亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        葫蘆籽的超聲波輔助三相分配提取工藝

        2023-03-29 07:44:18黃正虹汪祖華
        食品工業(yè) 2023年3期
        關(guān)鍵詞:叔丁醇響應(yīng)值葫蘆

        黃正虹,汪祖華*

        1.貴州中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心(貴陽(yáng) 550000);2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院(貴陽(yáng) 550000)

        葫蘆是葫蘆科的一種常見草本植物,被廣泛種植于亞洲、歐洲和南美洲。葫蘆籽含有豐富的不飽和脂肪酸和生物活性物質(zhì)的油[1]、蛋白質(zhì)、植物甾醇、維生素和多糖。研究表明,葫蘆籽油具有極好的保健功效;葫蘆籽油提取的蛋白質(zhì)具有抑制細(xì)菌生長(zhǎng)、抑制炎癥和降低血糖等生理功能;從葫蘆果肉中提取的多糖具有增加血清胰島素水平、降低血糖水平和改善葡萄糖耐量的能力,可用作新型抗胰島素劑[2-4]。

        超聲波輔助三相分配提?。║TPP)技術(shù)是一種綠色、高效的提取方法,是將粗提取物或懸浮液與固體鹽和有機(jī)溶劑混合,同時(shí)形成三種不同的相[4]。上相是叔丁醇層,主要含有脂類、色素等非極性化合物,中間的沉淀相是蛋白質(zhì)層,下面的水相是水層,其中含有一些極性化合物,如多糖。

        近年來,雖然UTPP技術(shù)應(yīng)用于從天然作物中提取和純化酶、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、多糖和其他物質(zhì),但是很少使用UTPP技術(shù)同時(shí)提取油、蛋白質(zhì)和多糖的研究。因此,研究的目的是通過UTPP技術(shù)同時(shí)提取分離CSO、CSP和CSPS。研究考察了硫酸銨添加量、叔丁醇與漿液的比例、pH、超聲功率、輻射時(shí)間和占空比對(duì)CSO、CSP和CSPS提取率的影響。

        1 材料與方法

        1.1 材料和儀器

        葫蘆籽于中國(guó)內(nèi)蒙古自治區(qū)巴彥淖爾市杭錦后旗市場(chǎng)購(gòu)買。將干凈的葫蘆籽放入DZF-6250真空干燥器(上海友誼儀器有限公司)中,在60 ℃和25 kPa下干燥24 h,達(dá)到2 g/100 g的含水量。研磨后,葫蘆籽通過0.425 mm篩,密封在密封袋中,儲(chǔ)存在4 ℃直到提取。正己烷[國(guó)藥試劑公司(上海市),色譜純]。其他試劑(包括叔丁醇、硫酸銨、無(wú)水乙醇、鹽酸、氫氧化鈉、牛血清蛋白、考馬斯亮藍(lán)G-250、苯酚、硫酸)均購(gòu)自國(guó)藥試劑公司(上海市),分析純。

        1.2 葫蘆籽組分分析

        參照AOCS[5]的標(biāo)準(zhǔn)方法分析了葫蘆籽的水分、油和蛋白質(zhì)含量,參照AOAC[6]的標(biāo)準(zhǔn)方法分析了灰分含量。葫蘆籽粉的含油量為46.17±0.11 g/100 g,蛋白質(zhì)含量為30.25±0.23 g/100 g,初始含水量為9.43±0.11 g/100 g,總灰分含量為5.54±0.16 g/100 g。

        1.3 UTPP提取CSO,CSP,CSPS工藝

        葫蘆籽漿是通過將葫蘆籽粉與蒸餾水以1∶20(g/mL)混合來制備的。在室溫下,將一定比例的(NH4)2SO4(10~50 g/100 mL)添加到葫蘆籽混合物中,并輕輕攪拌使其充分混合。使用0.1 mol/L鹽酸溶液和0.1 mol/L NaOH溶液將混合物的pH調(diào)節(jié)至3~7。然后,按體積比(叔丁醇/漿液=0.5∶1.0~2.5∶1.0)加入叔丁醇。

