朱凱 周青 楊磊 馬雪兒 李琴 何曉萱 楊雪霞 蔡雯

非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是以肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過多積聚為主要特征的一系列進(jìn)行性肝臟疾病，疾病譜包括單純脂肪性肝病到非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）等，病理特征包括肝纖維化、肝硬化等[1]。NASH現(xiàn)已成為世界上第8 位死亡原因，每年約有120 萬人因其相關(guān)并發(fā)癥而死亡[2]。運(yùn)動(dòng)及飲食干預(yù)是目前防治NASH 的重要方法，《非酒精性脂肪性肝病防治指南（2018 更新版）》[3]建議對(duì)超重等NAFLD 患者實(shí)行減少熱量攝入、調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)、平衡膳食、限制攝入模型高糖飲食等飲食干預(yù)和堅(jiān)持長(zhǎng)期中等強(qiáng)度有氧運(yùn)動(dòng)等運(yùn)動(dòng)干預(yù)。自噬與NAFLD 的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。作為自噬通量研究的標(biāo)志物，微管相關(guān)蛋白輕鏈3（microtubule-associated protein light chain 3，Lc3）和p62 蛋白在肝臟自噬被誘導(dǎo)時(shí)可觀察到水平下降，而在自噬受到抑制時(shí)會(huì)累積。抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）3和磷酸化的STAT3（p-STAT3）等基因的表達(dá)可增加自噬相關(guān)蛋白Beclin-1表達(dá)，后者通常被認(rèn)為是自噬過程中的關(guān)鍵蛋白之一，通過激活自噬來改善肝臟脂肪變性[5]。一般情況下，B 細(xì)胞淋巴瘤-2（B cell lymphoma-2，Bcl-2）會(huì)與Beclin-1 緊密結(jié)合，而運(yùn)動(dòng)可通過解離Beclin-1 和Bcl-2 來啟動(dòng)自噬[6]。目前有關(guān)運(yùn)動(dòng)及飲食干預(yù)對(duì)NASH 動(dòng)物肝臟中自噬蛋白的影響研究尚少，本研究通過構(gòu)建單純性NASH 小鼠模型，從肝臟自噬的角度出發(fā)，觀察運(yùn)動(dòng)與飲食干預(yù)對(duì)NASH 的影響，以期為運(yùn)動(dòng)及飲食干預(yù)防治NASH提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 6 周齡C57BL/6 野生型小鼠52 只，體質(zhì)量（19.80±1.31）g，在新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心正常喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心許可證號(hào)：SYXK（新）2018-003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（新）2018-0001。本研究通過新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審核，批號(hào)為IACUC-20211202-8。

1.1.2 主要試劑 高果糖飼料（60.1%果糖、1.0%蔗糖、8.9%蔗糖、20.0%蛋白質(zhì)、10.0%蛋白質(zhì)）購(gòu)于江蘇協(xié)同醫(yī)藥生物有限公司，批號(hào)：XT704；高效RIPA 組織快速裂解液、蛋白上樣緩沖液、蛋白濃度測(cè)定試劑盒、HE 染色套裝、Trizol 試劑均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公 司，批號(hào)分別為R0010、P1016、PC0020、YA0031 和15596018）；EasySee Western blot 試劑盒購(gòu)自TRANS，批號(hào)：N21017；BSA 購(gòu)自Biofroxx，批號(hào)：4240GR025；β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）抗體、Lc3-Ⅱ抗體購(gòu)自Bioss，批號(hào)分別為bs-0061R 和bs-4843R；Beclin-1 抗體購(gòu)自Abcam，批號(hào)：AB210498；p62 抗體購(gòu)自ABclonal，批號(hào)：A11247；鼠抗兔二抗、驢抗兔二抗購(gòu)自santa cruz，批號(hào)分別為sc-2358 和sc-2315）；One Step RT-qPCR 專用試劑盒購(gòu)自艾科瑞，批號(hào)：AG11708。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物造模與分組 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d 后，編號(hào)、稱質(zhì)量，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（對(duì)照組）10 只、NASH 模型組（模型組）12 只、有氧跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)干預(yù)組（運(yùn)動(dòng)組）10 只、單純飲食干預(yù)組（飲食組）10 只、有氧跑臺(tái)聯(lián)合飲食干預(yù)組（聯(lián)合組）10 只。本試驗(yàn)共進(jìn)行20 周，對(duì)照組全程給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組與運(yùn)動(dòng)組全程給予高果糖飼料喂養(yǎng)，飲食組及聯(lián)合組前12 周給予高果糖飼料喂養(yǎng)，后8 周給予普通飼料喂養(yǎng)。小鼠采用高果糖飼料喂養(yǎng)，常規(guī)8～10 周成模[7]。于第11 周末隨機(jī)抽取2 只模型組小鼠驗(yàn)?zāi)＃溆嘈∈?0 周末取材。

