易宗容，李雪梅，雷美紅，劉桂英，馮堂超，陽 剛

（1.宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川宜賓 644000；2.西南大學(xué)，重慶市 400715；3.敘州區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川宜賓 644000；4.宜賓市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川宜賓 644000）

種公豬精液品質(zhì)優(yōu)劣直接影響母豬受胎率、產(chǎn)仔數(shù)、斷奶存活率和斷奶窩重等指標(biāo)（梅軍四等，2016），種公豬精液品質(zhì)受遺傳、年齡、飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)水平、疾病等因素的影響（胡國娟，2020）。采精頻率在近幾年逐步成為影響精液品質(zhì)的一個(gè)關(guān)鍵因素和重要研究對(duì)象，采精頻率根據(jù)種公豬的年齡、飼養(yǎng)水平、生長(zhǎng)發(fā)育程度和使用年限等因素進(jìn)行確定。采精頻率過低，附睪內(nèi)會(huì)貯藏大量精液，精子密度偏，造成精子高死亡率；采精頻率過高，其附睪內(nèi)的精子數(shù)量較少或成熟率較低，會(huì)造成生產(chǎn)效率低下。本試驗(yàn)利用計(jì)算機(jī)輔助精液分析儀對(duì)試驗(yàn)長(zhǎng)白種公豬的精子活力、密度、精子結(jié)構(gòu)完整性和精液量等進(jìn)行研究，有效揭示不同采精頻率對(duì)長(zhǎng)白種公豬精液品質(zhì)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物精液 種公豬體型健碩、個(gè)體發(fā)育良好、健康的成年長(zhǎng)白種公豬（18～24月齡），精液專人徒手采集。豬精液稀釋粉（葡萄糖、檸檬酸鈉、EDTA、抗生素）、蒸餾水、乙醇、乙酸異戊脂、2.5%戊二醛、PBS緩沖液。

1.1.2 試驗(yàn)儀器 高溫高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫水浴鍋、電子分析天平、恒溫箱、磁力攪拌器、移液槍、光學(xué)顯微鏡、離心機(jī)、掃描電子顯微鏡、計(jì)算機(jī)輔助精液分析儀（CASA）、CO2臨界點(diǎn)干燥儀。

1.2 方法

1.2.1 測(cè)定項(xiàng)目及方法 按照1、2、3、4、5次/周的采精頻率采精，采精時(shí)間9：00～10：00，由專人采精，試驗(yàn)準(zhǔn)備期為1周，所有種公豬集中采精一次，然后統(tǒng)一飼養(yǎng)管理標(biāo)準(zhǔn)集中飼養(yǎng)且不采精，每次完成種公豬采精后立即送檢。通過CASA檢測(cè)精子的活率、活力、密度及精子運(yùn)動(dòng)性能等指標(biāo)，使用掃描電子顯微鏡檢測(cè)精子畸形數(shù)和頂體完整性指標(biāo)，電子分析天平準(zhǔn)確稱量精液質(zhì)量（換算方式：1 g=1 mL）。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)與分析 使用IBM SPSS Statistics 22.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析，試驗(yàn)結(jié)果以“Mean±SD”表示結(jié)果。P＞0.05表示組間差異顯著。

2 結(jié)果分析

2.1 采精頻率對(duì)精子密度、活力及精液量等的影響 由表1可知，種公豬精液的密度、活力、活率隨采精頻率增加呈先升后降的趨勢(shì)，采精頻率為3次/周時(shí)，各指標(biāo)均達(dá)到最高值。采精頻率為3次/周的精子密度與1、2及5次/周的精子密度有顯著差異（P＞0.05），與4次/周時(shí)差異不顯著（P＞0.05）。采精頻率為3次/周時(shí)，精子活力與精子活率達(dá)到峰值，顯著高于5次/周（P＞0.05）。采精頻率為1次/周時(shí)精液量達(dá)到峰值，與2、3和4次/周時(shí)差異不顯著（P＞0.05）。精子總數(shù)在采精頻率為3次/周時(shí)達(dá)到峰值，與1、2和4次/周時(shí)差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于5/周時(shí)（P＞0.05）。

表1 采精頻率對(duì)長(zhǎng)白種公豬精液各參數(shù)的影響

2.2 采精頻率對(duì)精子頂體完整性的影響 由圖1可知，種公豬采精頻率為1、2和3次/周時(shí)，頂體完整性分別為95%、94%和93%，三者差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于4次/周（89%）和5次/周（87%）時(shí)的精子頂體完整性（P＞0.05）。

圖1 采精頻率對(duì)長(zhǎng)白種公豬精子頂體完整性的影響

2.3 采精頻率對(duì)精子畸形率的影響 由圖2可知，精子畸形率在采精頻率5、4次/周時(shí)分別高達(dá)19%和16%，差異不顯著（P＞0.05）；在采精頻率為3次/周時(shí)的畸形率為12%，與其余4次采精頻率差異顯著（P＞0.05）；采精頻率在1、2次/周時(shí)的精子畸形率分別是3%和4%。有研究表明，公豬精液畸形率一般不高于18%，否則會(huì)影響后代質(zhì)量與母豬產(chǎn)仔數(shù)（梅軍四等，2016）。

