馬志茹 趙盼月 翟少偉

(集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院鰻鱺現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)教育部工程研究中心, 廈門(mén) 361021)

膽汁酸(Bile acids, BA)由動(dòng)物肝臟中合成, 貯存在膽囊中, 攝食后排入腸道中發(fā)揮作用; 其具有親水性的羥基及羧基, 又含有親油性烷基的特殊的兩性分子結(jié)構(gòu), 決定了其具有較強(qiáng)表面活性, 在促進(jìn)腸道對(duì)飼料中脂類(lèi)物質(zhì)的消化吸收中發(fā)揮重要作用[1,2], 還可通過(guò)激活法尼酯X受體(Farnesoid X receptor, FXR)調(diào)節(jié)脂類(lèi)代謝[2,3]。BA除了在脂類(lèi)消化吸收代謝方面的基本作用外, 還具有提高動(dòng)物免疫力, 減少細(xì)菌內(nèi)毒素吸收、抑制有害菌增殖及利膽的生理功能[1]。因此, 膽汁酸作為魚(yú)類(lèi)飼料添加劑的報(bào)道逐漸增多, 且大多研究表明適量添加BA可促進(jìn)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng), 提高飼料利用效率[4,5]。近來(lái)的研究表明, BA可降低投喂高脂飼料的草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)[6]、大黃魚(yú)(Larimichthy scrocea)[7]、黑鯛(Acanthopagrus schlegelii)[8]、紅鰭東方鲀(Takifugu rubripes)[9]和虹鱒(Oncorhynchus mykiss)[10]等魚(yú)類(lèi)肝脂過(guò)度蓄積, 緩解肝脂過(guò)量蓄積產(chǎn)生的肝功能損傷; 還能減輕投喂低蛋白質(zhì)飼料草魚(yú)[11]、高淀粉飼料大口黑鱸(Micropterus salmoides)[12,13]、豆油替代魚(yú)油飼料大黃魚(yú)[14]、高非淀粉多糖飼料虹鱒[15]及高植物性原料比例飼料的大菱鲆(Scophthalmus maximus)、羅非魚(yú)(Oreochromis niloticus)和虹鱒等體內(nèi)脂肪代謝紊亂[16—18]。上述研究結(jié)果顯示了BA在維持魚(yú)類(lèi)肝臟脂類(lèi)代謝穩(wěn)態(tài)方面具有重要作用, 還鮮見(jiàn)其在鰻鱺(Anguillaspp.)飼料中的報(bào)道。

鰻鱺營(yíng)養(yǎng)豐富, 素有“水中人參”的美譽(yù), 作為我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi), 連續(xù)多年在出口創(chuàng)匯的單一水產(chǎn)品中排名第一。歐洲鰻鱺(Anguilla anguilla)曾是我國(guó)主要鰻鱺養(yǎng)殖品種, 但該品種屬于《瀕危野生動(dòng)植物種國(guó)際貿(mào)易公約》CITES附錄Ⅱ的瀕危保護(hù)物種, 目前國(guó)內(nèi)進(jìn)口量較少, 仍有一定養(yǎng)殖規(guī)模[19]。歐洲鰻鱺全魚(yú)脂肪含量在可養(yǎng)殖的主要鰻鱺品種中最高, 且肝臟功能易受脂肪代謝紊亂帶來(lái)的負(fù)面影響[20,21], 開(kāi)展BA添加在歐洲鰻鱺飼料中的應(yīng)用研究具有重要的實(shí)踐和理論意義。因此, 本實(shí)驗(yàn)旨在研究歐洲鰻鱺幼魚(yú)飼料中添加不同水平BA對(duì)肝臟脂肪代謝的影響, 為揭示BA調(diào)節(jié)魚(yú)類(lèi)脂肪代謝機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)飼料

將養(yǎng)殖歐洲鰻鱺幼魚(yú)的9口水泥池[初始規(guī)格(141.5±1.9) g/尾; 初始魚(yú)重(682±23) kg/池]隨機(jī)分為3個(gè)組, 分別投喂幼鰻商業(yè)飼料(對(duì)照組)及在其基礎(chǔ)上添加500 mg/kgBA(BA1組)、基礎(chǔ)飼料添加1000 mg/kg BA(BA2組)的飼料; 每個(gè)組3個(gè)重復(fù), 養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)持續(xù)15 周。在本實(shí)驗(yàn)中膽汁酸添加水平根據(jù)以往膽汁酸在不同魚(yú)類(lèi)飼料中適宜添加水平及膽汁酸的推薦水平在500 mg/kg左右而綜合考慮確定。

