王 丹

江蘇省鹽城市第二人民醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合肝病科 224000

原發(fā)性肝癌在臨床上十分常見，惡性程度較高，危及患者生命[1]。該病病因主要為乙型肝炎，乙型肝炎發(fā)病率極高，且發(fā)病較為隱匿，重視度不足，為原發(fā)性肝癌發(fā)病率居高不下的重要性原因。報(bào)道顯示，原發(fā)性肝癌發(fā)病期間腫瘤細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)免疫抑制，對(duì)Treg進(jìn)行上調(diào)，腫瘤免疫逃逸，影響預(yù)后[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，乙肝病毒DNA載量在評(píng)估乙型肝炎原發(fā)性肝癌疾病的發(fā)展中具有重要意義，且乙型肝炎原發(fā)性肝癌患者可能會(huì)誘導(dǎo)甚至加重細(xì)胞免疫功能紊亂，從而促使腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移，影響預(yù)后[3]。但目前，臨床關(guān)于乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者乙肝病毒DNA載量與免疫功能的關(guān)系報(bào)道較少，且不深入?；诖?，本文選擇我院收治的乙型肝炎原發(fā)性肝癌患者與健康體檢者進(jìn)行對(duì)比分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2022年2月我院收治的乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者60例(觀察組)，取同期健康體檢人員60例(對(duì)照組)，對(duì)照組：男33例、女27例，年齡30～77歲，平均年齡(53.50±9.21)歲，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)18～23，平均BMI 20.50±1.12；觀察組：男35例、女25例，年齡32～77歲，平均年齡(54.50±9.25)歲，BMI 19～22，平均BMI 20.50±1.10；兩組患者臨床資料具有同質(zhì)性(P>0.05)。診斷標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)《肝病診療指南》[4]，經(jīng)病理檢查確診為乙型肝炎性原發(fā)性肝癌。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者；年齡30～77歲；已簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝轉(zhuǎn)移癌、其他惡性腫瘤者；合并心、腦、血管疾??；合并局部感染/全身性感染者；近期使用免疫調(diào)節(jié)劑者；免疫功能障礙者；臨床資料不完整；依從性不佳者。

1.2 方法 獲得受試者知情同意情況下，保證無菌抽取2ml的EDTA抗凝血，混勻吸取100μl全血，使其混合于CD3+、CD4+、CD8+檢測(cè)試劑中，于37℃避光環(huán)境下，孵育15min。孵育后依次加入2ml溶血素，再次混勻、孵育，待液面清亮后應(yīng)用1ml/管BD鞘液，以1 500r/min轉(zhuǎn)速持續(xù)離心處理2遍，時(shí)間5min內(nèi)，以400μl BD鞘液重懸細(xì)胞。采用流式細(xì)胞儀(廠家：美國(guó)Becton Dicknson，型號(hào)：FACSCalibur)，對(duì)兩組研究對(duì)象CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群水平、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)含量進(jìn)行檢測(cè)，并計(jì)算CD4/CD8比值。以熒光定量PCR法，對(duì)兩組研究對(duì)象的乙肝病毒DNA載量進(jìn)行測(cè)定、對(duì)比。測(cè)定兩組受試對(duì)象TNM分期情況。

2 結(jié)果

2.1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群及Treg細(xì)胞含量對(duì)比 與對(duì)照組比較，觀察組CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值明顯更低，CD8+%水平、Treg細(xì)胞含量明顯更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群及Treg細(xì)胞含量對(duì)比

2.2 不同TNM分期患者乙肝病毒DNA載量、T細(xì)胞亞群免疫功能分析 60例乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者中TNM分期為Ⅱ期者28例、Ⅲ期者32例。相較于TNM分期為Ⅱ期的患者，Ⅲ期患者的乙肝病毒載量明顯更高，CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值更低，CD8+%、Treg細(xì)胞含量明顯更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同TNM分期患者乙肝病毒DNA載量、T細(xì)胞亞群免疫功能分析

2.3 乙肝病毒DNA載量與T細(xì)胞亞群免疫功能相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，乙肝病毒DNA載量與CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.789、-0.856、-0.812，P<0.05)，與CD8+%、Treg細(xì)胞呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.889、0.882，P<0.05)。見表3。

