孔煜夫，張曉東，周 彬，王丹麗，王亞軍,2，徐善良,2

(1.寧波大學(xué) 海洋學(xué)院，浙江 寧波 315211； 2.水產(chǎn)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(寧波大學(xué))，浙江 寧波 315211)

銀鯧(Pampusargenteus)隸屬于鱸形目(Perciformes)，鯧科(Stromateidae)，鯧屬(Pampus)，屬暖水性中上層集群性經(jīng)濟(jì)魚類。主要分布于中國(guó)、日本等亞洲海域，科威特、伊拉克海域的阿拉伯灣及印度孟加拉灣等印度洋和西太平洋[1]。但是近20年來(lái)，由于過(guò)度捕撈以及海洋環(huán)境的污染，使銀鯧的野生資源受到了極大的破壞，其野生資源量日漸減少。為保護(hù)銀鯧的種質(zhì)資源，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)銀鯧的人工繁育、養(yǎng)殖進(jìn)行了諸多研究[2-6]。

隨著銀鯧人工育苗、養(yǎng)殖等一系列技術(shù)的突破，銀鯧已成功實(shí)現(xiàn)人工養(yǎng)殖并逐步走向規(guī)?；B(yǎng)殖。養(yǎng)殖密度是決定養(yǎng)殖魚類生長(zhǎng)速度、產(chǎn)量和效益的主要因素之一，在大規(guī)模的集約化生產(chǎn)中往往通過(guò)增加養(yǎng)殖密度的方式來(lái)增加單位面積產(chǎn)量。然而，高密度的養(yǎng)殖會(huì)引起殘餌和代謝廢物的增加，導(dǎo)致水質(zhì)惡化、水中有害物質(zhì)含量增加等現(xiàn)象，這將對(duì)魚類產(chǎn)生擁擠脅迫，常表現(xiàn)為魚類對(duì)飼料的利用率降低、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、免疫力降低等。高密度的養(yǎng)殖在帶來(lái)較高經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)往往也增加了風(fēng)險(xiǎn)[7-10]。近年來(lái)，關(guān)于擁擠脅迫對(duì)魚類生理與生長(zhǎng)影響的報(bào)道較少，大多集中在饑餓、溫度、鹽度等方面[11-15]。消化酶作為動(dòng)物體內(nèi)的重要酶類，其活性的高低除反映動(dòng)物消化能力的強(qiáng)弱外，還可以直接或間接地影響著魚類的生長(zhǎng)[16]。喬瑋等[17]在進(jìn)行大菱鲆(Scophthalmusmaximus)密度養(yǎng)殖試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，飼養(yǎng)密度對(duì)大菱鲆的消化酶活性有著顯著的影響，高密度飼養(yǎng)產(chǎn)生的擁擠脅迫抑制了大菱鲆的生長(zhǎng)，使得高密度組的大菱鲆增重率和特定生長(zhǎng)率顯著低于中、低兩個(gè)密度組。鄧超準(zhǔn)[18]在研究擁擠脅迫對(duì)星洲紅魚的影響時(shí)也同樣發(fā)現(xiàn)，過(guò)高的飼養(yǎng)密度對(duì)其消化酶及生長(zhǎng)性能有著顯著影響。

因此，為探究不同密度下銀鯧生長(zhǎng)性能及消化酶活性的變化，本試驗(yàn)設(shè)置了3個(gè)密度梯度組(30、60 ind/m3和90 ind/m3)，測(cè)定分析不同密度下銀鯧腸、胃組織中的淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶活性的時(shí)空變化，從酶活性角度分析不同養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧產(chǎn)生的脅迫影響；同時(shí)，測(cè)定不同密度條件下40 d后銀鯧的特定生長(zhǎng)率和增重率，分析不同密度對(duì)銀鯧生長(zhǎng)的影響。試驗(yàn)結(jié)果將作為優(yōu)化銀鯧幼魚養(yǎng)殖密度的指標(biāo)，為大規(guī)模養(yǎng)殖銀鯧提供理論參考，提高養(yǎng)殖整體經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚

試驗(yàn)在寧波大學(xué)梅山校區(qū)中試基地銀鯧養(yǎng)殖中心進(jìn)行，試驗(yàn)用魚為人工培育的銀鯧幼魚，養(yǎng)殖密度為20 ind/m3。從同一池中選取健康活潑、同一批次培育的大小規(guī)格相近的個(gè)體810尾，平均體質(zhì)量3.88±0.72 g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用有效水體1 m3的PVC圓桶進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)分成3個(gè)密度處理組，分別為低密度組(30 ind/m3)、中密度組(60 ind/m3)、高密度組(90 ind/m3)，每組三個(gè)平行。試驗(yàn)周期為40 d，試驗(yàn)期間連續(xù)充氣，避光養(yǎng)殖，對(duì)三個(gè)密度組的水質(zhì)進(jìn)行調(diào)控，盡量使水質(zhì)保持一致。所選用的飼料為自制的黏性團(tuán)狀飼料(日本產(chǎn)“魚寶”牌飼料+新鮮魚肉糜+海蜇的混合料)，置于水中間的餌料臺(tái)內(nèi)。為保證營(yíng)養(yǎng)不溶失，每隔2～3 h更換飼料。海水鹽度24‰～26‰，pH值為7.9～8.1，水溫(28±1)℃，溶解氧(DO)含量>7 mg·L-1。

1.3 樣品采集及保存辦法

在試驗(yàn)開(kāi)始后的第0、5、10、20 d和40 d分別進(jìn)行取樣。取大小相近，活力較好，健康的幼魚進(jìn)行試驗(yàn)，每次每個(gè)處理組各取6尾(每個(gè)平行取2尾)，取樣后及時(shí)減少桶內(nèi)水體積，以保持相應(yīng)的密度。將取出的活魚立即用MS-222麻醉，分別稱量體質(zhì)量和體長(zhǎng)并記錄，然后將魚置于冰盤上快速解剖，取部分腸、胃置于-80 ℃冷凍保存。

1.4 測(cè)定方法

1.4.1 生長(zhǎng)指標(biāo)計(jì)算

增重率(WG, 單位: %)和特定生長(zhǎng)率(SGR, 單位: %)計(jì)算公式如下:

WG=100×(mt-m0)/m0

(1)

SGR=100×(lnmt-lnm0)/t

(2)

式中:m0為試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)試驗(yàn)魚的初始平均體質(zhì)量，g；mt為結(jié)束時(shí)試驗(yàn)魚的初始平均體質(zhì)量， g；t為試驗(yàn)天數(shù)，d。

1.4.2 蛋白濃度的測(cè)定-BCA法 采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的總蛋白定量測(cè)定試劑盒，組織中蛋白濃度采用BCA法測(cè)定，將20 μL待測(cè)液加入樣品孔，再加入200 μL BCA工作液，37 ℃恒溫箱保溫20～30 min，用分光光度計(jì)在562 nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔吸光值。

1.4.3 銀鯧胃組織中胃蛋白酶酶活性的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)為1∶9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，然后用研磨棒在冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成10 %的勻漿。將離心機(jī)預(yù)冷，用離心機(jī)在2 500轉(zhuǎn)/min下離心10 min，離心完成后取其上清液進(jìn)行測(cè)定。酶活力測(cè)定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的胃蛋白酶測(cè)定試劑盒，依次添加試劑，最終在室溫下用紫外分光光度計(jì)在660 nm處測(cè)量吸光度。胃蛋白酶酶活力定義：每毫克組織蛋白在37 ℃條件下每分鐘分解蛋白質(zhì)生成1 μg氨基酸相當(dāng)于1個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：胃蛋白酶活力(U/mg)=(測(cè)定管OD值-對(duì)照管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD 值)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(50 μg/mL)/反應(yīng)時(shí)間(10 min)×反應(yīng)液總體積(0.64 mL)/取樣量(0.04 mL)/待測(cè)樣本蛋白濃度(mg/mL)。

