余思雨，操 穎，朱明哲，黃志艷，季 光，張貴民，張 莉

1.上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院脾胃病研究所（上海 200032）；2.上海中醫(yī)藥大學公共健康學院（上海201203）；3.中藥制藥共性技術(shù)國家重點實驗室（山東 臨沂 276006）

肝纖維化是因肝臟受到損傷而產(chǎn)生的一種創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，病理改變以肝星狀細胞（HSC）過度活化和細胞外基質(zhì)進行性積聚及纖維性瘢痕形成為特征［1-2］，為臨床常見的慢性肝病。既往肝纖維化最主要的病因是病毒感染和飲酒，但隨著抗病毒藥物的臨床普及，近年來與代謝相關(guān)的非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）成為了肝纖維化的重要風險因素。肝纖維化是非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）的重要病理表現(xiàn)，NASH合并肝纖維化提示NAFLD肝臟病理進展，若不及時干預，則有可能發(fā)展為肝硬化甚至是肝細胞癌。

TP53是抑癌基因，可通過啟動腫瘤細胞周期阻滯、凋亡、衰老，進而發(fā)揮抗腫瘤作用［3］。TP53基因突變后，其編碼的p53蛋白半衰期會延長，穩(wěn)定性亦會增加，進而在核內(nèi)不斷積累，失去對細胞的監(jiān)視作用［4］。研究［5-6］表明，p53可影響腎纖維化、心肌纖維化進程，并參與NASH的發(fā)生、發(fā)展。線粒體p53可與溶質(zhì)載體家族25成員28（SLC25A28）形成復合物，導致氧化還原活性鐵異常積累和電子轉(zhuǎn)移鏈功能亢進，促進HSC的鐵死亡，從而減輕小鼠肝纖維化［7］。研究［8］發(fā)現(xiàn)，白介素-10（IL-10）可以促進活化的HSC衰老及衰老HSC中p53的表達，進而減輕CCl4誘導的大鼠纖維化。因此，調(diào)控p53蛋白表達可能是治療NASH相關(guān)肝纖維化的有效策略。

中藥復方化滯柔肝顆粒（HZRG）由茵陳、決明子、大黃、澤瀉、豬苓、山楂、蒼術(shù)、白術(shù)、陳皮、瓜蔞、女貞子、墨旱蓮、枸杞子、小薊、柴胡和甘草等16味中藥組成，具有清熱利濕、祛濁解毒、祛瘀柔肝的功效，是治療脂肪性肝病的常用中成藥。既往研究［9］表明，HZRG可以顯著降低酒精性肝炎小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶、肌酸激酶等指標的水平。臨床研究［10］發(fā)現(xiàn)，HZRG能很好地改善NAFLD患者的臨床癥狀、血脂水平及肝功能指標。前期研究發(fā)現(xiàn)，HZRG可以明顯減輕飲食誘導的NASH模型小鼠的代謝性炎癥，但HZRG對NASH相關(guān)肝纖維化的效應(yīng)和機制尚未明確。因此，我們借助網(wǎng)絡(luò)藥理學研究方法，聚焦HZRG治療NASH的潛在靶點p53，通過建立蛋氨酸膽堿缺乏（MCD）飲食誘導的NASH相關(guān)肝纖維化模型，探討HZRG對p53的調(diào)控作用，以期為HZRG治療NASH的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 細胞 人源性HSC細胞系LX2細胞購自美國模式培養(yǎng)物集存庫（ATCC），采用含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素?鏈霉素的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)環(huán)境：37 ℃，95%濕度，5% CO2。細胞實驗數(shù)據(jù)的獲得均基于3次實驗重復。

1.1.2 動物 6周齡雄性C57BL/6小鼠，SPF級，購于江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司。實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（蘇）2018-0008。動物飼養(yǎng)于無特異性病原體環(huán)境中，溫度（22±2）℃，濕度（55±15）%，交替12 h光照和黑暗循環(huán)。本實驗經(jīng)江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司實驗動物倫理委員會批準（批準號：GPTAP20200721-2）。