        使用20 kHz頻率的鈦超聲波探頭對(duì)混合物進(jìn)行超聲處理,該探頭浸入樣品溶液中,距底部1.5 cm的深度。在脈沖模式下,混合物處理一定時(shí)間(5~25 min),同時(shí)保持一定的超聲波功率(30~150 W)和一定的占空比(20%~100%)。為了避免定位效應(yīng),使用圓底玻璃反應(yīng)器。用冰浴冷卻系統(tǒng),使所有樣品的溫度保持在25 ℃以下。超聲處理后,將混合物以7 600×g離心20 min,形成界限分明的三相。對(duì)上層溶劑層進(jìn)行負(fù)壓蒸發(fā)以回收叔丁醇,并將獲得的CSO樣品儲(chǔ)存在4 ℃下。CSO提取率按式(1)計(jì)算。

        CSO提取率=葫蘆籽提取物中油脂的含量(g/100 g)/所用的葫蘆籽顆粒原料中油脂的含量(g/100 g)×100% (1)

        中間層主要由沉淀的CSP和脫脂葫蘆籽組成,并記錄中間相的體積。將中間層的沉淀物溶解在pH 8.0的0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液中,在4 ℃放置超過12 h,并在蒸餾水中透析,然后將上清液冷凍干燥以獲得CSP。獲得的CSP儲(chǔ)存在4 ℃下,以供進(jìn)一步研究。牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線由考馬斯亮藍(lán)比色法制備。CSP提取率按式(2)計(jì)算。

        CSP提取率=葫蘆籽提取物中蛋白的含量(g/100 g)/所用的葫蘆籽顆粒原料中蛋白的含量(g/100 g)×100% (2)

        下層水相主要由CSPS和(NH4)2SO4組成。首先記錄所獲得的下層溶液的體積,用蒸餾水透析并冷凍干燥以獲得CSPS。CSPS儲(chǔ)存在4 ℃下,供后續(xù)研究使用。用苯酚-硫酸法(以d-葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn))測(cè)定樣品在波長(zhǎng)490 nm處的吸光度,計(jì)算出樣品中CSPS的含量,進(jìn)而計(jì)算出葫蘆籽多糖的提取率。CSPS提取率按式(3)計(jì)算。

        CSPS提取率=葫蘆籽提取物中多糖的含量(g/100 g)/所用的葫蘆籽顆粒原料中多糖的含量(g/100 g)×100% (3)

        1.4 響應(yīng)面法的優(yōu)化試驗(yàn)

        在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選擇響應(yīng)面法中的Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化,以獲得最佳響應(yīng)值。以超聲功率(A)、輻照時(shí)間(B)和占空比(C)為自變量,以CSO提取率(R1)、CSP提取率(R2)和CSPS提取率(R3)為響應(yīng)值,設(shè)計(jì)了三因素三水平的響應(yīng)面試驗(yàn),設(shè)計(jì)概要見表1。通過軟件(Design Expert 8.0.6,USA)分析二次多項(xiàng)式模型的系數(shù)。使用ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析以獲得UTPP的最佳條件。

        表1 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素和水平

        2 試驗(yàn)結(jié)果與討論

        2.1 添加(NH4)2SO4的影響

        在TPP系統(tǒng)中,(NH4)2SO4是最常用的鹽析試劑,因?yàn)樗阋?,?duì)蛋白質(zhì)溫和,并且具有高溶解度[10]。如圖1(A)所示,隨著(NH4)2SO4的添加量從10 g/100 mL增加到50 g/100 mL,CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率均呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì),這是因?yàn)辂}析效應(yīng)隨著體系中鹽濃度的增加而變得更強(qiáng)。(NH4)2SO4的最佳濃度將使蛋白質(zhì)絮凝并將其分離到相間,最大限度地釋放與蛋白質(zhì)結(jié)合的脂質(zhì),從而最大限度地溶解叔丁醇相中的脂質(zhì)[7]。因此,當(dāng)(NH4)2SO4濃度為30 g/100 mL時(shí),CSO提取率和CSP提取率最高,分別為38.99%和14.27%。然而,在較低的(NH4)2SO4添加量(20 g/100 mL)下,鹽的增溶作用可以促進(jìn)CSPS在下相中的有效分配。因此,當(dāng)(NH4)2SO4的加入量為20 g/100 mL時(shí),CSPS提取率最高,為2.05%。

