蔡猛，張永寧

（1.駐馬店市中心醫(yī)院，河南 駐馬店 463000；2.黃淮學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南 駐馬店 463000）

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是臨床上常見(jiàn)的一種老年慢性疾病，主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨變性及關(guān)節(jié)周?chē)琴|(zhì)增生［1］。有學(xué)者認(rèn)為，關(guān)節(jié)軟骨異常炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致OA軟骨組織病變重要原因之一［2］。細(xì)胞焦亡是一種新的炎癥性細(xì)胞死亡，能夠誘導(dǎo)炎癥級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，與OA的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。細(xì)胞焦亡中以Caspase－1介導(dǎo)的經(jīng)典型細(xì)胞焦亡在OA中被廣泛性研究［3-4］。研究發(fā)現(xiàn)，在OA大鼠模型中軟骨組織焦亡相關(guān)蛋白Caspase－1、IL－1β、IL－18蛋白表達(dá)顯著升高，細(xì)胞焦亡指數(shù)增加，而抑制細(xì)胞焦亡能夠改善OA軟骨組織損傷［5］。因此，以O(shè)A軟骨細(xì)胞焦亡的角度研究藥物作用機(jī)制具有重要意義。

三七總皂苷（total saponins of panax notoginseseng，PNS）是三七的主要活性成分，具有抗炎、抗氧化等生物活性［6］。已有研究報(bào)道，PNS能夠降低炎癥因子釋放，降低軟骨組織炎癥反應(yīng)，改善OA軟骨損傷［7-8］。但是目前有關(guān)PNS對(duì)OA軟骨損傷的具體作用機(jī)制尚未完全闡明。本研究將基于TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路傳導(dǎo)機(jī)制，擬通過(guò)構(gòu)建OA大鼠模型探究PNS對(duì)OA軟骨細(xì)胞焦亡的影響及可能的分子作用機(jī)制，以期為臨床合理應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠，4～6周齡，體質(zhì)量（200 ±15）g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司［SCXK（京）2019－0017］，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由飲水，晝夜交替光照，溫度維持在20～25 ℃，相對(duì)濕度60%～70%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)符合3R原則，且通過(guò)駐馬店市中心醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查（批件號(hào)：20201002）。

1.1.2 藥品與主要試劑

三七總皂苷（成都埃法生物科技有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)90%，批號(hào)：AF20033002）；塞來(lái)昔布（輝瑞制藥有限公司，規(guī)格：200 mg/粒，國(guó)藥準(zhǔn)字J20140072）；二辛可酸（bicinchonininc acid，BCA）蛋白濃度測(cè)定試劑盒、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、蘇木素－伊紅（hematoxylin and eosin staining，HE）染色試劑盒、阿爾新藍(lán)－核固紅染色試劑盒、原位末端標(biāo)記（TUNEL）染色檢測(cè)試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為P0012S、ST023、C0105S、C0153S、C1091）；番紅O染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：293342）；免疫組化試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：SP－9001）；TLR4一抗、NLRP3一抗、Caspase－1一抗、IL－1β一抗、IL－18一抗（美國(guó)Cell Signaling Technology公司，批號(hào)分別為14358、13158、24232、12703、57058）。

1.1.3 主要儀器

多功能酶標(biāo)儀（長(zhǎng)春樂(lè)鏷科技有限公司，型號(hào)：LP－5117）；熒光倒置顯微鏡（日本/奧林巴斯Olympus，型號(hào)：CKX53）；高速冷凍離心機(jī)（湖南可成儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)：H3－18KR）；凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)Bio－Rad伯樂(lè)公司，型號(hào)：Gel Doc XR+）；電子壓痛儀（天津諾雷信達(dá)科技有限公司，型號(hào)：YLS－3E）；足底熱測(cè)痛儀（美國(guó)IITC公司，型號(hào)：HBS－1096A）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物造模、分組及給藥