1.2.2 運(yùn)動(dòng)干預(yù)方案 小鼠運(yùn)動(dòng)方案參考Ahn 等[8]。運(yùn)動(dòng)組與聯(lián)合組第12 周開始進(jìn)行為期1 周的適應(yīng)性訓(xùn)練，小鼠每天持續(xù)跑步30 min，3 次/周，速度為10～18 m/min。隨后進(jìn)行為期8 周正式訓(xùn)練，每天持續(xù)跑步35～64 min，5 次/周，速度為14～20 m/min，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度為心率達(dá)到60%～75%最大心率。訓(xùn)練時(shí)間為除周二、周四外的15：00～17：00。運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練時(shí)間內(nèi)，其余組均置于靜止跑臺(tái)。

1.2.3 樣本處理 第20 周末最后1 次訓(xùn)練后，全體小鼠禁食不禁飲12 h，測(cè)量小鼠體質(zhì)量，麻醉后心臟取血，低溫離心取上層血清并置于-20 ℃冰箱冷藏。打開腹腔，心臟灌流后取肝臟，測(cè)量肝濕質(zhì)量并計(jì)算肝指數(shù)，分離部分肝臟固定在10%甲醛中，常溫保存，其余組織分裝置于-80 ℃冰箱凍存。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 血清生化指標(biāo)檢測(cè) 采用全自動(dòng)血液生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C 等血脂與肝功指標(biāo)。

1.3.2 肝臟病理學(xué)檢測(cè) 取甲醛固定的肝臟組織，常規(guī)石蠟包埋后，切成4 μm 厚切片，HE 染色后光鏡下觀察肝臟組織細(xì)胞脂肪變性、肝小葉炎癥和氣球樣變性程度，并計(jì)算肝臟NAFLD 活動(dòng)性評(píng)分（NAFLD activityscore，NAS）[7]。視野中肝細(xì)胞脂肪變細(xì)胞數(shù)＜5%為0 分，細(xì)胞數(shù)占5%～33%為1 分，細(xì)胞數(shù)占34%～66%為2 分，細(xì)胞數(shù)＞66%為3 分；肝小葉內(nèi)20 倍鏡下無壞死灶炎癥得分為0 分，＜2 個(gè)壞死灶為1 分，2～4 個(gè)為2分，＞4 個(gè)為3 分；視野總肝細(xì)胞無氣球樣病變?yōu)? 分，氣球樣病變細(xì)胞少見為1 分，多見為2 分。NAS 由此3個(gè)指標(biāo)得分相加而成，＜3 分排除NASH，＞4 分則診斷為NASH，3～4 分為可能NASH。肝細(xì)胞脂肪變細(xì)胞數(shù)＞33%但不存在肝小葉內(nèi)炎癥、氣球樣變和纖維化則為單純性NAFLD。