所用幼鰻商業(yè)飼料由浙江科盛飼料股份有限公司生產(chǎn)且未添加BA, 主要原料為白魚(yú)粉、α-糊化淀粉、酵母粉、膨化大豆及復(fù)合預(yù)混料, 其主要營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)(測(cè)定值): 水分6.08%、粗蛋白質(zhì)47.43%、粗脂肪4.81%、灰分16.87%、鈣4.16%和總磷2.85%。將BA(豬源膽汁酸產(chǎn)品, 有效含量50%, 廈門(mén)興牧威動(dòng)物保健品有限公司生產(chǎn))按照500和1000 mg/kg水平添加在上述商業(yè)基礎(chǔ)飼料中, 采用逐級(jí)混合均勻的方法制作實(shí)驗(yàn)組飼料。

1.2 飼養(yǎng)管理

本實(shí)驗(yàn)在福建錦江之曼水產(chǎn)科技有限公司5號(hào)養(yǎng)殖車(chē)間進(jìn)行, 選用具有循環(huán)水設(shè)施的六邊形水泥池(面積30 m2, 高1.5 m, 有效水體體積27 m3, 水體流速為0.39 m3/min, 采用液氧充氣)開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究,所有歐洲鰻鱺幼魚(yú)養(yǎng)殖水泥池實(shí)行統(tǒng)一管理。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前, 每日用攪拌機(jī)(YE2132M-6, 上海皓天電機(jī)有限公司)將粉狀基礎(chǔ)飼料與水混合均勻(重量比為1∶1.2), 和成面團(tuán)狀飼料, 再切成2 kg左右的小塊進(jìn)行投喂。實(shí)驗(yàn)魚(yú)日投喂2次(每天06:00和18:00), 每餐根據(jù)攝食活力、水質(zhì)變化和天氣變化等狀況確定具體投喂量; 采用自然光照, 另在投喂時(shí)開(kāi)日光燈1h。由于在實(shí)際生產(chǎn)中規(guī)格相近的鰻鱺經(jīng)過(guò)一段時(shí)間養(yǎng)殖, 魚(yú)體重因個(gè)體生長(zhǎng)速度的不同而出現(xiàn)較大差異, 所以一般每隔2—3個(gè)月進(jìn)行一次規(guī)格大小的分群操作, 即將規(guī)格接近的鰻鱺挑選出來(lái)再置于同一池中養(yǎng)殖。在公司5號(hào)養(yǎng)殖車(chē)間的歐洲鰻鱺幼魚(yú)重新分群后, 挑選出規(guī)格和總重接近的9口水泥池用于本實(shí)驗(yàn)。正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后每日記錄攝食和死魚(yú)狀況(實(shí)驗(yàn)期間鰻鱺成活率平均為99.8%); 實(shí)驗(yàn)期內(nèi)控制水溫26—30℃, 溶解氧10—15 mg/L, pH 6.0—6.5, 氨氮濃度8.0—8.5 mg/L,亞硝酸鹽濃度0.15—0.22 mg/L; 鰻鱺其他飼養(yǎng)管理、水質(zhì)指標(biāo)等與同養(yǎng)殖車(chē)間內(nèi)其他養(yǎng)鰻池保持一致。

1.3 樣品采集與處理

在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 實(shí)驗(yàn)魚(yú)禁食24h, 每口池隨機(jī)撈取12尾魚(yú), 被無(wú)水乙醇配制成2 g/L丁香酚麻醉后再無(wú)菌解剖魚(yú)體后分離肝臟取樣, 其中3尾魚(yú)肝臟同一部位的肝小葉重要靜脈周?chē)? 再置于Bouin氏液中至少固定24h后再制作切片; 剩余肝臟樣品按照趙盼月[21]的方法采集及預(yù)處理樣品待測(cè)脂肪代謝酶水平或活性。6尾魚(yú)肝臟樣品冷凍保存待測(cè)常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分。3尾魚(yú)肝臟樣品放到無(wú)菌凍存管中液氮速凍, -80℃保存后將對(duì)照組和BA1組各6個(gè)肝臟樣品送至上海敏心生物科技有限公司進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析。在本課題組之前的研究中, BA1組與BA2組歐洲鰻鱺幼魚(yú)生長(zhǎng)、腸道消化酶活性和血清生化主要指標(biāo)等接近[5], 兩組肝臟脂肪代謝變化可能相似, 只將BA1組與對(duì)照組進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

