鄭肖蘭 劉先寶 鄭行愷 李博勛 時濤 馮艷麗 黃貴修

摘??要：天然橡膠是四大工業(yè)原料中唯一的可再生資源，由炭疽病菌侵染引起的橡膠樹炭疽病是當前我國橡膠生產(chǎn)上最為嚴重的兩大葉部病害之一。本研究通過調(diào)查海南省主栽橡膠樹品種（系）及監(jiān)測炭疽病發(fā)生流行情況，調(diào)查發(fā)現(xiàn)PR107和RRIM600種植面積最大，分別占51.06%（102?000?hm2）和43.39%（86?700?hm2）；在對橡膠樹炭疽病的隨機踏查和固定監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，該病在實生苗、嫁接苗、增殖苗、各主栽品種幼齡樹和成齡膠園中全年均可發(fā)生，3—4月為盛發(fā)期；海南省橡膠樹種植面積大，且品種（系）單一，因此炭疽病在適宜發(fā)病條件下易暴發(fā)流行。通過形態(tài)觀察、致病性測定和多基因系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)，分離自瓊中縣陽江農(nóng)場苗圃橡膠樹葉片上的菌株HCkHNQZ1736為喀斯特炭疽菌（Colletotrichum?karstii），這是首次在海南省橡膠樹上發(fā)現(xiàn)該類病菌。致病力評價發(fā)現(xiàn)其對PR107、RRIM600、熱研7-33-97和大豐95四個主推品種均有強致病力。殺菌劑敏感性測定結(jié)果表明，菌株HCkHNQZ1736和分離自云南保山的同種菌株MeCkYN1705對咪鮮胺錳鹽差異不顯著且不具抗藥性，EC50分別為0.0784??g/mL和0.0775??g/mL。HCkHNQZ1736對多菌靈表現(xiàn)出高抗藥性，EC50達1107.2654??g/mL，而MeCkYN1705的EC50僅為0.0554??g/mL。

關(guān)鍵詞：橡膠樹炭疽病；病害調(diào)查；喀斯特炭疽菌；分子鑒定中圖分類號：S763.7??????文獻標識碼：A

Investigation?of?Colletotrichum?sp.?and?Identification?of?C.?karstii?of?Rubber?Trees?in?Hainan

ZHENG?Xiaolan，?LIU?Xianbao，?ZHENG?Xingkai，?LI?Boxun，?SHI?Tao，?FENG?Yanli，?HUANG?Guixiu*

Environment?and?Plant?Protection?Institute，?Chinese?Academy?of?Tropical?Agricultural?Sciences?/?Hainan?Innovation?Center?of?Academician?Team?/?Key?Laboratory?of?Monitoring?and?Control?of?Tropical?Agricultural?and?Forest?Invasive?Alien?Pests，?Ministry?of?Agriculture?and?Rural?Affairs?/?Hainan?Key?Laboratory?for?Monitoring?and?Control?of?Tropical?Agricultural?Pests，?Haikou，?Hainan?571101，?China

Abstract：?Rubber?tree?（Hevea?brasiliensis）?is?the?only?renewable?resource?among?the?four?major?industrial?raw?materials.?The?rubber?tree?anthracnose?which?infected?by?the?Colletotrichum?sp.?is?one?of?the?most?serious?foliar?disease?of?rubber?production?in?China.?In?this?study，?we?investigated?the?main?rubber?tree?varieties?（strains）?and?monitoring?the?occurrence?and?prevalence?of?anthracnose?in?Hainan?province.?It?was?found?that?PR107?and?RRIM600?had?the?largest?planting?area，?accounting?for?51.06%?（102?000?hm2）?and?43.39%?（86?700?hm2）?respectively.?The?anthracnose?of?mature?rubber?plantations?and?value-added?nurseries?in?Yangjiang?Farm?was?occurred?all?year?round，?with?the?peak?period?from?March?to?April;?Therefore，?the?rubber?tree?planted?in?Hainan?province?was?large，?and?the?variety?（strain）?was?single，?so?it?was?easy?to?break?out?and?spread?when?the?anthracnose?was?suitable.?HCkHNQZ1736?isolated?from?the?leaves?of?the?rubber?nursery?of?Yangjiang?Farm?in?Qiongzhong?County，?was?identified?as?a?new?strain?of?Colletotrichum?karstii，?which?had?highly?pathogenic?to?four?main?varieties?of?rubber?tree，?PR107，?RRIM600，?Reyan?7-33-97?and?Dafeng?95.?Studied?on?the?results?of?carbendazim?and?prochloraz-manganese?sensitivity?test?of?HCkHNQZ1736?and?MeCkYN1705?showed?that?the?two?strains?had?no?resistance?to?prochloraz-manganese，?while?the?EC50?was?0.0784??g/mL?and?0.0775??g/mL?respectively.?However，?HCkHNQZ1736?showed?high?resistance?to?carbendazim，?at?this?time，?the?EC50?was?1107.2654??g/mL，?while?MeCkYN1705?had?only?0.0554??g/mL.

Keywords：?rubber?tree?anthracnose;?disease?investigation;?Colletotrichum?karstii;?molecular?identification

DOI：?10.3969/j.issn.1000-2561.2023.12.021

天然橡膠、鋼鐵、煤炭、石油并稱為世界四大工業(yè)原料，其中天然橡膠是其中唯一的可再生資源。1906年斯里蘭卡發(fā)現(xiàn)并報道全球首例橡膠樹炭疽病，1962年海南國營大豐農(nóng)場發(fā)現(xiàn)并報道我國首例橡膠樹炭疽病[1]。截至目前，橡膠樹炭疽病已經(jīng)幾乎遍布全球所有植膠地，其中非洲中部、南美洲、亞洲南部和東南部等植膠國家最為嚴重[2-4]。

海南是我國橡膠樹種植的主要省份，也是海南省第一大經(jīng)濟作物。但由于膠價下跌，膠農(nóng)積極性受損，加上橡膠樹樹齡老化，品種種植變化或更替情況不甚明確，為了更好地了解橡膠種植情況和橡膠炭疽病發(fā)生流行，為橡膠樹炭疽病和白粉病兩病防控制定更合理的措施，因此很有必要對橡膠品種（系）及其種植情況進行詳細了解。鑒于此，本研究聯(lián)合海南天然橡膠產(chǎn)業(yè)集團股份有限公司對海南省橡膠種植情況進行了調(diào)研。炭疽病是由炭疽菌屬（Colletotrichum?Corda）真菌引起的一種重要真菌病害，在熱帶、亞熱帶、溫帶等地區(qū)廣泛分布，導致糧食、果蔬、花卉甚至高大喬木等600多種植物均受其危害[5-8]。在橡膠樹上，炭疽病的危害近年來又有上升趨勢。

