于鑫 唐敏敏 趙松林 宋菲
(1. 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所 海南文昌 571300;2. 海南省檳榔工程技術(shù)研究中心 海南文昌 571339;3. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 湖北武漢 430070)
植物多酚是植物內(nèi)以苯環(huán)加單羥基或多羥基為基本特征的次級代謝物[1],根據(jù)基本結(jié)構(gòu)不同分為酚酸類(C6-C3或C6-C1)、黃酮類(C6-C3-C6或[(C6-C3-C6)n])、木酚素(C6-C3-C3-C6)、木質(zhì)素[(C6-C3)n]、二苯乙烯衍生物(C6-C2-C6)等[2]。
檳榔(Areca catechuL.)的果實(shí)——檳榔既可食用也可藥用。檳榔作為中國四大南藥之首,具有利水,滅蟲,截瘧等功效[3]。檳榔中含有多種不同的活性成分,如檳榔多酚、生物堿、多糖、皂苷等[3]。其中檳榔果中多酚類含量豐富,可高達(dá) 29.8%[4]。在檳榔多酚類物質(zhì)中屬類黃酮化合物含量最高[5],代表物質(zhì)主要包括兒茶素、表兒茶素、原花青素[6]、柚皮素[7]、異鼠李素、木犀草素[8]、金圣草黃素、甘草素、槲皮素[9]等。另外,檳榔多酚中的酚酸類物質(zhì)主要有沒食子酸、原兒茶酸和奎寧酸等。目前,檳榔中檢測到的部分多酚類物質(zhì)如圖1所示。多酚作為檳榔重要的代謝產(chǎn)物,具有多重生物活性功能。因此,文章對目前的檳榔多酚研究進(jìn)展進(jìn)行階段性綜述,為檳榔多酚的開發(fā)利用提供一定的材料支持。
圖1 檳榔中的主要多酚化合物及結(jié)構(gòu)
在功能成分的開發(fā)利用中,提取純化技術(shù)至關(guān)重要。為了高效獲取多酚成分,常見提取方法主要包括溶劑提取、超聲波輔助及微波輔助提取、超臨界流體萃取[10-11]等。當(dāng)前應(yīng)用于檳榔多酚的提取方法以有機(jī)溶劑提取法及超聲輔助提取法為主,尤其以溶劑提取法較為普遍。
1.1.1 溶劑提取法 多酚類物質(zhì)含有酚羥基基團(tuán),極性較強(qiáng),可利用相似相溶原理通過多酚類物質(zhì)在不同有機(jī)溶劑中溶解度的不同來實(shí)現(xiàn)對多酚的提取[12]。有機(jī)溶劑提取法設(shè)備簡單、操作簡便、能耗低,因此有機(jī)溶劑提取法應(yīng)用十分普遍。但該方法有機(jī)溶劑耗量多,提取時(shí)間長,對于熱不穩(wěn)定化合物的提取并不適用。目前,有機(jī)溶劑提取法在檳榔多酚的提取中使用較多。
部分學(xué)者對檳榔整果的多酚提取進(jìn)行了研究。普義鑫[13]利用甲醇提取海南產(chǎn)檳榔整果多酚,在甲醇濃度86.2%、料液比1:16、溫度62℃條件下提取 52 min后提取率最高,提取率達(dá)17.82 mg/g。王燕等[14]采用乙醇溶液為提取溶劑,并優(yōu)化提取溫度和提取時(shí)間來提高海南產(chǎn)檳榔整果多酚的提取率,結(jié)果表明,在溫度60℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)64%、提取時(shí)間70 min條件下,檳榔整果多酚得率為(20.55±0.706)mg/g。