1.4.4 銀鯧胰臟組織中胰蛋白酶活性的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)為1∶9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，然后用研磨棒在冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成10 %的組織勻漿，將離心機(jī)預(yù)冷，用離心機(jī)在2 500轉(zhuǎn)/min下離心10 min，離心完成后取其上清液進(jìn)行測(cè)定。酶活力測(cè)定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的胰蛋白酶測(cè)定試劑盒，將0.015 mL待測(cè)樣品和1.5 mL胰蛋白酶底物應(yīng)用液快速混勻，室溫下用紫外分光光度計(jì)在253 nm處測(cè)量吸光度。胰蛋白酶酶活力定義：在pH值為8.0，溫度為37 ℃條件下，每毫克蛋白質(zhì)中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003即為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：胰蛋白酶活性(U/mg)=[(測(cè)定管A2-測(cè)定管A1)-(空白管A2-空白管A1)]/20 min/0.003×反應(yīng)液總體積(1.5 mL+0.015 mL)/樣本取樣量(0.015 mL)/[樣本中蛋白濃度(mg/mL)×樣本取樣量(0.015 mL)]。

1.4.5 淀粉酶活力的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)為1∶9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，然后用研磨棒在冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成10 %的組織勻漿，將離心機(jī)預(yù)冷，用離心機(jī)在2 500轉(zhuǎn)/min下離心10 min，離心完成后取其上清液進(jìn)行測(cè)定。酶活力測(cè)定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的α-淀粉酶(AMS)測(cè)試盒，將0.5 mL底物緩沖液和0.1 mL待測(cè)樣品混合，之后依次加入碘應(yīng)用液和雙蒸水，室溫下用酶標(biāo)儀在660 nm處測(cè)量吸光度。淀粉酶酶活力定義：組織中每毫克蛋白質(zhì)在37 ℃條件下與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個(gè)淀粉酶活力單位。

計(jì)算公式：淀粉酶活力(U/mg)=(空白管OD值-測(cè)定管OD值)/空白OD值×0.4×0.5/10×30 min/7.5 min/[取樣量(0.1 mL)×待測(cè)樣本蛋白濃度(mg/mL)。

1.4.6 脂肪酶活性的測(cè)定 準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)為1∶4的比例加入4倍體積的生理鹽水(自配)，然后用研磨棒在冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成20 %的組織勻漿，將離心機(jī)預(yù)冷，用離心機(jī)在2 500轉(zhuǎn)/min下離心10 min，離心完成后取其上清液進(jìn)行測(cè)定。酶活力測(cè)定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的脂肪酶(LPS)測(cè)定試劑盒，將2 mL底物緩沖液和25 μL 20 %組織勻漿混合，加入25 μL試劑四，室溫下用酶標(biāo)儀在420 nm處測(cè)量吸光度。脂肪酶酶活力定義：在溫度為37 ℃下，每克組織蛋白在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式：脂肪酶活力(U/g)=(A1-A2)/AS×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(454 μmol/L)×反應(yīng)液總體積(2.05 mL)/取樣量(0.025 mL)/反應(yīng)時(shí)間(10 min)/待測(cè)樣本蛋白濃度(g/L)。

式中：A1為樣本待測(cè)溶液在石英比色皿中，波長(zhǎng)為420 nm下，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)30 s時(shí)讀取的吸光值；A2為樣本待測(cè)溶液在37 ℃水浴鍋中水浴10 min后倒回比色皿中，波長(zhǎng)420 nm處，計(jì)時(shí)30 s時(shí)讀取的吸光值；As為2 mL底物緩沖液和50 μL生理鹽水充分混合后，在波長(zhǎng)為420 nm處測(cè)量吸光值。

