王 敏，宋雨萌，劉文杰，于雯雯，羅 蘭

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)植物醫(yī)學(xué)學(xué)院，山東省植物病蟲害綠色防控工程研究中心，青島 266109）

大白菜（Brassica rapa ssp.pekinensis）起源于中國，是我國分布最廣，種植面積最大的蔬菜。其營養(yǎng)豐富，含有蛋白質(zhì)、多種維生素和鈣、磷等多種礦物質(zhì)及大量的膳食纖維，同時具有藥用及保健作用[1]。近年來隨著種植面積擴(kuò)大和耕作制度的改變，大白菜的病蟲害愈來愈嚴(yán)重，主要有白菜根腫病、白菜霜霉病、白菜軟腐病和白菜黑斑病[2-3]，其中白菜黑斑病是一種重要的世界性真菌病害，危害葉片和整株植物，在我國各地均有發(fā)生，已成為我國蔬菜生產(chǎn)上的主要病害之一，在流行年份可造成20%～50%的減產(chǎn)，嚴(yán)重危害大白菜的產(chǎn)量與品質(zhì)[4-5]。防治白菜黑斑病除選用優(yōu)良品種和加強農(nóng)業(yè)措施外，化學(xué)防治是主要防治措施，但生產(chǎn)上使用的藥劑多為早期開發(fā)的保護(hù)性殺菌劑和苯并咪唑類等常規(guī)殺菌劑[6-7]。保護(hù)性殺菌劑用藥量大，藥效易受環(huán)境影響，其無法在植物體內(nèi)傳導(dǎo)，在作物發(fā)病后治療效果不佳[8]。同時化學(xué)農(nóng)藥的大量廣泛使用，使黑斑病對多種藥劑產(chǎn)生了不同程度的抗性，防治效果明顯降低[9]。因此篩選高效、低毒的新型殺菌劑來防治白菜黑斑病尤為重要。

氟環(huán)唑（Epoxiconazole）是新一代含氟的麥角甾醇生物合成抑制劑類殺菌劑，通過抑制真菌細(xì)胞膜甾醇生物合成而阻止真菌的生長，其具有保護(hù)和治療作用，還能誘導(dǎo)作物產(chǎn)生抗病性，廣泛用于谷物和果樹等的各種真菌病害防治[10]。吡唑醚菌酯（Pyraclostrobin）是一種廣譜、高效的甲氧基丙烯酸酯類內(nèi)吸性殺菌劑，作用于真菌線粒體呼吸鏈中的細(xì)胞色素復(fù)合物，阻止電子傳遞，從而抑制真菌孢子萌發(fā)或菌絲生長[11]。其還具有良好的輸導(dǎo)和擴(kuò)散性，對蔬菜、果樹的真菌病害都有較好的防治效果。戊唑醇（Tebuconazole）為三唑類殺菌劑，主要防治蔬菜、小麥、花生等的多種真菌病害，在全球50多個國家的60多種作物上取得登記并得到廣泛應(yīng)用[12]。

為了篩選防治白菜黑斑病的有效藥劑以及延緩病原菌對三唑類殺菌劑的抗藥性的產(chǎn)生，本研究采用生長速率法測定了苯并咪唑類、麥角甾醇生物合成抑制劑類以及甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑共7種單劑對白菜黑斑病菌的室內(nèi)毒力，然后選用氟環(huán)唑與吡唑醚菌酯及戊唑醇進(jìn)行復(fù)配，篩選增效配方，為白菜黑斑病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

95%甲基硫菌靈原藥，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司；96%三唑酮原藥、95%丙環(huán)唑原藥、98%吡唑醚菌酯原藥，山東濰坊潤豐化工股份有限公司；98%戊唑醇原藥，江蘇龍燈化學(xué)有限公司；95%氟環(huán)唑原藥，浙江禾本科技股份有限公司；96%烯唑醇原藥，江蘇常隆農(nóng)化有限公司。二甲基亞砜DMSO，天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

1.2 供試菌種

白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)植物醫(yī)學(xué)院農(nóng)藥學(xué)實驗室分離鑒定并保存。

1.3 試驗方法

采用生長速率法測定7種藥劑以及復(fù)配劑對白菜黑斑病菌的毒力[13-14]。將原藥用DMSO配成母液，再稀釋成系列質(zhì)量濃度用于試驗（表1）。通過預(yù)備試驗確定試驗濃度范圍，在濃度范圍之內(nèi)設(shè)置5～7個濃度梯度，要求抑制率在10%～90%之間。將稀釋好的藥液與PDA培養(yǎng)基搖勻制成含藥平板，將5 mm的白菜黑斑病菌菌餅接于含藥平板中央，每質(zhì)量濃度重復(fù)3次，同時設(shè)空白對照。放入28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待對照皿中菌落長至培養(yǎng)皿直徑2/3時，測量不同處理白菜黑斑病菌菌落的直徑，并計算抑菌率。