橡膠樹炭疽菌為刺盤孢屬（Colletotrichum）尖孢炭疽菌復合種（C.?acutatum?species?complex）和膠孢炭疽菌復合種（C.?gloeosporioides?species?complex）[9-10]。傳統(tǒng)的形態(tài)學、培養(yǎng)特征和ITS分類限制了對這些復合種的認識，一直以來，眾多學者均一致認為橡膠樹炭疽病主要由膠孢炭疽菌導致，少數(shù)為尖孢炭疽菌，將其分別劃分為C.?gloeosporioides和C.?acutatum?2個種群，但隨著分類學的發(fā)展和分析方法的進步，基于多位點的系統(tǒng)發(fā)育分析有助于科學家發(fā)現(xiàn)和明確更多的橡膠樹炭疽病菌復合種[11-13]。目前確認與橡膠樹相關(guān)的有膠孢炭疽、尖孢炭疽和博寧炭疽3個復合種[14]。研究表明，國內(nèi)橡膠樹炭疽病原主要屬于膠孢炭疽菌和尖孢炭疽菌復合種，其中膠孢炭疽復合種包括果生刺盤孢（C.?fructicola）、暹羅炭疽（C.?siamense）和樂東炭疽（C.?ledongense），尖孢炭疽復合種包括華南炭疽（C.?australisinense）、版納炭疽（C.?bannanense）和C.?laticiphilum，前期病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)海南橡膠樹炭疽病的膠孢炭疽菌復合群主要有C.?siamense和C.?fructicola?2個種[15-18]。博寧炭疽復合種喀斯特炭疽菌在橡膠樹上僅在云南省綠春縣于2016年發(fā)現(xiàn)，而其他產(chǎn)區(qū)包括海南未見報道[19]。

本研究通過對海南省主栽橡膠樹品種（系）調(diào)查和炭疽病發(fā)生流行進行常規(guī)監(jiān)測，在此過程中從瓊中縣陽江農(nóng)場的苗圃橡膠樹葉上獲得菌株HCkHNQZ1736，并對該菌株進行了鑒定、致病力測定等，發(fā)現(xiàn)該菌株為橡膠樹新發(fā)炭疽菌——喀斯特炭疽菌（C.?karstii），為海南橡膠產(chǎn)區(qū)首次發(fā)現(xiàn)，此外通過藥劑敏感性測定發(fā)現(xiàn)該菌株對多菌靈產(chǎn)生高抗藥性。

1??材料與方法

1.1??材料

1.1.1??供試菌株??喀斯特炭疽菌株MeCkYN1705分離自云南保山，由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境與植物保護研究所分離、鑒定和保存；喀斯特炭疽菌株HCkHNQZ1736分離自海南瓊中，為本研究中采集、分離和鑒定獲得。

1.1.2??植物材料和樣地??熱研7-33-97、RRIM600、PR107等供試橡膠苗由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院橡膠研究所國家種質(zhì)資源圃提供，保存于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院環(huán)境與植物保護研究所演豐基地。

1.1.3??培養(yǎng)基??PDA、LB、察氏培養(yǎng)基、AEA培養(yǎng)基、SNA培養(yǎng)基均為常規(guī)配置培養(yǎng)基。

1.2??方法

1.2.1??橡膠樹炭疽病疫情隨機踏查與固定監(jiān)測方法??2017—2018年，對海南省植膠區(qū)進行橡膠樹品種（系）、面積以及炭疽病害調(diào)查。調(diào)查方法參考農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T?3197—2018《熱帶作物種質(zhì)資源抗病蟲鑒定技術(shù)規(guī)程?橡膠樹炭疽病》進行。

2017—2019年，選擇海南省瓊中縣陽江農(nóng)場的多年生增殖苗圃作為海南省橡膠樹炭疽病疫情動態(tài)變化的固定監(jiān)測點，每年2—10月對監(jiān)測點的病情指數(shù)變化情況等數(shù)據(jù)進行記錄和整理。橡膠樹炭疽病樣品采集、分離、純化與保存均采用常規(guī)植物病理學實驗方法[20]進行。

1.2.2??形態(tài)觀察??供試菌株在PDA平板上培養(yǎng)7?d后，觀察菌落形態(tài)，通過AEA培養(yǎng)基和SNA培養(yǎng)基促進菌株產(chǎn)孢，顯微鏡下觀察分生孢子、分生孢子梗和附著胞等微觀形態(tài)，并記錄其大小。形態(tài)鑒定參考《普通植物病理學》[9]和《植物病原真菌學》[10]對菌株進行形態(tài)上的初步分類鑒定。

1.2.3??系統(tǒng)發(fā)育分析??（1）菌株基因組DNA提取。將已鑒定、純化培養(yǎng)的菌株接種于PDA平板，置于28?℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7?d，用CTAB法提取菌株DNA[6]。

（2）多基因測序。選擇核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）、β-微管蛋白基因（tub）和3-磷酸甘油醛脫氫酶基因（GAPDH）部分序列進行多基因系統(tǒng)發(fā)育分析。所用引物見表1，PCR擴增體系（總體積25??L）：2.5?mmol/L?dNTP?Mixture?2??L；TaKaRa?LA?Taq高保真酶0.5??L；2×GC?buffer?Ⅰ12.5??L；10??mol/L上、下游引物各1??L；ddH2O?7??L；Template?1??L。PCR反應程序見表1。擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分離，利用天根生化科技（北京）有限公司回收試劑盒回收目的片段。將回收純化的PCR產(chǎn)物送深圳華大基因科技有限公司進行測序，將測序結(jié)果置于NCBI上BLAST進行比對分析。

（3）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。在NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫中下載博寧炭疽復合種所用模式種的序列，利用MEGA?v.?6.0軟件對所獲得的序列分別進行比對，刪除不確定的序列，利用Sequence?Matrix?1.7.8軟件對ITS、tub和GAPDH進行序列拼接，獲得完整的序列數(shù)據(jù)。利用MEGA?v.?6.0中Model進行模塊預測，再利用該軟件Phylogeny中的Maximum?Likelihood方法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，以C.?truncatum作為外群，1000重復。

1.2.4??致病力測定??采用孢子懸浮液接種法，將孢子懸浮液（孢子濃度為1×106個/mL）接種至海南省橡膠樹主栽品種（大豐95、PR107、熱研7-33-97、RRIM600）離體古銅期葉片上，以接種菌株MeCkYN1705孢子懸浮液為陽性對照，以接種無菌水為陰性對照，每個處理3片葉子，每片葉子處理3個點，3次重復共9片葉子，25?℃恒溫保濕培養(yǎng)3?d后檢查發(fā)病情況，用十字交叉法測量病斑直徑，以病斑直徑評價其致病力。