1.4.7 數(shù)據(jù)的處理與統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示。所測(cè)數(shù)據(jù)采用“SPSS version 19.0”軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)；統(tǒng)計(jì)間若有顯著差異，再用Duncan法進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧生長(zhǎng)的影響

3個(gè)密度組銀鯧幼魚的增重率、特定生長(zhǎng)率如圖1、圖2所示。中密度組(60 ind/m3)銀鯧幼魚的增重率與特定生長(zhǎng)率分別為(235.19±10.23)%、(4.03±0.10)%，顯著高于低密度組(P<0.05)，高密度組(90 ind/m3)幼魚的增重率與特定生長(zhǎng)率分別為(196.00±24.25)%、(3.61±0.27)%，均略低于中密度組，但無(wú)顯著性差異(P>0.05)，從增重率和特定生長(zhǎng)率這兩個(gè)指標(biāo)來(lái)看，中密度組>高密度組>低密度組。

注：不同字母表示差異顯著(P<0.05)，下同。圖1 養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧增重率的影響

圖2 養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧特定生長(zhǎng)率的影響

在養(yǎng)殖周期內(nèi)，不同密度組下銀鯧幼魚的生長(zhǎng)方程曲線如圖3所示。其中低密度組生長(zhǎng)方程為W=-0.007 2t2+0.478 3t+6.242，R2=0.826;中密度組生長(zhǎng)方程為W=-0.002 8t2+0.364 9t+5.362 1，R2=0.938;高密度組生長(zhǎng)方程為W=-0.004 6t2+0.397 1t+4.903 6，R2=0.939。在0～5 d時(shí)，銀鯧幼魚的增長(zhǎng)幅度最大，其中低密度組增長(zhǎng)率為132.6%，為同時(shí)期中密度組的1.09倍，高密度組的1.36倍。之后，不同密度組的增重率均有所放緩。至5～10 d時(shí)，低密度組的增重率為16.0%仍高于中密度組。而在10～20 d、20～30 d、30～40 d這幾個(gè)周期內(nèi)，中密度組的增長(zhǎng)率分別為21.2%、15.4%和26.3%，均高于同時(shí)期的低密度組和高密度組。根據(jù)生長(zhǎng)方程預(yù)測(cè)，三個(gè)密度組在0～5 d時(shí)都處于快速增長(zhǎng)時(shí)期，20 d后低密度組增重變得緩慢，高密度組的增重較中密度組有所下降，而中密度組仍保持相對(duì)穩(wěn)定的增長(zhǎng)。

圖3 不同養(yǎng)殖密度下銀鯧幼魚的生長(zhǎng)方程曲線

2.2 養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧四種消化酶活性的影響

2.2.1 胃蛋白酶 如圖4，隨著養(yǎng)殖時(shí)間的變化，低密度組的胃蛋白酶活性整體呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，且變化顯著(P<0.05)； 40 d后，低密度組的胃蛋白酶活性顯著高于中密度組和高密度組(P<0.05)。高密度組隨著時(shí)間的變化呈現(xiàn)出先上升后下降的變化，在5 d時(shí)，胃蛋白酶活性達(dá)到峰值，為11.69 U/mg，為40 d時(shí)胃蛋白酶活的2.75倍；之后一直呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，在40 d時(shí)達(dá)到最低值，為4.89 U/mg。中密度的酶活變化趨勢(shì)與高密度組相一致，同為先上升后下降的變化，于5 d時(shí)達(dá)到峰值為9.36 U/mg，顯著低于高密度組(P<0.05)；于40 d時(shí)達(dá)到最低值，與高密度組差異不顯著(P>0.05)。10 d前，高密度組銀鯧幼魚的胃蛋白酶活性最高；10 d后，低密度組銀鯧幼魚的胃蛋白酶活性最高。

注：不同字母表示組間差異顯著(P<0.05)，下同。圖4 養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧胃蛋白酶活性的影響