1.1.3 藥物與試劑 HZRG購于山東新時代藥業(yè)有限公司（批號：8041912029），本實驗定義人鼠等效劑量為低劑量，雙倍劑量為高劑量。轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β 1），美國PeproTech公司（批號：1221209）；Tenovin-6，美國Selleck公司（批號：S4900）。丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）生化檢測試劑盒，南京建成生物有限公司（批號分別為C009-2-1、C010-2-1、A020-2-2、A059-2-2、A111-1-1、A110-1-1）?？贵wp53，美國Santa Cruz Biotechnology公司（批號：sc-126）；α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA），美國Cell Signaling Technology公司（批號：19245）；I型膠原蛋白α1鏈（Col1a1），美國Cell Signaling Technology公司（批號：72026）；β-肌動蛋白（β-actin），杭州華安生物技術(shù)有限公司（批號：HO0802）。兔二抗，美國Cell Signaling Technology公司（批號：7074S）；鼠二抗，美國 Cell Signaling Technology公司（批號：7076S）；熒光二抗兔抗、熒光二抗鼠抗，美國Invirtrogen公司（批號分別為A11012、A32723）。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒，上海酶聯(lián)生物科技有限公司（批號：m1002095-2）。

1.1.4 主要儀器 Western blot快轉(zhuǎn)儀，金斯瑞生物科技有限公司（型號：L00686）；功能酶標儀，美國BioTek公司（型號：SynergyH4）；低溫高速離心機，德國Eppendorf公司（型號：5804R）；切片機、脫水機、包埋機，德國Leica公司（型號分別為RM2235、RM2235、EG1150H+C）；高速低溫組織研磨儀，武漢塞維爾生物科技有限公司（型號：KZ-Ⅲ-FP）；高內(nèi)涵影像采集系統(tǒng)，美國美谷分子儀器有限公司（型號：ImageXpress & MetaXpress）；正置和倒置顯微鏡，日本Olympas株式會社（型號：50I+FⅡGGP）；全自動生化分析儀，日本Toshiba株式會社（型號：TBA-40FR）。RT-qPCR儀，美國ABI公司（型號：7500 StepOne PLUS）。

1.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學分析 借助中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫與分析平臺（TCMSP）、中醫(yī)藥綜合數(shù)據(jù)庫（TCMID）、化合物靶點預測數(shù)據(jù)庫（Swiss Target Prediction）等及相關(guān)文獻查找HZRG的化學成分和作用靶點。利用人類基因綜合數(shù)據(jù)庫（GeneCards）、藥物銀行（DrugBank）等對NASH疾病靶點進行篩選，選擇Venny 2.1.0平臺獲取兩者的交集靶點。二者靶點取交集后利用Cytoscape軟件構(gòu)建成分-靶點網(wǎng)絡(luò)，String數(shù)據(jù)庫構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，拓撲分析獲取關(guān)鍵靶點和成分。

1.3 HZRG對NASH相關(guān)肝纖維化小鼠的干預作用

1.3.1 造模、分組與干預 參考文獻［11］造模方法構(gòu)建NASH相關(guān)肝纖維化小鼠模型。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機分為對照組、模型組、HZRG高劑量組、HZRG低劑量組，每組8只。對照組給予正常飲食，模型組、HZRG高劑量組、HZRG低劑量組給予MCD飲食（A02082002B）。在飲食的基礎(chǔ)上，HZRG低、高劑量組同時灌胃給予3 g·kg-1·d-1、6 g·kg-1·d-1的HZRG藥液［藥物溶解于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液（CMC-Na）中］，對照組、模型組小鼠均灌胃給予等量的0.5% CMC-Na溶液，1次/d（0.1 mL·10 g-1），各組均連續(xù)干預4周。