1.2.5??藥劑敏感性測定??（1）多菌靈和咪鮮胺藥劑母液配置。稱取98%多菌靈原藥粉劑（江蘇新躍達生物科技有限公司）0.5?g溶解于1?mol/L稀鹽酸中，待粉末完全溶解后用無菌水定容至50?mL，過濾、滅菌，獲得10?000??g/mL的母液，于4?℃保存。

稱取96%咪鮮胺錳鹽原藥（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）0.05?g粉劑溶解于甲醇中，用無菌水定容至50?mL，過濾、滅菌，獲得1000??g/mL的母液，于4?℃保存。

（2）含藥培養(yǎng)基配置。在融化后降溫至55?℃左右的PDA培養(yǎng)基中添加不同體積的多菌靈和咪鮮胺母液，分別制成不同濃度的多菌靈和咪鮮胺含藥PDA培養(yǎng)基。不同藥劑處理濃度梯度見表2。

（3）敏感性評價。參考劉艷[6]的方法，進行敏感性測定并計算回歸方程和EC50。

1.3??數(shù)據(jù)處理

按隨機區(qū)組試驗設計的數(shù)據(jù)處理方法整理試驗數(shù)據(jù)，使用SPSS和Excel軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2??結(jié)果與分析

2.1??海南省橡膠樹炭疽病疫情分析

2.1.1??海南省橡膠主栽區(qū)與主栽品種概況??為了更好地了解橡膠種植情況和橡膠炭疽病的發(fā)生流行，筆者聯(lián)合海南天然橡膠產(chǎn)業(yè)集團股份有限公司對海南省橡膠主栽品種和分布進行調(diào)查統(tǒng)計，結(jié)果見表3和圖1。經(jīng)調(diào)查，現(xiàn)海南省橡膠主產(chǎn)

區(qū)共種植橡膠樹約200?000?hm2，開割面積達到約163?000?hm2。其中，儋州和瓊中為海南省主要的植膠地區(qū)，總面積均達到30?000?hm2以上；其次，澄邁、樂東、白沙的種植面積達20?000?hm2左右，亦為海南省橡膠產(chǎn)業(yè)的中堅力量；其余地區(qū)橡膠種植相對較少。

在調(diào)查地區(qū)中，PR107的種植面積約為102?000?hm2，占51.06%；RRIM600的種植面積約為86?700?hm2，占43.39%；熱研7-33-97的種植面積約為4333?hm2，占2.17%；大豐95的種植面積約為1800?hm2，占0.90%；海墾系列的種植面積約為2613?hm2，占1.31%；其他橡膠品種均為零星種植，總種植面積約為2347?hm2，占1.18%。

2.1.2??炭疽病疫情踏查與監(jiān)測結(jié)果??（1）隨機踏查結(jié)果。2017—2018年，對海南省儋州市、瓊中縣、樂東縣、萬寧市、白沙縣、澄邁縣等主栽區(qū)進行了橡膠樹炭疽病隨機踏查（表4）。根據(jù)發(fā)病癥狀進行區(qū)分，尖孢炭疽菌復合種癥狀主要是病斑凸起，膠胞炭疽菌導致的發(fā)病癥狀主要是水漬狀病斑及葉尖葉緣卷曲（圖2）。調(diào)查結(jié)果表明，炭疽病在各個主栽區(qū)普遍發(fā)生，苗圃、定植膠園及開割膠林均有發(fā)生。儋州市西聯(lián)農(nóng)場主要受膠孢炭疽菌復合種侵染的影響，樂東縣保顯農(nóng)場、白沙縣大嶺農(nóng)場主要受尖孢炭疽菌復合種侵染的影響，而其他地區(qū)尖孢炭疽菌和膠孢炭疽菌同時發(fā)生，屬于尖孢炭疽菌和膠孢炭疽菌混合侵染。

總體來說，在田間條件下熱研7-33-97、PR107、RRIM600等海南省主栽橡膠樹品種對橡膠炭疽病均不具備良好的抗性，炭疽病主要發(fā)生在橡膠樹抽芽期至淡綠期，2—4月橡膠樹抽葉時遇連續(xù)低溫、陰雨、高濕天氣，致使疫情暴發(fā)成災，該時期為防治關(guān)鍵期；在苗圃地若栽培管理措施較粗放則橡膠樹炭疽病終年發(fā)生，如樂東保顯農(nóng)場、白沙大嶺農(nóng)場和儋州市等地的苗圃和增殖圃均普遍發(fā)生炭疽病，典型癥狀見圖2。

（2）固定監(jiān)測結(jié)果。2017—2019年，對固定監(jiān)測點開展了炭疽病的年度消長動態(tài)調(diào)查，監(jiān)測點為瓊中縣陽江農(nóng)場苗圃，林地類型為多年生增殖苗圃，品種為PR107，炭疽病在調(diào)查期間全程均有發(fā)生。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，病原菌可以侵染為害全年中任何時候萌發(fā)的橡膠樹嫩葉。橡膠樹葉片開芽至展葉期（小古銅期）為最感病階段，大古銅至變色期為中度感病階段，淡綠葉只是輕度感病，而老化葉基本不再感病。橡膠樹發(fā)芽時病害即可發(fā)生，最初為害萌發(fā)的嫩葉，隨后古銅期和淡綠期的葉片也受感染。病害消長動態(tài)如圖3所示，每年2—3月炭疽病害暴發(fā)型增長，為炭疽病疫情的暴發(fā)流行期，3—4月病情指數(shù)達到最高，隨后病情指數(shù)逐級下降并趨于平緩，這一發(fā)病情況與橡膠樹的萌芽抽葉期吻合，同時受氣候條件的影響大，物候、降雨量和溫濕度滿足時病害亦會加重。監(jiān)測結(jié)果顯示，2019年的病情指數(shù)顯著低于2017年和2018年，推測2019年是由于氣候條件良好，不利于病原菌暴發(fā)導致。

2.2??菌株分離與致病性測定

2017—2018年，從海南省主要橡膠種植區(qū)采集病樣264份，獲得炭疽病分離物140份，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，分離物的菌絲菌落形態(tài)與常規(guī)尖孢炭疽菌和膠胞炭疽菌差異不大，進行抽樣初步分析孢子形態(tài)，發(fā)現(xiàn)菌落色素也與尖孢炭疽菌和膠胞炭疽菌差異不大，僅其中采自瓊中縣陽江農(nóng)場苗圃的炭疽病樣品中有1株炭疽病菌菌落顏色異常，菌落背面產(chǎn)生橙紅色色素，初篩發(fā)現(xiàn)其對多菌靈有抗性，因此對該菌株進行進一步研究。柯赫氏法

