張志鵬，徐 杰，劉佩儀，黃夢(mèng)婷，鐘志奎，程學(xué)仁

基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑的鮮地黃配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張志鵬1，徐 杰1，劉佩儀1，黃夢(mèng)婷1，鐘志奎1，程學(xué)仁2*

1. 廣東一方制藥有限公司，廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 佛山 528244 2. 中國(guó)中藥控股有限公司，廣東 佛山 528300

建立基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑的鮮地黃配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為鮮地黃配方顆粒質(zhì)量控制提供參考。根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》，制備25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑，測(cè)定各批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率、指標(biāo)成分梓醇和地黃苷D的含量，構(gòu)建能全面表征鮮地黃環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分和苯乙醇苷類(lèi)成分的UPLC特征圖譜；基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率、指標(biāo)成分含量、特征圖譜的一致性，制備3批鮮地黃配方顆粒，驗(yàn)證制定標(biāo)準(zhǔn)的合理性。鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率實(shí)測(cè)范圍為13.93%～20.09%；梓醇和地黃苷D的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為36.14～73.37、2.96～5.33 mg/g；環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分特征圖譜共標(biāo)定了10個(gè)共有峰，指認(rèn)峰3、4、6分別為梓醇、地黃苷D、益母草苷；苯乙醇苷類(lèi)成分特征圖譜共標(biāo)定了8個(gè)共有峰，指認(rèn)峰1、4、5、6分別為洋地黃葉苷C、毛蕊花糖苷、焦地黃苯乙醇苷B1、異毛蕊花糖苷；3批鮮地黃配方顆粒出膏率、指標(biāo)成分含量、特征圖譜均與同批次藥材制備的標(biāo)準(zhǔn)湯劑接近，且均在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)。該研究建立的基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑的鮮地黃配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)合理、穩(wěn)定可行，可為鮮地黃配方顆粒的質(zhì)量控制提供參考。

鮮地黃；標(biāo)準(zhǔn)湯劑；配方顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；梓醇；地黃苷D；益母草苷；洋地黃葉苷C；毛蕊花糖苷；焦地黃苯乙醇苷B1；異毛蕊花糖苷

鮮地黃為玄參科植物地黃Libosch.的新鮮塊根，鮮用，具有清熱生津、涼血、止血的功效，主治熱病傷陰、舌絳煩渴、溫毒發(fā)斑、吐血、衄血、咽喉腫痛等癥[1]。鮮地黃始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，用于治療高熱急證和血熱妄行、吐血衄血[2]。近代，鮮地黃的應(yīng)用仍較為廣泛，在《中國(guó)藥典》1963～2020年版中均有收載[3]。研究表明，鮮地黃主要含有環(huán)烯醚萜苷類(lèi)和苯乙醇苷類(lèi)成分，包括梓醇、地黃苷D、桃葉珊瑚苷、益母草苷、京尼平苷、焦地黃苯乙醇苷A1、毛蕊花糖苷、焦地黃苯乙醇苷B1、異毛蕊花糖苷等[4-6]。相比于生地黃，鮮地黃在消炎抗菌、涼血止血以及免疫作用等方面表現(xiàn)出更為顯著的療效[7-9]。

中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑是以中醫(yī)理論為指導(dǎo)、臨床應(yīng)用為基礎(chǔ)，參考現(xiàn)代提取方法，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化工藝制備而成的單味中藥飲片水煎劑，用于規(guī)范和標(biāo)化臨床用藥[10]?！吨兴幣浞筋w粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》規(guī)定，中藥配方顆粒所有藥學(xué)研究，包括工藝參數(shù)確定、質(zhì)控方法和指標(biāo)選擇、限度制定等，均應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行對(duì)比研究。2021年2月，國(guó)家藥監(jiān)局等4部門(mén)聯(lián)合發(fā)布了《關(guān)于結(jié)束中藥配方顆粒試點(diǎn)工作的公告》，規(guī)定自2021年11月1日起，所有不具有國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)或省級(jí)藥品監(jiān)督管理部門(mén)制定標(biāo)準(zhǔn)的中藥配方顆粒均不得上市銷(xiāo)售。因此，為保證鮮地黃配方顆粒的市場(chǎng)供應(yīng)，建立鮮地黃配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已迫在眉睫。本研究根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》，采集了25批不同產(chǎn)地的鮮地黃藥材，制備標(biāo)準(zhǔn)湯劑，并以與標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率、指標(biāo)成分含量、特征圖譜3大指標(biāo)的一致性為表征，建立了鮮地黃配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以期為鮮地黃配方顆粒及其他新型飲片的質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters Acquity型超高效液相色譜系統(tǒng)，包括真空脫氣機(jī)、二元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、TUV檢測(cè)器、Empower數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，美國(guó)Waters公司；ME203E型萬(wàn)分之一分析天平、XP26型百萬(wàn)分之一天平，美國(guó)Mettler Toledo公司；TRL-0.5型真空冷凍干燥機(jī)，大連雙瑞科技有限公司；DN1000型多功能提取罐、NS200型單效濃縮器，江蘇華泰重工裝備有限公司；SODA-45型噴霧干燥機(jī)，上海大川原干燥設(shè)備有限公司；LGS20型干法制粒機(jī)，南京迦南制藥設(shè)備有限公司；MiliQ Direct 8型超純水機(jī)，德國(guó)默克密理博公司。