2.2.2 胰蛋白酶 如圖5，剛出生的幼魚在3個(gè)密度組中都表現(xiàn)出較高的胰蛋白酶活性。5 d后，胰蛋白酶在高密度組與低密度組中變化相一致，均呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化，且變化顯著(P<0.05)；其中，低密度組胰蛋白酶活性在10 d時(shí)達(dá)到高峰值，為287.55 U/mg；而高密度組在20 d時(shí)達(dá)到高峰值，為281.00 U/mg，峰值比低密度組更晚到來(lái)。在0 h～10 d時(shí)，低密度組胰蛋白酶活性始終高于中密度組和高密度組；20～30 d時(shí)高密度組胰蛋白酶活性顯著高于中密度組和低密度組，但低于初始水平(P<0.05)。

圖5 養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧胰蛋白酶活性的影響

2.2.3 淀粉酶 如圖6，在養(yǎng)殖過(guò)程中，低密度組淀粉酶活性呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化，在20 d時(shí)達(dá)到最大值，為1032 U/mg。中密度組淀粉酶的活性呈現(xiàn)先上升后下降的變化，其在5 d時(shí)達(dá)到最大值，為1 074 U/mg，10 d后，淀粉酶活性處于較低水平，且較初始水平有所下降。0～20 d高密度組酶的活性呈現(xiàn)先上升后下降再上升的變化，40 d后，淀粉酶活力顯著高于中密度和低密度組(P<0.05)。

2.2.4 脂肪酶 如圖7，剛出生的幼魚在3個(gè)密度組中都表現(xiàn)出較高的脂肪酶活性。此后，低密度組呈現(xiàn)先下降后上升再下降的變化，且變化差異顯著(P<0.05)，在5 d時(shí)達(dá)到最小值，為26.37 U/mg；在20 d時(shí)達(dá)最大值，為66.55 U/mg。中密度組的脂肪酶活性變化趨勢(shì)與低密度相一致，在10 d時(shí)降至最小值，為33.00 U/mg；在20 d時(shí)升至最大值，達(dá)到60.55 U/mg。高密度組脂肪酶活性在0 h～10 d無(wú)顯著變化(P>0.05)，10～20 d酶活急劇下降，降至16.05 U/mg，20 d后酶活無(wú)顯著變化。40 d后高密度組的脂肪酶活性低于中密度和低密度組，且差異極其顯著(P<0.01)。