則驗證結(jié)果表明（圖4），證明該菌株能引起橡膠樹炭疽病，用無菌超純水進行菌株保存，編號為HCkHNQZ1736。

2.3??形態(tài)鑒定結(jié)果

對菌株HCkHNQZ1736和MeCkYN1705進行培養(yǎng)和觀測（圖5），結(jié)果表明，在PDA培養(yǎng)基上氣生菌絲為毛氈狀，菌絲平伏、邊緣整齊，呈圓形，28?℃培養(yǎng)箱內(nèi)菌落生長速率約為（10.5±?1.5）mm/d，生長初期2個菌株背面均為乳白色至奶黃色，生長后期菌株HCkHNQZ1736背面逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槌燃t色。此外，通過顯微鏡觀察2個菌株的顯微結(jié)構(gòu)基本一致，子囊殼近球形，表面呈蜂窩狀斑紋，直徑為80.4～90.6??m；子囊孢子單行或雙行排列，邊緣整齊，一端鈍圓一端呈錐形或彎曲，大小為（4.2±0.9）?m×（14.2±1.1）?m；分生孢子圓柱狀，邊緣整齊，兩端鈍圓，大小為（4.8±?0.7）?m×（15.2±0.9）?m，有1～2個油滴；附著胞為深棕色至黑褐色，呈橢圓形或近圓形，邊緣整齊，大小為（5.4±0.4）?m×（8.2±0.6）?m；孢子梗透明至淡褐色，光滑，有隔膜和分支，多為簇狀分布，長度約為50??m。根據(jù)上述菌落形態(tài)和顯微結(jié)構(gòu)等特征初步推測菌株HCkHNQZ1736為博寧炭疽菌復合種。

2.4??系統(tǒng)發(fā)育分析

利用引物對ITS1/ITS4、T1/Bt-2b、GDF/GDR分別對菌株HCkHNQZ1736和MeCkYN1705的基因組DNA進行PCR擴增，分別獲得575、751、239?bp的片段，驗證測序后將獲得的基因序列在GenBank中進行BLAST比對，供試菌株的ITS序列與C.?boninense的同源性為99%；供試菌株的tub序列與C.?karstii的同源性為99%；供試菌株的GAPDH序列與C.?karstii的同源性為99%。

下載博寧炭疽復合種中各種模式菌株的多基因序列，利用MEGA?v.?6.0軟件進行比對后手動校正，將各基因序列以首尾相接的方式進行連接，比對后包括外群C.?truncatum在內(nèi)共有1245個序列特征，序列1～507為ITS序列；508～1003為tub2序列；1004～1245為GAPDH序列。用最大似然法中的Hasegawa-?Kishino-Yano?model模塊構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖6），供試菌株與C.?karstii聚為同一分支，節(jié)點支持率為98%，表明供試菌株屬于喀斯特炭疽（C.?karstii）。

2.5??致病力測定結(jié)果

通過致病力測定，發(fā)現(xiàn)菌株HCkHNQZ1736和MeCkYN1705對4個主栽品種大豐95、RRIM 600、PR107和熱研7-33-97均表現(xiàn)出很強的致病力，與菌株MeCkYN1705相比，菌株HCkHNQZ 1736對4個海南主栽橡膠樹品種古銅期葉片的致病力稍弱，發(fā)生侵染后3?d的平均病斑直徑分別為10.33、10.90、10.57、9.17?mm，其中對RRIM 600的致病力最強，對熱研7-33-97的致病力較弱（表5）。

2.6??喀斯特炭疽菌的藥劑敏感性

菌株HCkHNQZ1736和MeCkYN1705對不同濃度的98%多菌靈原藥和96%咪鮮胺錳鹽原藥敏感性測定結(jié)果如表6所示，通過計算獲得菌株HCkHNQZ1736和MeCkYN1705在多菌靈和咪鮮胺錳鹽篩選壓力下的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)（r）以及EC50值。結(jié)果表明，在多菌靈的篩選壓力下，HCkHNQZ1736產(chǎn)生非常強的抗藥性，EC50達到1107.2654??g/mL，而MeCkYN1705的EC50僅為0.0554??g/mL；在咪鮮胺錳鹽的篩選壓力下，藥劑對HCkHNQZ1736和MeCkYN1705的作用效果相近，2個菌株均未表現(xiàn)出抗藥性，EC50分別為

3??討論

通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，海南省目前種植的橡膠樹品種中，51.06%為PR107，43.39%為RRIM600，2.17%為熱研7-33-97，0.90%為大豐95，1.31%為海墾系列，其余品種共占1.18%，可見海南省橡膠樹主栽品種相對單一且面積大，主栽品種中，PR107抽葉不整齊，在炭疽病侵襲時往往需要反復治理；RRIM600開割后抽葉相對整齊，物候比較一致，整體上適合炭疽病的統(tǒng)防統(tǒng)治；熱研7-33-97相對高產(chǎn)但不抗風，易受臺風侵襲發(fā)生斷樹或倒伏，導致橡膠樹林段物候不整齊，炭疽病常年均有發(fā)生，暴發(fā)期間需要反復治理。

為了解和掌握橡膠樹炭疽病在田間的真實發(fā)生情況，2017—2019年對海南省儋州市、瓊中縣、樂東縣、萬寧市、白沙縣、澄邁縣等主栽區(qū)進行了橡膠樹炭疽病的隨機踏查，并設置瓊中縣陽江農(nóng)場增殖苗圃作為橡膠樹炭疽病病情長期動態(tài)監(jiān)測點，結(jié)果發(fā)現(xiàn)橡膠樹炭疽病的發(fā)生流行情況與橡膠樹的品種（系）以及樹齡關(guān)系小，而與橡膠樹物候期及生態(tài)環(huán)境特別是氣候相關(guān)性聯(lián)系密切，抽芽至古銅期如果遇上持續(xù)的陰雨天氣必導致炭疽病大暴發(fā)，因此橡膠樹炭疽病防控措施的重點是結(jié)合天氣預報提前預防，一旦發(fā)病后防治將變得極其困難，這與以往膠農(nóng)反映的現(xiàn)象吻合，因此，落實抽葉至古銅期的橡膠樹炭疽病統(tǒng)防統(tǒng)治措施要依據(jù)天氣預報進行調(diào)整。