        圖1 UTPP法測(cè)試參數(shù)對(duì)CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率的影響

        (NH4)2SO4濃度過高導(dǎo)致蛋白質(zhì)不可逆變性,不利于油體中蛋白質(zhì)和脂類的分離,導(dǎo)致CSO提取率和CSP提取率下降。同時(shí),隨著(NH4)2SO4添加量的增加,CSPS提取率也降低,這是因?yàn)殡S著鹽離子濃度的增加,鹽離子結(jié)合了更多的水分子,導(dǎo)致與水分子之間形成的氫鍵網(wǎng)絡(luò)減弱,進(jìn)而影響多糖的提取[7]。

        (NH4)2SO4濃度為30 g/100 mL時(shí),CSO提取率和CSP提取率最高,而(NH4)2SO4濃度為20 g/100 mL和30 g/100 mL時(shí),CSPS提取率之間的差異不顯著(P>0.05)。因此,選擇濃度為30 g/100 mL的(NH4)2SO4進(jìn)行進(jìn)一步研究。

        2.2 叔丁醇與漿液比例的影響

        叔丁醇是TPP中常見的溶劑,具有良好的水溶性,可以有效分離蛋白質(zhì)、色素、脂質(zhì)等各種生物分。如圖1(B)所示,當(dāng)叔丁醇與漿液的體積比從0.5∶1.0(mL/mL)增加到1.0∶1.0(mL/mL)時(shí),CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率逐漸增加。叔丁醇濃度的增加促使沉淀的蛋白質(zhì)漂浮在下層水相(含水的鹽層)之上,這促進(jìn)了蛋白質(zhì)與脂質(zhì)和多糖的分離,同時(shí)促進(jìn)了CSO在叔丁醇中的溶解。因此,當(dāng)叔丁醇與漿液的體積比為1.0∶1.0(mL/mL)時(shí),CSO、CSP和CSPS的提取率最高,分別為39.74%,14.17%和1.94%。

        當(dāng)叔丁醇與漿液的體積比繼續(xù)增加到2.5∶1.0(mL/mL)時(shí),CSO提取率沒有顯著變化,而CSP提取率和CSPS提取率均下降。這是因?yàn)榇罅渴宥〈紝?dǎo)致蛋白質(zhì)變性,這不利于蛋白質(zhì)沉降到相間[8]。隨著叔丁醇含量的增加,它與硫酸根離子競(jìng)爭(zhēng)水分子,因此影響CSPS在下相中的溶解。結(jié)果表明,在漿液和叔丁醇的比例為1∶1時(shí),可可脂替代品的提取率最高[9]。當(dāng)叔丁醇與漿液的體積比為1.0∶1.0(mL/mL)時(shí),CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率達(dá)到最大值,因此選擇叔丁醇與漿液的體積比1.0∶1.0(mL/mL)進(jìn)行進(jìn)一步研究。

        2.3 pH的影響

        UTPP的分離效率與pH的變化高度相關(guān)。由于pH的變化會(huì)影響大分子之間的靜電相互作用,因此UTPP系統(tǒng)中蛋白質(zhì)和多糖的分配會(huì)隨著pH的變化而變化。在圖1(C)中,隨著pH從3增加到7,CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率呈現(xiàn)出先增加后減少的趨勢(shì)。在pH 5時(shí),最大的CSO提取率和CSP提取率分別為38.99%和14.17%,而在pH 6時(shí)最大的CSPS提取率為2.06%。一些研究結(jié)果顯示,CSP在pH約為5.0時(shí)溶解度最低。當(dāng)體系pH約為5時(shí),CSP的凈電荷為零,蛋白質(zhì)的沉淀量最大,有利于油體中油和蛋白質(zhì)的分離,進(jìn)而促進(jìn)CSO在叔丁醇中的溶解。因此,CSO提取率和CSP提取率在pH 5時(shí)達(dá)到最大值。