肝臟組織切片制備及觀察肝臟組織樣品在4%甲醛固定液中固定24h后于75%的酒精中浸泡, 更換數(shù)次以去除樣品中苦味酸的黃色, 按照常規(guī)方法進(jìn)行脫水、透明、包埋、切片及HE染色,石蠟封片, 在100倍觀察肝臟組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)[21]。

肝臟常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分肝臟常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定使用常規(guī)方法, 其中采用凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白水平; 采用乙醚索氏抽提法測(cè)定粗脂肪水平; 采用常規(guī)馬弗爐高溫灼燒法測(cè)定灰分水平。

肝臟脂肪代謝酶采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定肝臟脂肪酸合成酶(Fatty acid synthetase, FAS)和乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl CoA carboxylase, ACC)水平, 肝脂酶(Hepatic lipase,HL)和脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipase, LPL)活性。具體操作步驟詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)。此外, 總脂酶(Total lipase, TL)活性為HL和LPL兩種酶活性之和。

肝臟脂質(zhì)組學(xué)分析肝臟樣本于冰上緩慢解凍后取50 mg樣本, 加入1.5 mL氯仿/甲醇(2/1,v/v)溶液, 加入0.5 mL純水, 10 μL內(nèi)標(biāo)[200 μg/mL,PC(11∶0/11∶0)], 渦旋1min; 3000 r/min離心10min,取盡有機(jī)相于干凈的試管中, 氮?dú)獯蹈?。?00 μL異丙醇/甲醇(1/1,v/v)復(fù)溶; 12000 r/min, 4℃離心10min后取上清于進(jìn)樣瓶待進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析。脂質(zhì)組學(xué)分析委托上海敏心生物科技有限公司采用LC- MS (Thermo, Ultimate 3000LC, Q Exactive) 儀器平臺(tái)進(jìn)行, 所用色譜柱及其分離條件、質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)、掃描模式、碰撞模式、數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析方法等均與Wang等[22]相同。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

歐洲鰻鱺幼魚(yú)體成分及肝臟脂肪代謝酶等指標(biāo)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件中One-way ANOVA法進(jìn)行單因素方差分析。P＜0.05表示差異顯著。脂質(zhì)組學(xué)分析使用Lipid Search軟件(Thermo Fisher Scientific, USA)、SIMCA-P 13.0 (Umetrics AB, Umea,Sweden)軟件及OPLS-DA模型鑒定差異顯著的代謝物(VIP＞1,t檢驗(yàn)P＜0.05), 用MetaboAnalyst4.0數(shù)據(jù)庫(kù)尋找差異脂質(zhì)代謝產(chǎn)物富集的代謝通路。

2 結(jié)果

2.1 歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟組織形態(tài)

如圖 1所示, 不同組歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟組織中脂肪空泡數(shù)量方面存在較大差異; 對(duì)照組肝臟中脂肪空泡較多, BA組肝臟中脂肪空泡數(shù)量均較少。

圖1 飼料中添加膽汁酸對(duì)歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響Fig. 1 Effects of dietary bile acid supplementation onliver histology of European eel juveniles

2.2 歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分

由表 1可知, 與對(duì)照組相比, 添加BA顯著增加了歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟粗蛋白水平(P＜0.05), 顯著降低粗脂肪水平(P＜0.05), BA組間粗脂肪和粗蛋白水平無(wú)顯著差異(P＞0.05); 不同組間灰分水平接近(P＞0.05)。

表1 飼料中添加膽汁酸對(duì)歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響Tab. 1 Effects of dietary bile acid supplementation on proximate composition in liver of European eel juveniles (wet sample; %)

2.3 歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟脂肪代謝酶

由表 2可知, 與對(duì)照組相比, BA組肝臟FAS水平顯著降低(P＜0.05), 僅BA1組ACC水平顯著降低(P＜0.05), LPL、HL和TL活性均顯著升高(P＜0.05);BA1組和BA2組間均無(wú)顯著差異(P＞0.05), BA2組ACC水平與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

表2 飼料中添加膽汁酸對(duì)歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟脂肪代謝酶活性或水平的影響Tab. 2 Effects of dietary bile acid supplementation on lipid metabolism enzymes activities or levels in liver of European eel juveniles