1.2 材料

對(duì)照品梓醇（批號(hào)110808-201711，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.6%）、毛蕊花糖苷（批號(hào)111530-201914，質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.2%），中國(guó)食品藥品檢定研究院；對(duì)照品地黃苷D（批號(hào)ST11190120，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%），上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司；對(duì)照品益母草苷（批號(hào)17122601，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.62%），成都普菲德生物技術(shù)有限公司；對(duì)照品洋地黃葉苷C（批號(hào)DST201109-057，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%）、焦地黃苯乙醇苷B1（批號(hào)DST201203-071，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%），成都樂(lè)美天醫(yī)藥科技有限公司；對(duì)照品異毛蕊花糖苷（批號(hào)PS0003-0020，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%），成都普思生物科技股份有限公司。麥芽糊精（批號(hào)FH1905002），中糧生化能源（公主嶺）有限公司；色譜級(jí)甲醇、乙腈，德國(guó)默克股份兩合公司；色譜純磷酸，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；水為超純水，其余試劑均為分析純。

25批鮮地黃藥材（Y1～Y25）均經(jīng)廣東一方制藥有限公司孫冬梅主任中藥師鑒定，為玄參科地黃屬植物地黃Libosch.的新鮮塊根，來(lái)源信息見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)湯劑與配方顆粒的制備

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)湯劑 根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》，稱取鮮地黃飲片100 g，置電陶瓷壺中，加水煎煮2次；第1次加9倍量水，浸泡30 min，武火煮沸后，改文火保持微沸，繼續(xù)煎煮30 min，濾過(guò)；第2次加7倍量水，武火煮沸后，改文火保持微沸，繼續(xù)煎煮25 min，濾過(guò)；合并2次濾液，低溫減壓濃縮至投料量（清膏-投料量1∶1），在磁力攪拌下，分裝至10 mL西林瓶中，每瓶分裝約2 mL，分裝完畢后轉(zhuǎn)移至真空冷凍干燥機(jī)中凍干，即得標(biāo)準(zhǔn)湯劑。

表1 25批鮮地黃藥材來(lái)源信息

2.1.2 配方顆粒 取鮮地黃飲片5000 g，加水煎煮2次；第1次加9倍量水，浸泡30 min，武火煮沸后，改文火保持微沸，繼續(xù)煎煮30 min，濾過(guò)；第2次加7倍量水，武火煮沸后，改文火保持微沸，繼續(xù)煎煮25 min，濾過(guò)；合并2次并濾液，濾液減壓濃縮成相對(duì)密度為1.04～1.08 g/cm3（80 ℃）的清膏，加麥芽糊精適量，混勻，噴霧干燥（進(jìn)風(fēng)溫度175～185 ℃，出風(fēng)溫度85～95 ℃），得干浸膏粉；再加麥芽糊精適量，混勻，干法制粒（壓輥壓力15～20 MPa，輸料轉(zhuǎn)速為20～45 r/min，壓輪轉(zhuǎn)速3.5～5.5 r/min），制成1000 g，即得配方顆粒。

2.2 出膏率測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率以凍干粉量/飲片量計(jì)；配方顆粒出膏率以干浸膏粉量（扣除輔料）/投料量計(jì)。結(jié)果（表2）顯示，25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S1～S25）的出膏率為13.93%～20.09%，平均值為（17.23±1.68）%；3批配方顆粒（C20～C22）的出膏率分別為18.03%、18.15%、19.07%，平均值為（18.42±0.57）%。根據(jù)25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率的浮動(dòng)范圍以及3批配方顆粒出膏率的實(shí)際情況，鮮地黃配方顆粒制成量（制成的配方顆粒總量/投料量）擬定為20.0%，即每1 g配方顆粒相當(dāng)于飲片5.0 g。

2.3 梓醇定量測(cè)定

2.3.1 供試品溶液的制備 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑/配方顆粒適量，研細(xì)，取約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W、頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，濃縮至近干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

表2 25批標(biāo)準(zhǔn)湯劑及3批配方顆粒出膏率

S1～S25為25批藥材（Y1～Y25）制備的標(biāo)準(zhǔn)湯劑，C20～C22為S20～S22同批次藥材（Y20～Y22）制備的配方顆粒，S20～S22下稱隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑

S1—S25 are standard decoction prepared from 25 batches of medicinal materials (Y1—Y25), C20—C22 are formula particles prepared from the same batch of medicinal materials (Y20—Y22) in S20—S22, and S20—S22 are hereinafter referred to as accompanying standard decoction

2.3.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱取梓醇對(duì)照品5.285 mg，加流動(dòng)相溶解，并定容至5 mL，制成質(zhì)量濃度為1 052.772 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，搖勻，備用。

2.3.3 色譜條件 采用Waters Acquity HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 mm）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（1∶99）；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量2 μL。梓醇對(duì)照品溶液以及鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液色譜圖如圖1所示。

圖1 鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑(A)和梓醇對(duì)照品(B)的UPLC圖

2.3.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取梓醇對(duì)照品儲(chǔ)備液0.10、0.25、0.50、1.00、2.50 mL，置于5 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，制成含梓醇21.055、52.639、105.277、210.554、526.386 μg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取各質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以梓醇對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程＝ 1 573.3－7 311.9，2＝0.999 4，結(jié)果表明梓醇在21.055～526.386 μg/mL與峰面積線性關(guān)系良好。

2.3.5 精密度考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得到梓醇峰面積的RSD為0.70%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件，分別在制備后0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到梓醇峰面積的RSD為1.21%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7 重復(fù)性考察 分別取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品6份，按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到梓醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD為2.17%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收率考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）樣品9份，每份0.05 g，精密稱定，置于錐形瓶中，平均分為3組。分別向3組錐形瓶中精密加入梓醇對(duì)照品（梓醇對(duì)照品加入量與所取樣品中梓醇成分含量之比控制在0.5∶1、1∶1、1.5∶1），按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算梓醇得平均加樣回收率為101.95%，RSD為2.55%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

2.3.9 梓醇定量測(cè)定 取25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品，分別按“2.3.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3?？梢?jiàn)，25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑中梓醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36.14～73.37 mg/g，平均值為（52.83±8.79）mg/g；3批配方顆粒中梓醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為42.65、39.79、38.66 mg/g，稍低于3批隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑按制成量20.0%折算后的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

表3 25批標(biāo)準(zhǔn)湯劑指標(biāo)成分含量測(cè)定結(jié)果

2.4 地黃苷D定量測(cè)定

2.4.1 供試品溶液的制備 除殘?jiān)谩?.4.3”項(xiàng)下流動(dòng)相溶解并定容外，其他操作同“2.3.1”項(xiàng)方法。

2.4.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱取地黃苷D對(duì)照品1.444 mg，加流動(dòng)相溶解并定容至5 mL，制成質(zhì)量濃度為283.024 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，搖勻，備用。

2.4.3 色譜條件 采用Waters Acquity HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 mm）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水溶液（5∶95），檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm；體積流量0.3 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量2 μL。地黃苷D對(duì)照品溶液以及鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液色譜圖如圖2所示。

圖2 鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑(A)和地黃苷D對(duì)照品(B)的UPLC圖

2.4.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取地黃苷D對(duì)照品儲(chǔ)備液0.10、0.25、0.50、1.00、2.50 mL，置于5 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，制成含地黃苷D 5.660、14.151、28.302、56.605、141.512 μg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取各質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以地黃苷D對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程＝2 811.3－3 560.3，2＝0.999 4，結(jié)果表明，地黃苷D在5.661～141.512 μg/mL與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4.5 精密度考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得到地黃苷D峰面積的RSD為0.43%，表明儀器精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件，分別在制備后0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到地黃苷D峰面積的RSD為0.83%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.7 重復(fù)性考察 分別取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品6份，按“2.4.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到地黃苷D質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD為1.39%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.8 加樣回收率考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品9份，每份0.05 g，精密稱定，置于錐形瓶中，平均分為3組。分別向3組錐形瓶中精密加入地黃苷D對(duì)照品（地黃苷D對(duì)照品加入量與所取供試品中地黃苷D成分含量之比控制在0.5∶1、1∶1、1.5∶1），按“2.4.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得地黃苷D的平均加樣回收率為101.92%，RSD為2.55%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

2.4.9 地黃苷D定量測(cè)定 取25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品，分別按“2.4.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑中地黃苷D質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.96～5.33 mg/g，平均值為（3.73±0.57）mg/g；3批配方顆粒中地黃苷D質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為3.15、3.26、3.16 mg/g，與3批隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑按制成量20.0%折算后的質(zhì)量分?jǐn)?shù)基本一致。

2.5 環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分特征圖譜建立

2.5.1 供試品溶液的制備 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑/配方顆粒適量，研細(xì)，取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W、頻率45 kHz）60 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，濃縮至近干，殘?jiān)?.1%磷酸水溶液溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加0.1%磷酸水溶液至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取梓醇、地黃苷D、益母草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加0.1%磷酸水溶液溶解并定容，制成混合對(duì)照品溶液。