1.3.2 血清生化指標檢測 末次給藥后，心臟采集全血并分離血清，-80 ℃保存。采用生化分析儀檢測各組小鼠血清ALT、AST、LDH、ALP水平，ELISA試劑盒檢測血清TNF-α水平。

1.3.3 肝組織病理 采血后，收集各組小鼠的肝臟，稱重、拍照后將肝臟中葉分為3份，其中1份用10%福爾馬林中性液固定，切片行HE染色、天狼猩紅染色和Masson染色、免疫組化；2份液氮速凍后-80 ℃保存?zhèn)溆?，用于組織蛋白、RNA的提取及肝組織TC、TG的測定。

小鼠肝臟組織固定1周，脫水后石蠟包埋，病理切片機切取5 μm厚度的石蠟切片，HE染色觀察肝組織病理變化，并由2位病理專家獨立閱片和評價肝組織脂肪變、炎癥和氣球樣變情況，根據(jù)參考文獻［12］中的有關(guān)標準行NAFLD活動度評分（NAS，包括肝脂肪變評分、小葉內(nèi)炎癥評分、肝細胞氣球樣變評分3個部分）；天狼猩紅和Masson染色觀察肝臟膠原沉積情況；免疫組化觀察肝組織中α-SMA和Col1a1的表達，并用ImageJ軟件分析陽性表達面積。

1.3.4 試劑盒檢測肝組織TC、TG水平 取適量肝組織，乙醇勻漿后取上清液，試劑盒檢測肝組織TC、TG水平。

1.3.5 Western blot法檢測肝組織相關(guān)蛋白表達 取適量肝組織在RIPA裂解液中勻漿，低溫離心（12 000 g，離心半徑為90 mm，4 ℃，15 min）后收集上清液。蛋白質(zhì)定量（BCA）法測定蛋白濃度。用10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，室溫封閉30 min，一抗4 ℃孵育過夜，二抗在室溫下孵育60 min。膜表面滴加增強型化學發(fā)光試劑（ECL），置于化學發(fā)光成像系統(tǒng)顯色。采用ImageJ軟件分析蛋白條帶灰度值，計算相關(guān)蛋白相對于內(nèi)參蛋白（β-actin）的表達量。

1.3.6 RT-qPCR法檢測肝組織相關(guān)基因表達 取約20 mg肝組織置于研缽內(nèi)，加入1 mL TRIzol提取總RNA，加入逆轉(zhuǎn)錄試劑進行逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA。以β?actin為內(nèi)參，進行熒光定量PCR擴增以檢測各組肝臟組織或LX2細胞中相關(guān)基因的表達水平。反應(yīng)條件：95 ℃預變性15 min，95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s；40個循環(huán)。擴增引物由上海閃晶生物科技有限公司合成。

小鼠p53基因引物序列如下：F-GGCAGACTTTTCGCCACAG，R-GATGATGGTAAGGATAGGTCGG。各組均設(shè)2個復孔。用2-??CT法表示目的基因的相對表達水平。

1.4 p53蛋白對LX2細胞活化的影響 將LX2細胞以4×105/孔種植于6孔板，24 h后貼壁注入新的含TGF-β1（0、5、10、20 μg·L-1）或Tenovin-6（4.5 g·L-1）的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后進行蛋白、RNA提取及免疫熒光等實驗。

1.4.1 Western blot法檢測TGF-β1誘導的LX2細胞α-SMA、Col1a1、p53蛋白表達 收集細胞在RIPA裂解液中裂解，檢測方法見“1.3.5”。

1.4.2 免疫熒光檢測p53蛋白在活化的LX2細胞中的表達 4%多聚甲醛固定LX2細胞15 min，磷酸鹽緩沖液（PBS）洗3遍后0.5%免疫染色通透液（Triton-X）透化處理15 min，10%牛血清白蛋白（BSA）封閉2 h后滴加一抗，4 ℃過夜；PBS洗3遍后熒光二抗孵育1 h，4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）細胞核染色后高內(nèi)涵拍照。