就目前而言，膠孢炭疽復合種和尖孢炭疽復合種仍是侵染海南省橡膠樹的優(yōu)勢種[23]，本次常規(guī)調(diào)查主要也是調(diào)查尖孢炭疽菌和膠胞炭疽菌為主，國內(nèi)橡膠樹上未系統(tǒng)開展調(diào)查喀斯特炭疽菌，而國內(nèi)外對喀斯特炭疽菌的報道多在蘭花、油茶、大葉桉、辣椒等作物上[24-26]，迄今為止國內(nèi)在橡膠樹上的喀斯特炭疽病僅在云南省紅河綠春的戈蘭和德宏瑞麗的莫里橡膠樹上零星發(fā)生[19]。本研究于海南省橡膠樹上首次發(fā)現(xiàn)喀斯特炭疽菌的發(fā)生為害，樣品采自海南省瓊中縣陽江農(nóng)場苗圃，菌株編號為HCkHNQZ1736。通過形態(tài)觀察該菌株在PDA平板上的生長狀況，對子囊、分生孢子、子囊孢子、附著胞、孢子梗等結(jié)構(gòu)進行初步鑒定，鑒定該菌株為博寧炭疽菌復合種；利用多基因分析對其ITS、tub和GAPDH三個基因進行同源性比較并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，進一步基于多位點的系統(tǒng)發(fā)育分析確定該菌株的分類地位[11-13，?27-28]，同源比較后鑒定該菌株為喀斯特炭疽（C.?karstii）。由此可見，博寧炭疽中的喀斯特炭疽菌已經(jīng)在云南和海南橡膠產(chǎn)區(qū)發(fā)現(xiàn)，以后普查中應注意加強對該類菌株的監(jiān)測，并對其生物學特性和流行學進行深入研究，以便在生產(chǎn)上能更高效地全面防控橡膠樹炭疽病。

本研究還開展了菌株HCkHNQZ1736對海南主栽橡膠樹品種的致病力研究，并明確其對多菌靈和咪鮮胺的藥劑敏感性，經(jīng)過藥劑敏感性測定發(fā)現(xiàn)該菌株對多菌靈具有高抗性，EC50達到1107.2654??g/mL，且該菌株菌落背面顏色在生長3?d左右轉(zhuǎn)變?yōu)槌燃t色，有別于敏感性菌株的奶黃色。鄭肖蘭等[29]克隆了該菌株的tub2基因，序列分析發(fā)現(xiàn)其所編碼的第198氨基酸位點由谷氨酸（Glu-E）突變?yōu)楸彼幔ˋla-A），該氨基酸位點突變是導致該菌株產(chǎn)生多菌靈抗性的原因。上述研究結(jié)果與詹儒林[30]、李河等[31]的炭疽菌抗藥性機理研究結(jié)果一致，高抗菌株為三聯(lián)密碼子第198位點從GAG突變?yōu)镚CG，導致第198位點的氨基酸由谷氨酸突變?yōu)楸彼帷?/p>

植物病原炭疽菌對苯并咪唑類的抗藥性研究主要集中在苯并咪唑類殺菌劑，該類殺菌劑是20世紀60年代末70年代初開發(fā)的一類含有苯并咪唑分子結(jié)構(gòu)的高效且廣譜的內(nèi)吸性殺菌劑。盡管目前苯并咪唑類殺菌劑的抗藥性問題已日趨嚴重，但這類殺菌劑仍被全世界廣泛使用，用于防治多種植物病害[32]。苯菌靈是第一個應用于大田的苯并咪唑類殺菌劑，自1967年開始使用，1969年SCHROEDER等[33]首次報道黃瓜白粉菌對苯菌靈產(chǎn)生了抗藥性。隨后在許多國家均陸續(xù)發(fā)現(xiàn)對該類藥劑產(chǎn)生抗性，如1982年SPALDING[34]報道了芒果炭疽菌對多菌靈的抗性，1987年周明國等[35]在灰霉菌中檢測到多菌靈抗性菌株，1994年JOHNSON[36]報道了灰葡萄孢對苯菌靈的抗性，DE?LAPEYRE等[37]報道了香蕉炭疽菌對特克多的抗性。2001年周明國等[38]報道了引起小麥赤霉病的禾谷鐮孢菌對多菌靈出現(xiàn)了高抗藥性，2003年朱桂寧等[39]研究發(fā)現(xiàn)番茄灰霉病菌對多菌靈抗性很高；隨后，詹儒林[30]、楊葉等[40]和徐大高等[41]均報道了海南芒果炭疽菌對多菌靈產(chǎn)生了抗藥性。李洋[42]報道了葡萄炭疽菌對多菌靈產(chǎn)生了抗藥性。因此科學合理地使用農(nóng)藥，延緩病菌對農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性及科學治理抗藥性是農(nóng)藥防治領(lǐng)域中具有重要意義的課題[40，?43]。本研究結(jié)果顯示大田中橡膠樹炭疽病已經(jīng)產(chǎn)生了苯并咪唑類多菌靈高抗藥性菌株，如果此類抗藥性菌株傳播速度快，適生性強，將會在生產(chǎn)上給橡膠樹或其他作物帶來極大的潛在危險，高抗性炭疽菌的普查將是下一步病害常規(guī)調(diào)查的重點，炭疽菌的抗藥性基礎(chǔ)研究、流行研究以及防控措施等相關(guān)研究將也是今后農(nóng)業(yè)發(fā)展中高度重視的研究內(nèi)容之一。因此今后的研究應重點關(guān)注和監(jiān)測橡膠樹炭疽菌抗藥性發(fā)生情況，減少易產(chǎn)生抗藥性殺菌劑的使用，并深入研究炭疽菌數(shù)量多、分布范圍廣的分子機制，為有效防治橡膠樹炭疽病奠定基礎(chǔ)。

參考文獻

• 馮淑芬，?劉秀娟，?王紹春，?張開明，?鄭服叢.?橡膠樹炭疽病流行規(guī)律研究[J].?熱帶作物學報，?1998，?19（4）：?39-45.FENG?S?F，?LIU?X?J，?WANG?S?C，?ZHANG?K?M，?ZHENG?F?C.?Epidemic?process?of?anthracnose?of?Hevea?brasiliensis[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?1998，?19（4）：?39-45.?（in?Chinese）
• 鄭肖蘭，?崔昌華，?鄭服叢，?羅大全，?吳偉懷.?橡膠炭疽病病原菌生物學特性初步研究[J].?微生物學通報，?2006（2）：?95-99.ZHENG?X?L，?CUI?C?H，?ZHENG?F?C，?LUO?D?Q，?WU?W?H.?Study?on?biological?characters?of?the?pathogens?caused?anthracnose?of?rubber?trees[J].?Microbiology?China，?2006（2）：?95-99.?（in?Chinese）
• 鄭肖蘭，?傅帥，?鄭服叢，?李銳，?吳偉懷，?賀春萍.?植物病原菌抗藥性研究進展[J].?熱帶農(nóng)業(yè)科學，?2011，?31（1）：?86-90.ZHENG?X?L，?FU?S，?ZHENG?F?C，?LI?R，?WU?W?H，?HE?C?P.?Research?advances?on?fungicide?resistance?in?plant?pathogens[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Agriculture，?2011，?31（1）：?86-90.?（in?Chinese）
• ZHENG?X?L，?LIU?Y，?WEI?X?H，?HE?C?P，?WU?W?H，?LIANG?Y?Q，?LI?R，?ZHENG?F?C.?Generation?and?analysis?of?pathogenicity-related?gene?mutants?of?Colletotrichum?gloeosporioides?using?a?novel?promoter?trapping?system[J].?Plant?Diseases?and?Pests，?2013（3）：?12-15，?19.