在《中國藥典》中,檳榔核和殼分別入藥。因此,多數(shù)學(xué)者會將檳榔果分為核和殼,有針對性地進(jìn)行研究。韓林[15]考察了乙醇對檳榔籽多酚的提取效率,發(fā)現(xiàn)乙醇提取物得率為(8.75±0.95)%,總酚含量為(114.14±3.41)mg/g檳榔籽。成煥等[16]利用丙酮溶劑提取檳榔核即檳榔籽多酚,在68℃利用50%體積的丙酮按1:38的料液比提取48 min后,實(shí)際總酚得率達(dá)到 40.43%,通過計(jì)算得到總酚含量為367.39 mg/g檳榔籽,顯著高于韓林的數(shù)據(jù)。CHAVAN等[17]考察了多個(gè)溶劑對印度產(chǎn)檳榔核多酚的提取率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)丙酮的多酚提取效率最高,最終得到的多酚含量為(218.29±0.68)mg GAE/g檳榔核;其次為甲醇和乙醇,多酚含量分別為(198.53±0.43)和(170.67±0.07)mg GAE/g檳榔核;最低為三氯甲烷,多酚含量為(12.32±0.18)mg GAE/g檳榔核。該研究通過優(yōu)化工藝參數(shù)后,得到的最高多酚含量為407.47 mg/g檳榔核。除去產(chǎn)地和品種因素,振蕩處理可能加強(qiáng)提取劑與檳榔粉末的接觸,促進(jìn)提取劑更大程度地滲透進(jìn)檳榔的細(xì)胞組織,提高了多酚的溶出率。
祁靜[1]采用乙醇溶液提取檳榔殼中的多酚,經(jīng)優(yōu)化后,得到的多酚提取率為14.96 mg/g殼干重。何瑞平等[18]利用5種傳統(tǒng)溶劑及環(huán)保型低共熔溶劑(DESs)提取檳榔殼中多酚。結(jié)果顯示:提取效率最佳的為50%丙酮,提取液中多酚含量為15.36 mg,其次是3種DESs即L-脯氨酸:丙三醇、甜菜堿:乳酸和L-脯氨酸:乙二醇提取液中多酚含量分別為12.14、12.46、11.78 mg GAE/g DW,乙酸乙酯提取液中多酚含量最低。
除有機(jī)溶劑外,也有學(xué)者采用蒸餾水做浸提劑,提取檳榔多酚。ZHANG等[19]對海南產(chǎn)檳榔核多酚進(jìn)行了最佳提取工藝的優(yōu)化,最終得到80℃提取45 min時(shí),最高總多酚含量為(2.76±0.19)%,此數(shù)據(jù)顯著低于有機(jī)溶劑對檳榔多酚的提取率。
由此可見,不同的有機(jī)溶劑對檳榔中多酚的提取效率差異較大,這可能是溶劑的極性和溶解性差異導(dǎo)致[20]。因此,對不同的檳榔部位,可以采用不同的溶劑和提取條件,進(jìn)而得到較高的提取效率。
1.1.2 超聲/微波等輔助提取法 超聲輔助提取法通常是利用超聲裝置同有機(jī)溶劑提取相結(jié)合的一種提取方式,其操作過程簡單,成本低廉。作用原理是利用超聲波所產(chǎn)生的強(qiáng)烈震動及其空化效應(yīng)嚴(yán)重破壞原料粉末的微觀結(jié)構(gòu)和細(xì)胞,促進(jìn)溶劑向細(xì)胞內(nèi)浸透,使得多酚等活性成分迅速、充分溶出,提高提取效率,是目前應(yīng)用廣泛且效率較高的多酚提取方法[21]。
陳思卿等[22]利用超聲輔助乙醇溶液提取檳榔籽多酚發(fā)現(xiàn),在80℃利用40%體積的乙醇按1:60的料液比提取40 min后,多酚提取效果最優(yōu),提取量為111.47 mg/g。宋菲等[23]以75%乙醇為提取溶劑,超聲波輔助法制備檳榔籽和殼多酚提取物,通過測定和計(jì)算,檳榔籽多酚提取率為(49.06±1.34)%、檳榔殼多酚提取率為(16.74±2.47)%,檳榔籽、檳榔殼提取物的多酚含量分別為(43.83±2.48)%、(3.00±0.08)%。
有研究比較了常規(guī)溶劑法和超聲微波輔助法對檳榔多酚提取率的影響[24]。分別采用常規(guī)液-固萃取法和超聲-微波協(xié)同輔助萃取法提取檳榔核中的酚類化合物,測定并比較了4種樣品的總酚得率,其中輔助萃取法獲得的檳榔核提取物具有優(yōu)異的總酚得率:270.92 mg GAE/g檳榔核、純度達(dá)到 42.84%,顯著高于常規(guī)液-固萃取檳榔核總酚得率190.00 mg GAE/g,證明超聲-微波輔助萃取法能夠更有效地提取檳榔核多酚。