1.4.3 qRT-PCR法檢測p53 mRNA在活化的LX2細胞中的表達 收集細胞置于研缽內(nèi)，檢測方法見“1.3.6”。

1.4.4 p53蛋白對LX2細胞活化的抑制作用 采用p53激動劑Tenovin-6上調(diào)LX2細胞中p53蛋白的表達，Western blot法、免疫熒光檢測激動劑Tenovin-6干預后LX2細胞α-SMA、Col1a1、p53表達，檢測方法見“1.3.5”和“1.4.2”。

1.5 統(tǒng)計學方法 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以±s表示，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)使用單因素方差分析（ANOVA），兩兩比較采用t檢驗；不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用非參數(shù)檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學分析情況 預測得到的核心化合物為大黃素、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、黃樟醇、威德樂內(nèi)酯、蘆丁、異橙黃酮和川陳皮素，這些化合物靶向p53蛋白及肝臟纖維化通路分子，如基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、絲裂原激活蛋白激酶8（MAPK8）、白介素-6（IL-6）、趨化因子 8（CXCL8）、TGF-β1、過氧化酶活化增生受體γ（PPAR-γ）等。見圖1。

圖1 HZRG治療NASH的網(wǎng)絡(luò)藥理學分析

2.2 對小鼠血清生化指標的影響 與對照組比較，模型組小鼠血清ALT、AST、LDH、ALP水平升高（P<0.05），HZRG低、高劑量組小鼠血清ALT、AST、LDH、ALP水平升高（P<0.05），而TNF-α水平降低（P<0.05）。與模型組比較，HZRG低、高劑量組小鼠血清ALT、AST、LDH、TNF-α水平降低（P<0.05），HZRG低劑量組小鼠血清ALP水平降低（P<0.05）；與HZRG低劑量組比較，HZRG高劑量組小鼠血清ALT、AST、LDH、TNF-α水平進一步降低，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 各組血清生化指標水平比較（n=8，±s）

表1 各組血清生化指標水平比較（n=8，±s）

注：HZRG為化滯柔肝顆粒。ALT為丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，AST為天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶，LDH為乳酸脫氫酶，ALP為堿性磷酸酶，TNF?α為腫瘤壞死因子?α。與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05。

TNF-α/（ng·L-1）741.00±68.72 775.20±53.75 409.00±76.70*#470.80±70.07*#組別對照組模型組HZRG高劑量組HZRG低劑量組ALT/（U·L-1）26.44±3.11 541.20±99.54*323.90±83.96*#357.90±78.52*#AST/（U·L-1）54.79±9.00 367.90±70.92*214.30±53.04*#275.30±62.77*#LDH/（U·L-1）287.30±34.66 866.70±152.30*400.10±67.16*#528.80±110.20*#ALP/（U·L-1）76.88±5.85 119.70±12.58*108.40±8.07*106.40±10.54*#

2.3 對小鼠肝組織病理和TC、TG水平的影響 肝組織HE染色顯示，對照組小鼠肝組織細胞結(jié)構(gòu)與邊界清晰，組織結(jié)構(gòu)正常，未見明顯脂質(zhì)累積。模型組小鼠肝組織中肝索結(jié)構(gòu)紊亂，中央靜脈周圍肝細胞出現(xiàn)明顯的混合性脂肪變，間質(zhì)內(nèi)可見大量的淋巴細胞浸潤，另可見少許漿細胞和粒細胞，NAS評分高于對照組（P<0.05）。與模型組比較，HZRG低、高劑量組小鼠肝細胞內(nèi)脂滴減少，肝臟脂肪變和炎細胞浸潤程度明顯減輕，NAS評分降低（P<0.05）。見圖2A、圖2B。