[5]?劉艷，?賀春萍，?易克賢，?習金根，?吳偉懷，?梁艷瓊，?鄭金龍，?李秋潔，?鄭肖蘭，?鄭服叢.?橡膠炭疽病菌致病相關(guān)突變體的篩選及表型分析[J].?熱帶作物學報，?2014，?35（11）：?2278-2283.LIU?Y，?HE?C?P，?YI?K?X，?XI?J?G，?WU?W?H，?LIANG?Y?Q，?ZHENG?J?L，?LI?Q?J，?ZHENG?X?L，?ZHENG?F?C.?Screening?of?pathogenicity-related?mutants?from?a?T-DNA?insertional?mutant?library?of?Colletotrichum?gloeosporioides?and?analysis?on?the?phenotypes[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?2014，?35（11）：?2278-2283.?（in?Chinese）

[6]?劉艷.?橡膠炭疽病菌（Colletotrichum?gloeosporioides）致病相關(guān)突變體表型分析及插入位點定位[D].?海口：?海南大學，?2010.LIU?Y.?The?analysis?on?the?phenotypesof?Colletotrich?umgloeosporioides?pathogenicity-related?mutantsand?the?T-DNA?flanking?sequence[D].?Haikou：?Hainan?University，?2010.?（in?Chinese）

[7]?范會雄，?李德威，?黃宏積，?吳多興，?黃深武.?橡膠樹炭疽病發(fā)生流行規(guī)律及防治研究[J].?植物保護，?1996，?22（5）：?31-32.FAN?H?X，?LI?D?W，?HUANG?H?J，?WU?D?X，?HUANG?S?W.?Study?on?the?epidemic?law?and?control?of?rubber?tree?anthracnose[J].?Plant?Protection，?1996，?22（5）：?31-32.?（in?Chinese）

[8]?崔昌華.?橡膠老葉炭疽病病原菌的生物學、對藥物的敏感性及ITS序列分析[D].?儋州：?華南熱帶農(nóng)業(yè)大學，?2006.CUI?C?H.?Biological?characters，?sensitivity?to?fungicide?and?ITS?sequence?analysis?of?the?pathogens?caused?anthracnose?from?rubber?trees[D].?Danzhou：?South?China?University?of?Tropical?Agriculture，?2006.?（in?Chinese）

[9]?許志剛.?普通植物病理學[M].?北京：?高等教育出版社，?2009.XU?Z?G.?Common?plant?pathology[M].?Beijing：?Higher?Education?Press，?2009.?（in?Chinese）

[10]?陸家云.?植物病原真菌學[M].?北京：?中國農(nóng)業(yè)出版社，?2000.LU?J?Y.?Mycology?of?plant?pathogens[M].?Beijing：?China?Agricultural?Press，?2000.?（in?Chinese）

[11]?江濤，?劉先寶，?李博勛，?鄭肖蘭，?蔡吉苗，?馮艷麗，?黃貴修.?國內(nèi)橡膠樹尖孢炭疽復合種種間分子系統(tǒng)發(fā)育及生物學特性分析[J].?熱帶作物學報，?2020，?41（9）：?1856-1864.JIANG?T，?LIU?X?B，?LI?B?X，?ZHEGN?X?L，?CAI?J?M，?FENG?Y?L，?HUANG?G?X.?Interspecific?molecular?phylogeny?and?biological?characteristics?of?Colletotrichum?acutatum?complex?species?causing?Colletotrichum?leaf?disease?on?rubber?trees?in?China[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?2020，?41（9）：?1856-1864.?（in?Chinese）

[12]?江濤，?劉先寶，?李博勛，?馮艷麗，?鄭肖蘭，?黃貴修.?橡膠樹尖孢炭疽復合種新菌株的報道及生物學特性分析[J].?植物病理學報，?2020，?50（5）：?531-542.JIANG?T，?LIU?X?B，?LI?B?X，?FENG?Y?L，?ZHENG?X?L，?HUANG?G?X.?Report?and?biological?characteristics?to?new?strain?of?Colletotrichum?acutatum?species?complex?causing?anthracnose?in?rubber?trees[J].?Acta?Phytopathologica?Sinica，?2020，?50（5）：?531-542.?（in?Chinese）

[13]?劉先寶，?李博勛，?孫懂懂，?時濤，?黃貴修.?橡膠樹膠孢炭疽菌P型ATP酶基因CgATPase?01的敲除及表型分析[J].?熱帶作物學報，?2017，?38（5）：?126-132.LIU?X?B，?LI?B?X，?SUN?D?D，?SHI?T，?HUANG?G?X.?Knockout?and?phenotypic?analysis?of?the?CgATPase?01?gene?of?Colletotrichum?gloeosporioides[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?2017，?38（5）：?126-132.?（in?Chinese）

[14]?MARIN?FY，?GROENEWALD?J?Z，?CAI?L，?CHEN?Q，?MARINCOWITZ?S，?BARNES?I，?BENSCH?K，?BRAUN?U，?CAMPORESI?E，?DAMM?U，?DE?BEER?Z?W，?DISSANAYAK?A，?EDWARDS?J，?GIRALDO?A，?HERN?NDEZ?R?M，?HYDE?K?D，?JAYAWARDENA?R?S，?LOMBARD?L，?LUANGSAARD?J，?MCTAGGART?A?R，?ROSSMAN?A?Y，?SANDOVAL?D?M，?SHEN?M，?SHIVAS?R?G，?TAN?Y?P，?VAN?DER?LINDE?E?J，?WINGFIELD?M?J，?WOOD?A?R，?ZHANG?J?Q，?ZHANG?Y，?CROUS?P?W.?Genera?of?phytopa thogenic?fungi：?GOPHY?1[J].?Studies?in?Mycology，?2017（86）：?99-216.

