鄭佳欣 李曉飛

坐骨神經(jīng)損傷多見(jiàn)于患者受到直接暴力，是臨床上常見(jiàn)的周?chē)窠?jīng)損傷。此類(lèi)患者往往因缺乏有效治療導(dǎo)致殘疾，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)[1]。目前對(duì)于坐骨神經(jīng)損傷主要采用手術(shù)治療。修復(fù)周?chē)窠?jīng)損傷的手術(shù)方法很多，大面積損傷常采用端對(duì)端吻合，但是外傷造成的長(zhǎng)時(shí)間周?chē)窠?jīng)缺損，通常需要移植物來(lái)填補(bǔ)缺口[2]。盡管自體神經(jīng)移植仍然是周?chē)窠?jīng)損傷的首選治療策略，但也存在各種問(wèn)題，比如神經(jīng)供體組織的來(lái)源、神經(jīng)是否可以存活。周?chē)窠?jīng)損傷的修復(fù)是一個(gè)非常復(fù)雜的病理過(guò)程，由于神經(jīng)再生緩慢、沃勒變性、組織粘連、肌肉和運(yùn)動(dòng)終板萎縮等原因，很難取得滿(mǎn)意的效果[3]。所以，開(kāi)發(fā)新的治療策略來(lái)加速神經(jīng)突起的生長(zhǎng)是非常重要的。既往研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）多用于治療組織再生和自身免疫性疾病，細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以作為旁分泌或自分泌介質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和組織再生[4]。外泌體是由活細(xì)胞分泌的細(xì)胞外囊泡，通過(guò)多泡體和細(xì)胞質(zhì)膜的融合釋放到細(xì)胞外空間，直徑為30～150 nm，與病毒大小相似。牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞（gingival mesenchymal stem cells，GMSCs）是可從牙齦組織中分離的干細(xì)胞特異性前體細(xì)胞，具有自我更新、多向分化和免疫調(diào)節(jié)能力。與骨髓來(lái)源的MSCs相比，GMSCs易于分離、同質(zhì)化，增殖速度更快，形態(tài)穩(wěn)定，并且在長(zhǎng)期培養(yǎng)后也能保持正常的核型和MSCs特征[5-6]。然而，GMSCs來(lái)源的外泌體是否能夠促進(jìn)周?chē)窠?jīng)再生的相關(guān)報(bào)道較少。筆者采用可降解甲殼素/殼聚糖支架聯(lián)合GMSCs來(lái)源外泌體，觀(guān)察其對(duì)坐骨神經(jīng)損傷的修復(fù)作用，以期為臨床上周?chē)窠?jīng)損傷患者的康復(fù)提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 GMSCs

1.1.1 來(lái)源 選取2020年1月至2021年12月收治金華市中心醫(yī)院4名健康志愿者，其中男2例，女2例，年齡22～32歲。在拔除智齒過(guò)程中收集1 mg牙齦組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）沒(méi)有牙周病史；（2）無(wú)出血性疾??；（3）簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）牙齦發(fā)炎或者感染的患者；（2）不同意手術(shù)方案的患者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[（研）2020-121-09]。

