孫艷秋 李 琪 劉鑒毅 , 莊 平 , 楊 俊 彭彪彪 秦 搏 趙 峰 , 馮廣朋 , 黃曉榮 ,

(1. 上海海洋大學水產(chǎn)科學國家級實驗教學示范中心, 上海 201306; 2. 中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所, 上海 200090;3. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海與長江口漁業(yè)資源環(huán)境科學觀測實驗站, 上海 200090; 4. 上海長江口漁業(yè)資源增殖和生態(tài)修復(fù)工程技術(shù)研究中心, 上海 200090)

點籃子魚(Siganus guttatus)隸屬于鱸形目(Perciformes), 籃子魚科(Siganidae), 籃子魚屬(Siganus),是一種廣鹽、暖水性魚類, 主要產(chǎn)于中國南海海域及印度-太平洋的熱帶、亞熱帶海域, 從珊瑚礁到河口水域均有分布[1]。點籃子魚是偏植食性的海水雜食性魚類, 喜食滸苔等藻類, 對環(huán)境的適應(yīng)能力較強。在進行網(wǎng)箱養(yǎng)殖時, 扮演清道夫的角色, 在清潔網(wǎng)箱、改善水質(zhì)等方面發(fā)揮著重要作用。除此以外, 點籃子魚的經(jīng)濟效益也十分可觀, 環(huán)境適應(yīng)性強、養(yǎng)殖技術(shù)較簡單、病害少、生長速度快。目前點籃子魚的經(jīng)濟效益和生態(tài)效益已經(jīng)引起人們的重視[2]。

滸苔(Enteromorpha prolifera)又稱青苔, 是一種常見的大型絲狀藻類, 可在短時間內(nèi)(1—2周)使池中藻絲縱生。滸苔及剛毛藻等絲狀藻類在我國沿海較為常見, 是濾食性貝類養(yǎng)殖池塘常見的敵害生物, 一旦暴發(fā), 不但影響?zhàn)B殖品種的生長, 還會引起生物疾病甚至危害養(yǎng)殖品種的生存, 造成經(jīng)濟損失[3]。我國北方正在嘗試利用點籃子魚攝食滸苔的特點, 將滸苔視作點籃子魚的天然餌料, 從而控制貝類養(yǎng)殖池塘中滸苔大面積暴發(fā)的問題, 進而改善養(yǎng)殖水體環(huán)境, 從而減少養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟損失。

目前, 對點籃子魚餌料條件的研究主要集中于人工餌料[4], 有研究將滸苔作為添加劑加入人工飼料中飼喂黃斑籃子魚[5,6], 但將滸苔作為天然餌料飼喂點籃子魚的研究較少, 僅趙峰等[2]和宋超等[7]研究了攝食滸苔對點籃子魚的肌肉營養(yǎng)成分、生長性能及消化酶活性的影響, 但是未見攝食滸苔對點籃子魚免疫能力及消化道菌群影響的相關(guān)報道。本研究以室內(nèi)養(yǎng)殖缸模擬貝類養(yǎng)殖池塘, 套養(yǎng)點籃子魚, 對人工飼料和滸苔兩種餌料條件下點籃子魚的生長、相關(guān)酶活性及消化道菌群進行比較,以期為點籃子魚的推廣養(yǎng)殖及后續(xù)生態(tài)養(yǎng)殖模式的構(gòu)建提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與設(shè)計

試驗所用的點籃子魚來自中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所海南瓊海研究中心, 空運至江蘇贛榆研究中心, 暫養(yǎng)2月后, 選取體質(zhì)較為健壯, 規(guī)格一致的幼魚用于試驗, 其初始體質(zhì)量為(2.02±0.13) g, 體長為(40.17±0.81) mm。

