■張 沙 鄧圣庭 薛俊敬 楊凱麗 卓銳文 方熱軍

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410125）

熱應(yīng)激（HS）是指動(dòng)物在高溫環(huán)境下，機(jī)體產(chǎn)生的熱量與散熱之間的平衡被打破，不能有效地散發(fā)熱量而引起的非特異性生理反應(yīng)[1]。隨著全球變暖形勢(shì)的嚴(yán)峻，環(huán)境溫度不斷上升以及禽類(lèi)規(guī)?；s化養(yǎng)殖方式的發(fā)展，熱應(yīng)激成為限制禽類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育的一個(gè)重要因素[2-3]，給家禽的生產(chǎn)性能帶來(lái)嚴(yán)重的負(fù)面影響，造成機(jī)體部分生理功能異常（如免疫器官萎縮、內(nèi)部結(jié)構(gòu)損傷、炎癥反應(yīng)等），從而抑制肉雞的免疫功能，影響肉雞的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失[4-6]。因此，通過(guò)各種調(diào)控手段來(lái)減緩或消除熱應(yīng)激對(duì)動(dòng)物的不利影響，對(duì)于保證動(dòng)物的健康生長(zhǎng)和生產(chǎn)效益具有重要意義。

硒是畜禽必需的微量元素之一，是谷胱甘肽過(guò)氧化物酶及多種蛋白質(zhì)的重要組成成分。目前，有機(jī)硒和無(wú)機(jī)硒是應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)中的兩種主要硒源添加劑，無(wú)機(jī)硒源主要包括硒酸鈉和亞硒酸鈉，有機(jī)硒源主要包括酵母硒、納米硒和硒代蛋氨酸等[7-9]。與傳統(tǒng)無(wú)機(jī)硒相比，有機(jī)硒吸收率和生物活性較高，毒性低以及污染環(huán)境較小[10-12]。硒代蛋氨酸作為一種有機(jī)硒，有較高的生物學(xué)效價(jià)，能直接參與體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，大量沉積于組織蛋白質(zhì)中，為動(dòng)物提供抗氧化及免疫保護(hù)，使其具備了緩解畜禽熱應(yīng)激的潛力，但目前有關(guān)飼糧中添加硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞的影響研究報(bào)道較少。因此，本研究目的是在熱應(yīng)激條件下探討硒代蛋氨酸對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫器官及免疫功能的影響，為肉雞的規(guī)模化養(yǎng)殖生產(chǎn)使用硒添加劑緩解熱應(yīng)激損傷提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所使用的硒代蛋氨酸是L-硒代蛋氨酸，購(gòu)于四川新一美生物科技有限公司（硒≥2 000 mg/kg）。羅斯308肉雞購(gòu)自湖南省長(zhǎng)沙市當(dāng)?shù)剞r(nóng)場(chǎng)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用240 只21 日齡健康羅斯308 肉公雞，按2×2因子設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為常溫組（NT 組）、熱應(yīng)激組（HS組）、常溫硒代蛋氨酸組（NT-Se-Met組）、熱應(yīng)激硒代蛋氨酸組（HS-Se-Met 組）4 個(gè)處理，每個(gè)處理6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只雞，試驗(yàn)期21 d。NT 組和HS 組基礎(chǔ)飼糧中添加0.3 mg/kg 亞硒酸鈉（以硒計(jì)），NT-Se-Met 組和HS-Se-Met 組基礎(chǔ)飼糧中添加0.3 mg/kg 硒代蛋氨酸（以硒計(jì)）。試驗(yàn)期常溫溫度設(shè)定為（24±2）℃，高溫溫度為（32±2）℃，高溫和常溫環(huán)境溫度持續(xù)至42日齡停止，相對(duì)濕度均控制在55%～65%，持續(xù)光照，自由采食和飲水?；A(chǔ)飼糧參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33—2004）營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能

于試驗(yàn)第1天和第21天，上午6：00-7：00時(shí)對(duì)所有肉雞進(jìn)行空腹稱(chēng)重，稱(chēng)重前12 h 禁食。試驗(yàn)期間，以重復(fù)為單位記錄各組的采食量。計(jì)算肉雞的平均日采食量（ADG，g/d）、平均日增重（ADFI，g/d）和料重比（F/G）。