采用改良的Hulth法［9］構(gòu)建OA大鼠模型。大鼠腹腔注射3%的戊巴比妥鈉麻醉，仰臥位固定，取左膝關(guān)節(jié)為術(shù)側(cè)，沿左膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)剪開(kāi)皮膚，充分暴露膝關(guān)節(jié)腔，切斷內(nèi)側(cè)副韌帶、前交叉副韌帶，并摘除半月板，外科縫合線將創(chuàng)口縫合，期間操作避免損傷軟骨組織。術(shù)后大鼠腹腔注射青霉素（20萬(wàn)U/d），連續(xù)3 d，預(yù)防感染。關(guān)節(jié)炎癥指數(shù) ≥ 4分，可視為造模成功。假手術(shù)組（Sham組）大鼠僅行剪開(kāi)皮膚，暴露關(guān)節(jié)腔。SD大鼠隨機(jī)分為Sham組，模型組（Model），三七總皂苷低、高劑量組（PNS－L、PNS－H）和陽(yáng)性對(duì)照藥塞來(lái)昔布組（Celecoxib），每組各10只。按照大鼠和人體等效劑量換算以及文獻(xiàn)［10］中的干預(yù)劑量，PNS－L組和PNS－H組大鼠分別給予50、200 mg/kg PNS灌胃，1次/d，連續(xù)8周。Celecoxib組大鼠給予24 mg/kg Celecoxib灌胃，1次/d，連續(xù)8周。Sham組和Model組大鼠均給予等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)8周。

1.2.2 軟骨組織病理學(xué)染色

①末次給藥結(jié)束后，各組大鼠同時(shí)處死，觀察膝關(guān)節(jié)軟骨組織形態(tài)，并剪取相同部分的軟骨組織，采用4%的多聚甲醛固定組織24 h，室溫條件下將膝關(guān)節(jié)標(biāo)本經(jīng)EDTA溶液脫鈣處理，期間脫鈣溶液每3 d更換1次，脫鈣時(shí)長(zhǎng)為1個(gè)月，直至軟骨組織足夠柔軟，然后對(duì)處理后的組織標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋、切片，切片厚度3～5 μm，軟骨組織切片后進(jìn)行HE染色觀察病理形態(tài)變化，利用Mankin's評(píng)分表［11］對(duì)大鼠軟骨組織病理?yè)p傷進(jìn)行評(píng)分，Mankin's分值越高表示軟骨組織損傷程度越嚴(yán)重；②番紅O染色切片制作同HE，之后按照試劑盒檢測(cè)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行番紅O染色；③阿爾新藍(lán)染色切片制作同HE，之后按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行阿爾新藍(lán)染色，鏡下觀察軟骨組織，并拍照。

1.2.3 大鼠壓痛閾值及熱痛閾值測(cè)定

給藥8周后，圓筒固定大鼠，利用電子壓痛儀壓向大鼠患處后側(cè)足背，當(dāng)大鼠發(fā)出掙扎或是鳴叫時(shí)測(cè)定的壓力值即為壓痛閾值；將大鼠放置于透明的玻璃箱內(nèi)，并將足底熱測(cè)儀放置于大鼠患處足底，設(shè)置時(shí)間為20 s，溫度為30 ℃，之后打開(kāi)計(jì)時(shí)器，直至大鼠發(fā)出鳴叫或是抬腿回縮時(shí)所用時(shí)間即為熱痛閾值。以上測(cè)試指標(biāo)每只大鼠測(cè)定3次，取平均值為最終結(jié)果。

1.2.4 TUNEL染色檢測(cè)軟骨細(xì)胞焦亡

組織固定、切片制作過(guò)程同HE染色。按照TUNEL染色試劑盒進(jìn)行染色，通過(guò)光學(xué)顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。其中TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞核呈亮綠色，軟骨細(xì)胞核呈藍(lán)色。每張切片隨機(jī)選取6個(gè)視野，計(jì)算TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞率，即軟骨細(xì)胞焦亡率。

TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞率（%）=TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%

1.2.5 免疫組化法檢測(cè)TLR4、NLRP3、Caspase－1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)

按照“1.2.2”取各組大鼠軟骨組織切片，經(jīng)3%H2O2溶液孵育10 min，85 ℃抗原修復(fù)，加10% BSA溶液封閉20 min；加TLR4、NLRP3、Caspase－1抗體（工作液體積稀釋比例為1∶200），4 ℃孵育過(guò)夜；加對(duì)應(yīng)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫孵育30 min；滴加二氨基聯(lián)苯胺顯色液，沖洗切片后進(jìn)行蘇木素軟骨細(xì)胞核染色，于200倍視野下隨機(jī)選取6個(gè)視野進(jìn)行觀察，拍照，利用Image J軟件進(jìn)行免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞比率評(píng)估TLR4、NLRP3和Caspase－1的表達(dá)。

