吳曉玲

念珠菌性陰道炎是成年女性中常見(jiàn)的婦科疾病,特別是近些年因?yàn)榧に仡?lèi)藥物與抗生素的廣泛使用,使得臨床很多真菌都出現(xiàn)耐藥,導(dǎo)致各類(lèi)真菌感染的發(fā)病率逐年升高。很多患者自身對(duì)真菌感染和治療都缺乏必要的認(rèn)識(shí),自行購(gòu)買(mǎi)的抗真菌藥物不具有針對(duì)性,這就導(dǎo)致治療中很容易出現(xiàn)真菌感染性病癥反復(fù)發(fā)作,進(jìn)而導(dǎo)致治療難度增加［1］。本文主要比較革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法檢驗(yàn)?zāi)钪榫躁幍姥谆颊哧幍婪置谖锏男Ч町?并以常規(guī)病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn),報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年4月～2021年6月到本院進(jìn)行治療的145例疑似念珠菌性陰道炎患者作為研究對(duì)象,其中已婚83例、未婚62例,年齡22～43歲、平均年齡(35.38±8.28)歲,病程1～14個(gè)月、平均病程(7.67±1.35)個(gè)月,發(fā)病至入院時(shí)間1～5 d、平均發(fā)病至入院時(shí)間(2.41±0.43)d。符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》標(biāo)準(zhǔn),患者在《知情同意書(shū)》上簽字。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①患者自覺(jué)存在陰道瘙癢、白帶異常等相關(guān)癥狀；②患者具有進(jìn)行陰道病原微生物檢驗(yàn)的條件；③所有患者在入院前2周之內(nèi)均未服用過(guò)抗生素等相關(guān)藥物。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①急性生殖道炎癥反應(yīng)；②其他嚴(yán)重婦科疾??；③合并嚴(yán)重心臟、肝臟、腎臟器質(zhì)性病變；④惡性腫瘤、腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；⑤嚴(yán)重精神類(lèi)疾病、溝通交流障礙；⑥同期參與其他研究,并存在對(duì)本文研究結(jié)果產(chǎn)生影響的行為和體征。

1.3 檢驗(yàn)方法

1.3.1 陰道分泌物采集 在標(biāo)本采集前1 d,告知研究對(duì)象避免性生活,不要盆浴。各項(xiàng)檢查均堅(jiān)持無(wú)菌操作。根據(jù)檢查目的不同,采集不同部位(宮頸管口、陰道深部、陰道穹窿后部等)的陰道分泌物,收集待測(cè)。

1.3.2 革蘭染色法 將標(biāo)本均勻涂抹在潔凈的載玻片中央,自然風(fēng)干或通過(guò)火焰2～3次固定。標(biāo)本干燥后,滴加草酸銨結(jié)晶紫溶液,染色1 min。用流水緩慢沖洗,吸水紙吸干。滴加碘液,染色1 min,水洗。95%乙醇脫色,待無(wú)紫色液體流出立即水洗。番紅復(fù)染3～5 min,水洗,鏡檢。若鏡下可見(jiàn)革蘭陽(yáng)性濃染的卵圓形孢子或假菌絲即可判定念珠菌。

1.3.3 細(xì)菌培養(yǎng)法 將樣本浸入無(wú)菌生理鹽水中,接種環(huán)劃線(xiàn)接種于沙氏葡萄糖瓊脂平板,35℃培養(yǎng)24～ 48 h。如出現(xiàn)表面光滑、有濃酵母味的乳白色菌落,選取典型菌落接種念珠菌顯色平板。白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌和克柔念珠菌分別呈現(xiàn)為綠色、紫色、藍(lán)灰色和粉紅色。

1.3.4 PCR檢測(cè)法 ①待檢樣品接種于沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基,35～37℃培養(yǎng)48 h。②選取3～5個(gè)典型菌落溶于1 ml無(wú)菌生理鹽水中,5000 r/min離心5 min,沉淀加入核酸提取試劑盒中提取菌體核酸。③PCR擴(kuò)增：選取25 μl擴(kuò)增體系(10 倍濃度PCR緩沖液2.5 μl,10 mmol dNTP混合液2.5 μl,5 U/μl Taq I聚合酶0.2 μl,25 μmol/L SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2各0.5 μl,核酸提取液1 μl,超純水補(bǔ)至25 μl),擴(kuò)增參數(shù)按常規(guī)設(shè)置(預(yù)變性95℃ 5 min；變性95℃ 30 s,退火58℃ 30 s,延伸72℃ 1 min,擴(kuò)增30～35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min),并設(shè)置陰陽(yáng)對(duì)照。④電泳：將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。⑤紫外凝膠成像儀觀察：若出現(xiàn)235 bp的目的條帶,即為念珠菌陽(yáng)性。