1.3.2 免疫器官指數(shù)

于試驗(yàn)期結(jié)束日每重復(fù)隨機(jī)取1 只肉雞頸動(dòng)脈放血屠宰，空腹取樣，分離胸腺、脾臟、法氏囊，用濾紙吸干殘余血跡后稱(chēng)重，計(jì)算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)。

器官指數(shù)（g/kg）=器官重量（g）/活體重（kg）

1.3.3 免疫指標(biāo)

血清和組織（肝臟和脾臟）的免疫指標(biāo)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定程序按照酶聯(lián)免疫生物科技有限公司試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。免疫指標(biāo)包括免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和干擾素γ（IFN-γ）。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙因素方差分析，主效應(yīng)包括溫度、硒代蛋氨酸及兩者的互作效應(yīng)。當(dāng)有交互作用時(shí)，采用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）”表示，P＜0.05 表示差異顯著，0.05＜P＜0.1表示差異有顯著性趨勢(shì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激條件下肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2 可知，與常溫狀態(tài)相比，熱應(yīng)激狀態(tài)肉雞末重、平均日增重、平均日采食量顯著降低（P＜0.05），料重比顯著升高（P＜0.05），而飼糧中添加硒代蛋氨酸對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響（P＞0.05）；飼糧中硒代蛋氨酸和溫度對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)互作效應(yīng)（P＞0.05）。

表2 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激條件下肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表3 可知，與常溫狀態(tài)相比，熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞脾臟指數(shù)顯著降低（P＜0.05），而飼糧中添加硒代蛋氨酸對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)無(wú)顯著影響（P＞0.05），飼糧中硒代蛋氨酸和溫度對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)也無(wú)互作效應(yīng)（P＞0.05）。

表3 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞免疫器官指數(shù)的影響(g/kg)

2.3 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激條件下肉雞免疫功能的影響

由表4 可知，在血清免疫指標(biāo)方面，與常溫狀態(tài)相比，熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞血清IgA、IgG、IL-2顯著降低（P＜0.05），IgM有降低的趨勢(shì)（P=0.071），IL-1β和IL-6顯著升高（P＜0.05）；而添加硒代蛋氨酸顯著升高IL-2含量（P＜0.05），IgG 有升高趨勢(shì)（P=0.059），IL-1β有降低趨勢(shì)（P=0.062）；飼糧中硒代蛋氨酸和溫度對(duì)肉雞血清免疫指標(biāo)無(wú)互作效應(yīng)（P＞0.05）。

表4 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表5 可知，在肝臟免疫指標(biāo)方面，與常溫狀態(tài)相比，熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞肝臟IgG、IgM、IL-2 顯著降低（P＜0.05），IL-1β和IL-6 顯著升高（P＜0.05）；而添加硒代蛋氨酸顯著升高肝臟中IgA、IgG、IgM、IL-2 含量（P＜0.05），顯著降低IL-1β含量（P＜0.05）；飼糧中硒代蛋氨酸和溫度對(duì)肉雞肝臟IgM 有顯著互作效應(yīng)（P＜0.05）。

表5 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞肝臟免疫指標(biāo)的影響

由表6 可知，在脾臟免疫指標(biāo)方面，與常溫狀態(tài)相比，熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞脾臟IgA、IgG、IgM、IL-2含量顯著降低（P＜0.05），IL-1β含量顯著升高（P＜0.05），IL-6 有升高趨勢(shì)（P=0.099）；而添加硒代蛋氨酸顯著升高了脾臟中IgA、IgG、IgM、IL-2 含量（P＜0.05），IL-1β含量顯著降低（P＜0.05）；飼糧中硒代蛋氨酸和溫度對(duì)肉雞脾臟免疫指標(biāo)無(wú)互作效應(yīng)（P＞0.05）。

表6 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞脾臟免疫指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長(zhǎng)性能的影響