經(jīng)初步提取的檳榔多酚粗提物中仍然存在蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、多糖等雜質(zhì),因此需對粗提物進(jìn)行進(jìn)一步的純化,提高檳榔多酚的純度進(jìn)而有助于下一步的研究。層析是多種分離純化中操作簡便的技術(shù),其中大孔樹脂是植物多酚分離純化的常用填料。該填料具有特殊的大孔結(jié)構(gòu),可利用孔的結(jié)構(gòu)、孔徑大小、孔面積等物理性能,通過樹脂對所純化物質(zhì)的吸附力差異,有選擇性地洗脫分離,從而實(shí)現(xiàn)對化學(xué)物質(zhì)的純化[25]。普義鑫[13]考察了 5種大孔樹脂(S-8、D-3520、ADS-8、DM-0301和 AB-8)對檳榔果多酚提取物的純化效果,結(jié)果發(fā)現(xiàn),S-8型大孔樹脂對檳榔果多酚的吸附性和解析性最好,經(jīng)優(yōu)化得到了S-8動態(tài)吸附與解析檳榔果多酚的最佳條件為解析液濃度77.4%,解析液體積為6.5,最佳解析率為92.52%。也有人比較了3種粒徑一致但孔徑不同的大孔樹脂(S-8、AB-8和D101)對中藥飲片檳榔即檳榔核多酚的純化效果。最終結(jié)果顯示:采用 AB-8型的弱極性大孔樹脂為填料,95%乙醇溶液作為洗脫液,上樣濃度在40 mg/L時(shí),檳榔核多酚粗提物中多酚含量由 33.25%提高至 45.03%,可達(dá)到較好的多酚純化目的[25]。以上2個(gè)研究結(jié)果差異較大,這可能是由于二者的多酚提取物化學(xué)組成區(qū)別較大。成煥[26]采用 XAD-7HP大孔樹脂對檳榔籽多酚進(jìn)行分離純化,檳榔籽多酚的純度可由44.03%提高到85.96%。祁靜[1]對檳榔殼多酚粗提物進(jìn)行純化分離,選用聚酰胺樹脂柱,以75%的乙醇為洗脫劑,流速確定為1 mL/min,經(jīng)純化后酚類物質(zhì)占比達(dá)到濃縮液干物質(zhì)的80%,效果良好。
也有多位學(xué)者采用多重層析手段將提取物分離純化,并將核磁技術(shù)和質(zhì)譜等多種技術(shù)聯(lián)用,從檳榔中得到了一些多酚單體化合物。目前,從檳榔殼中分離鑒定出6個(gè)黃酮(木犀草素、異鼠李素、巴西紅厚殼素、金圣草黃素、表兒茶素和(±)-4',5-二羥基-3',5',7-三甲氧基黃烷酮)和3個(gè)酚酸(異香草酸、原兒茶酸和對羥基苯甲酸)[8]。楊文強(qiáng)等[27]采用色譜法對檳榔的乙醇提取物進(jìn)行分離純化,根據(jù)理化性質(zhì)與波譜數(shù)據(jù)共鑒定出了5個(gè)黃酮(甘草素、槲皮素、異鼠李素、(+)-兒茶素、5,7,4'-trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavanone)、2個(gè)酚酸(香草酸和阿魏酸)和1個(gè)二苯乙烯類物質(zhì)(反式白藜蘆醇)。
影響檳榔多酚含量的因素較多,生長地區(qū)、成熟度、提取方法甚至質(zhì)量,都會導(dǎo)致檳榔中多酚含量差異。
ELIZABETH 等[28]選用班達(dá)亞齊、北蘇門答臘、西加里曼丹和西巴布亞4個(gè)地區(qū)的檳榔果為樣品,測定檳榔殼多酚的含量。結(jié)果表明,班達(dá)亞齊、北蘇門答臘、西加里曼丹3個(gè)地區(qū)的檳榔殼多酚含量差異不顯著,分別為(122.27±8.09)、(111.72±10.5)、(108.84±8.81)mg GAE/g 檳榔殼;而西巴布亞地區(qū)的檳榔殼中多酚含量為(216.71±18.06)mg GAE/g檳榔殼,顯著高于其他3個(gè)地區(qū)。盡管以上4個(gè)地區(qū)均為熱帶雨林氣候,但其海拔和緯度存在顯著差異,其中西巴布亞地區(qū)海拔最高,并且處于南半球,這可能是造成不同地區(qū)檳榔多酚含量差異的主要原因。
