仝霄霄

（湯陰縣畜牧獸醫(yī)總站 456150）

近年來，雞大腸桿菌病﹑雞白痢﹑鴨疫里默氏桿菌病﹑豬水腫病等細(xì)菌性傳染病已成為危害養(yǎng)殖業(yè)的多發(fā)病[1]。由于耐藥菌株的增加，對畜牧業(yè)的發(fā)展造成極大的損失。同時，由于養(yǎng)殖過程中不科學(xué)的﹑盲目的濫用抗菌藥，很多致病性細(xì)菌產(chǎn)生了耐藥性，使得抗菌藥對細(xì)菌性疾病的控制效果越來越差，不但造成藥物浪費(fèi)，而且還延誤病情，給養(yǎng)殖戶造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。如按照常規(guī)檢驗，則最少需要48h左右才能出來結(jié)果[2]。因此，在臨床用藥前進(jìn)行快速﹑有效的藥物敏感試驗已成為正確使用抗菌藥物的必要手段。筆者在多年的試驗室診斷和臨床實踐中總結(jié)出一套簡易快速的藥物敏感試驗方法。經(jīng)過在臨床上反復(fù)實踐，效果顯著，有效給養(yǎng)殖戶挽回了損失，同時減少了藥物濫用情況?，F(xiàn)將試驗情況報告如下，為有效診斷和治理畜禽細(xì)菌病提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗背景

2021年4月，安陽某養(yǎng)殖場雞群出現(xiàn)死亡，用藥治療效果差。本實驗室對病雞進(jìn)行解剖，采集心臟﹑肝臟和腹腔液涂板，選養(yǎng)殖場現(xiàn)有藥物原粉進(jìn)行藥敏試驗，確定敏感藥物，便于針對治療。

1.2 試驗方法

本試驗室隨機(jī)選取3只病雞解剖，觀察組織器官病變情況分別采集心臟﹑肝臟和腹腔液涂營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（Nutrient Agar，NA）平板。按照文獻(xiàn)[3]的方法并加以改良，稱量0.1g藥物原粉加入10mL生理鹽水溶解后混合均勻，稀釋10倍后備用，此時藥物濃度為1000μg/mL。移液器吸取20μL藥液（20μg）小心點(diǎn)種到上述已涂過病料組織的NA平板上，37℃培養(yǎng)14～16 h。取出平板觀察藥敏結(jié)果，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑，篩選敏感藥物。

2 試驗結(jié)果

2.1 解剖病理變化

解剖發(fā)現(xiàn)前2只病雞肝臟﹑心臟﹑肌胃和腺胃無明顯病變，腹腔無積液。第3只病雞肝臟破裂，出血，心臟纖維素滲出﹑附著。如圖1所示。

圖1 第3只病雞腹腔病變照片

2.2 藥敏試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，第1只和第2只雞心臟﹑肝臟和腹腔涂板培養(yǎng)后，沒有出現(xiàn)致病菌，第3只雞心臟﹑肝臟和腹腔均出現(xiàn)均勻的疑似病原菌苔分布，測量抑菌圈直徑，病原菌對藥物敏感結(jié)果如圖2和表1所示。

圖2 第3只病雞各臟器藥敏結(jié)果

表1 各臟器病原菌對藥物敏感性試驗結(jié)果

藥敏結(jié)果表明，各組織臟器中的病原菌心臟中病原菌對7種藥物敏感順序為：

心臟：阿米卡星＞替米考星＞慶大霉素＞阿莫西林＞氟苯尼考＞頭孢噻呋鈉；

肝臟：替米考星＞慶大霉素＞阿米卡星＞頭孢噻呋鈉；

腹腔液：阿米卡星＞替米考星＞多西環(huán)素＞頭孢噻呋鈉＞慶大霉素＞氟苯尼考＞阿莫西林。

結(jié)合以上藥物敏感結(jié)果，建議采用替米考星拌料﹑阿米卡星和慶大霉素注射方式治療，觀察治療效果。

3 討論

針對病原微生物對養(yǎng)殖成本和利潤的威脅，畜禽養(yǎng)殖行業(yè)中常采用抗菌和抑菌藥物進(jìn)行防控。其中，最常用的抗菌和抑菌藥物是移植于人藥﹑獸藥的抗生素[4]。由于缺乏科學(xué)的用藥指導(dǎo)，養(yǎng)殖生產(chǎn)中各種抗生素的用法與用量往往存在盲目性，因而不但成本高﹑藥物浪費(fèi)﹑效果不理想，還會對生態(tài)環(huán)境健康造成嚴(yán)重影響。特別是對有益菌群的誤傷和病原菌抗藥性增加[5]。因此，在用藥前進(jìn)行科學(xué)的藥物敏感試驗（Antimicrobial susceptibility testing，AST)是獸醫(yī)工作者必備的技能。

藥敏試驗即為測定目標(biāo)藥物對細(xì)菌和真菌培養(yǎng)的表觀作用效果，主要包括基于細(xì)菌分離純化的稀釋法[6]﹑K-B紙片法[7]﹑牛津杯法[8]﹑E-test[9]法等。應(yīng)用這些方法時，對貴重儀器的依賴性較小，成本較低，結(jié)果可以直接通過肉眼判斷，而且大多可以給出最小抑菌濃度MIC值。但是，這些方法往往操作繁瑣，且需要較長的時間，從而在一定程度上會錯過最佳投藥時機(jī)，增加損失[5]。近幾年來筆者根據(jù)臨床經(jīng)驗結(jié)合實驗室檢驗技術(shù)采用這種簡易快速藥敏試驗?zāi)茉诤芏痰臅r間內(nèi)選擇出畜禽常見細(xì)菌性疾病的敏感藥物，可在細(xì)菌感染的最初時期選擇敏感藥物將細(xì)菌殺滅，減少藥物開支，為臨床治療爭取寶貴的時間。通過該方法對安陽某養(yǎng)殖場發(fā)病肉雞進(jìn)行臨床細(xì)菌藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)病原細(xì)菌對慶大霉素敏感度較高，這與羅薇等[10]報道的通過K-B法雞大腸桿菌藥敏試驗結(jié)果一致。王會生等[10,11]通過對規(guī)模化雞場大腸桿菌細(xì)菌分離純化培養(yǎng)，紙片法藥敏試驗，也得到和本試驗一致的結(jié)論。有意思的是，第3只病雞疑似分離到的病原菌對青霉素敏感度：心臟＞腹腔液＞肝臟，同時對多西環(huán)素敏感度：腹腔液/肝臟＞心臟，這可能是該發(fā)病雞群存在不止一種病原菌感染的情況，結(jié)合問詢該雞場以往用藥情況，發(fā)現(xiàn)存在用藥單一，藥物重復(fù)多次使用的問題，這也可能導(dǎo)致雞場存在的病原菌株對某些抗菌藥物的敏感性并不完全相同。因此，正確地選用抗菌藥物最好建立在進(jìn)行分離病原菌做藥物敏感試驗的基礎(chǔ)上。

綜上，本試驗方法切實可行，尤其考慮到一般養(yǎng)殖場的現(xiàn)實試驗條件，比之實驗室流程化的藥敏試驗程序（病料采集﹑細(xì)菌分離純化﹑涂菌﹑貼藥敏片），存在周期短（最快12h出結(jié)果），便于操作的好處。該方法在臨床獸醫(yī)學(xué)上值得推廣和應(yīng)用。