試驗?zāi)M小型貝類養(yǎng)殖池塘: 在文蛤養(yǎng)殖中套養(yǎng)點籃子魚。文蛤來自江蘇贛榆當?shù)刎愵愷B(yǎng)殖池塘, 試驗采用規(guī)格為1 m3的圓形養(yǎng)殖桶, 桶底部鋪設(shè)3—5 cm厚的砂土, 沉淀后引入海水, 文蛤的養(yǎng)殖密度為200粒/m2, 暫養(yǎng)1周后開始試驗。試驗設(shè)置2個餌料組, 分別為人工飼料組和滸苔組, 其中人工飼料組投喂“微粒子”配合飼料, 滸苔組投喂?jié)G苔鮮樣; 每組設(shè)置3個平行, 每個平行放入70尾魚。試驗共計70d, 每天7:00—9:00和15:00—17:00投喂, 觀察并記錄其攝食情況。試驗期間水溫17.2—29.4℃,鹽度28—30, pH 8.0±0.3, 溶氧5 mg/L以上。

1.2 樣品采集

餌料樣本: 分別取3份人工飼料及滸苔, 其中滸苔鮮樣經(jīng)0.22 μm孔徑濾膜抽濾, 采用滅菌的鑷子裝入無菌袋中, 立即放入-80℃超低溫冰箱中保存,用于微生物多樣性分析。

消化道樣本: 在試驗結(jié)束后, 點籃子魚幼魚饑餓處理24h, 每組從3個平行中隨機抽取樣品15 尾用丁香酚麻醉, 測量體質(zhì)量和體長, 在無菌環(huán)境下采用75%酒精擦拭體表, 隨即于冰盤上解剖, 將去除內(nèi)容物的胃、幽門盲囊和腸的前、中、后段分為兩份, 其中一份與肝臟用預(yù)冷的滅菌生理鹽水沖洗,液氮速凍后置于-80℃冰箱中保存, 用于消化酶及非特異性免疫酶活性分析; 另一份液氮速凍后置于-80℃冰箱中保存, 用于微生物多樣性分析。

1.3 生長及消化道酶活指標測定

生長指標測定: 為了跟蹤監(jiān)測點籃子魚生長指標, 分別在養(yǎng)殖開始時(8月21日)、試驗30d時(9月20日)和試驗結(jié)束時(10月30日)共測定3次, 獲得體質(zhì)量及體長等數(shù)據(jù)后, 計算增重率(WGR, %)、特定生長率 (SGR, %/d)和存活率(SR, %)。

WGR=(Wn-W0)/W0×100

SGR=[ln(Wn)-ln(W0)]/n×100

SR=Sn/S0×100

式中,Wn表示試驗進行n天時點籃子魚質(zhì)量;W0表示試驗初始質(zhì)量;Sn表示試驗n天成活尾數(shù);S0表示試驗初始投放尾數(shù)。

酶活指標測定: 將消化道各組織樣本冰上解凍后分別稱重, 按1∶9 (w/v)的比例加入適當?shù)念A(yù)冷勻漿液, 在冰浴條件下組織勻漿機勻漿, 在4℃條件下2000 r/min離心20min, 取上清液作粗酶提取液, 消化酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶)、非特異性免疫酶(酸性磷酸酶ACP、堿性磷酸酶AKP、超氧化物歧化酶SOD和溶菌酶LZM)的測定方法均由南京建成生物工程研究所試劑盒提供, 具體操作按照說明書嚴格執(zhí)行。蛋白濃度用考馬斯亮藍染色法測定, 酶標儀及紫外分光光度計測定吸光度值。

1.4 微生物測定

總DNA提取: 采用 QIAamp DNA Mini Kit(QIAGEN, 德國)試劑盒對組織樣本和餌料樣本提取微生物總DNA。

PCR擴增及高通量測序: 將通過各試劑盒提取的微生物總DNA進行PCR擴增, 采用引物338F (5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′)和 806R (5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)對樣品序列為16S rDNA V3—V4 高變區(qū)序列進行擴增。PCR反應(yīng)體系25 μL: 5×反應(yīng)緩沖液5 μL、5×高GC緩沖液5 μL、Q5高保真DNA聚合酶0.25 μL、dNTP(10 mmol/L)2.0 μL、正、反引物各 1.0 μL、DNA模板1.0 μL,補雙蒸水至25 μL。PCR反應(yīng)條件: 98℃預(yù)變性30s;之后進入擴增循環(huán)98℃變性30s, 50℃退火30s,72℃延伸30s, 重復(fù)25—27個循環(huán); 最后72℃延伸5min。PCR反應(yīng)在PCR反應(yīng)儀9700(Applied Biosystems?GeneAmp?, CA, 美國)上進行。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測合格后, 構(gòu)建文庫, 通過Illumina MiSeq平臺對群落DNA片段進行雙端(Paired-end)測序。

