診發(fā)生，影響遠(yuǎn)期預(yù)后，故還需尋找更為安全、準(zhǔn)確的早期診斷方式。

肝穿刺為當(dāng)前診斷PBC的金標(biāo)準(zhǔn)，通過肝活檢獲得組織標(biāo)本，能夠及時(shí)明確肝臟病變情況，為臨床早期治療提供重要參考。但該方式對機(jī)體造成的創(chuàng)傷較大，不適合作為常規(guī)檢查開展。而血清學(xué)檢測具有操作簡單、安全性高、可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)勢，通過采集靜脈血即可開展一系列檢測工作，不僅取材方便，且出結(jié)果快，能夠?yàn)樵缙诿鞔_PBC病情提供必要信息。但常規(guī)血清谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、堿性磷酸酶等診斷效果欠佳，還需尋找更為準(zhǔn)確的血清檢測指標(biāo)。而隨著臨床深入研究發(fā)現(xiàn)，不同類型的自身免疫性肝病均存在不同特征的自身抗體，當(dāng)疾病發(fā)生后可于血液循環(huán)內(nèi)檢出相關(guān)抗體陽性，故自身抗體的檢測在PBC診斷中尤為重要。本研究結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測敏感度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值高于抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體單一檢測，AMA-M2抗體敏感度、準(zhǔn)確度、陰性預(yù)測值高于抗sp100、抗gp210；kappa檢驗(yàn)顯示，抗sp100與肝穿刺結(jié)果一致性差（kappa值=0.323）；抗gp210與肝穿刺結(jié)果一致性差（kappa值=0.336）；AMA-M2抗體與肝穿刺結(jié)果一致性尚可（kappa值=0.748）；聯(lián)合檢測與肝穿刺結(jié)果一致性極好（kappa值=0.944）。上述結(jié)果提示抗sp100、抗gp210聯(lián)合AMA-M2抗體檢測在PBC診斷中價(jià)值更高，能夠提高診斷敏感度、準(zhǔn)確度，降低漏診、誤診風(fēng)險(xiǎn)，以便于臨床盡早開展針對性治療。其原因?yàn)?，抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體為PBC發(fā)病過程中產(chǎn)生的重要抗體，其中抗sp100屬于抗核抗體，其靶抗原為可溶性酸性磷酸化核蛋白，當(dāng)PBC發(fā)生后，可于血液內(nèi)檢出，也可在其他自身免疫性疾病患者中少量檢出，但在其他肝病中為陰性，故在PBC診斷方面具有較高的特異度，但抗sp100單一檢測陽性率較低[11]?？筭p210則為核孔膜糖蛋白抗體，在PBC診斷中具有較高特異度，其靶抗原位于核孔復(fù)合物上210kD跨膜糖蛋白，炎癥反應(yīng)持續(xù)作用可觸發(fā)免疫系統(tǒng)或潛在的分子模擬誘導(dǎo)抗gp210生成，使得血清內(nèi)可檢測出陽性[12-13]。與抗sp100相同的是，抗gp210也存在高特異度、低敏感度特點(diǎn)，單一應(yīng)用陽性率低。AMA-M2抗體則為PBC診斷的特異性抗體，PBC病理過程中則以循環(huán)血液內(nèi)出現(xiàn)抗線粒體抗體為特征，病理變化過程中可誘導(dǎo)AMA-M2抗體大量生成，故血液內(nèi)陽性檢出率較高，但AMA-M2抗體單用仍存在一定漏診風(fēng)險(xiǎn)[14-15]。而抗sp100、抗gp210不僅能夠在AMA-M2抗體陽性患者中存在表達(dá)，在AMA-M2抗體陰性患者中亦可存在表達(dá)，故抗sp100、抗gp210、AMA-M2抗體聯(lián)合檢測可以優(yōu)勢互補(bǔ)，彌補(bǔ)單一檢測敏感度、特異度不足等缺點(diǎn)，進(jìn)一步提高診斷效能，最大限度降低漏診、誤診風(fēng)險(xiǎn)，為臨床早期治療工作開展提供重要指導(dǎo)。

綜上所述，抗sp100、抗gp210聯(lián)合AMA-M2抗體檢測可提高PBC診斷敏感度、準(zhǔn)確度，減少疾病漏診的發(fā)生，以便于盡早采取針對性治療，有效阻止疾病進(jìn)展，改善患者預(yù)后。