1.1.2 GMSCs收集和培養(yǎng) 收集的牙齦組織進(jìn)行無(wú)菌處理，用PBS清洗3次，并在含有2 mg/ml胰蛋白酶的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2 h。終止消化后，分離上皮層和固有層，收集固有層并切碎，在37℃下用膠原酶消化1 h，1 000 r/min離心10 min，離心半徑為10 cm，取上清液備用；加入含有10%FBS和100 U/ml青霉素+鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基將沉淀物制備成細(xì)胞懸液，然后接種培養(yǎng)在細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于37℃、5%CO2的增濕細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。棄原始培養(yǎng)基，去除漂浮細(xì)胞。加入含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基，每2 d更換1次培養(yǎng)基。當(dāng)細(xì)胞融合率達(dá)到80%時(shí)，用胰蛋白酶消化細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)傳代。第3～5代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.1.3 GMSCs鑒定 采用流式細(xì)胞儀鑒定原代GM-SCs，將2×105個(gè)/ml的GMSCs與異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）或藻紅蛋白（phycoerythrin，PE）的特異性單克隆抗體相結(jié)合，在4℃避光培養(yǎng)箱中孵育30 min。采用流式細(xì)胞儀分析目的細(xì)胞表面抗原，其中抗CD34（PE）抗體、CD45（PE）抗體、CD73（FITC）抗體、CD90（FITC）和CD146（FITC）作為陽(yáng)性檢測(cè)組，小鼠單克隆IgG1同型作為對(duì)照組。通過(guò)觀(guān)察CD34、CD45、CD73、CD90和CD146的陽(yáng)性率來(lái)確定細(xì)胞類(lèi)型。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和材料 選擇24只SPF級(jí)SD大鼠，鼠齡4～6（5.22±1.34）周，體重287～399（343±56）g，購(gòu)自浙江省中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[許可證號(hào)：SCXK（浙）2021-1009]；飼養(yǎng)于金華市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[使用許可證號(hào)：SYXK（浙）2021-0024]。飼養(yǎng)環(huán)境為（22±2）℃、50%～60%濕度、12 h明暗交替的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，期間自由飲水進(jìn)食。DMEM培養(yǎng)液（批號(hào)：10829018，500 ml）購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；Trizol試劑（批號(hào)：10296028，100 ml）和熒光定量PCR試劑盒（批號(hào)：KK4611，10 ml）均購(gòu)自日本TaKaRa公司；CD34（PE）抗體、CD45（PE）抗體、CD73（FITC）抗體、CD90（FITC）和CD146（FITC）（批號(hào)：ab187284、ab134202、ab239246、ab124527、ab78451，100 μl）均購(gòu)自美國(guó) Abcam 公司。科賽格外泌體試劑盒（批號(hào)：CSB-EI0110，10T）購(gòu)自武漢華美生物工程有限公司。兔抗鼠CD63、CD9、CD81和GAPDH一抗（批號(hào)：10628D、10626D、MA5-32333、MA5-15738，100 μl）、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG二抗（批號(hào)：MA5-42729，100μl）購(gòu)自北京賽默飛公司。馬爾文Nanosight納米顆粒追蹤分析儀購(gòu)自英國(guó)馬爾文帕鈉科公司，型號(hào)為NanoSight LM10；流式細(xì)胞儀購(gòu)自德國(guó)Partec公司，型號(hào)為CyFlow?Cube 6；CatWalk XT 9.0步態(tài)分析儀購(gòu)自諾達(dá)思（北京）信息技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.3 GMSCs來(lái)源外泌體提取和鑒定

1.3.1 外泌體提取 利用CUSABIO外泌體試劑盒提取GMSCs細(xì)胞上清液中的外泌體。取1.1.2中的上清液，超速離心，去除雜質(zhì)。按照說(shuō)明書(shū)的要求，加入試劑A和試劑B，850 r/min離心1 min，離心半徑為10 cm，加入1 000 μl試劑 E，850 r/min離心 1 min，離心半徑為10 cm，吸去液體，保留沉淀物；重復(fù)此步驟2次，加入400 μl試劑F，水平混合儀室溫洗脫10 min，同上法離心得到沉淀物即為提取外泌體樣本，于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 外泌體囊泡觀(guān)察 采用透射電子顯微鏡（transmission electron microscope，TEM）觀(guān)察。在外泌體樣本中加入100 μl PBS重新懸浮外泌體，取30 μl外泌體懸液，置于載樣銅網(wǎng)上，室溫下靜置3 min，加入3%磷鎢酸溶液30 μl進(jìn)行染色，5 min后棄去染色液，室溫下靜置于銅網(wǎng)干燥，采用TEM觀(guān)察外泌體囊泡結(jié)構(gòu)，并采用馬爾文Nanosight納米顆粒追蹤分析儀分析外泌體囊泡直徑分布。

1.3.3 外泌體標(biāo)志蛋白CD63、CD9、CD81檢測(cè) 采用Western blot法。取100 μl外泌體懸液于EP管，置于冰上預(yù)冷，采用RIPA裂解液提取總蛋白。采用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，調(diào)整蛋白上樣量為30 μg，采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分離蛋白。電泳結(jié)束后，采用電轉(zhuǎn)移的方式將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)到聚偏氟乙烯膜。將膜浸入封閉液中，在室溫下放置在搖床上封閉2 h；加入兔抗鼠CD63、CD9、CD81和GAPDH一抗，抗體稀釋比例為1∶10 000，4℃過(guò)夜孵育；用TBST緩沖液洗膜3次，5 min/次；加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG二抗，抗體稀釋比例為1∶2 000，室溫避光孵育10 min；用TBST緩沖液洗膜3次，5 min/次；加入Supersignal west femto最大靈敏度底物，于凝膠成像分析系統(tǒng)顯影并拍照。