通過高通量測序得到的下機數(shù)據(jù), 運用QIIME2(2019.4)軟件切除序列的引物片段, 棄去未匹配引物的序列, 并進行質(zhì)控、去噪、拼接和去嵌合體。使用R語言腳本, 對全部樣本中所包含的高質(zhì)量序列的長度分布進行統(tǒng)計, 處理后獲得高質(zhì)量序列;將相似度≥97%的序列歸為1個可操作分類單元(Operational taxonomic units, OTU), 選取每個OTU的代表性序列, 并進行物種分類學注釋。對OTUs代表序列進行物種組成、Alpha多樣性和Beta多樣性分析, 在各分類水平上進行個體和群體水平的菌群豐度分析。最后用 R 語言進行 PCA 統(tǒng)計分析和作圖。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用單因素方差分析(One-way ANOVA)方法對結(jié)果數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析, 利用Duncan’s檢驗對同一攝食下點籃子魚幼魚不同消化道組織間的差異性進行多重比較, 采用T-test檢驗對不同餌料組點籃子魚幼魚相同消化道組織間進行差異性分析, 顯著性水平為P＜0.05。所有數(shù)值均采用平均值±標準誤(mean±SE) 表示。

2 結(jié)果

2.1 兩種餌料條件下生長指標比較

人工飼料與滸苔對點籃子魚幼魚生長的影響見表 1。結(jié)果顯示, 養(yǎng)殖期間兩組點籃子魚的存活率均為100%。人工飼料組點籃子魚幼魚的增重率、特定生長率均顯著高于滸苔組(P＜0.05)。人工飼料與滸苔均可滿足點籃子魚幼魚生長所需的基本營養(yǎng)需求。

表1 兩組點籃子魚幼魚的生長性能差異Tab. 1 Differences in growth performance of juvenile Siganus guttatus between the two groups

2.2 兩種餌料條件下消化酶活性特征比較

如圖 1所示, 兩組胃蛋白酶、胰蛋白酶和淀粉酶活性均在肝臟中最低, 顯著低于其他各部位的3種酶活力(P＜0.05)。兩餌料組胃蛋白酶活性均在腸道中最高, 且人工飼料組胃蛋白酶活性隨著腸道走向逐漸降低; 兩餌料組相比, 滸苔組點籃子魚幼魚胃及中腸部位的胃蛋白酶活力均顯著高于人工飼料組(圖 1a)。滸苔組胰蛋白酶活性隨著消化道走向依次升高, 在腸中活性最高。中腸部位的胰蛋白酶活性滸苔組顯著高于人工飼料組 (P＜0.05; 圖 1b)。滸苔組點籃子魚幼魚后腸淀粉酶活性最高, 前腸次之, 二者顯著高于消化道其他部位(P＜0.05)。滸苔組前腸、后腸淀粉酶活性均顯著高于人工飼料組(P＜0.05)。由圖 1d可見人工飼料組點籃子魚幼魚各部位脂肪酶活性均高于滸苔組。人工飼料組脂肪酶活性在胃中最高, 肝臟次之, 腸中脂肪酶活性隨著腸道的走向依次增高。滸苔組脂肪酶活性也隨腸道走向依次升高, 但中、后腸無顯著性差異(P＞0.05); 滸苔組脂肪酶活性肝臟中最高, 胃次之,兩者之間差異不顯著 (P＞0.05)。

圖1 兩組點籃子幼魚不同部位消化酶活性Fig. 1 Digestive enzyme activities in different parts of juvenile Siganus guttatus in two groups

