嚴(yán) 露，蒲婧哲，管悅琴，鄭衛(wèi)兵，孫翼飛，張亞中*

百蕊草藥材與標(biāo)準(zhǔn)湯劑量值傳遞規(guī)律研究及分析

嚴(yán) 露1，蒲婧哲2, 3，管悅琴4，鄭衛(wèi)兵4，孫翼飛4，張亞中2, 3*

1. 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012 2. 安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽 合肥 230051 3. 國家藥品監(jiān)督管理局中藥質(zhì)量研究與評價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230051 4. 安徽九華華源藥業(yè)有限公司，安徽 滁州 239000

建立百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的UPLC特征圖譜及其指標(biāo)成分的含量測定方法；研究百蕊草藥材與標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜的變化，并分析指標(biāo)成分百蕊草素I在藥材-標(biāo)準(zhǔn)湯劑的量值傳遞規(guī)律。采用Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18色譜柱（150 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動相為乙腈-0.2%甲酸水溶液，梯度洗脫，體積流量0.4 mL/min，檢測波長330、270 nm，柱溫30 ℃，建立特征圖譜與含量測定方法。以出膏率、含量及轉(zhuǎn)移率、特征圖譜共有峰傳遞數(shù)為主要評價(jià)指標(biāo)，分析百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的量值傳遞規(guī)律。19批百蕊草藥材、標(biāo)準(zhǔn)湯劑與各自的對照特征圖譜相似度分別為0.986～1.000、0.989～1.000。百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜標(biāo)定6個(gè)共有峰，藥材中的5個(gè)共有峰全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)準(zhǔn)湯劑并被指認(rèn)，其中4個(gè)共有峰采用對照品比對確認(rèn)，分別為5--阿魏酰奎寧酸（峰2）、4--阿魏?？鼘幩幔ǚ?）、百蕊草素I（峰5）、山柰酚-3--(2″--α-鼠李糖基-6″--丙二?；?-β-葡萄糖苷（峰6）。19批標(biāo)準(zhǔn)湯劑的平均出膏率為27.45%，百蕊草素I從藥材-標(biāo)準(zhǔn)湯劑的平均轉(zhuǎn)移率為89.48%，出膏率與轉(zhuǎn)移率均未出現(xiàn)離散數(shù)據(jù)。建立的標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜及含量測定方法穩(wěn)定可靠，百蕊草素I從藥材到標(biāo)準(zhǔn)湯劑的量值傳遞結(jié)果表明，百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量得到了較好地控制，其制備工藝具有科學(xué)性、可行性，為百蕊草配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定奠定基礎(chǔ)。

百蕊草；藥材；標(biāo)準(zhǔn)湯劑；特征圖譜；量值傳遞；百蕊草素I；5--阿魏?？鼘幩?；4--阿魏?？鼘幩?；山柰酚-3--(2″--α-鼠李糖基-6″--丙二?；?-β-葡萄糖苷

譽(yù)有“植物抗生素”之稱的檀香科百蕊草屬植物百蕊草Turcz.屬于多年生柔弱草本植物，又名百乳草、九仙草、九龍草等，其寄生體多達(dá)24科70種植物[1]，具有抗炎、抗菌、抗氧化、抑制腫瘤細(xì)胞增殖等多種藥理作用[2]，現(xiàn)已被制成片劑、膠囊劑、顆粒劑等多種劑型，其中“百蕊片、百蕊膠囊”被列為國家中藥保護(hù)品種[3]。

目前，針對百蕊草的研究主要集中在成分分離及分析[4-5]、人工栽培與半寄生特性[6-7]、多糖[8-9]、生物學(xué)[10-11]、質(zhì)量評價(jià)[12-13]等方面。百蕊草配方顆粒相關(guān)研究尚未見報(bào)道，且當(dāng)下各品種配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定及生產(chǎn)正如火如荼的開展，而標(biāo)準(zhǔn)湯劑是配方顆粒的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此，百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑量值傳遞的研究具有重要意義。

《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》中指出，中藥配方顆粒應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)湯劑的特征圖譜和含量限度范圍為參照，以出膏率、含量及轉(zhuǎn)移率、指紋圖譜或特征圖譜的一致性為考察指標(biāo)，對原料、中間體及成品制備過程中的量質(zhì)傳遞和物料平衡進(jìn)行全面研究[14]。