3 討論

近年來，原發(fā)性肝癌疾病發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)，該病的發(fā)生多與肝硬化、病毒性肝炎、化學(xué)致癌物質(zhì)等有關(guān)，患者常見肝區(qū)疼痛、消瘦、食欲減退、全身及消化道癥狀、肝大等，嚴(yán)重威脅患者生命安全[5]。報(bào)道認(rèn)為，原發(fā)性肝癌多是由于感染乙肝病毒后，若長(zhǎng)期處于慢性肝炎的狀態(tài)，則極易導(dǎo)致肝硬化，造成肝癌[6]?，F(xiàn)階段，乙型肝炎已經(jīng)發(fā)展為一個(gè)世界性的公共衛(wèi)生問題，且該疾病的發(fā)病率一直居高不下，大多數(shù)的情況下，乙型肝炎病毒并不會(huì)損害肝細(xì)胞，多經(jīng)由肝表面乙型肝炎病毒行免疫應(yīng)答，肝臟長(zhǎng)時(shí)間為慢性炎癥的狀態(tài)。近年來，報(bào)道指出乙肝病毒患者的DNA載量與其術(shù)后康復(fù)效果具有直接關(guān)系，且與疾病進(jìn)展、TNM分期具有一定相關(guān)性[7]。為進(jìn)一步探討乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者乙肝病毒DNA載量與免疫功能的關(guān)系，為臨床診斷及治療此病提供可靠的依據(jù)，本文選擇我院乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者與健康體檢者作為探討對(duì)象，進(jìn)行對(duì)比分析。

本文結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，觀察組CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值明顯更低，CD8+%、Treg細(xì)胞含量明顯更高。李富[8]在相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，觀察組患者CD4+%明顯更低，CD8+%、Treg細(xì)胞含量明顯更高，與本文結(jié)果具有一致性。相較于健康群體，乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者CD3+%、CD4+%、CD8+%、CD4/CD8比值等T細(xì)胞亞群、Treg細(xì)胞具有明顯的變化。分析原因可能為，肝癌微環(huán)境下的機(jī)體免疫狀態(tài)與肝癌的發(fā)生及發(fā)展具有直接關(guān)系，免疫相關(guān)細(xì)胞、細(xì)胞因子在肝癌發(fā)展的整個(gè)過程中具有重要作用，對(duì)于肝癌患者具有不良的影響。

CD3+是一種成熟的T細(xì)胞共同分化抗原，表達(dá)于所有成熟的T細(xì)胞表面。基于表面分化抗原的不同，可以分為CD4+、CD8+兩大種類，通過此兩大種類細(xì)胞亞群的表達(dá)量，有助于反映患者的機(jī)體免疫情況。其中CD4+細(xì)胞亞群于免疫系統(tǒng)中具有輔助調(diào)節(jié)的作用，CD8+會(huì)誘導(dǎo)形成CTL，CTL結(jié)合于特異性靶抗原后，會(huì)釋放穿孔素，破壞、誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡，最終可發(fā)揮抗腫瘤及抗病毒的作用。Treg為一種免疫抑制T細(xì)胞，可分泌多種細(xì)胞因子，抑制細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的成熟，從而抑制機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。研究結(jié)果進(jìn)一步提示，若乙肝患者感染HBV，淋巴細(xì)胞亞群的免疫功能會(huì)發(fā)生不同程度的受損情況，主要是由于乙肝病毒可經(jīng)由自身樹突狀細(xì)胞的成熟致使乙肝病毒特異性T淋巴細(xì)胞生存明顯減少，從而導(dǎo)致免疫功能顯著降低。

許怡等[9]報(bào)道顯示，乙肝患者病情進(jìn)展為肝癌后，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)量會(huì)顯著降低，提示乙肝肝癌患者細(xì)胞功能受損越嚴(yán)重，腫瘤細(xì)胞更易發(fā)生免疫逃逸，引發(fā)肝癌。本文結(jié)果顯示，相較于TNM分期為Ⅱ期的患者，Ⅲ期患者的CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值更低，CD8+%水平、Treg細(xì)胞明顯更高。這與許怡等報(bào)道具有一致性。但本文研究還發(fā)現(xiàn)，與Ⅱ期患者比較，Ⅲ期患者乙肝病毒DNA載量明顯更高(P<0.05)。數(shù)據(jù)表明，隨著患者病情的進(jìn)一步進(jìn)展，淋巴細(xì)胞免疫功能更易受損，TNM分期越高，乙肝病毒DNA載量亦越高。原因可能為，乙型肝炎性原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展期間，會(huì)產(chǎn)生大量的免疫抑制因子，此因子在降低外周血中CD3+、CD4+細(xì)胞含量方面具有重要作用，使CD8+細(xì)胞、Treg細(xì)胞含量明顯提高，損傷T淋巴細(xì)胞免疫功能。由此可見，乙肝病毒DNA載量增高可作為患者預(yù)后不良的有效預(yù)測(cè)因素[10]。

綜上所述，乙型肝炎性原發(fā)性肝癌患者乙肝病毒DNA含量與CD3+%、CD4+%、CD4/CD8比值呈負(fù)相關(guān)，與CD8+%、Treg細(xì)胞呈正相關(guān)，且TNM分期越高，乙肝病毒DNA載量越高，在對(duì)該病進(jìn)行診斷及治療中應(yīng)重點(diǎn)檢測(cè)其T細(xì)胞亞群免疫功能指標(biāo)，從而控制肝癌的進(jìn)展，延長(zhǎng)患者生存期。