1.2.6 Western blot檢測(cè)TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)

給藥8周后，立即將大鼠處死，剪取大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織并提取總蛋白，按照1∶5質(zhì)量與體積比加入細(xì)胞裂解液，于4 ℃條件下裂解40 min；BCA法測(cè)定各組大鼠軟骨組織蛋白質(zhì)濃度；蛋白上樣（按照每孔上樣量30 μg計(jì)算得出上樣體積）；凝膠電泳；濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜；5%BSA室溫封閉2 h；分別加TLR4抗體（1∶1 000）、NLRP3抗體（1∶1 000）、Caspase－1抗體（1∶1 000）、IL－1β抗體（1∶1 000）、IL－18抗體（1∶1 000）及β－actin抗體（1∶2 000），4 ℃孵育過(guò)夜；加對(duì)應(yīng)的山羊抗兔二抗或者山羊抗鼠二抗（1∶5 000），室溫孵育1～2 h；TBST洗滌3次，每次5 min，滴加顯影液，顯影并拍照。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用多因素方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P＜ 0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠軟骨組織病理學(xué)的比較

HE染色、番紅O染色和阿爾新藍(lán)染色顯示，Sham組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織結(jié)構(gòu)完整，層次清晰，軟骨細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列整齊，無(wú)明顯纖維化。Model組大鼠軟骨組織退變嚴(yán)重，表面有嚴(yán)重纖維化，軟骨結(jié)構(gòu)完全被破壞，軟骨細(xì)胞萎縮，層次雜亂，軟骨細(xì)胞外基質(zhì)降解明顯，呈現(xiàn)典型的OA病理?yè)p傷改變。相比于Model組大鼠，PNS各劑量組大鼠和Celecoxib組大鼠軟骨細(xì)胞形態(tài)較為正常，膝關(guān)節(jié)退變程度減輕，細(xì)胞外基質(zhì)染色較深，軟骨表面纖維化程度減少，OA病理?yè)p傷有一定改善。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠軟骨組織病理學(xué)染色（HE，× 200）

2.2 各組大鼠病理Mankin's評(píng)分的比較

與Sham組相比，Model組大鼠Mankin's評(píng)分顯著增加（P＜ 0.01）。與Model組相比，PNS各劑量組大鼠Mankin's評(píng)分顯著降低（P＜ 0.05或P＜ 0.01）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠病理?yè)p傷程度Mankin's評(píng)分比較（ ± s）

表1 各組大鼠病理?yè)p傷程度Mankin's評(píng)分比較（ ± s）

注：與Sham組相比，**P ＜ 0.01；與Model組相比，#P ＜ 0.05，##P ＜ 0.01。

組別Sham組Model組PNS－L組PNS－H組Celecoxib組Mankin's評(píng)分（分）1.02 ± 0.18 9.87 ± 2.10**7.61 ± 1.52#4.00 ± 1.21##3.45 ± 1.02##n 劑量（mg/kg）10 10 10 10 10－－5 0 200 24

2.3 各組大鼠壓痛閾值及熱痛閾值的比較

與Sham組相比，Model組大鼠壓痛閾值和熱痛閾值均顯著降低（P＜ 0.01）。與Model組相比，PNS各劑量組大鼠壓痛閾值和熱痛閾值均顯著增加（P＜ 0.05或P＜ 0.01）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠壓痛閾值及熱痛閾值比較（ ± s）

表2 各組大鼠壓痛閾值及熱痛閾值比較（ ± s）

注：與Sham組相比，**P ＜ 0.01；與Model組相比，#P ＜ 0.05，##P ＜ 0.01。

組別Sham組Model組PNS－L組PNS－H組Celecoxib組熱痛閾值（s）9.81 ± 1.01 5.32 ± 0.65**6.25 ± 1.02#8.32 ± 0.51##9.01 ± 0.76##n 劑量（mg/kg）10 10 10 10 10——5 0 200 24壓痛閾值（g）510.32 ± 18.72 321.71 ± 19.01**417.95 ± 22.32##463.20 ± 20.11##487.57 ± 18.01##

2.4 各組大鼠軟骨細(xì)胞焦亡的比較

TUNEL染色顯示，與Sham組相比，Model組大鼠軟骨細(xì)胞焦亡率顯著增加（P＜ 0.01）。與Model組相比，PNS各劑量組大鼠軟骨細(xì)胞焦亡率顯著降低（P＜0.05或P＜ 0.01）。見(jiàn)表3、圖2。