本課題組前期已研究并撰寫了不同產(chǎn)地百蕊草藥材質(zhì)量評價(jià)的相關(guān)論文，建立了百蕊草藥材的超高效液相色譜（ultra-high performance liquid chromatography，UPLC）特征圖譜，研究中發(fā)現(xiàn)百蕊草飲片各項(xiàng)指標(biāo)同藥材，故本實(shí)驗(yàn)在前期藥材研究的基礎(chǔ)上展開對百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的特征圖譜、含量測定、量值傳遞研究，為百蕊草配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC3600超高效液相色譜儀，安徽皖儀科技有限公司；Milli-Q超純水儀，美國Millipore公司；Mettler Toledo萬分之一電子天平、Mettler Toledo十萬分之一電子天平，托利多儀器（上海）有限公司；陶瓷藥罐，配套電爐底座，功率武火500 W、文火300 W，深圳市正云科技有限公司；LGJ-103真空冷凍干燥機(jī)，北京松源華興科技發(fā)展有限公司；色譜柱為Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）。

1.2 試劑

LC/MS級乙腈、乙醇、甲酸，美國Fairfield公司；其他分析純試劑均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；對照品百蕊草素I，批號Z19J11L108586，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，上海源葉生物科技有限公司；對照品5--阿魏?？鼘幩?，批號MUST-22053103，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.49%，成都曼斯特生物科技有限公司；對照品4--阿魏酰奎寧酸（批號DSTZ11110-646，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、山柰酚-3--(2″--α-鼠李糖基-6″--丙二?；?-β-葡萄糖苷（批號DSTZ20610-510，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥90%），樂美天醫(yī)藥/德斯特生物科技有限公司。

1.3 藥材

19批野生百蕊草藥材，由安徽九華華源藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院張亞中主任中藥師鑒定，均為檀香科百蕊草屬植物百蕊草Turcz的干燥全草，藥材及標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑、供試品、對照品溶液的制備

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備 取百蕊草100 g，浸泡30 min，加水煎煮2次，一煎加12倍量水浸泡30 min，武火（500 W）煮沸后改文火（300 W）再煎煮30 min，用200目篩網(wǎng)趁熱濾過；藥渣再加9倍量的水，武火煮沸后改文火再煎煮25 min，用200目篩網(wǎng)趁熱濾過；合并2次濾液，減壓濃縮至相對密度為1.02～1.10 g/mL的濃浸膏，真空冷凍干燥，取出，稱定質(zhì)量，粉碎，分裝至西林瓶中，即得百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑（凍干粉）。

表1 百蕊草樣品信息

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液的制備 取百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉，精密稱定0.5 g，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率500 W、頻率40 kHz）提取30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液。

2.1.3 藥材供試品溶液的制備 取百蕊草藥材粉末過4號篩，精密稱定1.0 g，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率500 W、頻率40 kHz）提取45 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得藥材供試品溶液。

2.1.4 藥材與標(biāo)準(zhǔn)湯劑對照品溶液的制備 精密稱取百蕊草素I對照品1.770、4.494 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，分別制成質(zhì)量濃度為0.347、0.881 mg/mL的溶液，即為百蕊草藥材、標(biāo)準(zhǔn)湯劑的對照品溶液。

2.1.5 鑒定用混合對照品溶液的制備 精密稱取5--阿魏酰奎寧酸、4--阿魏酰奎寧酸、百蕊草素I、山柰酚-3--(2″--α-鼠李糖基-6″--丙二?；?-β-葡萄糖苷對照品2.170、2.221、5.243、13.135 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成質(zhì)量濃度為0.216～1.182 mg/mL的混合對照品溶液。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC特征圖譜的建立及分析

2.2.1 色譜條件 Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18色譜柱（150 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動相為乙腈-0.2%甲酸水溶液，體積流量為0.4 mL/min，梯度洗脫：0～7 min，10%～13%乙腈；7～15 min，13%～16%乙腈；15～20 min，16%～21%乙腈；20～25 min，21%乙腈；25～27 min，21%～10%乙腈；柱溫為30 ℃；檢測波長為330 nm；進(jìn)樣量為2 μL。