與對照組比較，模型組小鼠肝組織TG水平升高（P<0.05）；與模型組比較，HZRG低、高劑量組小鼠肝組織TG水平降低（P<0.05）。各組肝組織TC水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見圖2C。

圖2 各組肝組織病理及TC、TG水平比較（n=8，±s）

2.4 對小鼠肝組織α-SMA、Col1a1蛋白表達的影響Masson染色、天狼猩紅染色及免疫組化結(jié)果顯示，與對照組比較，模型組小鼠肝臟膠原纖維沉積，α-SMA、Col1a1陽性表達面積增加（P<0.05）；與模型組比較，HZRG低、高劑量組小鼠肝組織中α-SMA、Col1a1陽性表達面積減少（P<0.05）。見圖3、圖4。

圖3 肝組織病理（Masson染色、天狼猩紅染色，×200）

圖4 各組肝組織α-SMA、Col1a1蛋白表達（免疫組化，×200）（n=8，±s）

與對照組比較，模型組小鼠肝組織α-SMA蛋白水平升高（P<0.05）；與模型組比較，HZRG高劑量組小鼠肝組織α-SMA蛋白水平降低（P<0.05），HZRG低、高劑量組小鼠肝組織Col1a1蛋白水平降低（P<0.05）。見圖5。

2.5 對小鼠肝組織p53蛋白與p53 mRNA表達的影響與對照組比較，模型組小鼠肝組織p53蛋白水平降低（P<0.05）；與模型組比較，HZRG高劑量組小鼠p53蛋白水平升高（P<0.05）。見圖6。各組小鼠肝組織p53 mRNA表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見圖7。

圖6 各組肝組織p53蛋白表達（n=8，±s）

圖7 各組肝組織p53 mRNA相對表達量（n=8，±s）

2.6 p53蛋白與p53 mRNA在活化LX2細胞中的表達情況 HSC是肝纖維化的核心效應(yīng)細胞，而α-SMA與Col1a1是其活化的標志物，TGF-β1可誘導肝星狀細胞系LX2細胞活化。結(jié)果顯示，在20 μg·L-1濃度的TGF-β1刺激下，LX2細胞中α-SMA、Col1a1表達升高，在5、10、20 μg·L-1濃度的TGF-β1刺激下，p53蛋白表達降低（P<0.05），但p53 mRNA表達水平無明顯變化（P>0.05）。見圖8～圖10。

圖8 活化LX2細胞中活性標志物及p53蛋白表達（免疫熒光檢測，×200）

圖9 活化LX2細胞中活性標志物及p53蛋白表達（n=3，±s）

圖10 活化LX2細胞中p53 mRNA相對表達量（n=3，±s）

2.7 p53對LX2細胞的抑制作用 采用p53激動劑Tenovin-6上調(diào)LX2細胞中p53蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)Tenovin-6干預LX2細胞可降低HSC活化標志物α-SMA、Col1a1的熒光或蛋白表達，提示p53激活可抑制HSC活化。見圖11。