2.5.3 色譜條件 采用Waters Acquity HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 mm）色譜柱；以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫：0～5 min，100% 0.1%磷酸水溶液；5～7 min，0～5%乙腈；7～10 min，5%乙腈；10～16 min，5%～11%乙腈；16～18 min，11%～16%乙腈；18～35 min，16%～30%乙腈；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm；體積流量0.3 mL/min；進(jìn)樣量2 μL。

2.5.4 精密度考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品溶液，按“2.5.3”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，以4號(hào)地黃苷D色譜峰為參照峰（S，相比于梓醇和益母草苷，4號(hào)峰指認(rèn)為地黃苷D，保留時(shí)間和峰面積居中，且作為環(huán)烯醚萜三糖苷，在量值傳遞過(guò)程中較為穩(wěn)定[11-12]，故作為參照峰），計(jì)算得各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的RSD均小于4%，表明儀器的精密度良好。

2.5.5 穩(wěn)定性考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品溶液，按“2.5.3”項(xiàng)下色譜條件，分別在樣品制備后的0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算得各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的RSD均小于3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.6 重復(fù)性考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）適量，按“2.5.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.5.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的RSD均小于4%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.7 特征圖譜的建立及共有峰的確定 取25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S1～S25），按照“2.5.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.5.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，計(jì)算平均值，結(jié)果見(jiàn)表4。

將各批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）”軟件進(jìn)行處理，建立鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑的對(duì)照特征圖譜（R），結(jié)果如圖3所示。計(jì)算相似度，25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S1～S25）與R的相似度分別為0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.998、1.000、0.999、0.997、0.999、0.995、0.998、1.000、0.998、0.999、0.994、1.000、1.000、0.999、0.999、0.998、0.998、0.993，均大于0.99，表明建立的特征圖譜檢測(cè)方法適應(yīng)性良好，符合標(biāo)準(zhǔn)湯劑的要求。建立的特征圖譜共標(biāo)定了10個(gè)共有峰，通過(guò)對(duì)照品比對(duì)，對(duì)峰3（梓醇）、4（地黃苷D）、6（益母草苷）進(jìn)行了指認(rèn)，結(jié)果如圖4所示。

取3批鮮地黃配方顆粒（C20～C22），按照“2.5.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.5.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖5。記錄各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果見(jiàn)表5、6。結(jié)果表明，3批配方顆粒特征圖譜均呈現(xiàn)與R相同的10個(gè)特征峰，且各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積與隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑基本一致。

表4 共有峰相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積均值(環(huán)烯醚萜苷類(lèi))

圖3 25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC特征圖譜(環(huán)烯醚萜苷類(lèi))

3-梓醇 4-地黃苷D 6-益母草苷

圖5 3批鮮地黃配方顆粒與隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑的UPLC特征圖譜及對(duì)照特征圖譜(R) (環(huán)烯醚萜苷類(lèi))

表5 3批鮮地黃配方顆粒與隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜相對(duì)保留時(shí)間比較(環(huán)烯醚萜苷類(lèi))

表6 3批鮮地黃配方顆粒與隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜相對(duì)峰面積比較(環(huán)烯醚萜苷類(lèi))

2.6 苯乙醇苷類(lèi)成分特征圖譜建立

2.6.1 供試品溶液制備 取標(biāo)準(zhǔn)湯劑/配方顆粒適量，研細(xì)，取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%甲醇20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250 W、頻率40 kHz）20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用30%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.6.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取洋地黃葉苷C、毛蕊花糖苷、焦地黃苯乙醇苷B1、異毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定容，制成混合對(duì)照品溶液。

2.6.3 色譜條件 采用Waters Acquity HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 mm）色譜柱；以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫：0～3 min，0～16%乙腈；3～10 min，16%～17.5%乙腈；10～20 min，17.5%～21%乙腈；20～22 min，21%～26%乙腈；22～27 min，26%～30%乙腈；27～30 min，30%乙腈；柱溫35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm；體積流量0.3 mL/min；進(jìn)樣量4 μL。

2.6.4 精密度考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品溶液，按“2.6.3”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，以5號(hào)焦地黃苯乙醇苷B1色譜峰為參照峰［S，指認(rèn)的4個(gè)特征峰均為苯乙醇苷類(lèi)成分，洋地黃葉苷C出峰時(shí)間較早，與峰8相距較遠(yuǎn)，不宜作為參照峰；峰4和峰6為毛蕊花糖苷和異毛蕊花糖苷，受熱會(huì)相互轉(zhuǎn)化，是熱敏性成分[13-14]，不宜作為參照峰；峰5（焦地黃苯乙醇苷B1）保留時(shí)間居中，性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，故選擇為參照峰］，計(jì)算得各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的RSD值均小于4%，表明儀器的精密度良好。