不同生長期,檳榔中的多酚含量變化較大。早期國外研究表明,檳榔多酚含量在綠果時(shí)期為17.2%~29.8%,而到了成熟期就下降為 11.1%~17.8%[29]。嚴(yán)和琴等[30]基于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定了不同發(fā)育期檳榔核和殼的代謝組,發(fā)現(xiàn)檳榔核的多酚物質(zhì)含量顯著高于殼的,且二者的多酚含量在授粉80~140 d時(shí)呈先增加再減少的趨勢。以上研究表明,隨著成熟期的發(fā)展,檳榔中的多酚含量先增加再逐漸減少。而 WANG等[31]的研究結(jié)果則有所不同。其發(fā)現(xiàn)隨著成熟度增加,多酚含量逐漸增加,當(dāng)檳榔果未成熟、果長分別為2和3 cm時(shí),多酚含量分別為5.78和9.28 mg GAE/g鮮果,成熟的檳榔果中含有12.63 mg GAE/g鮮果的多酚。該研究還發(fā)現(xiàn),檳榔果的生長方向不同(頂部朝上或朝下),也會影響其多酚含量。
有學(xué)者的研究表明,檳榔果的質(zhì)量不一樣,也會影響多酚含量。黃麗云等[32]通過測定同一時(shí)期采摘的不同果型的臺灣種檳榔中多酚含量發(fā)現(xiàn),多酚含量隨檳榔果質(zhì)量的增加而呈遞增趨勢,平均重量4 kg/1 000粒組的多酚含量(6.19%)是平均重量2.5 kg/1 000粒組多酚含量(2.07%)的2.99倍。
采后干燥方法和炮制方法也會影響檳榔多酚的含量。袁源等[33]研究了5種不同干燥方式(風(fēng)干、曬干、烘干、微波和冷凍)對檳榔果多酚總量的影響,結(jié)果表明,干燥后檳榔的總黃酮、總酚含量均顯著高于新鮮青果。該課題組還發(fā)現(xiàn),經(jīng)不同炙法炮制會影響檳榔殼總酚含量,經(jīng)不同炙法加工后檳榔殼總酚含量分別為,姜炙法(8.54±0.69)mg/g,酒炙法(7.53±0.41)mg/g,干炙法(5.18±0.32)mg/g,甘草炙法(4.77±0.62)mg/g,均高于未炮制的,其中姜炙法加工后檳榔多酚的含量最高[34]。但在該研究中,筆者認(rèn)為生姜自身的酚類物質(zhì)會影響檳榔多酚提取物的含量,并且酒中的乙醇會促進(jìn)多酚的溶出,從而增加檳榔總酚含量。
檳榔多酚組成復(fù)雜且多樣。隨著現(xiàn)代波譜技術(shù)的發(fā)展,多種檢測方法,如高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)、高效毛細(xì)管電泳色譜和高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(Ultrahigh-performance Liquid Chromatograph-Xevo triple quadrupole mass spectrometer,UPLC-MS)等逐漸用于測定檳榔中的多酚組分測定。目前,已從檳榔中檢測出含量較高的多酚化合物主要有黃酮類和酚酸類等物質(zhì)。
唐敏敏等[35]從海南檳榔籽(核)的75%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分定性鑒定出 76種多酚類化合物,其中相對含量高于0.1%的23種物質(zhì)中,有21種黃酮(兒茶素的相對含量最多,然后是L-表兒茶素、原花青素B1等)和2個(gè)酚類物質(zhì)(原兒茶酸和原兒茶醛);而馬江紅等[36]的研究也證明,檳榔提取物中含有一定量的原兒茶酸。張培月等[37]利用超聲輔助乙醇提取檳榔籽(核)中活性成分,并利用 UPLC-MS對加工后檳榔廢籽(核)提取物中的多酚類化合物組分進(jìn)行定性分析,從提取物中共檢測出44種黃酮類化合物,包括常見的兒茶素類、原花青素類以及蘆丁、刺芒柄花苷、甘草苷、柑橘查爾酮、川陳皮素等,其中兒茶素的含量高達(dá)77.27%,其次為表兒茶素8.53%。MENG等[38]得到的檳榔多酚含有多種黃酮類物質(zhì),如兒茶素、原花青素 B1和原花青素B2(含量分別為28 284.589 6,5 628.223 7和1 150.345 7 μg/g提取物),還含有酚酸類物質(zhì)如奎寧酸和丁香酸(含量分別為 5 628.223 7和4.715 3 μg/g 提取物)。HUANG 等[39]采用 UPLCMS測定了檳榔原花青素的組成發(fā)現(xiàn),檳榔核中含有兒茶素、表兒茶素及其二聚體和多聚體。