圖7 養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧脂肪酶活性的影響

3 討論

3.1 擁擠脅迫對(duì)魚類生長(zhǎng)的影響

一般認(rèn)為，除了餌料、遺傳、環(huán)境條件等因素之外，養(yǎng)殖密度被認(rèn)為是影響野生或養(yǎng)殖魚類生長(zhǎng)和性成熟最重要的因素之一。在一般情況下，隨著養(yǎng)殖密度的增大,魚類由于競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系的加劇會(huì)產(chǎn)生更多的活動(dòng)耗能，具體表現(xiàn)為高密度養(yǎng)殖條件下易出現(xiàn)食物資源不足的現(xiàn)象，此時(shí)，個(gè)體間爭(zhēng)食和攻擊行為會(huì)明顯增強(qiáng)，這會(huì)使攝入的能量更多地被用于這類非生長(zhǎng)因素，生長(zhǎng)速率自然隨著養(yǎng)殖密度的增加而出現(xiàn)降低，兩者之間往往存在著負(fù)相關(guān)的關(guān)系。此外，高密度的養(yǎng)殖環(huán)境會(huì)對(duì)魚類產(chǎn)生一種脅迫作用,迫使魚體長(zhǎng)期處于一種生理應(yīng)激狀態(tài)，使得其生理功能發(fā)生紊亂，從而影響其個(gè)體的生長(zhǎng)。一般情況下，魚類應(yīng)對(duì)環(huán)境脅迫時(shí)的應(yīng)激反應(yīng)主要有：警惕性提高、活動(dòng)增強(qiáng)、喜歡集群游動(dòng)進(jìn)而表現(xiàn)為無(wú)休止游動(dòng)等。因此，可以看出高密度養(yǎng)殖引起的生理應(yīng)激行為往往具有抑制作用。曹陽(yáng)等[7]為研究俄羅斯鱘(Acipensergueldenstaedtii)在不同密度下的生存狀態(tài)，設(shè)計(jì)了低(0.8 kg/m3)、中(1.6 kg/m3)和高(3.2 kg/m3)三個(gè)不同密度組。研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)56 d的飼養(yǎng)，不同密度對(duì)幼魚的成活率未造成顯著的影響(P>0.05)。隨著養(yǎng)殖密度的升高，中密度組俄羅斯鱘的增重率和肥滿度顯著高于高密度組，但與低密度組無(wú)顯著差異。Li[19]研究史氏鱘(Amursturgeon)時(shí)發(fā)現(xiàn)，在高密度條件養(yǎng)殖下，魚體的生長(zhǎng)率與增重率往往和養(yǎng)殖密度呈負(fù)相關(guān)，高密度組的生長(zhǎng)率和增重率顯著低于低密度組。黃寧宇等[20]研究瓦氏黃顙魚(Pelteobagrusvachelli)時(shí)，分別設(shè)置5個(gè)養(yǎng)殖密度(80 、160、240、320 ind/m3和400 ind/m3)。經(jīng)過(guò)30 d的試驗(yàn)，結(jié)果顯示，養(yǎng)殖密度和溫度的確會(huì)對(duì)瓦氏黃顙魚幼魚的生長(zhǎng)產(chǎn)生顯著影響。瓦氏黃顙魚幼魚的日增重、特定增長(zhǎng)率、生長(zhǎng)效率均隨密度的增大而減小，凈增重240 ind/m3和160 ind/m3兩密度組最高，與本試驗(yàn)結(jié)果相近。江仁黨[21]研究虹鱒(Oncorhynchusmykiss)時(shí)也得出了類似結(jié)果，試驗(yàn)設(shè)4個(gè)密度組， 初始密度分別為250、200、150尾和100尾，分別放入4個(gè)網(wǎng)箱中，分別于7月22日、8月14日、9月15日和10月15日對(duì)其進(jìn)行生長(zhǎng)測(cè)定，每次測(cè)量30尾。結(jié)果得出，在高密度條件養(yǎng)殖下，魚體的生長(zhǎng)率與增重率往往和養(yǎng)殖密度呈負(fù)相關(guān)，高密度組的生長(zhǎng)率和增重率顯著低于低密度組，與上述學(xué)者研究結(jié)果相一致。

也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，過(guò)低的養(yǎng)殖密度也會(huì)對(duì)魚類產(chǎn)生明顯的抑制作用。例如鄒雄等[22]對(duì)點(diǎn)籃子魚(Siganusguttatus)的研究發(fā)現(xiàn)，密度為4.95 kg/m3組的點(diǎn)籃子魚生長(zhǎng)要優(yōu)于密度為2.48 kg/m3組，且顯著高于7.80 kg/m3組和10.20 kg/m3組。逯尚尉等[23]研究也認(rèn)為，密度為2.1 kg/m3組的增重率最大，過(guò)高或過(guò)低的養(yǎng)殖密度都會(huì)對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(Epinephelusmalabaricus)生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制。本試驗(yàn)中高密度組(90 ind/m3)的增重率與特定生長(zhǎng)率均低于中密度組(60 ind/m3)，說(shuō)明高密度的養(yǎng)殖條件確實(shí)對(duì)銀鯧產(chǎn)生一定的脅迫作用；但本試驗(yàn)中中密度組(90 ind/m3)的增重率與特定生長(zhǎng)率高于高、低密度組，與鄒雄、逯尚尉等的研究結(jié)果相一致。分析認(rèn)為可能是因?yàn)辄c(diǎn)籃子魚、點(diǎn)帶石斑魚、銀鯧這類魚屬于群居魚類，具有集群行為，過(guò)低的養(yǎng)殖密度對(duì)其產(chǎn)生了抑制作用。李大鵬等[24]也研究證實(shí)，過(guò)低的養(yǎng)殖密度往往會(huì)導(dǎo)致群居魚類出現(xiàn)食欲下降、生長(zhǎng)減緩、行為異常等現(xiàn)象，而當(dāng)其集群生活時(shí)，則會(huì)恢復(fù)為行為活潑、積極進(jìn)食、生長(zhǎng)加快的狀態(tài)。這一點(diǎn)上從試驗(yàn)中體重生長(zhǎng)方程中也可看出，試驗(yàn)中低密度組銀鯧幼魚在發(fā)育到20 d后，增重幅度顯著下降，明顯低于中密度組。高密度組的銀鯧幼魚增重幅度相較于中密度組也呈現(xiàn)一定程度的下降。