1.3.3 肝臟組織中Beclin-1、Lc3-Ⅱ、p62 蛋白表達(dá)的檢測(cè) 采用Western blot 法。取凍存肝臟加入RIPA 裂解液裂解，超聲細(xì)胞破碎儀破碎后取上清液。根據(jù)蛋白濃度測(cè)定試劑盒說明書方法測(cè)定蛋白濃度，隨后經(jīng)聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜，TBST 洗膜，加入Beclin-1、Lc3-Ⅱ、p62 一抗，4 ℃孵育過夜。取膜后TBST 洗滌，加入二抗，室溫孵育2 h，TBST 再次洗滌。加入增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（enhanced chemiluminescence，ECL）液，化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)曝光，以β-actin 為內(nèi)參，根據(jù)條帶的灰度值計(jì)算Beclin-1、Lc3-Ⅱ、p62 蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3.4 肝臟組織Beclin-1、Lc3-Ⅱ、p62 mRNA 表達(dá)的檢測(cè) 采用熒光定量PCR（qRT-PCR）法。使用Trizol提取肝臟總RNA，按照qRT-PCR 試劑盒說明書方法生成cDNA，引物序列：Beclin-1（正向5'-ATAGAGGCAGGGCTAGTC-3'，反向3'-TAGGTAATGGTCTCGGTAAGA-5'）；Lc3-Ⅱ（正向5'-GATGTCCGACTTATTCGAGAGC-3'，反 向5'-TTGAGCTGTAAGCGCCTTCTA-3'）；p62（正向5'-GACCCAACACAGGCGATGG-3'，反向3'-ACTGCGACCCACGTTATATCA-5'）。反應(yīng)體系為2×緩沖液10 μl、參比染料1 μl、上下游引物各0.4 μl、cDNA 模板0.8 μl、單蒸水補(bǔ)足20 μl。擴(kuò)增程序?yàn)?5 ℃、10 min，95 ℃、15 s，59 ℃、1 min，共40 循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算Beclin-1、Lc3-Ⅱ和p62 mRNA 相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件，用Graph-Pad Prism 7.00 進(jìn)行繪圖。正態(tài)分布的計(jì)量資料用表示，多組間比較采取單因素方差分析。偏態(tài)分布的計(jì)量資料用M（P25，P75）表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行相關(guān)性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 5 組小鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)及血清生化指標(biāo)比較與對(duì)照組相比，模型組體質(zhì)量、肝指數(shù)、TC、TG、AST、ALT、LDL-C 均顯著增高（均P＜0.05），HDL-C 顯著降低（P＜0.05）；與模型組相比，僅聯(lián)合組肝指數(shù)顯著下降（P＜0.05），運(yùn)動(dòng)組、飲食組及聯(lián)合組小鼠體質(zhì)量、TC、TG、AST、ALT、LDL-C 均顯著降低（均P＜0.05），HDL-C 顯著增高（P＜0.05）；與聯(lián)合組相比，運(yùn)動(dòng)組及飲食組體質(zhì)量、TG、AST 、ALT、LDL-C 均顯著增高（均P＜0.05），運(yùn)動(dòng)組TC、肝指數(shù)顯著增高（均P＜0.05），飲食組HDL-C 顯著降低（P＜0.05），見表1。

表1 5 組小鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)及血清生化指標(biāo)比較

2.2 5 組小鼠肝臟組織病理學(xué)變化 對(duì)照組肝細(xì)胞形態(tài)正常，肝組織結(jié)構(gòu)完整，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰且排列整齊，無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及脂質(zhì)沉積，見圖1A；模型組肝細(xì)胞形態(tài)異常，有大量脂滴出現(xiàn)，肝細(xì)胞損傷嚴(yán)重，有大量脂質(zhì)沉積及氣球樣變，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，見圖1B；運(yùn)動(dòng)組肝細(xì)胞部分細(xì)胞核的周圍可觀察到大小不等的脂滴，部分有假小葉形成，見圖1C；飲食組部分肝臟出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有氣泡樣變，見圖1D；聯(lián)合組肝組織肝小葉基本正常，輕度肝細(xì)胞脂肪變性及少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，見圖1E。相比對(duì)照組，模型組在肝細(xì)胞脂肪變性、肝小葉炎癥、肝細(xì)胞氣球樣變和NAS 均增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；相比模型組，運(yùn)動(dòng)組、飲食組NAS明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），運(yùn)動(dòng)組肝細(xì)胞脂肪變性明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），肝小葉炎癥、肝細(xì)胞氣球樣變比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），飲食組肝細(xì)胞脂肪變性、肝小葉炎癥、肝細(xì)胞氣球樣變均有下降，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。聯(lián)合組肝細(xì)胞脂肪變性、肝小葉炎癥、肝細(xì)胞氣球樣變及NAS 均顯著降低（均P＜0.05）；運(yùn)動(dòng)組與飲食組間肝細(xì)胞脂肪變性、肝小葉炎癥、肝細(xì)胞氣球樣變及NAS 比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；相比聯(lián)合組，運(yùn)動(dòng)組肝細(xì)胞脂肪變性、NAS 顯著增多（均P＜0.05），飲食組肝細(xì)胞脂肪變性、肝小葉內(nèi)炎癥、NAS 均明顯增多（均P＜0.05），見表2。