圖2 各組大鼠軟骨細(xì)胞焦亡情況比較（TUNEL，× 200）

表3 各組大鼠軟骨細(xì)胞焦亡率比較（ ± s）

表3 各組大鼠軟骨細(xì)胞焦亡率比較（ ± s）

注：與Sham組相比，**P ＜ 0.01；與Model組相比，#P ＜ 0.05，##P ＜ 0.01。

組別Sham組Model組PNS-L組PNS-H組Celecoxib組細(xì)胞焦亡率（%）5.24 ± 1.80 30.85 ± 6.31**24.48 ± 5.12#14.77 ± 3.26##12.92 ± 3.61##n 劑量（mg/kg）10 10 10 10 10——5 0 200 24

2.5 各組大鼠軟骨組織TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路相關(guān)蛋白的比較

免疫組化檢測(cè)顯示，與Sham組相比，Model組大鼠軟骨細(xì)胞TLR4、NLRP3、Caspase－1陽(yáng)性細(xì)胞率顯著增加（P＜ 0.01）。與Model組相比，PNS各劑量大鼠軟骨細(xì)胞TLR4、NLRP3、Caspase－1陽(yáng)性細(xì)胞率顯著降低（P＜ 0.05或P＜ 0.01）。見(jiàn)圖3。Western blot檢測(cè)信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，與Sham組相比，Model組大鼠軟骨組織TLR4、NLRP3、Caspase－1、IL－1β、IL－18蛋白表達(dá)均顯著增加（P＜ 0.01）。與Model組相比，PNS各劑量組大鼠軟骨組織TLR4、NLRP3、Caspase－1、IL－1β、IL－18蛋白表達(dá)均顯著降低（P＜ 0.05或P＜0.01）。見(jiàn)圖4。

圖3 免疫組化法檢測(cè)各組大鼠軟骨細(xì)胞TLR4、NLRP3、Caspase－1 p20陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率

圖4 Western blot檢測(cè)各組大鼠軟骨組織TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)

3 討論

OA已經(jīng)成為骨關(guān)節(jié)外科常見(jiàn)疾病之一，是導(dǎo)致關(guān)節(jié)慢性疼痛的主要原因。預(yù)計(jì)到2030年，美國(guó)及歐洲國(guó)家OA的患病率將高達(dá)20%［12］。因此，積極探尋有效藥物干預(yù)治療OA尤為重要。目前臨床上常用治療OA藥物主要有甾體類及非甾體類抗炎藥、阿片類鎮(zhèn)痛藥和解熱鎮(zhèn)痛藥等［13］。上述臨床常用治療藥物在緩解OA疼痛癥狀中表現(xiàn)出良好的療效，但是對(duì)OA炎癥性退變進(jìn)程無(wú)明顯作用。

中醫(yī)藥在治療OA中具有不良反應(yīng)少、藥效作用緩和、多靶點(diǎn)等明顯優(yōu)勢(shì)［14］。OA可歸于寒濕阻痹證或痹證中營(yíng)衛(wèi)不和等范疇，瘀血可致痹證，對(duì)痹證久者予以活血化瘀藥治之［15］。OA患者不同階段，涉及眾多臟器，如肝、脾、腎等，但血瘀貫穿疾病始終，故活血化瘀治療OA為根本大法［16］。PNS來(lái)源于三七的根莖和根部，具有消腫止痛、散瘀止血等功效［17］。研究發(fā)現(xiàn)PNS能夠改善OA軟骨損傷，其機(jī)制與抑制組織炎癥反應(yīng)，降低軟骨細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖密切相關(guān)［10］。本研究通過(guò)Hulth法構(gòu)建OA模型，觀察PNS對(duì)OA大鼠軟骨損傷的影響。結(jié)果顯示，PNS能夠降低Mankin's評(píng)分，增加壓痛閾值和熱痛閾值，改善OA大鼠軟骨損傷，初步表明PNS具有治療OA功效。但是目前有關(guān)PNS治療OA的具體分子機(jī)制尚不清楚，炎癥和細(xì)胞死亡是OA的兩個(gè)主要特征［18］。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞焦亡是繼凋亡和炎癥性壞死后的一種新的細(xì)胞死亡方式，廣泛參與了多種炎癥性疾病的發(fā)生和發(fā)展，如膿毒癥、急性肺損傷及OA等［19-21］。細(xì)胞焦亡可分為Caspase－1介導(dǎo)的經(jīng)典細(xì)胞焦亡和Caspase－4/5/11介導(dǎo)的非經(jīng)典型細(xì)胞焦亡。既往研究發(fā)現(xiàn)，在OA大鼠軟骨組織中細(xì)胞焦亡指數(shù)明顯增加，焦亡相關(guān)蛋白Caspase－1、IL－1β和IL－18表達(dá)均明顯增加，而采用Caspase－1抑制劑處理后能夠明顯改善OA大鼠軟骨損傷［22］。眾多研究已證實(shí)PNS抗炎、抗氧化等作用，并能夠減輕缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞焦亡［23］。基于以上研究筆者推測(cè)PNS可能通過(guò)抑制細(xì)胞焦亡，改善OA軟骨損傷。本研究通過(guò)TUNEL染色檢測(cè)軟骨細(xì)胞焦亡情況。結(jié)果顯示，與Sham組相比，Model組大鼠軟骨細(xì)胞焦亡指數(shù)明顯增加；與Model組相比，PNS各劑量組大鼠軟骨細(xì)胞焦亡指數(shù)明顯降低?？梢?jiàn)，PNS能夠通過(guò)降低軟骨細(xì)胞焦亡，改善OA軟骨損傷。

