陳瑞芬,黃麗芳，劉昊虹

韶關市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東 韶關 512000

地中海貧血簡稱為地貧，是一組遺傳性溶血性貧血疾病，該病廣泛分布于世界各地，東南亞為高發(fā)地區(qū)之一，而我國又以廣東、廣西和四川最為常見[1]。地貧患者的特異性臨床表現(xiàn)主要為進行性溶血性貧血、肝脾腫大、免疫力低下等。目前，臨床上雖然可通過造血干細胞移植對地貧患者進行治療，但是各類并發(fā)癥發(fā)生率比較高，嚴重影響治療的效果。地貧分為α地貧和β地貧，其中α地貧是由于α珠蛋白基因發(fā)生突變，導致肽鏈的生成不足或者完全缺如，引起血紅蛋白結(jié)構(gòu)和功能異常所導致的常染色體隱性遺傳性血紅蛋白疾病。該病輕重不一，靜止型的可完全無癥狀。標準型、中間型及血紅蛋白H病會導致患兒出現(xiàn)溶血性貧血，進而影響生長發(fā)育。重癥可引發(fā)胎兒致死性水腫，進而導致死胎或者流產(chǎn)。加強產(chǎn)前遺傳咨詢、婚前篩查，對于防止中重癥地貧患兒出生的有效措施?；蛟\斷是地貧確診的金標準，但是耗時較長，且價格高昂，一般基層醫(yī)院無法推廣應用。因此，對于地貧患兒重在預防，才能從源頭上避免地貧患兒的出生[2-3]。本研究旨在探究韶關市孕產(chǎn)婦α地貧基因檢測結(jié)果及其血液學特征，為產(chǎn)前地貧篩查以及基因診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019 年10 月至2021 年10月在韶關市第一人民醫(yī)院就診的2 200例孕產(chǎn)婦展開研究。納入標準：(1)均為單胎產(chǎn)婦；(2)病情穩(wěn)定、意識清楚。排除標準：(1)急性感染、慢性失血及近3個月內(nèi)服用影響血細胞參數(shù)藥物產(chǎn)婦；(2)存在溝通障礙產(chǎn)婦；(3)合并嚴重的肝腎功能不全者。2 200 例產(chǎn)婦年齡21～34 歲，平均(26.3±4.5)歲；孕周12～17 周，平均(14.7±1.4)周。本研究經(jīng)醫(yī)院科教科審核批準并備案，所有患者均知情并簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 地貧篩查 采用美國海倫娜全自動電泳分析儀SPIFE-3000 及其配套試劑檢測孕產(chǎn)婦血紅蛋白A2 (HBA2)水平，相關操作嚴格參考儀器的說明書。

1.2.2 血液學檢測 采用Sysmex XT-4000i 血球分析儀及配套試劑檢測孕產(chǎn)婦的紅細胞平均體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)及平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)。

1.2.3 基因診斷 采用地貧基因檢測試劑盒(深圳亞能生物技術有限公司生產(chǎn))檢測基因，選擇廣東珠海黑馬Hema9600PCR 擴增儀擴增基因，同時混合PCR 產(chǎn)物。選擇Powerpac Basic，Bio-Rad Laboratories，Inc.進行電泳。在恒溫雜交儀[亞能生物技術(深圳)有限公司生產(chǎn)，型號：YN-H16]，標記探針薄膜，并完成雜交，判斷分子雜交反應及顯色反應。試劑盒可對3 種缺失型α-地貧基因進行檢測，其中包括東南亞型缺失(--SEA)、右側(cè)缺失(-α3.7)以及左側(cè)缺失(-α4.2)。

1.3 評價標準 將紅細胞平均體積(MCV)＜82 fL、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)＜27 fg 或HBA2＜2.5%或HBA2＞3.5%作為初篩陽性，以基因診斷作為金標準[4]。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS18.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標準差()表示，兩兩比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，采用受試者工作特征曲線(ROC)分析血液學指標對α地貧的診斷價值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 孕產(chǎn)婦產(chǎn)前篩查結(jié)果 血液學和血紅蛋白電泳篩查結(jié)果顯示，2 200例孕產(chǎn)婦初篩陽性患者為408例，陽性率為18.5%?；驒z測后確診為188例，檢出率為8.5%，其中包含單純α地貧基因缺失95例，占50.5%。

2.2 地貧基因檢測結(jié)果 188例確診地貧孕產(chǎn)婦基因檢測共檢出5 種α地貧基因缺失類型，11種β地貧基因突變類型和7 種α/β復合型地貧基因類型。其中95例α地貧基因缺失類型中東南亞型缺失(--SEA) 76例，占80.0%，占比最高，見表1。