表2 5 組小鼠肝臟組織NAS 比較（分）

圖1 5 組小鼠肝臟組織病理學(xué)檢查所見（A-E 依次為對(duì)照組、模型組、運(yùn)動(dòng)組、飲食組、聯(lián)合組）

2.3 5 組小鼠肝臟Beclin-1、Lc3-Ⅱ、p62 蛋白表達(dá)的比較 Western blot 結(jié)果顯示，5 組小鼠肝臟均檢測(cè)到自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)，Beclin-1、Lc3-Ⅱ、p62 蛋白分子量依次為52、14 和47 kDa，見圖2。相比對(duì)照組，模型組的Beclin-1 蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），p62 顯著升高（P＜0.05），相比模型組，運(yùn)動(dòng)組、飲食組、聯(lián)合組的Beclin-1 蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著升高（均P＜0.05），p62均顯著降低（均P＜0.05），Lc3-Ⅱ僅在飲食組和聯(lián)合組顯著升高（P＜0.05）。運(yùn)動(dòng)組與飲食組自噬相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。運(yùn)動(dòng)和飲食聯(lián)合干預(yù)后，Beclin-1和Lc3-Ⅱ蛋白相對(duì)表達(dá)量均顯著升高（均P＜0.05），p62 顯著降低（P＜0.05），見表3。

表3 5 組小鼠肝臟自噬相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

圖2 5 組小鼠肝臟自噬相關(guān)蛋白電泳圖

2.4 5 組小鼠肝臟Beclin-1、Lc3-Ⅱ、p62 mRNA 表達(dá)的比較 qRT-PCR 結(jié)果顯示，相比對(duì)照組，模型組的Beclin-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），p62顯著升高（P＜0.05。相比模型組，運(yùn)動(dòng)組、飲食組、聯(lián)合組的Beclin-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量均顯著升高（均P＜0.05），p62 均顯著降低（均P＜0.05），Lc3-Ⅱ僅在飲食組和聯(lián)合組顯著升高（P＜0.05）。運(yùn)動(dòng)和飲食聯(lián)合干預(yù)后，Beclin-1 和Lc3-ⅡmRNA 相對(duì)表達(dá)量均顯著升高（均P＜0.05），p62 則顯著降低（P＜0.05），見表4。

表4 5組小鼠肝臟Beclin-1、Lc3-Ⅱ、p62 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

2.5 肝臟病理形態(tài)指標(biāo)與自噬相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量的相關(guān)性分析 NASH 小鼠肝臟NAS 與肝臟組織Beclin-1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)（r=0.487，P＜0.01），與p62 mRNA 相對(duì)表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.442，P＜0.05），與Lc3-ⅡmRNA 相對(duì)表達(dá)量無相關(guān)性（r=0.241，P＞0.05）。NASH 小鼠肝指數(shù)與肝臟組織Beclin-1、Lc3-Ⅱ和p62 mRNA 相對(duì)表達(dá)量，均無相關(guān)性（均P＞0.05）。

3 討論

自噬現(xiàn)象廣泛存在于真核細(xì)胞生物體的新陳代謝中，它是細(xì)胞自我更新的過程，也是機(jī)體組織的一種自我防御機(jī)制[9]。多項(xiàng)研究表明，自噬參與肝臟脂質(zhì)代謝，長(zhǎng)期高果糖飲食可導(dǎo)致肝臟細(xì)胞自噬失調(diào)[10-12]，但自噬與NAFLD 間的關(guān)系仍有分歧，一些研究表明，NASH 模型小鼠Beclin-1、Lc3-Ⅱ蛋白相對(duì)表達(dá)量降低，自噬活性減弱[11-13]；也有研究發(fā)現(xiàn)Beclin-1、Lc3-Ⅱ蛋白在NASH 小鼠模型中的表達(dá)明顯增強(qiáng)，自噬活性增強(qiáng)[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組中Beclin-1 mRNA 及蛋白表達(dá)水平降低，而p62 mRNA 及蛋白表達(dá)水平升高，提示NASH 小鼠自噬活性減弱，與Liu 等[16]結(jié)果一致。但值得關(guān)注的是，本研究中模型組小鼠Lc3-ⅡmRNA及蛋白表達(dá)并無明顯變化，這可能與實(shí)驗(yàn)選用的小鼠、喂養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)及Lc3-Ⅱ的動(dòng)態(tài)變化有關(guān)。Lc3-Ⅱ作為一種蛋白輕鏈，是自噬過程的標(biāo)志物之一，主要參與自噬小體的形成，當(dāng)Lc3前體分子被自噬相關(guān)4同源物（Bautophagy related 4 homolog，ATG4）B 剪去C 端5 肽后裂解形成Lc3-Ⅰ，可被ATG7激活，轉(zhuǎn)移至ATG3 并偶聯(lián)脂酰乙醇胺以形成膜結(jié)合形式的Lc3-Ⅱ，成為自噬體的結(jié)構(gòu)蛋白[17]。隨著NAFLD 疾病進(jìn)展，脂質(zhì)在肝細(xì)胞大量沉積，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，機(jī)體自噬活性受到抑制，Lc3-Ⅱ處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，呈現(xiàn)無明顯變化。本研究使用C57BL/6野生型小鼠并喂養(yǎng)20周，與既往研究使用SD大鼠喂養(yǎng)8 周等存在差異，需要進(jìn)一步排除動(dòng)物品系及喂養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)對(duì)自噬蛋白的干擾。