2.4 歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟脂質(zhì)組學(xué)分析

正交偏最小二乘法(OPLS－DA)判別分析融合了正交信號(hào)校正的干擾信息剔除能力及偏最小二乘判別的相關(guān)信息提取能力, 是脂質(zhì)代謝組學(xué)中最常用的建模方法。本實(shí)驗(yàn)OPLS-DA法建模得分圖見(jiàn)圖 2?？梢?jiàn), 本模型具有較好的穩(wěn)定性和預(yù)測(cè)性,不存在過(guò)擬合現(xiàn)象; 對(duì)照組和BA1組代謝組產(chǎn)物有較好分離效果, 兩組之間存在明顯差異。

圖2 正、負(fù)離子模式下對(duì)照組和BA1組OPLS-DA分析得分圖Fig. 2 The OPLS-DA scores plot of control group and BA 1 group under ESI+ and ESI- mode

如圖 3所示, 與對(duì)照組相比, BA1組歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟中差異脂質(zhì)代謝產(chǎn)物富集的代謝通路按照重要程度由大到小分別是甘油磷脂代謝、甘油酯代謝、亞油酸代謝、α-亞油酸代謝及花生四烯酸代謝。

圖3 BA1組與對(duì)照組相比歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟差異脂質(zhì)代謝途徑富集通路氣泡圖Fig. 3 The scatter plot of the enriched metabolic pathway for all matching significant metabolites in liver of European eel juveniles of BA1 group in comparison with control group.

由表 3可知, 兩組歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟中存在顯著差異的主要是甘油磷脂代謝和甘油酯代謝。從所匹配的脂質(zhì)產(chǎn)物變化情況可以看出BA1組這兩條通路的代謝增強(qiáng), 涉及的脂質(zhì)產(chǎn)物主要是磷脂酰膽堿和溶血磷脂酰膽堿。此外, 磷脂酰膽堿參與的亞油酸代謝、α-亞麻酸代謝、花生四烯酸代謝在兩組中也存在一定差異, 代謝強(qiáng)度也有增加的趨勢(shì)。

表3 BA1組與對(duì)照組相比歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟中差異代謝通路匹配的脂質(zhì)代謝產(chǎn)物Tab. 3 The most relevant metabolic pathways and corresponding differential lipid metabolites in the liver of European eel juveniles of the BA1 group in comparison with the control group

3 討論

3.1 肝臟脂肪蓄積

研究表明, BA除了參與食物中脂類(lèi)和脂溶性維生素溶解、消化和吸收之外, 還可通過(guò)激活FXR調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)生成和分泌、血漿脂質(zhì)清除及腸道膽固醇吸收來(lái)影響脂質(zhì)代謝及自身代謝[2,3]。

在我們以往研究中發(fā)現(xiàn), 在飼料中添加500 mg/kg BA可降低歐洲鰻鱺血清中甘油三酯、總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇水平[5]。在本實(shí)驗(yàn)中, BA組歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟切片的結(jié)果顯示脂肪空泡數(shù)量減少, 這與在黑鯛[8]、大口黑鱸[12,13]、羅非魚(yú)[17]、烏鱧(Channa argus)[23]、雜交石斑魚(yú)(Epinephelus fuscoguttatus♀× E. lanceolatus♂)[24]、鱖(Siniperca chuatsi)[25]和鯉(Cyprinus carpioL.)[26]飼料中添加BA后肝臟組織切片中脂肪空泡變化的結(jié)果一致;BA組歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟脂肪水平顯著降低, BA這種降低肝臟脂肪水平的效應(yīng)在大黃魚(yú)[7]、紅鰭東方鲀[9]、大口黑鱸[12]、羅非魚(yú)[17]、雜交石斑魚(yú)[24]、鱖[25]、鯉[26]、草魚(yú)[27,28]、大菱鲆[29]和軍曹魚(yú)(Rachycentron canadum)[30]也有類(lèi)似的報(bào)道, 說(shuō)明添加BA具有明顯降低魚(yú)類(lèi)肝臟脂肪蓄積的作用。研究表明, 添加BA未顯著提高羅非魚(yú)[17]、鱖[25]、草魚(yú)[27,28]和軍曹魚(yú)[30]肝臟中粗蛋白質(zhì)水平, 這與本研究結(jié)果有所差異, 但在低脂肪水平下添加BA可顯著提高大菱鲆肝臟脂肪水平[29], 具體原因有待查明。