2.3 兩種餌料條件下免疫酶活性特征比較

如圖 2a所示, 點籃子魚幼魚消化道中ACP主要分布在腸中, 胃部ACP活性最低, 顯著低于其他消化器官(P＜0.05)。兩餌料組相比, 滸苔組點籃子魚消化道中ACP活性均略高于人工飼料組, 肝臟中ACP活性顯著高于人工飼料組(P＜0.05)。點籃子魚幼魚堿性磷酸酶(AKP)活性主要分布于腸道, 滸苔組各部位AKP酶活性均顯著高于人工飼料組(P＜0.05), 滸苔組中腸AKP酶活性最高, 后腸次之。人工飼料組點籃子魚幼魚LZM酶活力在腸道中最高,且隨腸道走向依次降低(圖 2c)。滸苔組點籃子魚幼魚LZM酶分布與人工飼料組相似, 前腸中最高,中腸、后腸次之, 但三者之間差異性不顯著(P＞0.05);兩餌料組相比, 人工飼料組點籃子魚幼魚肝臟LZM酶活力顯著高于滸苔組, 而后腸LZM酶活力則顯著低于滸苔組(P＜0.05), 其他部位均無顯著性差異。滸苔組點籃子魚幼魚各部位SOD酶活性均高于人工飼料組, 其中滸苔組中、后腸超氧化物歧化酶(SOD酶)活性最高(圖 2d)。

圖2 兩組點籃子幼魚不同部位非特異性免疫酶活性Fig. 2 Non-specific immune enzyme activities in different parts of juvenile Siganus guttatus in two groups

2.4 兩種餌料條件下消化道菌群結(jié)構(gòu)特征

本試驗共采集24個生物樣本, 經(jīng)高通量測序平均每個樣本獲得128131條序列, 對測序數(shù)據(jù)過濾、去噪、拼接和去除嵌合體后平均每個樣本有高質(zhì)量序列100964條, 經(jīng)歸類操作得到13192個OTUs,平均序列長度為422 bp。

Alpha多樣指數(shù)分析稀釋曲線顯示了樣品中所測得OTU數(shù)量隨著樣品序列的增多而變化的情況。如圖 3所示, 隨著橫坐標序列的增加, 縱坐標趨于一個穩(wěn)定值, 表明測序數(shù)據(jù)量合理可靠。通過計算在同一樣本中檢測到的隨機選擇擴增子序列的覆蓋率(Goodscoverage指數(shù))來評估抽樣的完整性,Goodscoverage指數(shù)反應(yīng)測序深度, 指數(shù)越接近于1,說明測序覆蓋深度越深, 本研究中各樣品覆蓋指數(shù)均為0.99, 覆蓋率水平表明該研究測序幾乎覆蓋樣品中所有物種。

圖3 兩組樣品物種豐度稀釋曲線Fig. 3 Species abundance dilution curves of samples in two groups

如表 2所示, Chao 1指數(shù)表征物種豐富度, Shannon表征多樣性, 兩指數(shù)越大, 樣品物種越豐富。兩餌料組均為后腸菌群的多樣性指數(shù)最高, 與飼料組相比, 滸苔組除后腸外其他部位菌群相對豐度均高于飼料組, 消化道菌群整體多樣性較飼料組高。

表2 兩組點籃子魚幼魚消化道菌群多樣性Tab. 2 Diversity of the digestive tract flora of juvenile Siganus guttatus in two groups

Beta 多樣指數(shù)分析將所有樣本中相對豐度小于1%的物種歸為其他。圖 1所示為各樣本在門分類水平的細菌群落組成圖, 組內(nèi)取均值。兩餌料組點籃子魚幼魚消化道各部位變形菌門(Proteobacteria)的相對豐度最高, 占絕對優(yōu)勢, 然后依次是厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)。與人工飼料及飼料組點籃子魚腸道相比, 滸苔及滸苔組點籃子魚幼魚腸道未發(fā)現(xiàn)梭桿菌門。相較于滸苔, 飼料表面的優(yōu)勢菌門增加了疣微菌門(Verrucomicrobia)、放線菌門(Actinobacteria); 而飼料組與滸苔組相比, 消化道疣微菌門和放線菌門的相對豐度也有所增加(圖 4)。