表1 α地貧基因檢測結(jié)果Table 1 Detection results of α-thalassemia gene

2.3 基因檢測結(jié)果陽性與陰性孕產(chǎn)婦的血液學指標比較 基因檢測顯示陽性孕產(chǎn)婦的MCV、MCH及MCHC 水平明顯低于檢測結(jié)果陰性孕產(chǎn)婦，HBA2水平則明顯高于檢測結(jié)果陰性孕產(chǎn)婦，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 基因檢測結(jié)果陽性與陰性孕產(chǎn)婦血液學指標比較()Table 2 Comparison of hematological indexes of pregnant and lying-in women with positive and negative gene detection results()

表2 基因檢測結(jié)果陽性與陰性孕產(chǎn)婦血液學指標比較()Table 2 Comparison of hematological indexes of pregnant and lying-in women with positive and negative gene detection results()

2.4 血液學指標對α地貧的ROC 曲線診斷模型 ROC 診斷模型顯示，MCV 診斷靈敏度為0.873、特異度為0.718，MCH 診斷靈敏度為0.897、特異度為0.743，MCHC 診斷靈敏度為0.808、特異度為0.759，HBA2診斷靈敏度為0.512、特異度為0.676，見圖1。

圖1 MCV、MCH、MCHC以及HBA2診斷α地貧的ROCFigure 1 ROC of MCV,MCH,MCHC,and HBA2 in diagnosis of α-thalassemia

3 討論

地貧是因紅細胞內(nèi)血紅蛋白數(shù)量及質(zhì)量異常，導致紅細胞壽命縮短引起的一種先天性貧血疾病。目前，臨床中尚無根治方法，僅能通過輸注濃縮紅細胞或間斷輸血的方式補充體內(nèi)紅細胞，糾正患者的貧血狀況。地貧患兒由于進行性加重的血管外溶血性貧血和過度骨性造血，會導致機體缺氧，營養(yǎng)成分缺乏，機體免疫力低下，易發(fā)生各類感染性疾病[5-6]。此外，長期輸血的鐵沉積也會帶來多臟器衰竭。對孕產(chǎn)婦而言，若胎兒是重癥α地貧，會導致胎兒基因缺陷而先天發(fā)育不良，很可能胎死腹中，即使存活下來也需要長期輸血或接受骨髓移植。因此，孕產(chǎn)婦產(chǎn)前地貧篩查和基因診斷對改善妊娠結(jié)局十分重要[7-8]。

基因診斷雖然是α地貧的診斷的金標準，但價格昂貴且耗時較長，故目前尚未廣泛應用于臨床。而血液學指標在α地貧篩查應用中，價格低廉、方法簡單。因此，常作為胎兒α地貧篩查的首選方法[9-11]。臨床研究顯示，針對血液學檢測MCV、MCH偏低的孕婦展開基因檢測，有助于簡化診斷過程，提高患兒的確診率[12-13]。本研究中，2 200 例孕產(chǎn)婦初篩陽性408 例，陽性率為18.5%。經(jīng)地貧基因檢測確診188例，檢出率為8.5%，其中單純α地貧基因缺失95 例，占50.5%，單純β地貧基因突變84 例，占44.7%，α/β復合型地貧9 例，占4.8%。而對188 例確診地貧孕產(chǎn)婦基因檢測結(jié)果顯示，共檢出5種α地貧基因缺失類型，11種β地貧基因突變類型和7種α/β復合型地貧基因類型。其中95例α地貧基因缺失類型中東南亞型缺失(--SEA)占比最高，為76 例(80.0%)，占比最高。研究結(jié)果顯示本市α地貧和β地貧攜帶率較高，而α地貧以缺失型為主。因此，了解本地地貧遺傳特點及基因突變類型后，有助于針對性開展地貧產(chǎn)前教育，提高產(chǎn)前診斷價值，有效避免中重癥地貧患兒的出生。本研究顯示，地貧基因檢測結(jié)果陽性孕產(chǎn)婦的MCV、MCH 及MCHC 水平均低于檢測結(jié)果陰性的孕產(chǎn)婦，HBA2水平高于檢測結(jié)果陰性孕產(chǎn)婦，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。對α地貧基因缺失孕產(chǎn)婦血液學指標進行多項分析后建立ROC 診斷模型顯示，MCV 診斷靈敏度為0.873、特異度為0.718，MCH診斷靈敏度為0.897、特異度為0.743，MCHC診斷靈敏度為0.808、特異度為0.759，HBA2診斷靈敏度為0.512、特異度為0.676。目前，已知的α地貧基因型至少有77種。但是為了避免中、重型地貧患兒出生，即使夫妻一方血液學指標或HBA2篩查為陰性，仍需進一步進行地貧基因診斷[14-15]。

綜上所述，α地貧最常見基因缺失類型為東南亞型缺失(--SEA)，血液學指標可作為α地貧的聯(lián)合篩查指標。