3.2 肝臟脂肪代謝酶活性或水平

肝臟是魚(yú)體脂質(zhì)代謝最為活躍器官, 其相關(guān)代謝酶的變化可以反映出體內(nèi)脂肪代謝狀況。FAS是脂肪酸合成的關(guān)鍵酶之一, 催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A轉(zhuǎn)變成脂肪酸, 可被膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(Sterol regulatory element-binding protein, SREBP-1)調(diào)控長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成[7]。ACC是脂肪酸合成限速酶, 可催化乙酰輔酶A形成丙二酰輔酶A, 控制體內(nèi)脂肪合成代謝的強(qiáng)弱[31]。在本實(shí)驗(yàn)中, 飼料中添加BA后, 歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟中的FAS和ACC水平顯著降低, 表明脂肪的合成代謝受到抑制。LPL和HL是魚(yú)類(lèi)肝臟脂肪分解代謝過(guò)程中的兩個(gè)關(guān)鍵酶, TL為二者之和。LPL可脂解血漿脂蛋白-甘油三酯而釋放游離脂肪酸和單酸甘油酯,以供組織氧化供能和貯存, 間接決定從飼料中的脂類(lèi)以體脂形式貯備起來(lái)或作為能源底物消耗掉[14,23,32]。HL存在于肝內(nèi)皮細(xì)胞表面, 可促進(jìn)低密度脂蛋白膽固醇和乳糜微粒殘粒進(jìn)入肝細(xì)胞, 參與高密度脂蛋白膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)及其殘粒分解[22,23,32]。在本研究中, 歐洲鰻鱺幼魚(yú)飼料中添加BA后, LPL、HL和TL活性均顯著上升, 說(shuō)明肝臟脂肪的分解代謝增強(qiáng)。因此, 歐洲鰻鱺幼魚(yú)飼料中添加BA可通過(guò)抑制肝臟脂肪合成代謝, 促進(jìn)脂肪分解代謝來(lái)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝, 從而減少脂肪蓄積。此外, 與陸生動(dòng)物的研究結(jié)果類(lèi)似, 在魚(yú)類(lèi)中的研究也證實(shí)FXR的激活是BA調(diào)節(jié)脂質(zhì)生成的關(guān)鍵途徑。在生理?xiàng)l件下,參與脂肪生成的ACC酶和脂肪酸合成的FAS酶均受小異源二聚體伴侶受體(Small heterodimer partner, SHP)調(diào)控[33], 推測(cè)BA可通過(guò)激活魚(yú)類(lèi)肝臟中FXR可通過(guò)介導(dǎo) SHP來(lái)調(diào)控元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子-1C(SREBP-1C)的表達(dá)[9,14,34]; 還可能誘導(dǎo)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α高表達(dá), 上調(diào)脂肪酸β氧化相關(guān)酶, 促進(jìn)脂肪酸氧化[7,23,24], 從而減少脂質(zhì)沉積。

3.3 肝臟脂質(zhì)代謝產(chǎn)物

在本實(shí)驗(yàn)中, BA1組歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟中差異脂質(zhì)代謝產(chǎn)物富集的代謝通路主要是甘油磷脂代謝、甘油酯代謝、亞油酸代謝、α-亞油酸代謝及花生四烯酸代謝等, 涉及的主要差異脂質(zhì)代謝產(chǎn)物是磷脂酰膽堿和甘油三酯, 且呈上調(diào)趨勢(shì)。磷脂酰膽堿是魚(yú)體內(nèi)主要的甘油磷脂, 也是脂蛋白的主要成分[35,36]; 與蛋白質(zhì)、維生素并列的“第三營(yíng)養(yǎng)素”,能夠保持肝臟正常功能, 保護(hù)肝臟, 預(yù)防脂肪蓄積[37]。磷脂酰膽堿在磷脂酶A2的作用下水解為溶血磷脂酰膽堿, 同其他脂肪降解產(chǎn)物一起與膽汁鹽混合,最終被腸粘膜細(xì)胞吸收[38]。溶血磷脂酰膽堿還可作為磷脂酰膽堿的瞬時(shí)中間體, 發(fā)揮第二信使作用[39]。此外, 甘油磷脂代謝相關(guān)的差異代謝產(chǎn)物, 還是膽汁的重要成分之一[40]。本實(shí)驗(yàn)肝臟靶向脂質(zhì)代謝組學(xué)結(jié)果顯示, BA1組歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟磷脂酰膽堿和溶血磷脂酰膽堿水平上調(diào), 表明添加BA可增強(qiáng)使肝臟甘油磷脂代謝。甘油磷脂主要包括磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇氨和磷脂酰肌醇等, 是細(xì)胞膜主要的脂質(zhì)成分, 在細(xì)胞增殖、分化和凋亡中發(fā)揮關(guān)鍵作用[35,41]。研究表明, 添加外源膽汁酸未降低紅鰭東方鲀膽囊中大部分種類(lèi)膽汁酸水平[9], 也未降低歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟不同種類(lèi)膽汁酸水平[21]。因此, 肝臟中甘油磷脂類(lèi)物質(zhì)水平的升高, 可能用于膽汁酸的合成。

