劉易偉，陳 萍，卿云光，耿 寧，黃 興

（黔南州檢驗檢測院，貴州都勻 558000）

刺梨（Rosa roxburghii）屬薔薇科，又名山王果、刺玫果、刺菠蘿、文先果等。刺梨味酸甜、肉質(zhì)肥厚，果實富含黃酮類化合物、多糖、多種維生素、胡蘿卜素、多種氨基酸和礦物質(zhì)元素等[1-4]。刺梨具有抗氧化、抗衰老；抗腫瘤、抗癌；解毒、護肝、抑菌、降血糖作用[5-7]。刺梨原汁是用新鮮刺梨果實壓榨而得的漿汁，刺梨原汁能促進胃液分泌，對平滑肌收縮運動具有明顯的抑制作用，對免疫功能有增強作用[8]。有動物實驗表明，刺梨原汁對動脈粥樣硬化有降低作用[9]?，F(xiàn)如今，人們對食品的要求越來越高，更加考慮食品的營養(yǎng)價值。刺梨因其豐富的營養(yǎng)價值和藥用價值，在全國范圍內(nèi)成為研究的焦點，更是貴州省重點發(fā)展的農(nóng)產(chǎn)品，榨汁不僅濃縮了刺梨的營養(yǎng)，豐富了口感，還能作為刺梨產(chǎn)品深加工的原材料，同時能避免由于刺梨鮮果的保存不易帶來的營養(yǎng)流失和浪費。

黃酮類化合物是刺梨原汁中一種重要的營養(yǎng)物質(zhì)，常用于測定總黃酮的方法有分光光度法[10-12]、液相色譜法[13-14]、熒光法[15]等。測定總黃酮的方法常用分光光度法和液相色譜法，液相色譜法主要應用于單一黃酮化合物的測定[16]。分光光度法操作簡單，測定成本較低，可直接吸取樣液進行試驗，大大簡化了提取步驟，節(jié)省了樣品處理的時間，平均回收率達到100.3%[17]。刺梨原汁中總黃酮的含量相對較高，超過了茶葉[10]、洋蔥[18-19]等，刺梨原汁為刺梨鮮果榨汁所得，總黃酮含量高于刺梨鮮果，但活性物質(zhì)易受溫度影響，因此采用分光光度計檢測不同溫度下刺梨原汁的總黃酮含量變化，研究溫度以及貯藏時間對刺梨原汁的總黃酮含量的具體影響，為今后研究刺梨原汁及其他刺梨產(chǎn)品的總黃酮檢測提供理論基礎，也為刺梨產(chǎn)品后續(xù)的開發(fā)研究提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

刺梨原汁（包裝方式：棕色玻璃瓶灌裝），龍里產(chǎn)區(qū)（樣品1）；刺梨原汁，貴定產(chǎn)區(qū)（樣品2）；刺梨原汁，獨山產(chǎn)區(qū)（樣品3）；甲醇，分析純；乙醇，分析純；蘆丁標準品（含量為92.4%）購于中國食品藥品檢定研究院。

TU-1901紫外可見分風光光度計，北京普析通用儀器有限公司；BS224S電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；SC-66HL冰箱，海爾；SPX-250BⅢ恒溫培養(yǎng)箱，天津市泰斯特儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品處理

將樣品分別放置于-24 ℃、-14 ℃、-7 ℃、4 ℃、20 ℃、30 ℃下儲存，放置前測定一次，之后每月進行一次總黃酮的測定，共測定7次。檢測方法參考耿寧[17]、T/GZSX 081—2021[20]中的測定方法，以蘆丁標準溶液為對照，甲醇溶液調(diào)零，1 cm比色皿，360 nm處進行吸光度的測定。

