錢(qián)胡月，宋立平，林妮妮，周艷梅

(北京新領(lǐng)先醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，北京 100094)

鹽酸氨溴索是一種祛痰藥，我國(guó)目前已上市的有膠囊劑、溶液劑、片劑、糖漿劑、顆粒劑、注射劑等，其中注射劑給藥后因可直接接觸人體組織或進(jìn)入血液系統(tǒng)，被認(rèn)為是安全風(fēng)險(xiǎn)程度較高的品種[1]。對(duì)該劑型由包裝系統(tǒng)引入至引發(fā)安全性風(fēng)險(xiǎn)的浸出物也應(yīng)進(jìn)行重點(diǎn)關(guān)注。NMPA發(fā)布的《已上市化學(xué)仿制藥(注射劑)一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求(征求意見(jiàn)稿)》規(guī)定，注射劑玻璃包裝不建議使用低硼硅玻璃和鈉鈣玻璃[2]?；谏鲜鲋笇?dǎo)性文件的要求，國(guó)內(nèi)鹽酸氨溴索注射液一致性評(píng)價(jià)研究階段已將包裝容器調(diào)整為中硼硅玻璃安瓿。中硼硅玻璃中通常含有硅、硼、鋁、鈣、鎂、鐵、鈦、鋇、鋅、鈷等多種金屬元素，而鹽酸氨溴索注射液為偏酸性藥物(pH值為3.5～5.5)，元素雜質(zhì)在酸性條件下浸出風(fēng)險(xiǎn)較高，因此灌裝后及存儲(chǔ)過(guò)程中有害元素雜質(zhì)可能會(huì)遷移至藥液中，甚至產(chǎn)生玻璃脫片，影響藥品的安全性。

《人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)Q3D元素雜質(zhì)指導(dǎo)原則》[3]列出了34種元素雜質(zhì)及其分類(lèi)及不同給藥途徑下需要研究的元素雜質(zhì)及其限度。第43版《美國(guó)藥典》<232>[4]中規(guī)定的元素雜質(zhì)種類(lèi)和限度基本與ICH Q3D一致?！痘瘜W(xué)藥品注射劑與藥用玻璃包裝容器相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》明確要求，在相容性研究中的相互作用研究部分應(yīng)全面考慮包材成分的遷移，包括全生命周期的評(píng)估，明確給出了玻璃包裝容器研究需重點(diǎn)關(guān)注的10種元素雜質(zhì)(鎘、銻、鋇、砷、鉛、鈷、鐵、鋅、鉻、鋰)及其限度，同時(shí)強(qiáng)調(diào)需對(duì)藥品中的硅、硼、鋁3種可表征玻璃被侵蝕或產(chǎn)生脫片的元素雜質(zhì)進(jìn)行研究[5]。

電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)屬于痕量分析方法，檢測(cè)濃度可低至ng·kg-1級(jí)，具有線(xiàn)性范圍寬、抗干擾能力強(qiáng)、靈敏度和準(zhǔn)確度高、可同時(shí)測(cè)定多種元素雜質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于痕量元素雜質(zhì)含量的分析檢測(cè)中[6]。近年來(lái)，ICP-MS法測(cè)定藥品原料及其制劑中元素雜質(zhì)含量的研究屢有報(bào)道[7-14]。根據(jù)中硼硅玻璃安瓿的成分特點(diǎn)及前期對(duì)鹽酸氨溴索注射液的定性?huà)呙杞Y(jié)果，擬采用ICP-MS法對(duì)鹽酸氨溴索注射液中的4種1類(lèi)元素(鎘、鉛、砷、汞)、3種2類(lèi)元素(鈷、釩、鎳)、3種3類(lèi)元素(鋰、銻、銅)及14種其他元素(硼、鎂、鋁、硅、鉀、鈣、鈦、鉻、錳、鐵、鋅、硒、鉬、鋇)共24種元素雜質(zhì)進(jìn)行研究，通過(guò)加速穩(wěn)定性研究試驗(yàn)，考察該注射液與中硼硅玻璃安瓿瓶包裝系統(tǒng)的相容性，旨在為產(chǎn)品質(zhì)量控制和包裝系統(tǒng)相容性研究提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(Thermo iCAP RQ，賽默飛世爾科技有限公司生產(chǎn))；十萬(wàn)分之一電子天平(TB-215D型，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn))；微波消解儀(金牛4010型，屹堯科技有限公司生產(chǎn))；超純水機(jī)(CSR-1-20(Ⅱ)型，北京愛(ài)思泰克科技開(kāi)發(fā)責(zé)任有限公司生產(chǎn))；藥品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)箱(LHH-150SD型，重慶永生公司生產(chǎn))。

1.2 樣品

鹽酸氨溴索注射液(規(guī)格2 mL∶15 mg，北京新領(lǐng)先醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為1910001、1910002、1910003)。