2.2.2 精密度試驗(yàn) 取百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉（批號BRC-DG-15），按“2.1.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，照“2.2.1”項(xiàng)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，以5號色譜峰（百蕊草素I）為參照峰（S），計(jì)算得到各共有峰相對保留時(shí)間的RSD為0.07%～0.29%，相對峰面積的RSD為0.47%～1.63%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉（批號BRC-DG-15），按“2.1.2”項(xiàng)方法平行制備6份供試品溶液，照“2.2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測定，以5號色譜峰（百蕊草素I）為參照峰（S），計(jì)算得到各共有峰相對保留時(shí)間的RSD為0.12%～0.29%，相對峰面積的RSD為0.52%～1.58%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉（批號BRC-DG-15），按“2.1.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，照“2.2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測定，分別于配制后的0、2、4、8、10、14、16 h進(jìn)樣測定，以5號色譜峰（百蕊草素I）為參照峰（S），計(jì)算得到各共有峰相對保留時(shí)間的RSD為0.18%～0.48%，相對峰面積的RSD為0.77%～1.79%，表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)湯劑和飲片特征圖譜的建立及相似度評價(jià) 取19批百蕊草藥材、標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測定并記錄色譜圖，將其導(dǎo)入“國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（2012版）”軟件，以S1號樣品色譜圖為參照圖譜，采用中位數(shù)法生成共有模式，對樣品進(jìn)行多點(diǎn)校正和Mark峰匹配得到百蕊草藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜（圖1、2），并對其進(jìn)行相似度分析，結(jié)果見表2。經(jīng)相似度評價(jià)結(jié)果分析，19批百蕊草藥材與對照特征圖譜的相似度在0.986～1.000，標(biāo)準(zhǔn)湯劑的相似度在0.989～1.000，表明19批不同產(chǎn)地的百蕊草藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑整體質(zhì)量相對穩(wěn)定，具有較好的一致性。

圖1 19批百蕊草藥材UPLC特征圖譜及其對照特征圖譜

圖2 19批百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑UPLC特征圖譜及其對照特征圖譜

表2 19批百蕊草藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑的相似度

2.2.6 標(biāo)準(zhǔn)湯劑和藥材共有峰的標(biāo)定及對比分析 將19批藥材、標(biāo)準(zhǔn)湯劑數(shù)據(jù)導(dǎo)入“國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)軟件（2012版）”，以S1號樣品色譜圖為參照圖譜，采用中位數(shù)法生成共有模式，對樣品進(jìn)行多點(diǎn)校正和Mark峰（標(biāo)記峰）匹配分別得到19批百蕊草藥材、標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜共有峰的匹配數(shù)據(jù)，從而計(jì)算相對峰面積。以分離度高、峰形好、峰面積穩(wěn)定為篩選條件確定共有峰，因此，藥材確定5個(gè)共有峰，標(biāo)準(zhǔn)湯劑確定6個(gè)共有峰（圖3）。通過對照品指認(rèn)了4個(gè)共有峰，藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑中的峰2、3、5、6分別為5--阿魏?？鼘幩帷?--阿魏?？鼘幩?、百蕊草素I、山柰酚-3--(2″--α-鼠李糖基-6″--丙二?；?- β-葡萄糖苷。由于百蕊草素I具有較好的峰形，且為特征性成分，故藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑均以5號峰為參照峰（S），計(jì)算各特征峰與S峰的相對保留時(shí)間及相對峰面積，取19批數(shù)據(jù)均值，見表3。

經(jīng)過多批次樣品驗(yàn)證，藥材各批次主成分均可在標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜中得到追蹤，表明百蕊草從藥材-標(biāo)準(zhǔn)湯劑的過程中各成分的到了有效的轉(zhuǎn)移，標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備工藝穩(wěn)定，不同批次之間的差異較小，為百蕊草配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)的制定奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

2-5-O-阿魏?？鼘幩?3-4-O-阿魏?？鼘幩?5-百蕊草素I 6-山柰酚-3-O-(2″-O-α-鼠李糖基-6″-O-丙二?；?-β-葡萄糖苷

表3 藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑的UPLC特征圖譜分析

2.3 百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率測定及分析

移取19批百蕊草煎煮2次合并后的濾液30 g至恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后于105 ℃烘箱中干燥至固體狀態(tài)，冷卻，稱定質(zhì)量，記錄蒸發(fā)皿與干膏的總質(zhì)量，按公式計(jì)算出膏率，結(jié)果見表4?？芍偃锊莩龈嗦实膶?shí)測范圍在24.00%～29.63%，波動范圍較窄，無論出膏率范圍值取均值±30%或均值±3SD，19批測定結(jié)果均在此范圍內(nèi)。