圖4 點籃子魚幼魚消化道各部位優(yōu)勢菌門組成Fig. 4 The composition of the dominant bacteria phyla in each part of the digestive tract of the juvenile Siganus guttatus

腸道菌群相似程度用物種豐度聚類熱圖展示(圖 5), 人工飼料表面的嗜冷桿菌屬(Psychrobacter)相對豐度最高, 滸苔表面的氫噬菌屬(Hydrogenophaga)相對豐度最高。相對于人工飼料組消化道菌群, 滸苔組消化道菌群表現(xiàn)出較大差異。

圖5 屬水平物種豐度聚類熱圖Fig. 5 Clustering heat map of species abundance at genus level

3 討論

3.1 兩種餌料條件對點籃子魚生長性能的影響

有研究表明, 餌料不同會對魚類的生長和存活產(chǎn)生影響[7,8]。試驗解剖發(fā)現(xiàn), 與滸苔組相比, 飼料組點籃子魚幼魚腹部和腸壁上附有更多的脂肪, 這與人工飼料含有的粗脂肪含量更高有關(guān)。點籃子魚是以植食性為主的雜食性魚類, 對食物的要求不嚴格, 對外界營養(yǎng)物質(zhì)變化的適應(yīng)能力較強, 當飼喂不同類型的餌料時均能正常生長和存活[4], 這與徐樹德等[9]對黃斑籃子魚(Siganus canaliculatus)的研究結(jié)果類似。宋超等[7]認為, 人工飼料粗蛋白和粗脂肪組成更符合點籃子魚的營養(yǎng)需求, 故人工飼料組幼魚的生長快于滸苔組。在本研究中, 人工飼料和滸苔組幼魚成活率均為100%, 但增重率分別為(132.18±1.03)%和(77.23±0.29)%, 特定生長率分別為(1.20±0.04)%和(0.82±0.02)%, 表明人工飼料與滸苔的營養(yǎng)基本能夠滿足點籃子魚幼魚的生長和生存需求, 另一方面也證實了點籃子魚對這兩種餌料具有較好的適應(yīng)能力, 該結(jié)果與宋超等[7]的研究結(jié)果相同, 與郭同旺等[10]對中華倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)的研究較為一致。

3.2 兩種餌料條件對點籃子魚消化和免疫能力的影響

消化酶活性與魚類的生長密切相關(guān), 它能夠直接反應(yīng)魚類的營養(yǎng)狀況, 是魚類消化能力的一個重要指標[11,12]。而消化酶活性受魚種類、魚體生理階段、運動情況[13]、生存環(huán)境[14]和餌料條件[7,15]等多種因素的影響。本試驗所用點籃子魚選自同一批幼魚, 其生長環(huán)境及管理方法基本相同, 僅餌料存在差異。兩餌料組點籃子魚幼魚胃蛋白酶活性均是腸中活性最高, 滸苔組胰蛋白酶活性為腸中較高, 而飼料組胰蛋白酶活性各部位均較高, 其中飼料組胃及幽門盲囊的胰蛋白酶活性顯著高于滸苔組; 兩餌料組消化道各部位均檢測到了淀粉酶活性, 且滸苔組幼魚各部位淀粉酶活性均高于飼料組,但僅胃、腸部位淀粉酶活性有顯著性差異; 兩餌料組幽門盲囊和前腸脂肪酶活性均表現(xiàn)極低, 幼魚消化道各部位飼料組脂肪酶活性均高于滸苔組。該結(jié)果表明, 對點籃子魚幼魚蛋白質(zhì)和淀粉消化起重要作用的是胃、腸和幽門盲囊, 對脂肪消化起重要作用的是胃、腸和肝臟。飼料組幼魚對脂肪的消化能力高于滸苔組, 但對淀粉的消化能力低于滸苔組。這與李瑾等[16]對中華鱘(Acipenser sinensis)脂肪酶和淀粉酶的分布結(jié)果較為相似; 但與宋超等[7]對網(wǎng)箱養(yǎng)殖點籃子魚幼魚的消化道酶活研究中脂肪酶的分布不同, 宋超等[7]發(fā)現(xiàn)對脂肪消化起重要作用的是腸、幽門盲囊和肝臟。滸苔粗纖維及碳水化合物含量高于人工飼料, 有研究表明魚類消化酶活性大小及分布會根據(jù)飼料中蛋白、脂肪及其他營養(yǎng)物質(zhì)含量水平進行適應(yīng)性調(diào)整, 飼料中蛋白及脂肪水平適當升高時, 魚類蛋白酶及脂肪酶活性會隨之適當升高, 以充分消化、吸收該類營養(yǎng)物質(zhì)[17]。同理, 滸苔的碳水化合物含量較高, 而脂肪相對缺乏, 因此滸苔組幼魚對脂肪的消化能力小于飼料組,而對淀粉的消化能力大于飼料組; 但對蛋白的消化能力未發(fā)現(xiàn)相似的規(guī)律, 這可能與此次實驗所用人工飼料中的蛋白組成與滸苔中蛋白含量差值較小相關(guān)。