2.6.5 穩(wěn)定性考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）供試品溶液，按“2.6.3”項(xiàng)下色譜條件，分別在樣品制備后的0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算得各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的RSD均小于4%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.6 重復(fù)性考察 取鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S3）適量，按“2.6.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.6.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積的RSD均小于4%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6.7 特征圖譜的建立及共有峰的確定 取25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S1～S25），按照“2.6.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.6.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，計(jì)算平均值，結(jié)果見(jiàn)表7。

將各批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）”軟件進(jìn)行處理，建立鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑R，結(jié)果如圖6所示。計(jì)算相似度，25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑（S1～S25）與R的相似度分別為0.975、0.978、0.978、0.994、0.976、0.937、0.943、0.887、0.873、0.890、0.948、0.958、0.985、0.969、0.974、0.933、0.954、0.934、0.895、0.894、0.975、0.852、0.837、0.901、0.847，均大于0.83，表明建立的特征圖譜檢測(cè)方法適應(yīng)性良好，符合標(biāo)準(zhǔn)湯劑的要求。

建立的特征圖譜共標(biāo)定了8個(gè)共有峰，通過(guò)對(duì)照品比對(duì)，對(duì)峰1（洋地黃葉苷C）、4（毛蕊花糖苷）、5（焦地黃苯乙醇苷B1）、6（異毛蕊花糖苷）進(jìn)行了指認(rèn)，結(jié)果如圖7所示。

表7 共有峰相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積均值(苯乙醇苷類(lèi))

圖6 25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC特征圖譜(苯乙醇苷類(lèi))

取3批鮮地黃配方顆粒（C20～C22），按照“2.6.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.6.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖8。記錄各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，見(jiàn)表8、9。結(jié)果表明，3批配方顆粒特征圖譜均呈現(xiàn)與對(duì)照特征圖譜相同的8個(gè)特征峰，且各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積與隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑基本一致。

1-洋地黃葉苷C 4-毛蕊花糖苷 5-焦地黃苯乙醇苷B1 6-異毛蕊花糖苷

圖8 3批鮮地黃配方顆粒與隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑的UPLC特征圖譜及對(duì)照特征圖譜(R) (苯乙醇苷類(lèi))

表8 3批鮮地黃配方顆粒與隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜相對(duì)保留時(shí)間比較(苯乙醇苷類(lèi))

表9 3批鮮地黃配方顆粒與隨行標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜相對(duì)峰面積比較(苯乙醇苷類(lèi))

3 討論

3.1 出膏率范圍的確定

《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》標(biāo)準(zhǔn)湯劑的表征與應(yīng)用項(xiàng)下建議，以干膏粉計(jì)算浸膏得率及標(biāo)準(zhǔn)偏差，以均值加減3倍SD（或均值的70%～130%）為出膏率的允許范圍。25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率平均值為（17.19±1.57）%。若鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率取均值±3倍SD范圍或取均值的70%～130%，即12.49%～21.88%或12.03%～22.34%，二者范圍較為接近；為嚴(yán)格控制大生產(chǎn)中的鮮地黃配方顆粒的出膏率，保證鮮地黃配方顆粒的質(zhì)量均一和穩(wěn)定，結(jié)合25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率的浮動(dòng)范圍以及3批配方顆粒出膏率的實(shí)際情況，由鮮地黃配方顆粒制成量確定為20.0%，故建議鮮地黃配方顆粒干浸膏出膏率應(yīng)取均值的70%～制成量20%，即控制在12.03%～20.0%為宜，修約為12.0%～20.0%。

3.2 指標(biāo)成分選擇及含量范圍的確定

研究表明，梓醇為地黃環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分發(fā)揮降血糖生物活性的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[15]，其可以調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞的糖脂代謝，通過(guò)活化位于腎上腺髓質(zhì)的腎上腺受體，促進(jìn)β-內(nèi)啡肽釋放，提高葡萄糖運(yùn)轉(zhuǎn)蛋白-4（glucose transporter 4，GLUT-4）的表達(dá)，從而提高葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)率，增加葡萄糖利用，抑制糖異生，降低鏈尿佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠血糖[16-17]。張莉等[18]發(fā)現(xiàn)地黃苷D可能是地黃發(fā)揮抗抑郁作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)之一，地黃苷D可有效緩解由高濃度皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的PC-12細(xì)胞損傷，其作用機(jī)制可能為提高BDNF表達(dá)，并通過(guò)BDNF-TrkB通路發(fā)揮抗凋亡作用，最終保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，從而發(fā)揮抗抑郁作用[19]。說(shuō)明梓醇和地黃苷D均為地黃的活性成分，且《中國(guó)藥典》2020年版一部地黃含量測(cè)定項(xiàng)下的指標(biāo)成分亦為梓醇和地黃苷D，故本研究以梓醇和地黃苷D作為鮮地黃配方顆粒質(zhì)量控制的指標(biāo)成分。本研究分別考察了提取溶劑、提取方式、溶劑用量以及提取時(shí)間，對(duì)鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑/配方顆粒梓醇和地黃苷D含量的影響。結(jié)果表明，加入60%甲醇25 mL，超聲提取30 min，效率高、效果好、溶劑用量少。