1.3 試劑

氬氣(純度99.999%)；氦氣(純度99.999%)；硝酸(質(zhì)量濃度為65%～68%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20190528)；24種(鎘、鉛、砷、汞、鈷、釩、鎳、鋰、銻、銅、硼、鎂、鋁、硅、鉀、鈣、鈦、鉻、錳、鐵、鋅、硒、鉬、鋇)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心生產(chǎn)，批號(hào)分別為196052-5、197018-7、198007-5、197019-4、198010-1、196009-3、198039-2、197030-3、199004-1、198106、199107、197025-2、198032-3、197023、198037-2、98036-2、198034-4、198009-4、197004-3、197011-4、199013-4、197008-8、19A002、201019)；Sc、Ge、In、Bi單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心生產(chǎn)，批號(hào)分別為196043、198003、196036-1、197031-1)；超純水(電阻率為18.2 MΩ·cm)。

2 方法與結(jié)果

2.1 元素雜質(zhì)安全閾值

鹽酸氨溴索注射液藥品說(shuō)明書(shū)中規(guī)定的最大用量為6支/d，但特殊使用說(shuō)明中給出了用于早產(chǎn)兒及新生兒嬰兒呼吸窘迫癥的治療(30 mg/kg)。為了充分保障用藥安全，按照1周歲嬰兒體重11.5 kg進(jìn)行用量計(jì)算，確定最終的最大用量為23支/d。分析評(píng)價(jià)閾值(AET)=每日允許暴露量(PDE)÷每日最大用量，計(jì)算24種元素雜質(zhì)的AET，詳見(jiàn)表1。

2.2 試驗(yàn)條件

射頻功率為1 550 W；載氣為氬氣，流量為1.0 L/min；碰撞氣和輔助氣均為氦氣，流量分別為4.5 L/min和0.8 L/min；等離子氣流量為14.0 L/min；泵速為40 r/min；測(cè)量模式為碰撞模式；數(shù)據(jù)采樣模式為跳峰模式；內(nèi)標(biāo)溶液為在線(xiàn)加入；重復(fù)測(cè)定次數(shù)為3次。

2.3 溶液制備

2.3.1 供試品溶液

取3批樣品分別于加速條件(溫度40℃，相對(duì)濕度75%)下放置3個(gè)月、6個(gè)月，得到加速3個(gè)月和6個(gè)月樣品。量取各條件下樣品0.1 mL，置于10 mL量瓶中，用2%硝酸溶液稀釋至刻度，搖勻即得，2%硝酸溶液為空白溶液。

2.3.2 內(nèi)標(biāo)溶液制備

精密量取Sc、Ge、In、Bi單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2%硝酸溶液稀釋制成濃度為10 ng/mL的溶液。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液制備

分別精密量取24種單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2%硝酸溶液稀釋制成0%、5%、10%、50%、100%、500%、1 000%限度濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液，各元素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液濃度見(jiàn)表1。

表1 元素雜質(zhì)限度和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液濃度Tab.1 Element impurity limit and standard curve solution concentration

2.4 內(nèi)標(biāo)選擇

選擇45Sc、73Ge、115In、209Bi為內(nèi)標(biāo)元素，其中7Li、11B、24Mg、27Al、29Si、39K、44Ca、48Ti、52Cr、55Mn、57Fe以45Sc為內(nèi)標(biāo)，59Co以45Sc和73Ge質(zhì)量數(shù)的均值為內(nèi)標(biāo)，60Ni、63Cu、66Zn、75As、77Se以73Ge為內(nèi)標(biāo)，95Mo、111Cd、121Sb、137Ba以115In為內(nèi)標(biāo)，202Hg和208Pb以209Bi為內(nèi)標(biāo)。

2.5 方法學(xué)驗(yàn)證

2.5.1 線(xiàn)性和范圍及靈敏度

以各元素對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)響應(yīng)值比率(各元素與內(nèi)部元素響應(yīng)值比值)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算得到各元素的線(xiàn)性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。取2%硝酸溶液連續(xù)進(jìn)樣11次，以連續(xù)測(cè)定空白響應(yīng)值的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以斜率，所對(duì)應(yīng)的各元素濃度作為檢測(cè)限。以空白響應(yīng)值的10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以斜率，所對(duì)應(yīng)的目標(biāo)元素濃度作為定量限。由表2結(jié)果表明，24種元素相關(guān)系數(shù)均大于0.999，線(xiàn)性關(guān)系良好，定量限小于10%限度濃度，檢測(cè)方法靈敏度良好。

2.5.2 儀器精密度及重復(fù)性

按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液制備方法制備儀器精密度溶液，重復(fù)測(cè)定6次。精密量取供試品6份，按供試品溶液制備方法制備重復(fù)性溶液。由于供試品中部分元素含量較低，在每份供試品溶液中按照各元素雜質(zhì)100% AET進(jìn)行加標(biāo)配制。由表3結(jié)果可見(jiàn)，儀器精密度試驗(yàn)中各元素的RSD值為0.72%～2.64%，重復(fù)性試驗(yàn)中各元素的RSD值為1.12%～3.84%。結(jié)果表明，24種元素雜質(zhì)檢測(cè)方法儀器精密度和重復(fù)性均良好。