圖11 Tenovin-6對活化的LX2細胞中活性標志物及p53蛋白表達的影響（×200）

3 討論

肝纖維化治療的近期目標為抑制疾病進展，遠期目標則在于逆轉(zhuǎn)肝纖維化、改善肝功能、阻止肝硬化發(fā)生及延長患者的生存期，治療方法主要有消除病因、戒酒、減肥等［13］，但目前尚缺乏直接治療的有效藥物。中醫(yī)藥治療慢性肝病療效確切，尤其是在肝纖維化防治領(lǐng)域，常從“濕熱疫毒”“血瘀阻絡(luò)”“氣陰兩虛”論治，具有明顯優(yōu)勢［14］。中藥復方HZRG是臨床治療濕熱蘊結(jié)型脂肪肝的常用中成藥，療效確切，也是治療NASH相關(guān)肝纖維化的潛在有效藥物［15］。該方由茵陳、決明子、大黃、澤瀉、豬苓、山楂、蒼術(shù)、白術(shù)、陳皮、瓜蔞、女貞子、墨旱蓮、枸杞子、小薊、柴胡和甘草組成，有清熱利濕、祛濁解毒、祛瘀柔肝之效。其中茵陳可以通過降低纖維化相關(guān)細胞因子的表達改善肝纖維化［16-17］；決明子提取物可以減少脂質(zhì)積累、減輕肝臟炎癥，從而對高脂飲食誘導的NAFLD模型小鼠起到肝保護作用［18］；大黃煎劑可以通過激活AMP活化蛋白激酶活性來改善肝臟脂肪變［19］；柴胡可以抑制HSC增殖，并通過下調(diào)肝組織中基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）的表達來促進細胞外基質(zhì)降解，從而發(fā)揮抗肝纖維化作用［20］；澤瀉甲醇提取物可明顯改善NAFLD大鼠的肝臟損傷、轉(zhuǎn)氨酶異常和肝腫大，減輕肝臟脂肪變性、炎癥和膠原沉積等形態(tài)學改變［21］。

腫瘤抑制基因TP53位于人類第17號染色體上，由11個外顯子和10個內(nèi)含子構(gòu)成，其因編碼一種相對分子量為53×103的磷酸核蛋白而得名，是最常見的突變基因［22-23］。1979年，Lane等［24］用免疫學方法發(fā)現(xiàn)，猴空泡病毒40（SV40）感染后的NIH3T3細胞的細胞核中存在能產(chǎn)生SV40大T抗原作用的磷酸化蛋白，即p53蛋白。該蛋白可以啟動細胞周期阻滯，導致細胞凋亡、細胞衰老，參與DNA損傷修復和分化及三羧酸循環(huán)、氧化磷酸化等生物通路，與細胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)關(guān)系密切［3］。生理狀態(tài)下，p53蛋白不穩(wěn)定，半衰期短，維持在較低水平［25］；但應(yīng)激源刺激會使其穩(wěn)定性增強，并轉(zhuǎn)錄調(diào)控下游靶基因，形成復雜的功能網(wǎng)絡(luò)［26］。因此，p53可能參與肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程。

本研究首先通過網(wǎng)絡(luò)藥理學聚焦發(fā)現(xiàn)，p53是治療NASH相關(guān)肝纖維化的潛在靶點。通過組織病理染色觀察發(fā)現(xiàn)，HZRG可以降低肝臟脂質(zhì)累積，改善肝臟形態(tài)變化。Masson染色、天狼猩紅染色及免疫組化顯示，肝組織內(nèi)有大量膠原沉積，HSC活化標志物α-SMA及Col1a1的表達水平升高，細胞中p53的表達水平降低。HZRG可以降低肝組織α-SMA和Col1a1蛋白表達，升高肝組織p53蛋白表達，并在一定程度上減輕肝纖維化。因此，p53的上調(diào)或能阻止肝纖維化的形成和發(fā)展。HSC是肝纖維化的核心效應(yīng)細胞，我們用TGF-β1誘導LX2細胞活化，結(jié)果顯示，活化的LX2細胞中α-SMA、Col1a1蛋白表達水平上調(diào)，p53表達水平降低；使用p53激動劑Tenovin-6后，細胞中p53表達的上調(diào)在一定程度上逆轉(zhuǎn)了LX2細胞的活化。上述提示HZRG對p53蛋白的調(diào)控可能是其對抗肝纖維化的效應(yīng)機制。

纖維化是肝腫瘤形成的重要風險因素，HZRG對于抑癌基因的上調(diào)，在一定程度上也可降低肝癌的風險。然而，p53在肝臟廣泛表達，細胞間的交互作用是纖維化病理機制復雜的重要原因［27-28］。本研究重點探討了p53對HSC活化的影響，尚不能排除肝臟其他細胞的作用，因此p53在肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中的作用還需進一步研究探討。