含固率＝(3－1)/2

出膏率＝(含固率×濾液凈質(zhì)量)/飲片質(zhì)量

1為蒸發(fā)皿恒定質(zhì)量，2為移液量，3為蒸發(fā)皿與干膏總質(zhì)量

2.4 百蕊草藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑中指標(biāo)成分的量值傳遞關(guān)系研究

《中國藥典》2020年版并未收錄百蕊草，故并無百蕊草的含量測定標(biāo)準(zhǔn)。本研究采用UPLC同時(shí)建立了百蕊草藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑中百蕊草素I的含量測定方法，可為制定百蕊草配方顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

2.4.1 色譜條件 檢測波長為270 nm，其余條件同“2.2.1”項(xiàng)。

2.4.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.1.4”項(xiàng)中百蕊草藥材與標(biāo)準(zhǔn)湯劑的對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 μL，按照“2.4.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，以百蕊草素I對照品質(zhì)量為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：藥材中百蕊草素I＝3 637.8＋83.708，＝0.999 8，線性范圍0.173～1.214 μg；標(biāo)準(zhǔn)湯劑中百蕊草素I＝3 258.0＋226.61，＝0.999 6，線性范圍0.440～3.082 μg。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 分別取百蕊草藥材與標(biāo)準(zhǔn)湯劑的對照品溶液，按照“2.4.1”項(xiàng)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積，并計(jì)算連續(xù)6次進(jìn)樣結(jié)果的RSD值。藥材對照品中百蕊草素I峰面積的RSD為0.18%，標(biāo)準(zhǔn)湯劑對照品中峰面積的RSD為2.05%，儀器精密度良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 分別取百蕊草藥材（批號PF-12）、標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉（批號BRC-DG-15），平行6份，按“2.1.3”項(xiàng)和“2.1.2”項(xiàng)方法制備6份供試品溶液，照“2.4.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計(jì)算6份供試品溶液進(jìn)樣結(jié)果的RSD值。藥材供試品溶液中百蕊草素I含量的RSD為0.57%，標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液中百蕊草素I含量的RSD為1.04%，重復(fù)性良好。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取百蕊草藥材（批號PF-12）、標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉（批號BRC-DG-15），按“2.1.3”項(xiàng)和“2.1.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，照“2.4.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測定，于配制后的0、2、4、8、10、14、16 h進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣結(jié)果的RSD值。藥材供試品溶液中百蕊草素I峰面積的RSD為0.43%，標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液中百蕊草素I峰面積的RSD為0.46%，穩(wěn)定性良好。

2.4.6 含量測定及轉(zhuǎn)移率計(jì)算 取19批百蕊草藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液，根據(jù)已建立的含量測定方法進(jìn)行定量測定，并按公式計(jì)算藥材到標(biāo)準(zhǔn)湯劑的轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表4。可知百蕊草藥材中百蕊草素I含量的實(shí)測值在6.02～10.89 mg/g，波動范圍較窄，無論取均值±3SD范圍還是均值±30%范圍，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均在范圍內(nèi)；標(biāo)準(zhǔn)湯劑中百蕊草素I含量的實(shí)測值在21.75～39.37 mg/g，雖然其最大值超過了均值±30%上限，但所有結(jié)果仍在均值±3SD范圍內(nèi)；百蕊草素I轉(zhuǎn)移率的實(shí)測轉(zhuǎn)移率在72.92%～98.89%，無論轉(zhuǎn)移率范圍是取均值±3SD范圍，還是均值±30%范圍，結(jié)果均在此范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)移率較為穩(wěn)定。

表4 百蕊草藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑測定結(jié)果

轉(zhuǎn)移率＝凍干粉中待測成分含量×凍干粉凈質(zhì)量/(藥材待測成分含量×飲片用量)