自噬的激活受多種因素共同影響，飲食與運(yùn)動(dòng)均能影響細(xì)胞的自噬作用[4]。Guarino 等[18]對(duì)小鼠實(shí)施8周速度為12.5 m/min 的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠Beclin-1、Lc3-Ⅱ基因及蛋白表達(dá)顯著升高，小鼠骨骼肌自噬激活。Gao 等[19]研究同樣證明了該結(jié)論，大鼠跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)后骨骼肌自噬激活，肝臟內(nèi)脂肪變性緩解，提示運(yùn)動(dòng)可通過激活肝臟脂噬來改善肝臟衰老。Li 等[20]對(duì)小鼠進(jìn)行16 周游泳訓(xùn)練后發(fā)現(xiàn)，游泳運(yùn)動(dòng)可激活骨骼肌和肝臟自噬來改善NAFLD。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)可通過增加Beclin-1 及減少p62 的表達(dá)，從而激活肝臟自噬，且單純飲食或運(yùn)動(dòng)干預(yù)激活小鼠肝臟自噬的效果遠(yuǎn)不如聯(lián)合干預(yù)。與本研究不同的是，馮燕[21]對(duì)NAFLD 小鼠進(jìn)行10 周飲食干預(yù)聯(lián)合高強(qiáng)度有氧跑步運(yùn)動(dòng)后檢測(cè)其內(nèi)臟脂肪組織自噬活性，結(jié)果顯示飲食干預(yù)聯(lián)合高強(qiáng)度有氧運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組內(nèi)臟脂肪組織中Beclin-1 蛋白水平明顯下降，p62 蛋白水平明顯升高，自噬活性受到抑制。這可能是不同研究檢測(cè)的組織部位、小鼠運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度及時(shí)長(zhǎng)不同，而過度運(yùn)動(dòng)可能抑制小鼠內(nèi)臟脂肪組織的自噬[22-23]。以上研究均顯示，運(yùn)動(dòng)聯(lián)合飲食干預(yù)對(duì)減輕小鼠肥胖及延緩NAFLD 疾病進(jìn)展較單一干預(yù)更佳。

另本研究還發(fā)現(xiàn)，NASH 小鼠肝臟組織NAS 與自噬相關(guān)蛋白Beclin-1 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)，與p62 呈負(fù)相關(guān)，提示運(yùn)動(dòng)及飲食干預(yù)可通過調(diào)節(jié)NASH 小鼠肝臟自噬相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量激活肝臟自噬，改善肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積與炎癥浸潤(rùn)程度，減少肝臟氣球樣變，降低NAS，延緩NASH 疾病進(jìn)展。

綜上所述，NASH 小鼠肝臟組織Beclin-1 mRNA 及蛋白相對(duì)表達(dá)量降低，p62 mRNA 及蛋白相對(duì)表達(dá)量增多，自噬活性受抑制，導(dǎo)致肝臟出現(xiàn)大量脂質(zhì)沉積和炎性浸潤(rùn)。運(yùn)動(dòng)和飲食干預(yù)可促進(jìn)Beclin-1 mRNA及蛋白表達(dá)、抑制p62 mRNA 表達(dá)及分解p62 蛋白來激活肝臟自噬，延緩NASH 疾病進(jìn)展，相比之下，聯(lián)合干預(yù)效果最佳。這一發(fā)現(xiàn)可為NASH 防治提供依據(jù)，為探究自噬的調(diào)節(jié)對(duì)NAFLD 的作用提供思路。