1.4 可降解甲殼素/殼聚糖支架制備 委托江西中洪博元生物試劑有限公司制備可降解甲殼素/殼聚糖支架，購(gòu)買(mǎi)制備專(zhuān)利（專(zhuān)利號(hào)：ZL01136314）后，按照說(shuō)明書(shū)制備。將蝦蟹殼50 g置于2 000 ml的燒瓶中，然后加入鹽酸1 000 ml，水浴鍋中40℃浸泡，直至無(wú)氣泡產(chǎn)生，收集蝦蟹殼后，中性水沖洗，直至pH值為中性；然后將蝦蟹殼置于2 000 ml的燒瓶中，加入50%氫氧化鈉1 000 ml，水浴鍋中加熱4 h，溫度控制在90℃，收集蝦蟹殼后，中性水沖洗，直至pH值為中性，隨后加入5%高錳酸鉀浸泡30 min脫色，脫色后中性水沖洗，直至pH值為中性，沉淀物為甲殼素。稱(chēng)取5 g甲殼素置于燒瓶中，再加入50%氫氧化鈉500 ml，燒瓶中110℃回流1 h后即可脫乙酰基，然后中性水沖洗，直至pH值為中性，烘干后可得殼聚糖，根據(jù)說(shuō)明書(shū)制備可降解甲殼素/殼聚糖支架凝膠以備用，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5 動(dòng)物模型構(gòu)建和分組

1.5.1 動(dòng)物模型構(gòu)建 24只SD大鼠均構(gòu)建動(dòng)物模型，腹腔注射戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉，然后右后肢備皮，鈍性分離股二頭肌和半腱肌、半膜肌，暴露坐骨神經(jīng)，用4.0鉻制羊腸線(xiàn)結(jié)扎4道，每道間距1 mm，松緊度以結(jié)扎線(xiàn)恰可上下活動(dòng)為準(zhǔn)。坐骨神經(jīng)損傷模型制備完成，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.5.2 分組 將24只坐骨神經(jīng)損傷模型大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為支架組、支架+外泌體組、自體移植組3組，每組各8只。支架組在坐骨神經(jīng)損傷部分加入單純甲殼素/殼聚糖支架凝膠，鋪滿(mǎn)切口為止，然后逐層縫合；支架+外泌體組在坐骨神經(jīng)損傷部分加入可降解甲殼素/殼聚糖支架+外泌體凝膠復(fù)合物，鋪滿(mǎn)切口為止，然后逐層縫合；自體移植組采用自體移植的坐骨神經(jīng)組織進(jìn)行治療，具體操作：將切除的自體坐骨神經(jīng)在手術(shù)顯微鏡下翻轉(zhuǎn)，以9-0縫合線(xiàn)縫合神經(jīng)外膜兩斷端，每端各縫合8針，逐層縫合肌肉和皮膚，手術(shù)區(qū)置入少量青霉素粉，然后待大鼠自然蘇醒。手術(shù)后，所有大鼠均存活，切口均在術(shù)后6～9 d愈合。

1.6 運(yùn)動(dòng)功能評(píng)估 采用CatWalk XT 9.0步態(tài)分析系統(tǒng)評(píng)估大鼠術(shù)后1、4和8周的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況，采用坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（sciatic nerve function index，SFI）定量測(cè)定坐骨神經(jīng)功能，其中SFI=0為正常，-100為完全損傷。

1.7 組織學(xué)評(píng)估 術(shù)后8周評(píng)估運(yùn)動(dòng)功能后采用脊椎脫臼法處死各組大鼠，然后收集大鼠的神經(jīng)組織樣本以及雙側(cè)腓腸肌進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

1.7.1 大體組織和再生神經(jīng)組織樣本觀(guān)察 處死大鼠后取出再生神經(jīng)組織樣本，大體組織在直視下觀(guān)察。將大鼠的再生神經(jīng)組織用2.5%戊二醛固定2 h，1%鋨酸染色，丙酮梯度脫水，制備石蠟組織塊，切成700 nm厚的半薄切片和70 nm厚的超薄切片。700 nm厚的半薄切片用1%甲苯胺藍(lán)染色，避光孵育20 min，用光鏡觀(guān)察；70 nm厚的超薄切片用醋酸鈾酰和檸檬酸鉛進(jìn)行染色并用TEM觀(guān)察。使用Image Pro Plus軟件測(cè)量有髓軸突密度、有髓軸突直徑和髓鞘厚度。