肉雞的羽毛豐富、皮膚無(wú)汗腺，容易造成機(jī)體產(chǎn)熱與散熱失衡問(wèn)題。肉雞會(huì)通過(guò)減少攝食量降低產(chǎn)熱，以維持體溫相對(duì)恒定，因而降低生長(zhǎng)性能[13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞平均日增重、末重顯著降低，料重比顯著升高。這與前人研究結(jié)論一致[14-15]。硒作為一種畜禽必需微量元素，能有效地促進(jìn)動(dòng)物的健康生長(zhǎng)發(fā)育，在抗衰老、抗炎、抗氧化等方面均具有積極作用[16-18]。眾所周知，硒通過(guò)硒蛋白發(fā)揮主要的生物學(xué)作用。5’-脫碘酶（DIO）就是一種重要的硒蛋白，T4通過(guò)DIO催化轉(zhuǎn)化為T(mén)3，進(jìn)而合成和分泌生長(zhǎng)激素，對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)和發(fā)育具有積極的影響[19]。Khan等[20]在熱應(yīng)激狀態(tài)下的肉雞飼糧中添加硒，顯著提高了試驗(yàn)雞的體增重和飼料轉(zhuǎn)化效率，機(jī)體的氧化損傷程度顯著降低。然而也有研究表明在飼糧中加硒對(duì)家禽的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響[21-22]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，硒代蛋氨酸未能顯著改善熱應(yīng)激給肉雞生長(zhǎng)性能帶來(lái)的負(fù)面影響，這可能與DIO處于硒蛋白合成優(yōu)先級(jí)的頂端有關(guān)，即硒的相對(duì)缺乏或不足（非嚴(yán)重缺乏）不會(huì)影響DIO的合成，因而沒(méi)有表現(xiàn)出硒對(duì)動(dòng)物的促生長(zhǎng)作用[23]；也有可能與硒的形式和添加水平有關(guān)。因此，更高濃度的硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長(zhǎng)性能的影響仍待進(jìn)一步探究。

3.2 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞免疫器官指數(shù)的影響

免疫器官指數(shù)可以反映動(dòng)物的免疫能力[24]。一般情況下，禽類(lèi)的胸腺、脾臟、法氏囊重量和指數(shù)增大，代表機(jī)體的免疫機(jī)能增強(qiáng)。大量報(bào)道指出，當(dāng)家禽處于熱應(yīng)激時(shí)機(jī)體分泌大量的皮質(zhì)酮（醇），會(huì)抑制血液中淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生，進(jìn)而導(dǎo)致器官發(fā)育受阻。趙三元等[25]研究表明熱應(yīng)激顯著降低了28～38日齡肉仔雞免疫器官指數(shù)。有研究表明，熱應(yīng)激組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)極顯著低于對(duì)照組，分別降低了31.6%和41.2%，而添加0.75 g/kg 富硒女貞子組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)僅降低了10.5%和20.8%，表明富硒女貞子能緩解熱應(yīng)激給小鼠脾臟和胸腺造成的損傷。本試驗(yàn)結(jié)果表明，熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞脾臟指數(shù)顯著降低，表明熱應(yīng)激能損傷免疫器官的發(fā)育。有研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加硒能顯著提高肉雞免疫器官（脾臟、胸腺和法氏囊）的比重，說(shuō)明硒能促進(jìn)熱應(yīng)激狀態(tài)下黃羽肉雞的器官發(fā)育，緩解熱應(yīng)激對(duì)器官發(fā)育的抑制作用。這與前人研究結(jié)果一致[26]。然而，鞠耿越[27]在飼糧中添加0.2～0.4 mg/kg 有機(jī)硒，對(duì)70 日齡仔鵝屠宰性能、器官指數(shù)無(wú)顯著影響。田耀耀等[28]研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞日糧中添加不同水平的酵母硒對(duì)其器官指數(shù)無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明日糧中添加硒代蛋氨酸對(duì)肉雞器官指數(shù)也無(wú)顯著影響。這可能有兩方面原因，一方面，由于動(dòng)物品種差異，不同動(dòng)物對(duì)硒的吸收代謝不同，對(duì)生長(zhǎng)性能和器官發(fā)育的影響不同；另一方面，本試驗(yàn)持續(xù)熱應(yīng)激21 d，白羽肉雞可能達(dá)到了應(yīng)激反應(yīng)的適應(yīng)階段，具體的原因仍需進(jìn)一步的研究驗(yàn)證。