魚類屬于進化程度較低的變溫動物, 非特異性免疫系統(tǒng)是抵抗疾病感染的最主要手段[18]。相關(guān)報道指出, 攝食條件可在一定程度影響魚類的免疫酶活力[19,20]。堿性磷酸酶(AKP) 及酸性磷酸酶(ACP)都是生物體內(nèi)重要的兩種代謝調(diào)控酶[8,21], 在免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用, 同時與水產(chǎn)動物機體的生長密切相關(guān), 也與魚體營養(yǎng)的吸收、利用有重要關(guān)聯(lián)[22,23]。有研究表明, 在體外條件下, 滸苔多糖能夠明顯地增強免疫反應(yīng)[24]。在本研究中, 滸苔組腸道AKP和ACP 活性均略高于人工飼料組, 這可能與滸苔鮮樣中有更為豐富的微量元素及滸苔多糖有關(guān)。整體來看兩組各部位ACP酶活性高于AKP活性, 這可能與點籃子魚自身特點及發(fā)育階段有關(guān)。LZM酶是魚類非特異性免疫系統(tǒng)中重要的組成部分[25],與機體免疫功能密切相關(guān)。兩試驗組各部位均有較高的LZM活性, 但飼料組與滸苔組相同部位LZM活性無顯著性差異。SOD為清除氧自由基的重要抗防御性功能酶, 增強吞噬細胞的吞噬能力、促進免疫球蛋白的產(chǎn)生和保護細胞免受氧化損傷[26], 可作為衡量魚類對外界環(huán)境適宜程度的重要生理指標。滸苔組各部位SOD酶活性均高于飼料組, 中、后腸SOD酶活性最高, 表明攝食滸苔后點籃子魚幼魚腸道SOD酶活性有所升高, 有益于促進點籃子魚產(chǎn)生免疫球蛋白, 提升免疫力。周勝強等[5]在飼料中添加滸苔對黃斑藍子魚進行飼喂, 發(fā)現(xiàn)魚體抗氧化能力有所提高, 結(jié)合本研究結(jié)果, 可進一步研究在人工飼料中添加滸苔飼喂點籃子魚, 以實現(xiàn)生長快、免疫力強的目標, 并研究人工飼料與滸苔的最佳配比, 為點籃子魚餌料的研究提供數(shù)據(jù)支撐。