1.7.2 坐骨神經(jīng)支配的肌肉重量和肌纖維重塑評(píng)估處死大鼠后取雙側(cè)腓腸肌，稱(chēng)重并用主要含有甲醛、冰醋酸和無(wú)水乙醇的肌肉組織固定劑固定24 h。石蠟包埋切片（厚7 mm），Masson三色染色。光學(xué)顯微鏡下用Image Pro Plus軟件進(jìn)行定量分析。計(jì)算腓腸肌濕重比，腓腸肌濕重比=手術(shù)側(cè)/正常側(cè)×100%。肌纖維橫截面積計(jì)算采用坐標(biāo)格的描紙法。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GMSCs的培養(yǎng)和鑒定 流式細(xì)胞儀測(cè)定GMSCs細(xì)胞標(biāo)志物包括CD73（87.2%）、CD90（98.2%）和CD146（63.0%）呈陽(yáng)性，而CD34（1.8%）和CD45（3.0%）呈陰性，見(jiàn)圖1。

圖1 GMSCs鑒定的流式細(xì)胞圖

2.2 GMSCs來(lái)源外泌體收集和鑒定 TEM檢查顯示外泌體囊泡結(jié)構(gòu)呈圓形結(jié)構(gòu)。馬爾文Nanosight納米顆粒追蹤分析儀測(cè)量外泌體囊泡直徑峰值為102 nm。Western blot法分析顯示，外泌體標(biāo)志蛋白CD9和CD63呈陽(yáng)性。見(jiàn)圖2。

圖2 GMSCs來(lái)源外泌體收集和鑒定結(jié)果（A：外泌體囊泡結(jié)構(gòu)的TEM圖，×600；B：外泌體囊泡直徑分布圖；C：外泌體標(biāo)志蛋白的電泳圖）

2.3 3組大鼠術(shù)后1、4、8周SFI的比較 3組大鼠術(shù)后1周SFI比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.784，P＞0.05），但術(shù)后4、8周SFI比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.904、19.237，均P＜0.05）；進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，術(shù)后4、8周支架+外泌體組的SFI明顯高于支架組（q=3.278、3.291，均P＜0.05），而自體移植組術(shù)后4、8周SFI明顯高于支架+外泌體組和支架組（q=3.074、2.971、3.209、2.943，均P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 3組大鼠術(shù)后1、4、8周SFI的比較

2.4 對(duì)再生坐骨神經(jīng)的組織學(xué)評(píng)估結(jié)果 與支架組比較，自體移植組和支架+外泌體組的再生神經(jīng)組織較為粗大，有髓神經(jīng)纖維形成明顯規(guī)則，且數(shù)量多，有髓軸突密度、有髓軸突直徑和髓鞘厚度均明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=16.027、15.584、12.507，均P＜0.05）。此外，支架+外泌體組有髓軸突密度、有髓軸突直徑和髓鞘厚度均明顯高于支架組（q=3.944、4.332、4.905，均P＜0.05）。而支架組和支架+外泌體組的有髓軸突密度、有髓軸突直徑和髓鞘厚度均明顯低于自體移植組（q=3.094、2.884，3.904、3.224、3.981、3.004，均P＜0.05）。見(jiàn)圖3（插頁(yè)）、表2。

表2 3組大鼠有髓軸突密度、有髓軸突直徑和髓鞘厚度的比較

圖3 再生坐骨神經(jīng)的大體樣本（×10）、甲苯胺藍(lán)染色（×100）和TEM（×600）所見(jiàn)

2.5 腓腸肌的組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果 Masson染色結(jié)果顯示，相較于支架組，支架+外泌體組的腓腸肌組織更緊密，自體移植組腓腸肌組織肌間隙明顯。支架+外泌體組的腓腸肌濕重比和肌纖維橫截面積明顯高于支架組（q=3.902、3.228，均P＜0.05），自體移植組的腓腸肌濕重比和肌纖維橫截面積明顯高于支架組和支架+外泌體組（q=5.413、4.149、3.227、3.278，均 P＜0.05）。見(jiàn)圖4（插頁(yè)）、表3。

表3 3組大鼠腓腸肌濕重比和肌纖維橫截面積的比較

圖4 腓腸肌的大體樣本和Masson 染色所見(jiàn)