[15]?Liu?X?B，?Li?B?X，?Cai?J?M，?Zheng?X?L，?Feng?Y?L，?Huang?G?X.?Diversity?of?Colletotrichum?species?causing?anthracnose?of?rubber?tree?in?China[J].?Scientific?Reports，?2018（8）：?10435.

[16]?林春花，?孫董董，?韓丹，?黃貴修.?中國橡膠樹苗圃2種炭疽病菌分子鑒定及分布分析[J].?熱帶作物學報，?2014，?35（9）：?1802-1808.?LIN?C?H，?SUN?D?D，?HAN?D，?HUANG?G?X.?Identification?of?Colletotrichum?species?on?the?Colletotrichum?leaf?disease?from?rubber?nurseries?in?China[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?2014，?35（9）：?1802-1808.?（in?Chinese）

[17]?林春花，?楊歡，?趙曉宇，?潘瀟涵，?劉文波，?繆衛(wèi)國，?鄭服叢.?海南橡膠樹炭疽菌Colletotrichum?siamense和C.?fructicola的鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析[J].?熱帶作物學報，?2018，?39（1）：?129-136.?LIN?C?H，?YANG?H，?ZHAO?X?Y，?PAN?X?H，?LIU?W?B，?MIAO?W?G，?ZHENG?F?C.?Identification?and?phylogenetic?analysis?of?anthracnose?pathogen?Colletotrichum?siamense?and?C.?fructicola?isolatedfrom?rubber?tree?in?Hainan[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?2018，?39（1）：?129-136.?（in?Chinese）

[18]?SHI?Y?P，?LIU?Y?X，?LI?L?L.?First?report?of?Colletotrichum?laticiphilum?causing?anthracnose?of?rubber?tree?in?China[J].?Plant?Disease，?2019，?103（3）：?579-580.

[19]?蔣桂芝，?石兆武，?劉一賢，?胡成云.?橡膠樹上的一種新炭疽菌[J].?熱帶農(nóng)業(yè)科技，?2016，?39（4）：?5-8.JIANG?G?Z，?SHI?Z?W，?LIU?Y?X，?HU?C?Y.?A?new?Coleto trichum?isolated?from?Hevea?brasiliensis[J].?Tropical?Agri cultural?Science?&?Technology，?2016，?39（4）：?5-8.?（in?Chinese）

[20]?許文耀.?普通植物病理學實驗指導[M].?北京：?科學出版社，?2017.XU?W?Y.?Experimental?guidance?on?general?plant?pathology[M].?Beijing：?Science?Press，?2017.?（in?Chinese）

[21]?林春花，?董瑛，?劉文波，?繆衛(wèi)國，?鄭服叢.?多基因序列比較分析海南橡膠樹炭疽病菌遺傳種群[J].?熱帶作物學報，?2016，?37（5）：?943-951.LIN?C?H，?DONG?Y，?LIU?W?B，?MIAO?W?G，?ZHENG?F?C.?Genetic?diversity?analysis?of?Colletotrichum?spp.?population?isolated?from?rubber?tree?in?Hainan?based?on?multiple-gene?phylogeny[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?2016，?37（5）：?943-951.?（in?Chinese）

[22]?楊曉琦，?周小軍，?朱麗燕，?陳向陽，?何曉嬋，?張傳清.?金線蓮炭疽病病原菌的分離鑒定及其對9種殺菌劑的敏感性[J].?農(nóng)藥學學報，?2020，?22（6）：?951-958.YANG?X?Q，?ZHOU?X?J，?ZHU?L?Y，?CHEN?X?Y，?HE?X?C，?ZHANG?C?Q.?Isolation?and?identification?of?pathogen?causing?anthracnose?on?Anoectochilus?roxburghii?and?its?sensitivity?to?nine?fungicides[J].?Chinese?Journal?of?Pesticide?Science，?2020，?22（6）：?951-958.?（in?Chinese）

[23]?CAO?X?R，?XU?X?M，?CHE?H?Y，?WEST?J?S，?LUO?D?Q.?Three?Colletotrichum?species，?including?a?new?species，?are?associated?to?leaf?anthracnose?of?rubber?tree?in?Hainan，?China[J].?Plant?Disease，?2019，?103：?117-124.

[24]?楊友聯(lián)，?蔡磊，?喻子牛，?劉作易，?HYDE?K?D.?蘭科植物上炭疽菌屬真菌系統(tǒng)學研究[C]//中國菌物學會.?2010年中國菌物學會學術(shù)年會論文摘要集，?2010：?44-45.YANG?Y?L，?CAI?L，?YU?Z?L，?LIU?Z?Y，?HYDE?K?D.?Colletotrichum?species?on?Orchidaceae[C]//Mycological?Society?of?China.?Abstracts?of?the?Academic?Annual?Conference?Papers?of?the?Chinese?Society?of?Microbiology?in?2010，?2010：?44-45.?（in?Chinese）

[25]?TOZZE?JUNIOR?H?J，?MASSOLA?JUNIOR?N?S，?C?MARA?G?M?S，?GIORIA?R，?SUZUKI?O，?BRUNELLI?K?R，?BRAGA?R?S，?KOBORI?R?F.?First?report?of?Colletotrichum?boninense?causing?Colletotrichum?on?pepper?in?Brazil[J].?Plant?Disease，?2009，?93（1）：?106-106.

[26]?VELHO?A?C，?STADNIK?M?J，?CASANOVA?L，?MONDINO?P，?ALANIZ?S.?First?report?of?Colletotrichum?karstii?causing?Glomerella?leaf?spot?on?apple?in?Santa?Catarina?State，?Brazil[J].?Plant?Disease，?2014，?98（1）：?157.

[27]?HUNUPOLAGAMA?D?M，?CHANDRASEKHARAN?N?V，?WIJESUNDERA?W?S?S，?KATHRIARACHCHIL?H?S，?FERNANDOT?H?P?S，?WIJESUNDERAR?L?C.?Unveiling?members?of?Colletotrichum?acutatum?species?complex?causing?Colletotrichum?leaf?disease?of?Hevea?brasiliensisin?Sri?Lanka[J].?Current?Microbiology，?2017，?74（6）：?747-756.

[28]?DAMM?U，?CANNON?P?F，?WOUDENBERG?J?H?C，?CROUS?P?W.?The?Colletotrichum?acutatum?species?complex[J].?Studies?in?Mycology，?2012，?73：?37-113.