Toll受體4（Toll receptor 4，TLR4）是一種模式識(shí)別受體，能夠通過(guò)識(shí)別并結(jié)合內(nèi)源性分子激活先天性免疫應(yīng)答反應(yīng)。經(jīng)配體刺激TLR4，導(dǎo)致核轉(zhuǎn)錄因子－κB（nuclear transcription factor－κB，NF－κB）激活并磷酸化入核，從而啟動(dòng)NOD樣蛋白受體3（NOD－like protein receptor 3，NLRP3）炎癥小體活化，激活并促進(jìn)炎癥因子釋放，對(duì)炎癥反應(yīng)過(guò)程發(fā)揮重要作用［24］。NLRP3作為Caspase－1介導(dǎo)細(xì)胞焦亡的關(guān)鍵調(diào)控蛋白。當(dāng)NLRP3被激活時(shí)會(huì)促進(jìn)NLRP3炎癥小體組裝形成復(fù)合物，繼而激活Caspase－1，促進(jìn)炎癥因子IL－1β和IL－18表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡［25］。既往研究發(fā)現(xiàn)，在OA大鼠軟骨組織中TLR4、NLRP3蛋白表達(dá)明顯增加，而抑制TLR4信號(hào)傳導(dǎo)能夠明顯降低NLRP3表達(dá)，從而降低組織炎癥反應(yīng)，改善OA損傷［26-27］。因此，以TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路為傳導(dǎo)途徑的細(xì)胞焦亡機(jī)制研究可能是OA疾病發(fā)生和發(fā)展中的又一重要機(jī)制。本研究利用免疫組化和Western blot檢測(cè)TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，與Sham組相比，Model組大鼠軟骨細(xì)胞TLR4陽(yáng)性細(xì)胞率、NLRP3陽(yáng)性細(xì)胞率、Caspase－1陽(yáng)性細(xì)胞率以及TLR4、NLRP3和Caspase－1蛋白表達(dá)均顯著增加。與Model組相比，PNS能夠抑制上述蛋白表達(dá)，表明PNS能夠通過(guò)抑制TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路活化，降低OA軟骨細(xì)胞焦亡。IL－1β和IL－18已被證實(shí)可以增強(qiáng)軟骨分解代謝，并能夠通過(guò)降低蛋白聚糖和Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)，促進(jìn)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)降解，并最終到OA疾病進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示，PNS能夠下調(diào)OA大鼠軟骨組織IL－1β和IL－18蛋白表達(dá)，改善OA軟骨損傷。

綜上所述，本研究通過(guò)探究PNS對(duì)OA大鼠軟骨細(xì)胞焦亡的影響及其作用機(jī)制。結(jié)果顯示，PNS能夠抑制OA大鼠軟骨細(xì)胞焦亡，改善骨關(guān)節(jié)損傷，其機(jī)制可能與抑制TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路相關(guān)。但是本研究仍存在一定的局限性，如未能闡明PNS與TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)傳導(dǎo)的直接/間接關(guān)系。為此，本研究后續(xù)擬通過(guò)培養(yǎng)原代軟骨細(xì)胞，利用過(guò)表達(dá)和基因沉默等實(shí)驗(yàn)技術(shù)進(jìn)一步闡明PNS對(duì)TLR4/NLRP3/Caspase－1信號(hào)通路介導(dǎo)軟骨細(xì)胞焦亡的作用。