3 討論

3.1 關(guān)于供試品處理及色譜條件的優(yōu)化

經(jīng)文獻(xiàn)查閱，相關(guān)百蕊草藥材的研究主要使用甲醇[15]、乙醇[16]、甲醇-鹽酸[17]等提取溶劑采用回流或者超聲提取的方式進(jìn)行供試品處理。本研究前期已建立了百蕊草的相關(guān)方法，故直接使用藥材供試品處理、色譜條件方法針對標(biāo)準(zhǔn)湯劑開展方法優(yōu)化研究，以色譜峰總峰面積與稱樣量之比為評價(jià)指標(biāo)確定百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的最佳供試品制備方法和色譜條件。經(jīng)研究結(jié)果分析，標(biāo)準(zhǔn)湯劑僅有取樣量和處理時(shí)間較藥材有些許改動，其余條件與藥材相同。

3.2 關(guān)于原料的代表性

根據(jù)《中藥配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定要求》的要求，所使用的藥材要具有代表性，且批次最少為15批。本次研究總共收集26批野生百蕊草樣品，其中陜西省6批，山西省9批，甘肅省3批，河南省3批，內(nèi)蒙古自治區(qū)1批，河北2批，安徽2批，基本覆蓋百蕊草配方顆粒上市擬采用藥材的主產(chǎn)區(qū)。經(jīng)分子鑒定，2批河北產(chǎn)地藥材為變種長梗百蕊草，1批內(nèi)蒙產(chǎn)地藥材為偽品急折百蕊草，故舍去。經(jīng)農(nóng)殘、重金屬檢驗(yàn)，2批陜西百蕊草藥材，1批山西百蕊草藥材、1批河南百蕊草藥材不符合藥典要求，故不納入研究。最終，將19批合格藥材制成百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑，符合《中藥配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定要求》的要求。

3.3 關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)湯劑工藝的評價(jià)指標(biāo)選擇及考察

本課題組前期運(yùn)用超高效液相色譜四級桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC- Q-TOF/MS）技術(shù)，對百蕊草藥材進(jìn)行了化學(xué)成分鑒定，多為酚酸類和黃酮類，各文獻(xiàn)也報(bào)道了百蕊草中含有黃酮、有機(jī)酸、生物堿、甾醇、揮發(fā)油、萜類等多種化學(xué)成分[5]，其中黃酮類化合物是百蕊草抗菌消炎作用的主要成分之一，含量最高且抑菌效果最好[18]，可作為評價(jià)其質(zhì)量的指標(biāo)性成分，故本研究選擇百蕊草素I評價(jià)和反映藥材-標(biāo)準(zhǔn)湯劑的量值傳遞情況以及相關(guān)工藝的優(yōu)化。

根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》，參照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》，在取樣量100 g、浸泡時(shí)間30 min、二煎的條件上，對加水量、煎煮時(shí)間、分離工藝、濃縮溫度進(jìn)行了考察，以出膏率、含量及轉(zhuǎn)移率、特征圖譜為評價(jià)指標(biāo)開展條件優(yōu)化?？疾旖Y(jié)果顯示，一煎12倍水，二煎9倍水；一煎30 min，二煎25 min；200目濾過；50～65 ℃濃縮時(shí)，出膏率、含量、轉(zhuǎn)移率為最高值，因此確定了最佳標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備工藝。研究結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，百蕊草素I的出膏率、含量和特征圖譜在正常范圍之內(nèi)，轉(zhuǎn)移率有幾批超過98%，經(jīng)異常值分析，可能是在提取過程中由于操作因素控制不當(dāng)導(dǎo)致其他成分向指標(biāo)成分轉(zhuǎn)化。

3.4 關(guān)于特征圖譜及百蕊草素I的量值傳遞分析

百蕊草藥材特征圖譜中應(yīng)呈現(xiàn)5個(gè)特征峰，標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜中應(yīng)呈現(xiàn)6個(gè)特征峰，通過對照品指認(rèn)了藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑中的峰2、3、5、6。從相對保留時(shí)間及對照品的指認(rèn)結(jié)果分析，藥材中的5個(gè)共有峰在標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜中得到了有效的轉(zhuǎn)移。多批次標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，峰4穩(wěn)定存在，峰型好，響應(yīng)高，故增加為標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征峰。