        隨著pH的增加,蛋白質(zhì)表面帶負(fù)電荷,這將增加蛋白質(zhì)在下層相中的溶解度,對(duì)油和蛋白質(zhì)的提取不利。因此,隨著pH繼續(xù)增加,CSO提取率和CSP提取率逐漸降低。pH的變化也會(huì)影響與多糖結(jié)合的糖蛋白的分離,從而影響CSPS提取率。CSO提取率和CSP提取率在pH 5時(shí)達(dá)到最大值,而在pH 5和pH 6時(shí)對(duì)CSPS提取率的影響的可變性不顯著(P>0.05)??紤]到pH對(duì)CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率的影響,選擇pH 5作為研究的下一步。

        2.4 超聲波功率的影響

        超聲波功率對(duì)提取效率有積極的貢獻(xiàn)。超聲功率的增加放大了空化效應(yīng)和機(jī)械剪切,促進(jìn)了傳質(zhì),有利于快速萃取。如圖1(D)所示,隨著超聲功率從30 W增加到150 W,CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率均呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì),當(dāng)超聲功率為120 W時(shí),CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率達(dá)到最高值,分別為38.99%,14.17%和1.94%,這是由超聲波產(chǎn)生的聲空化現(xiàn)象引起的。在超聲波處理過程中,瞬態(tài)氣泡在幾個(gè)聲學(xué)周期內(nèi)迅速形成,當(dāng)它們?cè)诮橘|(zhì)中達(dá)到臨界尺寸時(shí)會(huì)強(qiáng)烈破裂,這種現(xiàn)象增加了空化區(qū)域的局部壓力,并在液體周圍產(chǎn)生高剪切和湍流,這加速了傳質(zhì)過程[7,9-10],因此有利于CSO、CSP和CSPS的提取。然而,當(dāng)超聲功率過高時(shí),空化氣泡劇烈破裂,導(dǎo)致空化效應(yīng)的中斷,因此CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率減少。CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率在120 W的超聲功率下達(dá)到最大值。因此,選擇120 W的超聲功率用于進(jìn)一步研究。

        2.5 輻照時(shí)間的影響

        研究了超聲處理時(shí)間對(duì)CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率的影響,結(jié)果顯示在圖1(E)中。如圖1(E)所示,當(dāng)超聲處理時(shí)間為15 min時(shí),CSP提取率達(dá)到最大值2.01%,而CSO提取率和CSPS提取率在超聲處理時(shí)間為20 min時(shí)達(dá)到最高值,分別為38.99%和14.17%。超聲波輔助提取可以在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)物質(zhì)的有效提取,這是由于超聲的瞬時(shí)空化效應(yīng)破壞了生物膜和細(xì)胞壁,促進(jìn)了溶劑和固體之間的有效接觸,并使溶劑滲透到細(xì)胞中,從而加速了TPP的分離效率。因此,它有利于充分提取CSO,CSP和CSPS,并縮短提取時(shí)間[7,10]。CSO提取率和CSP提取率在照射時(shí)間為20 min時(shí)達(dá)到最大值。15和20 min的照射時(shí)間對(duì)細(xì)胞毒性的影響差異不顯著(P>0.05)。結(jié)合輻照時(shí)間對(duì)CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率的影響,選擇20 min的輻照時(shí)間用于進(jìn)一步研究。

        2.6 占空比的影響

        考慮到換能器的腐蝕和由此產(chǎn)生的過熱,研究人員不建議連續(xù)使用超聲波。因此,為該系統(tǒng)選擇超聲波處理的脈沖模式,并表示為占空比。通過改變超聲波開啟和關(guān)閉時(shí)間來改變占空比。如圖1(F)所示,當(dāng)占空比從20%增加到100%時(shí),CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率都顯示出先增加后減少的趨勢(shì)。占空比為60%時(shí),CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率值最高,分別為38.99%,14.17%和1.94%。超聲處理產(chǎn)生的空化氣泡的破裂會(huì)在周圍流體中引起高溫、高壓和微射流的瞬態(tài)。當(dāng)占空比為20%(即脈沖間隔延長(zhǎng))時(shí),微射流的這種狀態(tài)迅速消失。因此,較低的占空比不利于CSO、CSP和CSPS的提取。當(dāng)占空比增加時(shí),系統(tǒng)中的固體和液體顆粒在超聲處理下振蕩并獲得更快的速度,導(dǎo)致可溶性物質(zhì)從原料快速擴(kuò)散到溶劑中,從而促進(jìn)CSO、CSP和CSPS的提取[8]。