有學(xué)者采用高效毛細(xì)管電泳技術(shù)定量了檳榔殼多酚中的表兒茶素、兒茶素、柚皮素、山奈素、阿魏酸和綠原酸[1]。
已有多項(xiàng)研究證明檳榔多酚具有抗氧化、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抗炎、抗菌等生物活性功能。
生物體內(nèi)具有不成對電子的自由基為獲得臨近物質(zhì)的電子形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu),會主動攻擊正常細(xì)胞,導(dǎo)致該細(xì)胞老化甚至死亡,它的存在是生物體發(fā)生氧化損傷的重要原因[40]。檳榔果、檳榔核和檳榔殼的多酚提取物具有良好的體外抗氧化作用。
張丹等[41]測定檳榔果70%乙醇提取物體外抗氧化活性發(fā)現(xiàn),檳榔提取物乙酸乙酯部位抗氧化能力優(yōu)于正丁醇部位,同時(shí)其清除 DPPH自由基(IC50=14.60 μg/mL)、ABTS+自由基(IC50=2.04 μg/mL)以及還原 Fe3+能力(TEAC= 4762.99 μmol/g)均優(yōu)于陽性對照;且后續(xù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),檳榔提取物乙酸乙酯部位總多酚(7.47±0.047)mg/g與總黃酮含量(121.25±1.25)mg/g均顯著高于正丁醇部位[總酚(4.91±0.034)mg/g;總黃酮(34.07±0.88)mg/g],這說明檳榔果的體外抗氧化力與多酚和黃酮含量具有較好的正相關(guān)性。祁靜[1]研究了檳榔殼多酚的抗氧化能力,發(fā)現(xiàn)檳榔殼多酚樣品對DPPH以及ABTS自由基都具有較好的清除能力,同時(shí)能夠有效還原Fe3+,具有很強(qiáng)的還原效果,其抗氧化效果與樣品濃度的變化成正比。
有研究表明,檳榔核提取物的抗氧化力顯著高于檳榔殼,且不同發(fā)育期的核和殼抗氧化力也具有一定的差異。嚴(yán)和琴等[30]研究了不同發(fā)育期(授粉后80、110和140 d)檳榔核和殼85%乙醇提取物的體外清除自由基能力,發(fā)現(xiàn)檳榔核清除DPPH和ABTS自由基的能力及三價(jià)鐵還原力顯著優(yōu)于殼的,且授粉110 d的檳榔核抗氧化力最強(qiáng),這與其多酚含量變化趨勢基本一致。
干燥方式會影響檳榔多酚提取物的抗氧化能力。經(jīng)5種方式干燥后檳榔的抗氧化效果均優(yōu)于檳榔鮮果,其中含有多酚和黃酮最高的微波干燥檳榔果抗氧化力最得,清除DPPH自由基和ABTS自由基的IC50值分別為(0.82±0.0.03)和(0.15±0.03)mg/mL[33]。
糖尿病是一種以血糖含量高為特征的慢性糖代謝物紊亂疾病。α-葡萄糖苷酶水解多糖導(dǎo)致大量葡萄糖的釋放,是造成血糖升高的原因之一。有研究證明,多酚可與α-葡萄糖苷酶的生物蛋白質(zhì)相結(jié)合,使蛋白質(zhì)原有構(gòu)型發(fā)生改變,從而導(dǎo)致α-葡萄糖苷酶催化活性降低或消失,減少葡萄糖的生成。通過抑制α-葡萄糖苷酶的活性,降低體內(nèi)由多糖的水解而增長的血糖含量,即可治療或緩解糖尿病的發(fā)生[23]。