19批標(biāo)準(zhǔn)湯劑中，百蕊草素I質(zhì)量分?jǐn)?shù)的實(shí)測值在21.75～39.37 mg/g，雖然其最大值超過了均值±30%上限，但所有結(jié)果仍在均值±3SD范圍內(nèi)；轉(zhuǎn)移率的實(shí)測轉(zhuǎn)移率在72.92%～98.89%，無論出膏率范圍值取均值的70%～130%或均值的±3SD，結(jié)果均在此范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)移率較為穩(wěn)定，未出現(xiàn)離群值。標(biāo)準(zhǔn)湯劑定量測定和轉(zhuǎn)移率結(jié)果揭示，百蕊草素I從藥材-標(biāo)準(zhǔn)湯劑得到了有效的轉(zhuǎn)移。

4 結(jié)論

百蕊草藥材中的5個(gè)共有峰在標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜中得到了有效轉(zhuǎn)移，表明本研究建立的UPLC特征圖譜能準(zhǔn)確地反映藥材-標(biāo)準(zhǔn)湯劑之間的真實(shí)性、優(yōu)良性、穩(wěn)定性和主要化學(xué)成分的可追溯性。建立的指標(biāo)成分含量測定方法可同時(shí)用于藥材和標(biāo)準(zhǔn)湯劑的分析測定，量值傳遞結(jié)果表明百蕊草標(biāo)準(zhǔn)湯劑的質(zhì)量得到了較好的控制，其制備工藝具有科學(xué)性、可行性。標(biāo)準(zhǔn)湯劑作為配方顆粒系列研究的參考，與藥材、中間體、配方顆粒既有區(qū)別又有聯(lián)系，本研究結(jié)果可為百蕊草配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定及后期大生產(chǎn)提供參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 郭巧生, 羅夫來. 百蕊草群落物種多樣性與寄主調(diào)查研究 [J]. 中國中藥雜志, 2011, 36(3): 268-271.

[2] 劉永松, 羅曼, 潘玲, 等. 抗菌中草藥百蕊草的研究進(jìn)展 [J]. 藥學(xué)進(jìn)展, 2006, 30(6): 252-256.

[3] 張曉明. 半寄生植物百蕊草在長江下游地區(qū)適應(yīng)特性研究 [D]. 南京: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2015.

[4] 周思倩, 方艷, 譚金桃, 等. [J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2022, 34(10): 1633-1646.

[5] 鄒懿, 洪敏, 楊笑芳. 百蕊草化學(xué)成分分離 [J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2016, 22(7): 74-77.

[6] 張成才, 向增旭. 百蕊草種子破除休眠及設(shè)施栽培條件的優(yōu)化研究 [J]. 中藥材, 2020, 43(2): 274-279.

[7] 張曉明. 半寄生植物百蕊草在長江下游地區(qū)適應(yīng)特性研究 [D]. 南京: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2015.

[8] 邵麗君, 琚飛龍, 鐘楊, 等. 脫色對百蕊草多糖的結(jié)構(gòu)及應(yīng)用特性的影響: H2O2脫色和活性炭脫色的比較[J/OL]. 食品科學(xué). [2022-10-28]. http://kns.cnki.net/ kcms/detail/11.2206.TS.20220928.1656.037.html.

[9] 趙曉麗. 百蕊草多糖復(fù)配卡拉膠的凝膠特性及其應(yīng)用研究 [D]. 合肥: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué), 2019.

[10] 張文香, 常子麗, 李芳, 等. 百蕊草LRR-RLKs基因的鑒定與生物信息學(xué)分析 [J]. 南方農(nóng)業(yè), 2022, 16(9): 1-6.

[11] 張湄, 張麗杰, 譚維群, 等. 百蕊草有效成分提取工藝優(yōu)化及生物活性檢測 [J]. 重慶理工大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué), 2022, 36(10): 293-304.

[12] 王小東, 陳羽, 楊輝燦, 等. 黔產(chǎn)百蕊草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究 [J]. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2021, 38(2): 33-36.

[13] 王雨艨. 百蕊草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 [D]. 合肥: 安徽中醫(yī)藥大學(xué), 2016.

[14] 國家藥品監(jiān)督管理局. 關(guān)于發(fā)布《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》的通告(2021年第16號) [EB/OL]. (2021-02-10) [2022-03-03]. http://www.gov.cn/ zhengce/zhengceku/2021-02/11/content_5586817.html.