表1 7種殺菌劑對白菜黑斑病菌毒力測定的濃度梯度

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。求各藥劑毒力回歸式及EC50值等，用孫云沛公式[15-16]求各復(fù)配混劑共毒系數(shù)（CTC）。抑菌率及共毒系數(shù)按式（1）（2）計算。

式中：CTC為共毒系數(shù)，當(dāng)CTC＞120時，為增效作用，CTC為80～120時，為相加作用，CTC＜80時，為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種藥劑對白菜黑斑病菌的室內(nèi)毒力

7種藥劑對白菜黑斑病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果見表2。在這7種藥劑中，95%氟環(huán)唑原藥對白菜黑斑病菌毒力最高，EC50值為0.37 mg/L，毒力倍數(shù)約為95%甲基硫菌靈原藥的3 436.32倍；其次為98%吡唑醚菌酯原藥和98%戊唑醇原藥，EC50值均為0.60 mg/L。95%丙環(huán)唑原藥、96%烯唑醇原藥和96%三唑酮原藥的EC50值分別為2.66、3.38 mg/L和19.50 mg/L；95%甲基硫菌靈原藥的效果最差，EC50值為1 271.44 mg/L， 說明白菜黑斑病菌對甲基硫菌靈已產(chǎn)生抗藥性。

表2 7種殺菌劑對白菜黑斑病菌的毒力結(jié)果

2.2 氟環(huán)唑和戊唑醇復(fù)配對白菜黑斑病菌的聯(lián)合毒力

95%氟環(huán)唑原藥與98%戊唑醇原藥EC50值分別為0.37 mg/L和0.60 mg/L，其兩者按有效成分比4∶1、1∶1及1∶4復(fù)配時，對白菜黑斑病菌EC50值分別為0.29、0.34 mg/L和0.35 mg/L，復(fù)配劑的毒力大于單劑，3種復(fù)配劑的共毒系數(shù)分別為139.29、135.35和151.59，氟環(huán)唑與戊唑醇3個復(fù)配劑的共毒系數(shù)均大于120，表現(xiàn)為增效作用，其中兩者按有效成分1∶4時復(fù)配時的增效作用最大（表3）。

表3 氟環(huán)唑與戊唑醇混配對白菜黑斑病菌聯(lián)合毒力

2.3 氟環(huán)唑和吡唑醚菌酯復(fù)配對白菜黑斑病菌的聯(lián)合毒力

95%氟環(huán)唑原藥與98%吡唑醚菌酯原藥按照4∶1、1∶1及1∶4復(fù)配對白菜黑斑病菌EC50值分別為0.40、0.46 mg/L和0.53 mg/L，共毒系數(shù)分別為117.54、108.02和118.37，均表現(xiàn)出了一定的相加作用（表4）。

表4 氟環(huán)唑與吡唑醚菌酯混配對白菜黑斑病菌聯(lián)合毒力

3 結(jié)論與討論

白菜黑斑病不僅影響大白菜產(chǎn)量，還導(dǎo)致品質(zhì)下降，影響收益和食品安全。使用高效安全殺菌劑是防治病害的主要措施。本研究從7種不同機理殺菌劑中篩選出3種高效殺菌劑，分別為95%氟環(huán)唑原藥、98%吡唑醚菌酯原藥和98%戊唑醇原藥，對白菜黑斑病菌的EC50均小于1 mg/L，分別為0.37、0.60 mg/L和0.60 mg/L，可作為白菜黑斑病防治的有效藥劑。

氟環(huán)唑是一種內(nèi)吸性三唑類殺菌劑，可與井岡霉素、嘧菌酯和三環(huán)唑復(fù)配用于水稻紋枯病和稻瘟病的防治[17-19]，與吡唑醚菌酯復(fù)配用于小麥赤霉病和銹病的防治[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，將氟環(huán)唑和戊唑醇以不同比例混合，表現(xiàn)出對白菜黑斑病菌不同程度的增效作用，以氟環(huán)唑和戊唑醇1∶4按有效成分混配時增效最為顯著，這為氟環(huán)唑和戊唑醇復(fù)配的開發(fā)及應(yīng)用提供理論依據(jù)。

為了延緩抗藥性的產(chǎn)生，藥劑的交替使用和復(fù)配增效研究具有重要的實踐意義。戊唑醇不僅與苯醚甲環(huán)唑復(fù)配對白菜黑斑病菌具有增效作用[21]，與氟環(huán)唑復(fù)配同樣增效顯著。另外，甲基硫菌靈抗性水平也不容忽視，有研究發(fā)現(xiàn)蔓枯病菌（Stagonosporppsis citrulli）和蘋果腐爛病菌（Valsa mali）對甲基硫菌靈產(chǎn)生了不同程度的抗性[22-23]，本試驗中發(fā)現(xiàn)白菜黑斑病菌對甲基硫菌靈已產(chǎn)生了抗藥性，其抗性水平有待進(jìn)一步測定。