檳榔多酚提取物可以抑制α-葡萄糖苷酶活性,并且具有緩解鏈脲菌素誘導(dǎo)的小鼠糖尿病癥狀。宋菲等[23]以純化前后檳榔籽與殼中的多酚提取物為對象,觀察其對α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果:純化前后的檳榔籽多酚抑制α-葡萄糖苷酶活性的IC50值分別為(0.34±0.12)和(0.33±0.10) μg/mL,純化前檳榔殼提取物抑制酶的IC50值為(1.73±0.31)mg/mL,純化后IC50值為(0.14±0.09)mg/mL,抑制效果顯著均強(qiáng)于陽性對照阿卡波糖組[IC50值為(0.71±0.09)mg/mL]。陳思卿等[22]發(fā)現(xiàn),檳榔籽多酚能夠有效抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性,抑制率分別達(dá)到90.51%及 89.67%,抑制效果顯著。Huang等[39]研究了檳榔核原花青素對鏈脲菌素誘導(dǎo)的小鼠糖尿病癥狀的影響,在原代肝細(xì)胞中,檳榔原花青素劑量依賴性地抑制糖異生,并降低2個(gè)糖異生關(guān)鍵酶磷酸烯醇-丙酮酸羧激酶和葡萄糖-6-磷酸酶的基因表達(dá);連續(xù)4周灌胃10 mg/kg檳榔原花青素,可降低鏈脲菌素誘導(dǎo)的糖尿病小鼠空腹血糖、磷酸烯醇-丙酮酸羧激酶和葡萄糖-6-磷酸酶活性,并且提高腺苷酸活化蛋白激酶的蛋白表達(dá)。
通過調(diào)控免疫系統(tǒng),保持免疫系統(tǒng)良好功能和平衡對維持人體健康具有決定性作用。食用新鮮、有營養(yǎng)的天然食物來維持健康的生活方式與食用合成藥物的副作用相比對人體具有更多的優(yōu)勢。
目前,檳榔多酚提取物在體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,均具有一定的炎癥反應(yīng)抑制作用。SARI等[42]利用檳榔殼酚類提取物對其抗金黃色葡萄球菌感染活性及免疫調(diào)節(jié)活性進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,3個(gè)治療組分別給予500、1 000和1 500 mg/kg檳榔提取物(BW),第14天用金黃色葡萄球菌對大鼠攻毒1 h后,感染大鼠可顯著增加白細(xì)胞濃度(3個(gè)治療組與生理鹽水對照組白細(xì)胞濃度相比分別增加了 17.49%、26.99%和 26.78%)和巨噬細(xì)胞的活性和容量[對照組巨噬細(xì)胞活性(43.86±7.06);500 mg/kg BW 組(71.86±2.61);1000 mg/kg BW 組(77.14±5.34);1500 mg/kg BW組(80.71±3.35)],同時(shí)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞的數(shù)量隨著檳榔果提取物劑量的增加而增加。檳榔籽75%乙醇提取物乙酸乙酯部位對脂多糖誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞分泌的一氧化氮、前列腺素2、小鼠腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-6和活性氧自由基具有一定的抑制作用,且隨濃度增加抑制效果越好;該研究對該萃取部位進(jìn)行組分分析后分離出大量多酚類物質(zhì),總多酚含量高達(dá)(517.18±21.81)mg/g,證明檳榔籽提取液中的多酚組分對抗擊炎癥具有較大的有利作用[35]。檳榔籽原花青素在低劑量下可抑制 12-O-十四烷基磷波-13-醋酸(TPA)誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),抑制環(huán)氧合酶-2(COX-2)蛋白的表達(dá)。此外,在使用角叉菜膠誘導(dǎo)急性炎癥大鼠模型形成 3 mL滲出物后,以10 mg/(kg·d)的檳榔籽原花青素連續(xù)灌胃大鼠 5 d,滲出液體積減少 30%,并且減少可使COX-2蛋白的主要酶促產(chǎn)物前列腺素2的含量,具有顯著抗炎效果,以1 mg/kg/天的檳榔籽原花青素也可以減小滲出液體積和前列腺素2的含量[43]。