《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》標(biāo)準(zhǔn)湯劑的表征與應(yīng)用項(xiàng)下建議，根據(jù)含量測(cè)定得到的指標(biāo)成分的含量，以均值加減3倍SD（或均值的70%～130%）為含量測(cè)定的允許范圍。25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑中梓醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值為52.83 mg/g，SD為8.79 mg/g。含量范圍若取均值加減3倍SD的范圍為26.46～79.21 mg/g，25批標(biāo)準(zhǔn)湯劑梓醇含量均在范圍內(nèi)，范圍過(guò)寬，不利于產(chǎn)品的質(zhì)量控制；若取均值70%～130%的范圍為36.98～68.68 mg/g，25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑中有2批不在范圍內(nèi)，為S13（36.14 mg/g）和S17（73.37 mg/g），所占比例較小，利于鮮地黃配方顆粒的質(zhì)量穩(wěn)定和大生產(chǎn)質(zhì)量的控制，故認(rèn)為鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑梓醇含量范圍取均值的70%～130%較為合理，即控制在36.98～68.68 mg/g為宜。相應(yīng)的鮮地黃配方顆粒梓醇的含量范圍取標(biāo)準(zhǔn)湯劑按制成量20.0%折算后均值的70%～130%，即31.91～59.26 mg/g，3批鮮地黃配方顆粒梓醇含量均在此范圍內(nèi)。

25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑中地黃苷D質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值為3.73 mg/g，SD為0.57 mg/g。質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍若取均值加減3倍SD的范圍，即2.01～5.46 mg/g，25批標(biāo)準(zhǔn)湯劑地黃苷D含量均在范圍內(nèi)，范圍過(guò)寬，不利于產(chǎn)品的質(zhì)量控制；若取均值70%～130%的范圍為2.61～4.85 mg/g，25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑中有1批不在范圍內(nèi)，為S11（5.33 mg/g），所占比例較小，利于鮮地黃配方顆粒的質(zhì)量穩(wěn)定和大生產(chǎn)質(zhì)量的控制，認(rèn)為鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑地黃苷D的含量范圍取均值的70%～130%較為合理，即控制在2.61～4.85 mg/g為宜。相應(yīng)的鮮地黃配方顆粒地黃苷D的含量范圍取標(biāo)準(zhǔn)湯劑按制成量20.0%折算后均值的70%～130%，即2.24～4.16 mg/g，3批鮮地黃配方顆粒地黃苷D含量均在此范圍內(nèi)。

3.3 特征圖譜相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積范圍的確定

鮮地黃主要含有環(huán)烯醚萜苷類(lèi)和苯乙醇苷類(lèi)成分，環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分極性強(qiáng)，具有較好的水溶性，且在203 nm的波長(zhǎng)處有較強(qiáng)的吸收；苯乙醇苷類(lèi)成分極性較弱，在330 nm的波長(zhǎng)處有較強(qiáng)的吸收，由于鮮地黃中環(huán)烯醚萜苷成分梓醇的含量較高，苯乙醇苷類(lèi)成分含量均較低，難以將環(huán)烯醚萜苷類(lèi)和苯乙醇苷類(lèi)成分呈現(xiàn)在同一色譜圖上，為了保證各特征峰的有效分離以及基線平穩(wěn)，降低雜質(zhì)峰的干擾，本研究分別建立了表征環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分和苯乙醇苷類(lèi)成分的特征圖譜。此外，研究表明，鮮地黃在加工成生地黃和熟地黃的過(guò)程中，環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分會(huì)發(fā)生降解反應(yīng)，脫去糖基，生成非苷類(lèi)環(huán)烯醚萜成分，降解程度與連接糖基的數(shù)目有關(guān)[11]。本課題組對(duì)比了鮮地黃、生地黃和熟地黃配方顆粒環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分特征圖譜，發(fā)現(xiàn)生地黃和熟地黃配方顆粒中缺失峰8，且熟地黃配方顆粒中幾乎無(wú)法檢出峰3（梓醇），故建立的環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分特征圖譜，可用于鮮地黃配方顆粒專屬性鑒別。

此外，地黃中的苯乙醇苷類(lèi)成分具有顯著的抗氧化活性[20]，建立苯乙醇苷類(lèi)成分特征圖譜亦對(duì)鮮地黃配方顆粒質(zhì)量控制具有重要意義。本研究分別考察了不同提取溶劑、提取方式、溶劑用量以及提取時(shí)間對(duì)鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑/配方顆粒特征圖譜的影響。結(jié)果表明，加入60%甲醇25 mL，超聲提取60 min，環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分各特征峰響應(yīng)值較高，溶劑用量少；加30%甲醇20 mL，超聲提取20 min，苯乙醇苷類(lèi)成分各特征峰響應(yīng)值較高、溶劑用量少、效率高。