3 討論

既往研究表明，自體神經(jīng)移植仍是修復(fù)周?chē)窠?jīng)缺損的最佳方案，然而，神經(jīng)供體來(lái)源有限以及手術(shù)技術(shù)的限制，所以有必要找到替代這種技術(shù)的方法。局部植入干細(xì)胞治療周?chē)窠?jīng)損傷可促進(jìn)軸突再生和髓鞘形成。在修復(fù)過(guò)程中，干細(xì)胞分泌多種因子，如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞存活和神經(jīng)再生具有積極作用[7]。既往研究表明，干細(xì)胞介導(dǎo)組織修復(fù)的主要機(jī)制是旁分泌，而不是干細(xì)胞的分化[8]。并且，干細(xì)胞的旁分泌功能可以通過(guò)外泌體介導(dǎo)，作為一種新的替代方法，外泌體具有替代全細(xì)胞治療的巨大潛力。干細(xì)胞分泌的外泌體傳遞各種分子，包括細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、信號(hào)脂質(zhì)、mRNA和微小RNA。外泌體作為細(xì)胞間通訊介質(zhì)，傳遞蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA以調(diào)節(jié)各種生理和病理過(guò)程。此外，外泌體的應(yīng)用被證明比干細(xì)胞給藥更安全，干細(xì)胞給藥可以克服細(xì)胞免疫排斥和致癌突變。眾所周知，牙齦組織在受傷后會(huì)很快愈合，而由于GMSCs的功能，瘢痕很少。這些細(xì)胞有許多優(yōu)點(diǎn)，包括均質(zhì)、非腫瘤、易于分離和表型穩(wěn)定[9-10]。在本研究中，筆者成功地從人牙齦組織中分離出GMSCs，可以表達(dá)特異性表面抗原，包括CD73、CD90和CD146，但不表達(dá)造血干細(xì)胞的表面抗原，如CD34和CD45。既往研究表明，GMSCs移植可以用于周?chē)窠?jīng)損傷后再生。Lai等[11]和Court等[12]提出，外泌體可能調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)軸突生長(zhǎng)。然而，GMSCs衍生的外泌體被研究用于周?chē)窠?jīng)缺損的報(bào)道較少。本研究還成功地從GMSCs中分離和鑒定了外泌體。

在既往研究中，有學(xué)者探究可降解甲殼素/殼聚糖支架對(duì)周?chē)窠?jīng)缺損的修復(fù)效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)于10 mm神經(jīng)缺損的修復(fù)中，可降解甲殼素/殼聚糖支架的修復(fù)效果很差[13-14]。本研究在此基礎(chǔ)上，使用可降解甲殼素/殼聚糖支架結(jié)合來(lái)源于GMSCs的外體修復(fù)大鼠10 mm周?chē)窠?jīng)缺損。具體支架性狀如下：可降解甲殼素/殼聚糖支架為凝膠狀態(tài)，可以吸附外泌體，吸附效率可達(dá)90%以上，支架與外泌體結(jié)合后，可以緩慢釋放外泌體，支架本身屬于可降解材料，不會(huì)阻礙神經(jīng)斷端的修復(fù)，生物兼容性好，不會(huì)產(chǎn)生排斥反應(yīng)。本研究結(jié)果表明，術(shù)后8周，GMSCs分泌的外泌體不僅增加了再生軸突的有髓軸突密度和直徑，而且增加了再生軸突的髓鞘厚度，這與體外研究結(jié)果一致。同時(shí)，步態(tài)分析也用于評(píng)估大鼠神經(jīng)肌肉功能的恢復(fù)。本研究術(shù)后4周和8周，與支架組相比，外泌體+支架組的SFI有所改善。在本研究中，術(shù)后8周，肌肉組織學(xué)數(shù)據(jù)顯示，與支架組相比，外泌體+支架組的腓腸肌濕重比和肌纖維橫截面積增加，表明神經(jīng)肌肉功能的恢復(fù)有所改善，間接驗(yàn)證了步態(tài)分析的結(jié)果。

綜上所述，可降解甲殼素/殼聚糖支架聯(lián)合GMSCs來(lái)源外泌體可以對(duì)鼠坐骨神經(jīng)損傷模型起到一定的修復(fù)效果。但是，本研究尚存在一定的局限性，即牙齦干細(xì)胞分泌的外泌體如何發(fā)揮作用。Kou等[15]發(fā)現(xiàn)，GMSCs分泌的外泌體具有更多的蛋白質(zhì)含量，包括可抑制IL-1RA功能的細(xì)胞因子，該研究認(rèn)為外泌體中IL-1RA起到重要作用。因此，后續(xù)的研究也會(huì)對(duì)GMSCs分泌的外泌體成分進(jìn)行深入探討。