3.3 硒代蛋氨酸對(duì)熱應(yīng)激肉雞免疫功能的影響

免疫球蛋白可以防止機(jī)體免受細(xì)菌和病毒感染，IgA、IgG、IgM 是抵抗感染的重要物質(zhì)，其含量在一定程度上反映機(jī)體免疫功能狀況[29]。有研究指出，熱應(yīng)激會(huì)使動(dòng)物內(nèi)分泌功能紊亂，進(jìn)而抑制巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生，加速淋巴細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致動(dòng)物血清中免疫球蛋白含量下降、免疫能力降低，機(jī)體對(duì)外來(lái)病原體的屏障功能下降，發(fā)病率升高，而適當(dāng)補(bǔ)充硒能夠通過(guò)刺激效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生特異性免疫球蛋白，提高體液免疫功能[30-31]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞血清IgA、IgG，肝臟IgG、IgM 及脾臟中IgA、IgG、IgM 含量顯著降低，而飼糧中添加硒代蛋氨酸顯著提高了肝臟和脾臟中IgA、IgG和IgM含量，對(duì)血清中IgG含量有升高趨勢(shì)。Niu等[32]研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，0.4 mg/kg有機(jī)硒處理組的熱應(yīng)激肉雞初次免疫和二次免疫應(yīng)答產(chǎn)生的血清總抗體及IgM、IgG 含量顯著增加。潘翠玲等[33]研究表明，在日糧中添加0.2 mg/kg或以上的有機(jī)硒時(shí)，能顯著促進(jìn)蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率和血漿中IL-2 的含量。Haldar 等[34]在飼料中添加酵母硒可顯著提高熱應(yīng)激肉雞抗沙門(mén)氏菌的能力和新城疫抗體效價(jià)。前人研究結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果一致?？傊?，硒能夠通過(guò)促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖和提高免疫球蛋白含量增強(qiáng)機(jī)體的免疫應(yīng)答能力。

免疫細(xì)胞因子是調(diào)控免疫應(yīng)答的一類(lèi)小分子，包括白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子、干擾素、生長(zhǎng)因子、趨化因子等。IL-2可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖與分化，其含量反映機(jī)體的免疫應(yīng)答能力[35]；IL-1β作為一種關(guān)鍵的促炎細(xì)胞因子，參與多種自身免疫性炎癥反應(yīng)和多種細(xì)胞活動(dòng)；IFN-γ由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，是主要的促炎細(xì)胞因子之一[36]。在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，發(fā)生氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生的自由基產(chǎn)物可以調(diào)節(jié)許多免疫和炎性分子的表達(dá)，促使炎性惡化，引起組織損傷影響免疫系統(tǒng)的發(fā)育和免疫功能的正常發(fā)揮[37]。Asmaa 等[38]研究表明，生長(zhǎng)兔飼糧中添加硒可以降低炎癥因子水平，并提高了機(jī)體免疫應(yīng)答能力。Hussain[39]在日糧中添加不同硒源，結(jié)果使LPS 誘導(dǎo)的肉雞血清和肝臟中IFN-γ、IL-1β和IL-8 含量顯著提高。在本試驗(yàn)中，由熱應(yīng)激誘導(dǎo)肉雞發(fā)生的氧化應(yīng)激，導(dǎo)致機(jī)體血清和肝臟中IL-1β和IL-6 水平升高，而在飼糧中添加硒代蛋氨酸后，可降低肝臟和脾臟IL-1β水平，肝臟和脾臟中IL-6水平有降低的趨勢(shì)，且促使機(jī)體IL-2 水平升高，這與前人研究結(jié)果一致。因此，在肉雞飼糧中添加硒代蛋氨酸能緩解熱應(yīng)激引起的炎癥反應(yīng)，并提高機(jī)體免疫能力。

4 結(jié)論

飼糧中添加硒代蛋氨酸一定程度上改善了肉雞的生長(zhǎng)性能和免疫器官發(fā)育，緩解了熱應(yīng)激對(duì)肉雞造成的氧化損傷和炎癥反應(yīng)，提高了機(jī)體免疫功能。在肉雞生產(chǎn)中，硒代蛋氨酸在緩解肉雞熱應(yīng)激方面具有一定的應(yīng)用潛力。