1.3.5 病理診斷 對(duì)所有采集的分泌物首先進(jìn)行酸堿檢驗(yàn),正常值為4.5～5.5,如果pH值明顯升高則表明存在菌群聚集,為可疑陰道炎癥。潔凈度檢查以顯微鏡觀察標(biāo)本的桿菌、球菌、上皮細(xì)胞和白細(xì)胞的數(shù)量等,潔凈度為1～2度說(shuō)明正常,3～4度說(shuō)明異常。常規(guī)進(jìn)行滴蟲(chóng)、線(xiàn)索細(xì)胞的檢查。實(shí)施真菌檢測(cè)時(shí),如果鏡下發(fā)現(xiàn)直徑為3～5 μm卵圓形孢子,懷疑為白色念珠菌,然后對(duì)該標(biāo)本進(jìn)行胺試驗(yàn),結(jié)果陽(yáng)性即確認(rèn)念珠菌感染。

1.4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 統(tǒng)計(jì)革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法檢出結(jié)果和病理診斷結(jié)果,以病理診斷作為金標(biāo)準(zhǔn),比較革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法診斷念珠菌性陰道炎的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率、漏診率［2］。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陽(yáng)性)×100%；陰性預(yù)測(cè)值=真陰性/(假陰性+真陰性)×100%；靈敏度=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(假陽(yáng)性+真 陰性)×100%；準(zhǔn)確度=(真陽(yáng)性+真陰性)/總例數(shù)× 100%；約登指數(shù)=(靈敏度+特異度)-1；誤診率=假陽(yáng)性/(假陽(yáng)性+真陰性)×100%；漏診率=假陰性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法和病理診斷結(jié)果分析 病理診斷檢出陽(yáng)性141例,陰性4例；細(xì)菌培養(yǎng)法檢出陽(yáng)性134例,陰性11例；革蘭染色法檢出陽(yáng)性136例,陰性9例；PCR檢測(cè)法檢出陽(yáng)性 135例,陰性10例。見(jiàn)表1。

表1 革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法和病理診斷結(jié)果分析(n)

2.2 革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法對(duì)念珠菌性陰道炎的診斷效能比較 細(xì)菌培養(yǎng)法診斷念珠菌性陰道炎的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.51%、陰性預(yù)測(cè)值為18.18%、靈敏度為93.62%、特異度為50.00%、準(zhǔn)確度為92.41%、約登指數(shù)為0.4362、誤診率為50.00%、漏診率為6.38%；革蘭染色法診斷念珠菌性陰道炎的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.53%、陰性預(yù)測(cè)值為22.22%、靈敏度為95.04%、特異度為50.00%、準(zhǔn)確度為93.79%、約登指數(shù)為0.4504、誤診率為50.00%、漏診率為4.96%；PCR檢測(cè)法診斷念珠菌性陰道炎的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.52%、陰性預(yù)測(cè)值為20.00%、靈敏度為94.33%、特異度為50.00%、準(zhǔn)確度為93.10%、約登指數(shù)為0.4433、誤診率為50.00%、漏診率為5.67%。三種檢驗(yàn)方法診斷念珠菌性陰道炎的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率、漏診率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法對(duì)念珠菌性陰道炎的診斷效能比較

3 討論

臨床研究認(rèn)為［3］導(dǎo)致女性出現(xiàn)陰道炎的主要病原體包括細(xì)菌、滴蟲(chóng)和真菌,而真菌感染當(dāng)中主要以念珠菌感染為主,這是婦科疾病當(dāng)中的常見(jiàn)表現(xiàn)類(lèi)型。念珠菌性陰道炎在發(fā)病時(shí)會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)嚴(yán)重的外陰瘙癢和灼燒感,陰道分泌物存在豆腐渣樣的異味,隨著病情不斷進(jìn)展,會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)心絞痛和尿痛等主要表現(xiàn)［4,5］。這種病情十分頑固,遷延不愈,而且容易反復(fù)發(fā)作,因此很容易給患者的正常生活和工作帶來(lái)較大的影響［6,7］。

長(zhǎng)時(shí)間的炎癥容易誘發(fā)盆腔炎癥,也容易導(dǎo)致患者輸卵管和卵巢出現(xiàn)炎癥,嚴(yán)重情況下會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)宮頸糜爛與宮頸炎,甚至?xí)?duì)女性的身心健康產(chǎn)生威脅［8-10］。臨床對(duì)念珠菌性陰道炎患者要本著盡早診斷,盡早治療的原則,因此采取科學(xué)有效的方法對(duì)患者進(jìn)行積極的診斷十分必要［11,12］。革蘭染色法成本低廉、操作簡(jiǎn)單,容易在臨床上普遍推廣,但這種檢驗(yàn)方法也會(huì)受到多種因素影響,從而導(dǎo)致檢驗(yàn)過(guò)程中存在一定的誤差［13,14］。

綜上所述,革蘭染色法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法均可以實(shí)現(xiàn)對(duì)念珠菌性陰道炎患者陰道分泌物的檢驗(yàn),臨床可以根據(jù)患者的實(shí)際情況靈活的選擇這三種檢驗(yàn)手段。