        超聲作用引起的空泡潰滅可產(chǎn)生高達(dá)5 000 K的局部溫度和高達(dá)1 000 MPa的壓力。當(dāng)占空比達(dá)到100%時(shí),連續(xù)超聲作用產(chǎn)生的熱量難以迅速擴(kuò)散,導(dǎo)致局部溫度過高,不利于CSO、CSP和CSPS的提取。此外,使用脈沖超聲治療比連續(xù)超聲治療更節(jié)能。為了優(yōu)化UTPP同時(shí)提取CSO、CSP和CSPS的超聲處理參數(shù),對(duì)超聲功率、輻射時(shí)間和占空比三個(gè)自變量進(jìn)行了響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。其他操作條件:(NH4)2SO4的加入量為30 g/100 mL,叔丁醇與漿液的比例為1.0∶1.0(mL/mL),pH為5。

        2.7 響應(yīng)面法優(yōu)化CSO、CSP和CSPS提取

        2.7.1 干擾分析

        將獨(dú)立變量組合到響應(yīng)曲線中,利用擾動(dòng)圖研究了這3個(gè)變量對(duì)CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率的擾動(dòng)影響。試驗(yàn)自變量對(duì)響應(yīng)值的影響與曲線的斜率密切相關(guān)。斜率較大的響應(yīng)曲線意味著相應(yīng)的試驗(yàn)因子對(duì)響應(yīng)值敏感,而斜率較小的曲線表明響應(yīng)值對(duì)該因子不敏感。在繪制過程中,通過改變測(cè)試范圍內(nèi)的單個(gè)因素并固定其他因素來檢查響應(yīng)值與參考點(diǎn)的偏差。圖2顯示占空比和超聲功率比照射時(shí)間對(duì)CSO提取率更敏感。圖2中的曲線表明,照射時(shí)間和占空比對(duì)CSP提取率更敏感,對(duì)于CSPS提取率,照射時(shí)間最敏感,占空比不太敏感。

        圖2 測(cè)試參數(shù)對(duì)擾動(dòng)的影響

        2.7.2 響應(yīng)面模型分析

        采用BBD法對(duì)超聲功率、輻射時(shí)間和占空比參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳提取工藝條件。17次運(yùn)行的試驗(yàn)數(shù)據(jù)和RSM模型的預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)如表2所示,二次模型的ANOVA值如表3所示。如表3所示,“缺乏擬合P值”不顯著(P>0.05),回歸分析顯著,F(xiàn)值分別為84.12,88.06和30.25,表明三個(gè)因素與響應(yīng)值之間存在顯著的非線性關(guān)系。模型的R平方值分別為0.990 9,0.991 2和0.975 4,adj的R平方值分別為0.979 2,0.980 0和0.943 7,充分證明了模型與試驗(yàn)擬合良好?!癆deq精度”值分別為28.958,26.862和14.229,也表明該模型是理想的。所有三個(gè)模型的變異系數(shù)(C.V.)都小于5%,這代表了模型的良好再現(xiàn)性。

        表2 RSM模型的測(cè)試數(shù)據(jù)和預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)比較

        表4 回歸方程方差分析

        2.7.3 UTPP法提取參數(shù)的優(yōu)化

        基于響應(yīng)面法建立的數(shù)學(xué)模型,優(yōu)化的試驗(yàn)條件為超聲功率117.57 W,輻射時(shí)間19.75 min,占空比62.37%。在最佳條件下,預(yù)測(cè)值分別為39.85%,14.32%和1.99%。結(jié)合實(shí)際操作,將超聲功率、輻照時(shí)間和占空比分別調(diào)整為118 W、20 min和60%。為了驗(yàn)證優(yōu)化結(jié)果的可靠性,在調(diào)整后的條件下進(jìn)行3次試驗(yàn)驗(yàn)證,得到的CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率分別為39.79%±1.54%,14.30%±0.37%和1.97%±0.13%。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與預(yù)測(cè)值高度一致,表明該模型能有效預(yù)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果。