1.2.2 標準溶液的配制

精確稱取蘆丁標準品108.4 mg于100 mL容量瓶內(nèi)，用甲醇定容至刻度，得到蘆丁儲備液 1.002 mg·mL-1的蘆丁儲備溶液，分別稀釋至 1.00 μg·mL-1、2.00 μg·mL-1、3.00 μg·mL-1、4.00 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1和6.00 μg·mL-1蘆丁標準溶液，以甲醇溶液為零點。

1.2.3 總黃酮的測定

稱取1 g（精確至0.01 g）的樣品（若為冷凍樣品需提前解凍），用乙醇定容至25 mL，搖勻后，超聲提取20 min，室溫靜置30 min，吸取1 mL上清液于25 mL比色管中，用甲醇定容后，用進行分光光度計測定。每個樣品做3個平行樣，求平均值。

2 結(jié)果與討論

2.1 標準曲線的繪制

將配制好的不同濃度的蘆丁標準溶液進行測定，并制得標準曲線，得到回歸方程，見表1。

表1 各月蘆丁標準曲線及相關系數(shù)

2.2 刺梨原汁中總黃酮含量測定結(jié)果

應用分光光度法檢測，并對照標準曲線，按2.1所述公式計算可得到各個月不同溫度下刺梨原汁總黃酮的含量，結(jié)果見圖1～3。

圖1 樣品1刺梨原汁中總黃酮含量的測定結(jié)果

圖2 樣品2刺梨原汁中總黃酮含量的測定結(jié)果

由圖1～圖3可看出，在貯藏過程中總黃酮的變化趨勢一致，隨著貯藏時間的增加，總黃酮含量都呈下降趨勢，且貯藏溫度不同，下降速度也不同。隨著貯藏溫度的升高，總黃酮含量降低程度更加明顯，可以看出貯藏溫度對刺梨原汁的總黃酮存在一定的影響。以較低的溫度貯藏，能夠更好地保持刺梨原汁中的總黃酮的含量。以樣品1為例，-24 ℃下貯藏時間為6個月時的總黃酮含量與4 ℃下貯藏時間為4個月時的含量基本接近；以樣品2為例，4 ℃貯藏6個月和20 ℃、30 ℃貯藏3個月時的總黃酮含量相近，說明在低溫的條件下，總黃酮的降解速率更低。貯藏溫度在-24 ℃、-14 ℃和-7 ℃時，總黃酮含量的降低速率相對緩慢，4 ℃居中，20 ℃和 30 ℃條件下，總黃酮含量下降較快。隨著貯藏時間的增加，總黃酮含量逐漸降低，特別是在較高溫度的情況下，總黃酮含量降低更加明顯。在半年的儲存過程中，總黃酮都有一定程度的降解，貯藏溫度越低，總黃酮含量相對越穩(wěn)定，更有利于刺梨原汁中黃酮類化合物的活性保持。

圖3 樣品3刺梨原汁中總黃酮含量的測定結(jié)果

3 結(jié)論

刺梨原汁中含有豐富的黃酮類化合物，黃酮類化合物具有良好的清除自由基、抗氧化、抗衰老作用[21]，總黃酮含量受溫度影響較大，在較高貯藏溫度下，總黃酮含量降低較快，只有在較低的溫度條件下，總黃酮的含量下降較為緩慢。家庭冰箱常用 4 ℃保存食物，4 ℃下刺梨原汁的總黃酮含量在短時間內(nèi)相對穩(wěn)定，可以作為家庭保存刺梨原汁的推薦溫度，而企業(yè)在大量儲存刺梨原汁時，可以冷凍保存，且儲存時間不宜過長。本實驗采用分光光度法對刺梨原汁中總黃酮含量進行測定，簡化了操作步驟，減少耗材的使用，無需大型檢驗設備即可完成檢測，具有更高的可行性，更適合微小企業(yè)進行品質(zhì)分析。刺梨原汁因其豐富的營養(yǎng)價值，正越來越受到人們的關注，通過研究其總黃酮含量在不同溫度和貯藏條件下的變化，為刺梨原汁的銷售和儲運提供理論依據(jù)。