環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分：以峰4地黃苷D峰為參照峰S，25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD在0.21%～2.23%；說(shuō)明各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間較穩(wěn)定，因此，可以利用相對(duì)保留時(shí)間均值對(duì)特征峰進(jìn)行定位。根據(jù)25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑的對(duì)照特征圖譜信息，鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品色譜中應(yīng)呈現(xiàn)10個(gè)特征峰，與地黃苷D參照物峰相對(duì)應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)該在規(guī)定值的±10%之內(nèi)，規(guī)定值為0.27（峰1）、0.31（峰2）、0.58（峰3）、1.03（峰5）、1.15（峰6）、1.34（峰7）、1.81（峰8）、1.91（峰9）、2.03（峰10）。各特征峰與S峰的相對(duì)峰面積的RSD在24.57%～59.62%，說(shuō)明不同批次的樣品相對(duì)峰面積相差較大，表明不同批次鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑各特征峰所代表的化學(xué)成分的比例存在較大的差異，不建議對(duì)特征峰的相對(duì)峰面積作出規(guī)定。

苯乙醇苷類(lèi)成分：以峰5焦地黃苯乙醇苷B1峰為參照峰S，25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD在0～0.83%；說(shuō)明各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間較穩(wěn)定，因此，可以利用相對(duì)保留時(shí)間均值對(duì)特征峰進(jìn)行定位。根據(jù)25批鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑的對(duì)照特征圖譜信息，鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品色譜中應(yīng)呈現(xiàn)8個(gè)特征峰，與焦地黃苯乙醇苷B1參照物峰相對(duì)應(yīng)的峰為S峰，計(jì)算各特征峰與S峰的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)該在規(guī)定值的±10%之內(nèi)，規(guī)定值為0.46（峰1）、0.61（峰2）、0.66（峰3）、0.86（峰4）、1.06（峰6）、1.60（峰7）、2.14（峰8）。各特征峰與S峰的相對(duì)峰面積的RSD在27.59%～109.65%，說(shuō)明不同批次的樣品相對(duì)峰面積相差較大，表明不同批次鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑各特征峰所代表的化學(xué)成分的比例存在較大的差異，不建議對(duì)特征峰的相對(duì)峰面積作出規(guī)定。

本研究基于與鮮地黃標(biāo)準(zhǔn)湯劑的一致性，進(jìn)行配方顆粒的制備工藝研究，確定了鮮地黃配方顆粒生產(chǎn)工藝，制備的配方顆粒各指標(biāo)均在標(biāo)準(zhǔn)湯劑規(guī)定范圍內(nèi)。同時(shí)，本課題組開(kāi)展了鮮地黃和生地黃配方顆粒的藥效學(xué)對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)鮮地黃配方顆粒對(duì)脂多糖致大鼠體溫上升的抑制率明顯強(qiáng)于生地黃配方顆粒。由此可見(jiàn)，本研究建立的鮮地黃配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)合理，配方顆粒的制備工藝基本可行，可為鮮地黃配方顆粒國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定提供指導(dǎo)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國(guó)藥典[S]. 一部. 2020: 129-130.

[2] 張昭, 李志亮, 肖培根. 淺議鮮用植物藥的研究現(xiàn)狀及發(fā)展方向 [J]. 中草藥, 1998(11): 781-783.

[3] 徐杰, 張志鵬, 陳丹燕, 等. 中藥鮮藥的現(xiàn)代應(yīng)用與研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥, 2022, 24(1): 160-168.

[4] 張波泳, 江振作, 王躍飛, 等. UPLC/ESI-Q-TOF MS法分析鮮地黃、生地黃、熟地黃的化學(xué)成分 [J]. 中成藥, 2016, 38(5): 1104-1108.

[5] 崔微, 鄭琇梅, 李虹霞, 等. 鮮地黃的化學(xué)成分研究 [J]. 中藥材, 2022, 45(10): 2369-2375.

[6] 劉衛(wèi)欣. 鮮地黃有效部位提取分離、含量測(cè)定方法及降糖活性研究 [D]. 北京: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院, 2009.

[7] 賈秀梅, 張振凌, 吳瑞環(huán). 鮮地黃及保鮮加工品對(duì)血熱出血模型大鼠涼血止血藥效比較 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2014, 20(6): 127-132.

[8] 梁愛(ài)華, 薛寶云, 王金華, 等. 鮮地黃與干地黃止血和免疫作用比較研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 1999, 24(11): 663-666.