此外, 肝臟中磷脂酰膽堿水平上調(diào)還與亞油酸、α-亞麻酸和花生四烯酸代謝有關(guān)。亞油酸和α-亞麻酸作為鰻鱺等淡水魚(yú)類(lèi)主要的必需脂肪酸, 能夠維持生物膜的正常結(jié)構(gòu)和功能, 對(duì)膽固醇等類(lèi)脂代謝具有重要作用[42]; 花生四烯酸在機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝、白細(xì)胞功能調(diào)控和血小板激活中發(fā)揮著重要的作用[43], 還具有調(diào)節(jié)魚(yú)體抗氧化能力、機(jī)體炎癥反應(yīng)及免疫功能[44]。甘油三酯是甘油酯類(lèi)中最主要的中性脂質(zhì), 也是脂肪儲(chǔ)存能量的主要形式,還可作為甘油磷脂生成的底物[45,46]。在本實(shí)驗(yàn)中,肝臟甘油三酯水平上調(diào), 說(shuō)明肝臟中儲(chǔ)存的能量水平增加, 也可能用于與甘油磷脂代謝增強(qiáng)有關(guān)的代謝產(chǎn)物生成。在本實(shí)驗(yàn)中, 甘油磷脂代謝、甘油酯代謝、亞油酸代謝、α-亞油酸代謝及花生四烯酸代謝等分解代謝增強(qiáng)與BA組肝臟主要脂肪分解酶活性升高, 脂肪合成酶活性降低的結(jié)果相對(duì)應(yīng), 而生成的磷脂酰膽堿、甘油三酯等脂類(lèi)物質(zhì)含量上調(diào), 可能是對(duì)肝臟保護(hù)作用及維持高強(qiáng)度代謝水平的能量需要的一種適應(yīng)[46,47]。綜上, 在飼料中添加BA對(duì)歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟中脂質(zhì)代謝的影響可能主要通過(guò)調(diào)控甘油磷脂及甘油酯類(lèi), 詳細(xì)作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

目前, 還未見(jiàn)其他水產(chǎn)動(dòng)物的研究中使用靶向代謝組的方法, 分析BA對(duì)肝臟脂質(zhì)代謝通路的影響, 本實(shí)驗(yàn)中顯著變化的這些代謝通路仍需在轉(zhuǎn)錄水平、蛋白質(zhì)翻譯水平進(jìn)一步驗(yàn)證。此外, 本實(shí)驗(yàn)中僅對(duì)對(duì)照組和BA1組開(kāi)展了脂質(zhì)組學(xué)分析, 主要根據(jù)本課題組以往BA添加在歐洲鰻鱺幼魚(yú)中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[5], 推測(cè)2個(gè)BA添加水平組肝臟脂肪代謝的情況可能相近, 結(jié)合本實(shí)驗(yàn)中肝臟切片、肝組脂肪水平及脂肪代謝酶變化的結(jié)果可以證明原來(lái)的假設(shè)。而B(niǎo)A2組及更高BA添加水平對(duì)歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟脂質(zhì)代謝通路影響的情況及作用機(jī)制還有待于在將來(lái)的研究中查明。

4 結(jié)論

在飼料中添加膽汁酸可通過(guò)降低歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟中脂肪合酶水平和增加脂肪分解酶活性, 上調(diào)肝臟磷脂酰膽堿和溶血磷脂酰膽堿含量, 主要增強(qiáng)甘油磷脂代謝和甘油酯代謝, 從而減少脂肪蓄積。本研究率先利用脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析膽汁酸對(duì)歐洲鰻鱺幼魚(yú)肝臟脂肪代謝主要通路的影響, 研究結(jié)果可豐富膽汁酸調(diào)控魚(yú)類(lèi)脂肪代謝理論, 但顯著變化的相關(guān)脂質(zhì)代謝通路有待進(jìn)一步驗(yàn)證, 詳細(xì)的調(diào)控機(jī)制也需要在將來(lái)的研究查明。