2.5.3 準(zhǔn)確度

精密量取供試品9份，按供試品溶液制備方法，按50%、100%、150% AET加入各元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為低、中、高3個(gè)濃度的加標(biāo)供試品溶液，每個(gè)濃度制備3個(gè)平行樣品，進(jìn)行加樣回收試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3，各元素的回收率為92.6%～105.3%，RSD值為0.87%～4.10%。結(jié)果表明，24種元素雜質(zhì)檢測(cè)方法準(zhǔn)確度良好。

表2 24種元素的線(xiàn)性關(guān)系和靈敏度結(jié)果Tab.2 Linear relationship of 24 elements and sensitivity results

表3 24種元素的儀器精密度、重復(fù)性和準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Test results of instrument precision, repeatability and accuracy of 24 elements

續(xù)表3

2.5.4 樣品中元素雜質(zhì)的含量測(cè)定

取3批0個(gè)月和在加速條件下放置3個(gè)月和6個(gè)月的樣品，按溶液制備及測(cè)定方法配制并測(cè)定樣品。由表4可知，各樣品中24種元素雜質(zhì)檢出含量均符合AET限度要求，其中，僅Si、Al、B和Ba 4種元素有明顯增長(zhǎng)趨勢(shì)。由表4和表5可知，放置3個(gè)月和6個(gè)月的加速樣品中的Si濃度、Si/Al和Si/B濃度比值較放置0個(gè)月的樣品均有較大變化。

表4 鹽酸氨溴索注射液0月及加速樣品中24種元素雜質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果Tab.4 Determination results of 24 element impurities of ambroxol hydrochloride injection in 0 month and accelerated samples

表5 鹽酸氨溴索注射液加速樣品硅/鋁、硅/硼濃度比值測(cè)定結(jié)果Tab.5 Determination results of ambroxol hydrochloride injection accelerated silicon/aluminum, silicon/boron concentration ratio

3 討論

建立了同時(shí)測(cè)定鹽酸氨溴索注射液中24種元素雜質(zhì)含量的ICP-MS法，以45Sc、73Ge、115In、209Bi為內(nèi)標(biāo)，可有效避免基質(zhì)效應(yīng)、電離效應(yīng)和儀器漂移等因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。方法學(xué)考察結(jié)果顯示，各元素雜質(zhì)線(xiàn)性關(guān)系良好，重復(fù)性、儀器精密度、回收率均符合2020年版《中國(guó)藥典四部》通則[15]要求。

通過(guò)對(duì)3批鹽酸氨溴索注射液放置0、3、6個(gè)月的樣品進(jìn)行分析可知，僅Si、Al、B和Ba 4種元素有明顯增長(zhǎng)趨勢(shì)，結(jié)合材質(zhì)信息推測(cè)，B、Al、Si、Ba等元素雜質(zhì)的來(lái)源可能為存儲(chǔ)過(guò)程中從中硼硅玻璃安瓿遷移至藥液中。B、Al、Si、Ba 4種元素雜質(zhì)按照ICH Q3D中分類(lèi)要求均歸屬為其他類(lèi)，均為低毒性物質(zhì)，0、3、6個(gè)月的樣品檢出量均小于A(yíng)ET，說(shuō)明本品安全性良好。

放置3個(gè)月和6個(gè)月的加速樣品中的Si濃度、Si/Al和Si/B濃度比值較放置0個(gè)月的樣品均有較大變化。由相關(guān)文獻(xiàn)可知，中硼硅玻璃安瓿內(nèi)表面可能被侵蝕，有發(fā)生脫片的可能。NMPA發(fā)布的《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求》規(guī)定“根據(jù)加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)研究結(jié)果確定所采用的包裝材料和容器的合理性[16]”注射劑玻璃包裝材料生產(chǎn)工藝中的金屬離子或陽(yáng)離子團(tuán)在和藥品接觸過(guò)程中均有可能浸出到藥品中，影響藥品質(zhì)量或?qū)颊咧苯赢a(chǎn)生安全隱患，因此建議生產(chǎn)企業(yè)選擇合適的包裝材料進(jìn)行相容性考察，以降低藥品使用風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，所建方法靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可用于鹽酸氨溴索注射液中24種元素雜質(zhì)的含量測(cè)定；由0、3、6個(gè)月的樣品研究結(jié)果表明，中硼硅玻璃安瓿與鹽酸氨溴索注射液間有相互作用，存放加速6個(gè)月內(nèi)元素雜質(zhì)遷移量符合AET要求，說(shuō)明鹽酸氨溴索注射液與中硼硅玻璃安瓿包裝系統(tǒng)相容性良好，安全性良好。由于本品市場(chǎng)占有率較高，從安全用藥角度出發(fā)，各企業(yè)可參照《化學(xué)藥品注射劑與玻璃包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》中的內(nèi)容進(jìn)行模擬試驗(yàn)及相互作用研究，評(píng)估目前使用的包裝系統(tǒng)在全生命周期內(nèi)與藥品之間相互作用的程度，用以確定藥品與包裝系統(tǒng)間的相容性和藥品的安全性。