[9] 張芳芳. 地黃不同炮制品對(duì)陰虛動(dòng)物的影響研究 [D]. 濟(jì)南: 山東大學(xué), 2018.

[10] 陳士林, 劉安, 李琦, 等. 中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑研究策略 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 2016, 41(8): 1367-1375.

[11] 劉彥飛, 趙宇, 武衛(wèi)紅, 等. 地黃的化學(xué)成分及其在加工炮制過(guò)程中的變化 [J]. 國(guó)外醫(yī)藥: 植物藥分冊(cè), 2007(3): 102-108.

[12] 李更生, 劉明, 王慧森, 等. 地黃藥材炮制過(guò)程中環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分動(dòng)態(tài)變化的研究 [J]. 中國(guó)中醫(yī)藥科技, 2008, 15(6): 440-442.

[13] 于文娜, 張振凌, 張穎, 等. 地黃炮制過(guò)程中異毛蕊花糖苷含量的動(dòng)態(tài)變化 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2017, 23(18): 22-26.

[14] 張超, 華悅, 廉婧, 等. 肉蓯蓉炮制過(guò)程中苯乙醇苷類(lèi)成分含量變化規(guī)律研究 [J]. 中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志, 2022, 29(04): 92-97.

[15] 張?jiān)略? 王君明, 巫曉慧. 基于以梓醇為主要成分的地黃環(huán)烯醚萜苷生物活性研究 [J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2022, 40(12): 75-77.

[16] Lindor K D, Gershwin M E, Poupon R,. Primary biliary cirrhosis [J]., 2009, 50(1): 291-308.

[17] European Association for the Study of the Liver. EASL clinical practice guidelines: Management of cholestatic liver diseases [J]., 2009, 51(2): 237-267.

[18] 張莉, 盧仁睿, 王慧慧, 等. 地黃苷D對(duì)皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的PC-12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究 [J]. 中草藥, 2022, 53(11): 3385-3393.

[19] 王慧慧, 盧仁睿, 張莉, 等. 地黃中地黃苷D通過(guò)調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞M1/M2極化抑制神經(jīng)炎癥 [J]. 中藥材, 2021, 44(11): 2683-2687.

[20] 沈華旦, 方江濟(jì), 郭鵬程, 等. 基于HPLC-UV-DPPH法的地黃和熟地黃藥材抗氧化活性成分比較研究 [J]. 中草藥, 2018, 49(3): 582-588.

Study on quality standard of freshformula granules based on standard decoction

ZHANG Zhi-peng1, XU Jie1, LIU Pei-yi1, HUANG Meng-ting1, ZHONG Zhi-kui1, CHENG Xue-ren2

1. Guangdong Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Formula Granule, Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd., Foshan 528244, China 2. China Traditional Chinese Medicine Holdings Co., Ltd., Foshan 528300, China

The quality standard of freshformula granules based on standard decoction was established to provide reference for the quality control of freshformula granules.According to, 25 batches of freshstandard decoction were prepared, the extraction rate and the contents of catalpol and rehmannioside D were determined in each batch of standard decoction, and the UPLC characteristic chromatogram that can fully characterize the iridoid glycosides and phenylethanolic glycosides of freshwas constructed; Three batches of freshformula granules were prepared based on the consistency with the extraction rate, index component content and characteristic chromatogram of the standard decoction to verify the rationality of the standard formulation.The measured range of the extraction rate of freshstandard decoction was 13.93%—20.09%; The measured contents of catalpol and rehmannioside D were 36.14—73.37 mg/g and 2.96—5.33 mg/g; Ten common peaks were identified in the characteristic chromatogram of iridoid glycosides. The identified peaks 3, 4 and 6 were catalpol, rehmannioside D and leonuride; Eight common peaks were calibrated in the characteristic chromatogram of phenylethanolic glycosides, and peaks 1, 4, 5 and 6 were identified as purpureaside C, verbascoside, jionosideB1 and isoacteoside; The extract rate, index component content and characteristic chromatogram of the three batches of freshformula granules were close to the standard decoction prepared from the same batch of medicinal materials, and were within the scope of the quality standard.The quality standard of freshformula granules based on standard decoction established in this study is scientific, reasonable, stable and feasible, and can provide a reference for the quality control of freshformula granules.

fresh; standard decoction; formulation granules; quality standard; catalpol, rehmannioside D; leonuride; purpureaside C; verbascoside; jionosideB1; isoacteoside

R283.6

A

0253 - 2670(2023)04 - 1127 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.04.012

2022-09-26

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2018B030323004）；廣東特支計(jì)劃科技創(chuàng)業(yè)領(lǐng)軍人才項(xiàng)目（2017TY04R197）

張志鵬，碩士，主要從事中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail: zhangzp0909@163.com

程學(xué)仁，碩士，主任中藥師，主要從事中藥飲片與配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Tel: (0757)85128604 E-mail: chengxr@126.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]