        3 結(jié)論

        研究了用UTPP同時(shí)提取和分離葫蘆籽油、蛋白質(zhì)和多糖的效果。通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法優(yōu)化了硫酸銨添加量、叔丁醇與漿液的比例、pH、超聲功率、輻射時(shí)間和占空比等參數(shù),以實(shí)現(xiàn)CSO、CSP和CSPS的高效提取。當(dāng)(NH4)2SO4加入量為30 g/100 mL,叔丁醇與漿料的比例為1.0∶1.0(mL/mL),pH為5,超聲功率為118 W,輻射時(shí)間為20 min,占空比為60%時(shí),獲得最高的CSO提取率、CSP提取率和CSPS提取率。工藝分析和優(yōu)化結(jié)果表明,占空比和超聲功率對(duì)CSPS提取率的影響比輻照時(shí)間更敏感,占空比和輻照時(shí)間對(duì)CSP提取率的影響更敏感,輻照時(shí)間對(duì)CSPS提取率的影響最敏感。同時(shí),試驗(yàn)結(jié)果與預(yù)測(cè)值吻合較好,表明該模型可用于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。與TPP方法相比,UTPP方法提取時(shí)間縮短,UTPP方法提取的CSO質(zhì)量較好。天然植物油一般具有抑制刺激,醇和煙香的作用;多糖具有改善口感,增加豐滿度的作用。利用自主調(diào)香技術(shù)對(duì)葫蘆籽油和葫蘆籽多糖的香味特征進(jìn)行了修飾及優(yōu)化,進(jìn)一步提升了葫蘆籽油和葫蘆籽多糖的品質(zhì)和作為香精在卷煙中的實(shí)用性。

        猜你喜歡
        叔丁醇響應(yīng)值葫蘆
        高效減排環(huán)己酮氨肟化技術(shù)的開發(fā)及其工業(yè)化應(yīng)用
        “葫蘆鎮(zhèn)”上喜事多
        寫意葫蘆
        氨肟化裝置叔丁醇回收系統(tǒng)雙效精餾的節(jié)能改造
        氣相色譜法快速測(cè)定環(huán)境水中叔丁醇的含量
        基于熒光光譜技術(shù)的不同食用淀粉的快速區(qū)分
        提高環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性初探
        紫外熒光法測(cè)硫各氣路流量對(duì)響應(yīng)值的影響
        山東化工(2019年1期)2019-01-24 03:00:16
        寶葫蘆
        環(huán)己烷-叔丁醇-水共沸精餾模擬研究
        天津化工(2015年4期)2015-12-26 08:11:47
        久久天天躁狠狠躁夜夜不卡| 久久精品中文字幕免费| 手机av在线播放网站| 80s国产成年女人毛片| 中国熟妇人妻xxxxx| 一本无码av一区二区三区| 国产成人精品中文字幕| 国产在线视频91九色| 夫妇交换性三中文字幕 | 国产一级r片内射免费视频| 国产一区二区视频免费| 国产欧美性成人精品午夜| 成人无码一区二区三区网站| 三级全黄的视频在线观看| 久久九九精品国产不卡一区| 国产精品无码素人福利不卡| 亚洲粉嫩高潮的18p| 日本一道dvd在线中文字幕 | 亚洲精品综合色区二区| 日日噜噜噜夜夜狠狠久久蜜桃| 欧美国产激情二区三区| 97午夜理论片在线影院| 国产欧美久久久精品影院| 国产在线精品成人一区二区三区| 三a级做爰片免费观看| 国产人妻黑人一区二区三区| 国产男女猛烈无遮挡免费视频网址| 一区二区三区中文字幕脱狱者| 国产乱码精品一区二区三区四川人 | 疯狂做受xxxx高潮视频免费| 少妇高潮惨叫喷水在线观看| 精品一区二区三区人妻久久| 日本高清一区二区三区在线观看| 中文字幕肉感巨大的乳专区| 无码AV高潮喷水无码专区线 | 尤物国产一区二区三区在线观看| 各种少妇正面着bbw撒尿视频| 亚洲综合色一区二区三区小说| 精品国产一区二区三广区| 日韩乱码人妻无码系列中文字幕| 亚洲国产成人精品无码区99|