3.2 擁擠脅迫對(duì)銀鯧消化酶活性的影響

魚類受到外界不良環(huán)境因素刺激時(shí)，面臨生存壓力，其體內(nèi)會(huì)發(fā)生一系列的生理改變，導(dǎo)致其體內(nèi)消化酶活性、激素水平等內(nèi)分泌系統(tǒng)的活性發(fā)生變化，這一般稱為適應(yīng)性綜合征，又稱為應(yīng)激反應(yīng)。生理學(xué)家Selye H等[25]于1936年首先提出了應(yīng)激的概念，并將其分為警告期、抵抗期和疲憊期三個(gè)階段。學(xué)者Pickering[26]研究報(bào)告表明，魚類對(duì)外界脅迫確實(shí)存在一定的適應(yīng)性反應(yīng)，大致分為以下三個(gè)階段，即最初的機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌活動(dòng)的變化到由此引發(fā)的生理、生化及免疫的系列反應(yīng)變化，最終反映在行為上的改變。

高密度養(yǎng)殖往往會(huì)導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物生活空間的減小，進(jìn)而加劇水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)空間和餌料的競(jìng)爭(zhēng)，導(dǎo)致水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體能量消耗增多，具體表現(xiàn)為各類酶活性的變化[27]。消化酶是動(dòng)物體內(nèi)一大重要的酶類，其活力的高低可以直接反映動(dòng)物體內(nèi)消化能力的強(qiáng)弱。同時(shí)，消化酶作為魚類消化系統(tǒng)中極其重要的一類功能性物質(zhì)，在魚類生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程中，對(duì)其適應(yīng)食物變化的能力和攝取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力具有顯著影響[16]。