骨質(zhì)疏松癥是一種以骨含量下降、骨孔隙增大、骨折風(fēng)險(xiǎn)增加為特征的骨疾病。當(dāng)生物體內(nèi)骨吸收與骨形成所維持的穩(wěn)態(tài)被打破,骨吸收效率過高時(shí),骨質(zhì)疏松便會發(fā)生。該疾病在全世界范圍內(nèi)高發(fā),嚴(yán)重威脅人體健康[44]。以天然植物為原料提取有效藥用成分,作為一種安全、獲取方便的治療方法,在目前的疾病藥物治療研究中非常流行?,F(xiàn)已有研究證明檳榔多酚提取物可有效改善骨質(zhì)疏松癥狀。MEI等[44]利用卵巢切除術(shù)建立的骨質(zhì)疏松大鼠模型,研究檳榔籽多酚(ACP)對骨質(zhì)疏松癥的改善機(jī)制,與只進(jìn)行卵巢切除手術(shù)但不治療的陰性對照組相比,經(jīng)檳榔多酚提取物治療后明顯改善了大鼠骨小梁的微觀結(jié)構(gòu),增加了骨小梁數(shù)量和骨小梁厚度,使骨小梁分離率降低,同時(shí)ACP處理組中大鼠尿液中尿磷、尿鈣和抗酒石酸酸性磷酸酶活性等骨吸收指標(biāo)含量顯著降低,而血清中骨鈣素、骨保護(hù)素等骨形成指標(biāo)含量顯著升高,證明ACP可有效改善骨質(zhì)疏松癥。該研究還發(fā)現(xiàn),ACP可以通過保持潘氏細(xì)胞的數(shù)量來改善骨質(zhì)疏松大鼠的微生物蛋白(溶菌酶)表達(dá),因此推斷,ACP緩解骨質(zhì)疏松癥可能與控制炎癥反應(yīng)有關(guān)。MENG等[38]利用ACP治療骨質(zhì)疏松大鼠。研究結(jié)果表明,與陰性模型組骨質(zhì)疏松的大鼠相比,ACP顯著改善了受損的骨結(jié)構(gòu),增加了骨保護(hù)蛋白、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2和β-連環(huán)蛋白在骨和血清代謝物中的表達(dá),促進(jìn)城固細(xì)胞的形成,提高骨鈣素水平。因此,ACP可以同時(shí)調(diào)控骨吸收和骨形成從而緩解骨質(zhì)疏松。
植物多酚作為一種天然抗菌劑應(yīng)用廣泛,已有研究證明,酚類物質(zhì)可通過破壞微生物細(xì)胞膜、抑制微生物大分子合成以及影響微生物物質(zhì)代謝等途徑來抑制微生物生長[45]。張興等[8]從檳榔殼中分離鑒定出的酚類物質(zhì)-巴西紅厚殼素對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和金黃色葡萄球菌有顯著抑菌作用,抑菌圈直徑均為 9 mm。AMUDHAN等[46]從檳榔甲醇提取物中分離純化得到總酚類含量為164 mg/g,縮合單寧為62.61 mg/g,同時(shí)利用分離出的檳榔多酚提取物對大腸桿菌、綠膿桿菌、霍亂弧菌、傷寒桿菌、金黃色葡萄球菌和志賀氏菌等人體致病菌進(jìn)行抑菌活性檢測,結(jié)果顯示,除志賀氏菌外,檳榔多酚提取物對其他 5種致病菌均有一定的抑制作用,抑菌圈直徑分別為 13、10、9、9、7 mm。
WANG等[47]從整顆新鮮檳榔中提取酚類物質(zhì),將該提取物與經(jīng)鼠傷寒桿菌感染和誘變劑誘變后的小鼠肝臟細(xì)胞共同培養(yǎng),經(jīng)污染物致突變性檢測其誘變性和抗突變效應(yīng)發(fā)現(xiàn):粗酚提取物、縮合單寧和非縮合單寧酚組分3個(gè)實(shí)驗(yàn)組均未誘導(dǎo)鼠傷寒桿菌TA98和TA100的致突變性;且通過對MNNG和IQ兩種誘變劑的抗誘變活性進(jìn)行評價(jià)發(fā)現(xiàn),3種多酚樣品對MNNG對TA100的抑制作用較弱,但對IQ、TA98和TA100均有很強(qiáng)的抑制活性,且抗誘變活性隨多酚物質(zhì)含量的增加而增加。