3.3 兩種餌料條件對點籃子魚消化道菌群影響

腸道菌群能夠通過腸-腦神經(jīng)影響生物體的消化吸收、生長代謝和免疫調(diào)節(jié)等機能[27], 微生物多樣性降低表明群落功能穩(wěn)定性變差, 生物患病風險增大[28]。在本研究中, 兩種餌料條件下, 菌群多樣性隨消化道延伸呈上升趨勢, 該結(jié)果與姜燕等[29]對大黃魚的研究相反。除后腸外, 滸苔組消化道其他部位Chao1指數(shù)、Shannon指數(shù)均高于人工飼料組(P＜0.05), 物種豐度聚類熱圖也發(fā)現(xiàn), 相對于人工飼料組, 滸苔組消化道菌群表現(xiàn)出較大差異, 該結(jié)果表明滸苔組消化道菌群多樣性整體較高, 比人工飼料組具有更高的微生物群落功能穩(wěn)定性。Li等[15]發(fā)現(xiàn), 池塘養(yǎng)殖中發(fā)病塘養(yǎng)殖對象腸道微生物多樣性降低, 進一步證明了微生物的多樣性在養(yǎng)殖中的重要作用。趙柳蘭等[30]在對下建鯉(Cyprinus carpio var. jian)的腸道菌群研究中發(fā)現(xiàn), 養(yǎng)殖模式的不同也會對魚類腸道微生物產(chǎn)生影響, 也有研究表明魚類腸道微生物在纖維素物質(zhì)的消化和營養(yǎng)物質(zhì)的吸收代謝方面發(fā)揮著重要作用[31,32],許多研究發(fā)現(xiàn)水體環(huán)境[33,34]和餌料[35—37]可影響魚類腸道菌群組成。

對飼料和滸苔表面菌群的組成分析發(fā)現(xiàn), 飼料及滸苔的共有優(yōu)勢菌門變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門, 飼料表面增加了疣微菌門和放線菌門。對飼料組和滸苔組點籃子魚幼魚消化道菌群的組成分析發(fā)現(xiàn)了相同的差異: 兩組消化道共有優(yōu)勢菌門也為變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門, 飼料組消化道增加了疣微菌門和放線菌門。這一發(fā)現(xiàn)表明, 點籃子魚幼魚的消化道菌群優(yōu)勢菌門與餌料表面的菌群有關(guān)。張志標等[38]通過PCR-DGGE指紋圖譜分析發(fā)現(xiàn), 籃子魚腸道內(nèi)的微生物多樣性與滸苔表面的微生物多樣性聚為一類, 相似性高達60%, 進一步佐證了本研究結(jié)果。也有研究表明, 金頭鯛(Sparus aurata)的腸道菌群結(jié)構(gòu)受植物蛋白的影響,但其多樣性未受影響[39], 本研究中攝食滸苔的點籃子魚腸道菌群的結(jié)構(gòu)變化是否與滸苔本身的植物蛋白有關(guān)還有待進一步研究。許多研究表明, 疣微菌門和放線菌門都屬于海洋益生菌, 其中放線菌與抗生素的生產(chǎn)有關(guān)[40,41], 疣微菌門可參與異化硫循環(huán)、無機氮循環(huán)等, 具有重要的生態(tài)價值[42]。滸苔組后腸中也檢測到了疣微菌門(2.47%)和放線菌門(1.75%)的存在, 但其豐度低于飼料組后腸中的相對豐度; 且滸苔組幼魚消化道其他部位未檢測到疣微菌門的存在, 可能與水體環(huán)境或自身有關(guān), 其中原因還有待進一步研究。

4 結(jié)論

點籃子魚對外界營養(yǎng)物質(zhì)變化的適應(yīng)能力較強, 飼喂不同餌料也能正常生長和存活, 攝食滸苔的點籃子魚較攝食人工飼料的生長緩慢, 但其對滸苔中的淀粉消化能力增強, 滸苔的營養(yǎng)足夠滿足點籃子魚的生長需求, 且攝食滸苔的點籃子魚幼魚免疫能力也更強。點籃子魚幼魚的腸道菌群受食性影響, 攝食滸苔的幼魚消化道菌群多樣性整體較高,比攝食人工飼料的幼魚具有更高的微生物群落功能穩(wěn)定性。點籃子魚攝食滸苔這一習性生態(tài)價值顯著, 可以進一步研究在滸苔泛濫的貝類養(yǎng)殖池塘中套養(yǎng)一定密度的點籃子魚, 從而減少養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟損失; 同時深入研究點籃子魚-滸苔-貝類的生態(tài)養(yǎng)殖模式并進行推廣, 經(jīng)濟價值顯著。