在大菱鲆(Scophthalmusmaximus)的研究中，喬瑋等[17]對(duì)大菱鲆進(jìn)行3個(gè)密度組養(yǎng)殖處理。研究發(fā)現(xiàn)，隨著養(yǎng)殖密度的增加，大菱鲆的總蛋白酶(TMP)和淀粉酶(AMS)活力整體呈下降趨勢(shì)；且隨著時(shí)間的變化，每個(gè)密度組的TMP和AMS活力也呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)，120 d后，低密度組和中密度組的TMP和AMS活力表現(xiàn)均顯著低于高密度組。本試驗(yàn)中，養(yǎng)殖進(jìn)行到40 d時(shí)，高密度組中銀鯧胃蛋白酶、胰蛋白酶顯著低于0 h時(shí)水平，說(shuō)明高密度養(yǎng)殖使得銀鯧的胃蛋白酶、胰蛋白酶下降，蛋白質(zhì)消化吸收能力下降，這將是導(dǎo)致高密度下銀鯧生長(zhǎng)緩慢的重要因素之一，這與喬瑋等人的研究結(jié)果相一致。且本試驗(yàn)中低密度組和高密度組中的胰蛋白酶活性在0 h～40 d之間發(fā)生了一致且顯著的先下降后上升再下降的變化，且低密度組的高峰期比高密度組更快到來(lái)，Bolasina等[28]研究牙鲆(Paralichthysolivaceus)時(shí)也發(fā)現(xiàn)了相同現(xiàn)象，牙鲆的高低密度組胰蛋白酶活性出現(xiàn)顯著的升降變化，且低密度組的高峰期也出現(xiàn)在高密度組之前。鄧超準(zhǔn)等[18]在研究星洲紅魚時(shí)，對(duì)星洲紅魚進(jìn)行5個(gè)密度組處理(M1、M2、M3、M4、M5)，養(yǎng)殖30 d后測(cè)定其肝胰腺、腸、胃中的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶活力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在M3、M4這樣的較高密度組中，三種組織中的四種消化酶的活力均顯著高于M1組。Liang等[29]有關(guān)鰱(Hypophthalmichthysmolitrix)的研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，高密度組鰱的AMS活力顯著高于低密度組鰱。本試驗(yàn)中，在對(duì)銀鯧幼魚進(jìn)行為期40 d的養(yǎng)殖后，高密度組銀鯧幼魚的淀粉酶、胰蛋白酶活力均顯著高于低密度組，低密度組銀鯧幼魚的胃蛋白酶活性明顯(P<0.05)高于中、高密度組，可見(jiàn)擁擠脅迫對(duì)胃蛋白酶的活性影響較大，養(yǎng)殖密度增大，酶的活性甚至低于初始的酶的活性水平。此外，養(yǎng)殖40 d后的高密度組中脂肪酶活性卻顯著低于中密度組和低密度組，這可能是擁擠脅迫使得銀鯧的脂肪的消化能力大大下降，這也是本試驗(yàn)中高密度組銀鯧生長(zhǎng)率和增重率顯著低于中密度組和高密度組的重要原因。研究表明，在高密度條件下，魚類為了獲取食物和協(xié)調(diào)種間關(guān)系，需要消耗更多的能量來(lái)對(duì)抗這些因素影響，這不僅會(huì)導(dǎo)致耗能活動(dòng)增加，還會(huì)導(dǎo)致代謝水平的提高[30]。這可能是本試驗(yàn)中高密度組淀粉酶活力、胰蛋白酶活力顯著高于低密度組的原因。

4 結(jié)論

綜上所述，養(yǎng)殖密度對(duì)銀鯧幼魚的生長(zhǎng)存在影響。試驗(yàn)中養(yǎng)殖密度為60 ind/m3的銀鯧幼魚的生長(zhǎng)狀況最好，而過(guò)高或過(guò)低的養(yǎng)殖密度都會(huì)對(duì)銀鯧的生長(zhǎng)造成不利影響。銀鯧的體重生長(zhǎng)方程表明20 d后，低密度組的生長(zhǎng)速率明顯下降，而高密度組也表現(xiàn)出低于中密度組的增重速率。關(guān)于消化酶水平的研究發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖進(jìn)行到40 d時(shí)，高密度組銀鯧幼魚淀粉酶和胰蛋白酶活力均顯著高于低密度組，而胃蛋白酶和脂肪酶活力相較于中、低密度組明顯下降。其中，胃蛋白酶和脂肪酶活性水平的下降可能揭示了高密度養(yǎng)殖環(huán)境下銀鯧幼魚因?qū)κ澄镏械鞍缀椭镜睦寐瘦^低而導(dǎo)致的增重率和特定生長(zhǎng)率較低的問(wèn)題。而另一方面，淀粉酶和胰蛋白酶活力的提高反映出銀鯧幼魚在高密度養(yǎng)殖條件下代謝水平的提高，這也會(huì)進(jìn)一步加劇能量消耗，導(dǎo)致體重的增加減少及生長(zhǎng)受到一定抑制。