[29]?鄭肖蘭，?劉先寶，?李博勛，?鄭行愷，?時濤，?馮艷麗，?黃貴修.?橡膠樹炭疽菌HCkHNQZ1736?β-TUB2基因?qū)Χ嗑`的抗性相關(guān)性分析[J].?熱帶作物學報，?2021，?42（8）：?2334-2341.ZHENG?X?L，?LIU?X?B，?LI?B?X，?ZHENG?X?K，?SHI?T，?FENG?Y?L，?HUANG?G?X.?Preliminary?analysis?on?resistance?mechanism?of?β-TUB2?of?HCkHNQZ1736?of?rubber?tree?to?carbendazim[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?2021，?42（8）：?2334-2341.?（in?Chinese）

[30]?詹儒林.?芒果炭疽菌對多菌靈的抗藥性研究[D].?儋州：?華南熱帶農(nóng)業(yè)大學，?2004.ZHAN?R?L.?Studies?on?carbendazim-resistance?of?Colletotrichum?gloeosporioides?Penz?on?mango[D].?Danzhou：?South?China?Tropical?Agricultural?University，?2004.?（in?Chinese）

[31]?李河，?李司政，?王悅辰，?劉君昂，?徐建平，?周國英.?油茶苗圃炭疽病原菌鑒定及抗藥性[J].?林業(yè)，?2019，?55（5）：?85-94.LI?H，?LI?S?Z，?WANG?Y?C，?LIU?J?A，?XU?J?P，?ZHOU?G?Y.?Identification?of?the?pathogens?causing?anthracnose?of?Camellia?oleifera?in?nursery?and?their?resistence?to?fungicides[J].?Forestry，?2019，?55（5）：?85-94.?（in?Chinese）

[32]?李紅霞.?四種植物病原真菌對多菌靈的抗藥性分子遺傳機制及其檢測技術(shù)的研究[D].?南京：?南京農(nóng)業(yè)大學，?2003.LI?H?X.?Molecular?mechanism?and?detection?techniques?of?resistance?of?four?plant?pathogenic?fungi?to?carbendazim[D].?Nanjing：?Nanjing?Agricultural?University，?2003.?（in?Chinese）

[33]?SCHROEDER?W?T，?PROVVIDENTY?R.?Resistance?to?benomyl?in?powdery?mildew?of?cucurbits[J].?Plant?Disease?Reporter，?1969，?53：?271?-275.

[34]?SPALDING?D?H.?Resistance?of?mango?pathogens?to?fungicides?used?to?control?postharvest?diseases[J].?Plant?Diseases，?1982，?66：?1185-1186.

[35]?周明國，?葉鐘音，?劉經(jīng)芬.?南京市郊灰霉菌對苯并咪唑類殺菌劑田間抗性的檢測[J].?南京農(nóng)業(yè)大學學報，?1987，?10（2）：?53-57.ZHOU?M?G，?YE?Z?Y，?LIU?J?F.?Detection?of?resistance?of?grey?mold?（Botrytis?cinerea）?to?benzi?midazoles?in?the?field[J].?Journal?of?Nanjing?Agricultural?University，?1987，?10（2）：?53-57.?（in?Chinese）

[36]?JOHNSON?K?B.?Frequency?of?benzimidazole?and?dicarboxi mide-resistant?strains?of?Botrytis?cinerea?in?western?Orgon?small?fruit?snap?bean?plantings[J].?Plant?Disease，?1994，?78：?572-577.

[37]?DE?LAPEYRE?DE?BELLAIRE?L，?DUBOIS?C.?Distribution?of?thiabendazole-resistant?Colletotrichum?musae?isolates?from?Guadeloupe?banana?plantations[J].?Plant?Diseases，?1997，?81：?1378-1383.

[38]?周明國，?王建新.?禾谷鐮孢菌對多菌靈的敏感性基線及抗藥性菌株生物學性質(zhì)研究[J].?植物病理學報，?2001，?31（4）：?365-370.ZHOU?M?G，?WANG?J?X.?Study?on?sensitivity?basehline?of?Fusarium?graminearum?to?carbendazim?and?biological?characters?of?mbc-resistant?strains[J].?Acta?Phytopathologica?Sinica，?2001，?31（4）：?365-370.?（in?Chinese）

[39]?朱桂寧，?黃福新，?蔡健和.?廣西番茄灰霉病菌的多重抗藥性檢測[J].?中國蔬菜，?2003（4）：?14-16.ZHU?G?N，?HUANG?F?X，?CAI?J?H.?Multiple?fungicide-?resistance?of?tomato?Botrytis?cinerea?in?Guangxi[J].?China?Vegetables，?2003（4）：?14-16.?（in?Chinese）

[40]?楊葉，?何書海，?張淑娟，?胡美姣.?海南芒果炭疽菌對多菌靈的抗藥性測定[J].?熱帶作物學報，?2008（1）：?73-77.YANG?Y，?HE?S?H，?ZHANG?S?J，?HU?M?J.?Resistance?of?mango?anthracnose?pathogen?Colletotrichum?gloesporioides?to?carbendazim?in?Hainan?province[J].?Chinese?Journal?of?Tropical?Crops，?2008（1）：?73-77.?（in?Chinese）

[41]?徐大高，?潘汝謙，?鄭仲，?王振中.?芒果炭疽病菌對多菌靈的抗藥性監(jiān)測[J].?華南農(nóng)業(yè)大學學報，?2004，?25（2）：?34-36.??XU?D?G，?PAN?R?Q，?ZHENG?Z，?WANG?Z?Z.?Monitoring?of?the?resistance?of?Colletotrichum?gloeosporioides?on?mango?anthracnose?to?the?fungicide?carbendazim[J].?Journal?of?South?China?Agricultural?University，?2004，?25（2）：?34-36.?（in?Chinese）

[42]?李洋.?遼寧葡萄炭疽病菌對多菌靈抗藥性研究[D].?蘭州：?甘肅農(nóng)業(yè)大學，?2009.LI?Y.?Study?on?carbendazim-resistant?Colletotrichum?gloeosporioides?（Penz.）?Sacc.?in?Liaoning[D].?Lanzhou：?Gansu?Agricultural?University，?2009.?（in?Chinese）

[43]?詹儒林.?芒果炭疽病菌抗藥性基因tub2的克隆及其轉(zhuǎn)化金龜子綠僵菌的初步研究[D].?儋州：?華南熱帶農(nóng)業(yè)大學，?2007.ZHAN?R?L.?Cloning?of?carbendazim-resistant?gene?tub2?from?mango?anthracnose?and?its?transfer?to?Metarhizium?anisopliae?mediated?by?Agrobacterium?tumefaciens[D].?Danzhou：?South?China?Tropical?Agricultural?University，?2007.?（in?Chinese）