[15] 周思倩, 方艷, 譚金桃, 等. 基于UPLC-Q-TOF-MS/ MS分析百蕊草醇提物的化學(xué)成分 [J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2022, 34(10): 1633-1646.

[16] 宣偉東, 成熙, 葉曙娜, 等. 用HPLC法測定百蕊草中3個(gè)黃酮苷的含量 [J]. 藥學(xué)實(shí)踐雜志, 2019, 37(5): 460-463.

[17] 吳兆喜, 王黔陽, 朱克松, 等. 不同干燥方式對百蕊草中兩種黃酮醇苷含量影響 [J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué), 2016, 31(4): 696-699.

[18] 吳兆喜. 百蕊草中山奈素醇苷的提取純化工藝及活性測試研究 [D]. 貴陽: 貴州大學(xué), 2016.

Study and analysis on transmission law of quantity value betweenand standard decoction

YAN Lu1, PU Jing-zhe2, 3, GUAN Yue-qin4, ZHENG Wei-bing4, SUN Yi-fei4, ZHANG Ya-zhong2, 3

1. School of Pharmacy, Anhui University of Traditional Chinese Medicine, Hefei 230012, China 2. Anhui Institute for Food and Drug Control, Hefei 230051, China 3. NMPA Key Laboratory for Quality Research and Evaluation of Traditional Chinese Medicine, Hefei 230051, China 4. Anhui Jiuhua Huayuan Pharmaceutical Co., Ltd., Chuzhou 239000, China

To establish the UPLC characteristic spectrum of the standard decoction of Bairuicao () and the content determination method of its index components, study the changes of the characteristic spectra ofand standard decoction, and analyze the quantity transfer law of the index component kaempferol-3--glucorhamnoside in the medicinal material standard decoction.Analysis was performed on a Waters Acquity UPLC BEH Shield RP18(150 mm × 2.1 mm, 1.7 μm) column with acetonitrile-0.2% formic acid for gradient elution. The flow rate was 0.4 mL/min, the detection wavelength was 330 nm, and the column temperature was 30 ℃. The characteristic spectrum and content determination method were established. The delivery rate, content and transfer rate, and the number of common peaks in the characteristic spectrum were used as the main evaluation indexes to analyze the quantitative transmission law of the standard decoction of.The similarity of 19 batches ofand standard decoction with their respective control characteristic maps was 0.986—1.000 and 0.989—1.000, respectively. There were six common peaks in the calibration of the characteristic spectrum of the standard decoction of Bairuicao (). All the five common peaks of the medicinal materials were transferred to the standard decoction and identified. Among them, four chromatographic peaks were confirmed by comparison with the reference materials, namely 5--ferulic quinic acid (peak 2), 4--ferulic quinic acid (peak 3), kaempferol-3--glucorhamnoside (peak 5), kaempferol-3--(2″--α- rhamnose-6″--malonyl)-β-glucoside (peak 6). The average extraction rate of 19 batches of standard decoction was 27.45%, and the average transfer rate of kaempferol-3--glucorhamnoside fromto standard decoction was 89.48%. There was no discrete data of extraction rate and transfer rate.The established characteristic map and content determination method of standard decoction are stable and reliable. The results of the transmission of the quantity of kaempferol-3--glucorhamnoside fromto the standard decoction show that the quality of the standard decoction ofhas been better controlled, and the preparation process is scientific and feasible, which lays a solid foundation for the formulation of the quality standard of the prepared granules of.

Turcz.; medicinal materials; standard soup; characteristic chromatogram; magnitude transfer; kaempferol-3--glucorhamnoside; 5--ferulic quinic acid; 4--ferulic quinic acid; kaempferol-3--(2″--α-rhamnose-6″-- malonyl)-β-glucoside

R283.6

A

0253 - 2670(2023)04 - 1098 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.04.009

2022-09-07

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究”重點(diǎn)專項(xiàng)（2019YFC1711505）；安徽省藥品監(jiān)督管理局監(jiān)管科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目（AHYJ-KJ-202210）

嚴(yán) 露（1997—），女，碩士研究生，從事藥物分析新技術(shù)和新方法研究及中藥、天然藥物質(zhì)量控制研究。E-mail: 791637318@qq.com

張亞中，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，從事藥物分析新技術(shù)和新方法研究及中藥、天然藥物質(zhì)量控制研究。E-mail: 282483507@qq.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]