人類免疫缺陷病毒(HIV)是艾滋病的病原體,抑制其啟動宿主細(xì)胞病毒復(fù)制的酶是治療該病癥最傳統(tǒng)的目標(biāo)。已有研究證明,HIV-1型蛋白酶(PR)是HIV病毒的其中一個(gè)靶點(diǎn),通過抑制該酶活性可阻止病毒的擴(kuò)散。KUSUMOTO等[48]利用檳榔籽水提取物及多種植物提取物對HIV-1型蛋白酶(PR)活性抑制作用進(jìn)行測定。結(jié)果表明,在濃度0.2 mg/mL時(shí),檳榔籽水提取物對PR酶的抑制作用最為顯著,抑制作用大于70%,且檳榔籽提取物對PR酶抑制作用的IC50值為12 μg/mL,相較于乙酰胃蛋白酶抑制劑的IC50值(29 μg/mL),檳榔籽提取物的抑制效果顯著。該實(shí)驗(yàn)還對檳榔籽提取物組分進(jìn)行分析,從中分離出兒茶素、原花青素和兩種縮合單寧(Arecatannin A1、Arecatannin B1),通過測定4種物質(zhì)對PR酶的抑制作用發(fā)現(xiàn),Arecatannin B1在0.5 mmol/L時(shí)有顯著的抑制作用(78%),Arecatannin A1在0.5 mmol/L時(shí)有中度的抑制作用(56.8%)。
檳榔多酚除了上述生物活性功能外,還具備多種其他活性功能。祁靜[1]通過研究檳榔殼多酚對小鼠抗運(yùn)動疲勞效果的影響發(fā)現(xiàn),隨小鼠攝入檳榔多酚濃度的增加,小鼠體內(nèi)肌糖原與肝糖原含量顯著增加,同時(shí)血乳清和血清尿素氮水平下降,證明檳榔多酚可在一定程度上起到抗疲勞效果?;粞械萚49]將檳榔飲片中的多酚提取物在一定時(shí)間灌喂給受急進(jìn)高原影響的大鼠后發(fā)現(xiàn),在缺氧條件下,大鼠出現(xiàn)低氧血癥,主要臟器也都發(fā)生了不同程度氧化損傷。而預(yù)防給藥檳榔多酚后,大鼠血氧飽和度顯著升高,低氧血癥得以有效改善,氧化應(yīng)激損傷減輕。何嘉泳等[50]發(fā)現(xiàn),利用懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)所建立的抑郁模型小鼠,在經(jīng)連續(xù)給藥檳榔總酚后,小鼠靜止不動時(shí)間顯著縮短,證明給藥檳榔總酚后小鼠表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗抑郁能力。
在海南,檳榔種植面積逐年增加,現(xiàn)已成為230萬農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)支柱來源,在脫貧攻堅(jiān)中發(fā)揮著不可或缺的作用。但是,國家衛(wèi)計(jì)委不再頒發(fā)和續(xù)發(fā)食用檳榔生產(chǎn)許可證,檳榔作為海南省的支柱產(chǎn)業(yè)之一,目前面臨著嚴(yán)峻的產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整問題[6]。海南省政府工作報(bào)告中多次提出,挖掘檳榔的藥用價(jià)值,將檳榔回歸南藥。因此,檳榔藥用成分研究及綜合利用將為海南檳榔產(chǎn)業(yè)提供轉(zhuǎn)型方向。目前研究中,檳榔多酚的生物活性功能還未被完全發(fā)掘,已知生物活性功能的作用機(jī)制并不清楚,以及檳榔酚類物質(zhì)的組成、結(jié)構(gòu)等方向上的研究均有待進(jìn)一步的加深。因此,檳榔的天然活性成分,尤其是多酚類物質(zhì)并拓展其在藥用價(jià)值方面的應(yīng)用尚需要系統(tǒng)深入研究,這將為未來檳榔產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展提供必要的理論與現(xiàn)實(shí)依據(jù)。