圖2 采精頻率對(duì)長(zhǎng)白種公豬精子畸形率的影響

2.4 采精頻率對(duì)精子運(yùn)動(dòng)性能的影響 由表2可知，精子的VCL、VAP、VSL指標(biāo)會(huì)隨采精頻率的增加而出現(xiàn)先升后降的變化，VCL和VSL在3次/周時(shí)達(dá)到最高，而VAP在4次/周時(shí)達(dá)到最高值，該3項(xiàng)運(yùn)動(dòng)性能指標(biāo)在采精頻率為3、4次/周時(shí)與采精頻率為1、2和5次/周時(shí)差異顯著（P＞0.05）；LIN和STR指標(biāo)隨著采精頻率的增加逐漸下降，在頻率為5次/周時(shí)有輕微上升趨勢(shì)。WOB、BCF、MAD等指標(biāo)均隨采精次數(shù)的增多而降低，其中1次/周時(shí)顯著高于其余4次采精頻率（P＞0.05）。CMS運(yùn)動(dòng)參數(shù)隨著采精頻率提高出現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，且頻率為1次/周時(shí)顯著高于其余4次采精頻率的參數(shù)值（P＞0.05）。PMS運(yùn)動(dòng)參數(shù)隨采精次數(shù)增加呈先增后減的變化，采精頻率為5次/周時(shí)顯著低于其余4次采精頻率所測(cè)出的參數(shù)值（P＞0.05）。此外，ALH這一參數(shù)與采精頻率之間未發(fā)現(xiàn)規(guī)律性變化。

表2 采精頻率對(duì)長(zhǎng)白種公豬精子運(yùn)動(dòng)性能的影響

3 討論

3.1 采精頻率對(duì)長(zhǎng)白種公豬精液品質(zhì)基本參數(shù)的影響 本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著采精頻率的提高，精子的密度、活力、活率、精子總數(shù)4個(gè)指標(biāo)總體呈先上升后下降的趨勢(shì)，而且均在采精頻率為3次/周時(shí)達(dá)到最大。就精液量而言，沒有表現(xiàn)出規(guī)律性變化，精液量在采精頻率為1次/周時(shí)最多，5次/周時(shí)最少。在本次檢測(cè)的5項(xiàng)精子基本參數(shù)中，有4項(xiàng)參數(shù)都是在采精頻率為3次/周時(shí)達(dá)到最大，均顯著高于采精頻率為4、2次/周時(shí)。因此，本試驗(yàn)認(rèn)為，最佳的采精頻率為3次/周。而陽文攀等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，公豬采精間隔為5、7 d時(shí)精子活力較高，本試驗(yàn)結(jié)果未能明顯反映較長(zhǎng)時(shí)期的精子活力變化趨勢(shì)，可能是由于試驗(yàn)時(shí)間不足導(dǎo)致的。趙輝玲等（2022）研究表明，采精量會(huì)隨采精頻率的提高而呈下降趨勢(shì)；有研究發(fā)現(xiàn)，不同品種豬的精液量與精子密度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)（KNECHT等，2014），在本試驗(yàn)中沒有明顯表現(xiàn)，可能是由于試驗(yàn)過程和飼養(yǎng)管理的差異造成的。Simtal等（2004）認(rèn)為，采精頻率過于頻繁會(huì)使公豬性欲與精子數(shù)目下降，因此將采精間隔控制在2～5 d為最佳。

本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采精頻率為4、5次/周時(shí)，精子頂體完整性顯著下降，采精頻率為3次/周時(shí)，精子畸形率顯著上升，因?yàn)殡S著采精頻率的提高，精子細(xì)胞發(fā)育不成熟，結(jié)構(gòu)和功能還沒有發(fā)育完全，從而引起精子出現(xiàn)各種畸形形態(tài)，而且當(dāng)采精頻率為5次/周時(shí)，精子畸形率為19%，超過18%的國家標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，為了提高豬場(chǎng)種公豬的精液品質(zhì)和利用率，在采精頻率為3次/周時(shí)，精液品質(zhì)最佳；在采精頻率為4、2次/周時(shí)，精液品質(zhì)次之。

3.2 采精頻率對(duì)長(zhǎng)白種公豬精液運(yùn)動(dòng)性能的影響 Donnelly等（1998）研究發(fā)現(xiàn)，精子活力較高時(shí)，精子的運(yùn)動(dòng)性能比較強(qiáng)，和其相關(guān)的運(yùn)動(dòng)參數(shù)也會(huì)隨之提高。在本試驗(yàn)中，精子的VCL、VAP、VSL指標(biāo)會(huì)隨采集精液頻率的增加而表現(xiàn)出先增加后下降的趨勢(shì)，在3、4次/周時(shí)，以上3個(gè)指標(biāo)達(dá)到最高，說明精子運(yùn)動(dòng)性能在這兩個(gè)采精頻率時(shí)最佳。VCL、VAP、VSL指數(shù)越高，精子活力越好，運(yùn)動(dòng)性能越好，受精率越高，說明精子的活力、密度與精子總數(shù)與精子的VCL、VAP、VSL之間有關(guān)聯(lián)。在本試驗(yàn)中，VCL、VAP、VSL等指標(biāo)在3、4次/周時(shí)達(dá)到最高。

4 結(jié)論

（1）在采精頻率為3次/周時(shí)，精子的密度、活力與活率達(dá)到最高；精液量在采精頻率為1次/周時(shí)最多；精子總數(shù)在采精頻率為3次/周時(shí)達(dá)到最多。

（2）精子頂體完整性在采精頻率為1次/周時(shí)最高；采精頻率為1次/周時(shí)精子畸形率最低，2次/周時(shí)次之，在采精頻率為3、4次/周時(shí)的畸形率稍高，但均符合國標(biāo)GB/T25172-2010。

（3）精子運(yùn)動(dòng)性能的各項(xiàng)參數(shù)在采精頻率為2～3次/周時(shí)最佳，此階段采集的精液中精子最具活力。