李君一 袁福杰 劉科琳 王英

原發(fā)性急性閉角型青光眼（Primary acute angle closure glaucoma，PAACG）是我國(guó)原發(fā)性青光眼最常見(jiàn)的類(lèi)型，病理性眼壓升高是急性閉角型青光眼（Acute angle closure glaucoma，AACG）首要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。房水作為重要的眼內(nèi)液，與血漿中蛋白相比，房水蛋白在質(zhì)量與數(shù)量上與其存在一定差異。與以往觀念不同，當(dāng)前研究認(rèn)為房水（Aqueous humor，AH）中的蛋白不僅僅是由睫狀體的毛細(xì)血管濾過(guò)產(chǎn)生，局部組織分泌同樣參與了AH蛋白的生成[1]。近年來(lái)，一些研究認(rèn)為青光眼房水中一些蛋白的改變參與了疾病的發(fā)病過(guò)程，與小梁網(wǎng)（Trabecular，TM）細(xì)胞外基質(zhì)的重塑、炎癥反應(yīng)、神經(jīng)退行性疾病等相關(guān)[2-6]。本研究通過(guò)蛋白組學(xué)分析對(duì)眼壓高低不同的PAACG房水樣本進(jìn)行檢測(cè)，探究眼壓高低不同的PAACG房水蛋白的差異表達(dá)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選取2019 年3 月至2020 年9 月期間于吉林大學(xué)第二醫(yī)院眼科中心入院治療的PAACG患者88例（88眼），按照術(shù)前眼情況分為A組[眼壓≥50 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），36個(gè)樣本]和B組（眼壓≤21 mmHg，52 個(gè)樣本）。將上述A、B組樣本又分為2個(gè)隊(duì)列：發(fā)現(xiàn)隊(duì)列（A組，26個(gè)樣本；B組，37個(gè)樣本）和驗(yàn)證隊(duì)列（A組，10個(gè)樣本；B組，15個(gè)樣本），分別通過(guò)數(shù)據(jù)獨(dú)立采集（Data-independent acquisition，DIA）方法和平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Parallel reaction monitor，PRM）分析房水蛋白。為了減少降眼壓藥物對(duì)房水蛋白組學(xué)的影響，所有PAACG患者均使用了布林佐胺滴眼液（比利時(shí)愛(ài)爾康公司）、酒石酸溴莫尼定滴眼液（愛(ài)爾蘭艾爾建公司）、卡替洛爾滴眼液（中國(guó)廣東大冢制藥有限公司）等降眼壓藥物進(jìn)行治療。本研究遵循赫爾辛基宣言，并通過(guò)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2020044），所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 房水采集

所有患者行房水樣本采集前3 d，使用左氧氟沙星滴眼液（中國(guó)參天制藥公司）預(yù)防感染，手術(shù)準(zhǔn)備過(guò)程中使用鹽酸奧布卡因滴眼液（中國(guó)參天制藥公司）行表面麻醉。在顯微鏡下使用1 ml胰島素注射器（舒銳，上海碧迪醫(yī)療器械有限公司）于前房中緩慢抽取約100 μl房水放入無(wú)菌EP管中，存貯至-80℃冰箱直至分析。所有的青光眼手術(shù)及房水采集過(guò)程均由同一經(jīng)驗(yàn)豐富、操作熟練的醫(yī)師完成。

1.3 房水蛋白樣本制備

1.3.1 蛋白提取 房水樣本使用3倍體積的乙醇沉淀過(guò)夜，然后在10 625 r/m離心30 min。將蛋白重新懸浮在裂解緩沖液（7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、0.1 mol/L二硫蘇糖醇和5 mmol/L Tris）中。通過(guò)Bradford方法進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定。

1.3.2 蛋白消化 蛋白樣本（50～200 μl）在95℃下用20 mmol/L二硫蘇糖醇（Dithiothreitol，DTT）還原5 min 使蛋白變性，然后在溫室黑暗中用55 mmol/L碘乙酰胺烷基化45 min，再加入胰蛋白酶（1:50），在37℃下孵育過(guò)夜。消化后將所得肽進(jìn)行高壓液相色譜（High-pressure liquid chromatography，HPLC）分離。

1.3.3 HPLC分離 采用高pH RPLC色譜柱（4.6 mm×250 mm，C18，3 μm；美國(guó)Waters公司）分離混合的肽樣品。將樣品加入到緩沖液A1（H2O，PH=10）中。洗脫梯度為5%～30%的緩沖液B1（90%乙腈，PH=10；流速，1 ml/min）持續(xù)30 min。每分鐘收集1 份洗脫的肽，將其凍干后，將30 個(gè)餾分重懸于0.1%甲酸中，用于液相色譜-質(zhì)譜（Liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）分析。

1.3.4 LC-MS分析 Orbitrap Fusion Lumos tribrid質(zhì)譜儀（德國(guó)Thermo Scientific公司）與EASY-nLC 1000 結(jié)合用于依賴(lài)數(shù)據(jù)采集質(zhì)譜（Data-dependent acquisition，DDA-MS）和數(shù)據(jù)獨(dú)立采集-質(zhì)譜（Data independent acquisition–mass spectrometry，DIAMS）模式下的質(zhì)譜（Mass spectrometry，MS）分析。在RP C18自填充毛細(xì)管液相色譜柱（75 μm×100 mm，3 μm）上分離消化的肽。洗脫梯度為5%～30%緩沖液B2（0.1% 甲酸，99.9%乙腈；流速，0.3 μl/min），持續(xù)60 min。

1.3.5 光譜圖庫(kù)的建立及生成 以依賴(lài)數(shù)據(jù)采集（Data-dependent acquisition，DDA）模式分析了RPLC的30 個(gè)餾分。在DIA模式下分析每個(gè)單獨(dú)的樣品。使用Proteome Discoverer（德國(guó)Thermo Scientific公司）軟件處理DDA數(shù)據(jù)，并在附加了iRT融合蛋白序列（瑞士Biognosys公司）的人類(lèi)SwissProt數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行搜索。將結(jié)果導(dǎo)入Spectronaut Pulsar（瑞士Biognosys公司）軟件中。

經(jīng)濟(jì)全球化和貿(mào)易自由化正改變著我們的世界，當(dāng)今人們處于一個(gè)世界性的人口、商品、財(cái)富、信息和思想的不斷交換之中，這種行為已然構(gòu)成了復(fù)雜的全球性網(wǎng)絡(luò)[1-3].隨著全球化進(jìn)程的不斷加快，世界各個(gè)國(guó)家和地區(qū)間的貿(mào)易活動(dòng)更加頻繁，區(qū)域經(jīng)濟(jì)系統(tǒng)間的相互依賴(lài)程度也不斷加大[4].

1.3.6 PRM質(zhì)譜分析 在Triple TOF 5600上進(jìn)行PRM分析。肽段的分離在RPC18自填充毛細(xì)管LC色譜柱（50 μm×500 mm，3 μm）上進(jìn)行。洗脫的梯度為5%～30%的緩沖液B1（0.1%的甲酸，99.9%的乙腈；流速為0.3 μl/min），持續(xù)60 min。為了電離，使用2.10 kV的噴霧電壓和60℃的毛細(xì)管溫度。使用PRM采集模式監(jiān)控肽段，沿著完整的色譜運(yùn)行對(duì)所有肽段標(biāo)記物進(jìn)行前體離子的MS/MS掃描，每個(gè)樣品運(yùn)行2次。歸一化碰撞能量固定為35%，累積時(shí)間為300 s。

1.3.7 數(shù)據(jù)分析 采用Spectronaut Pulsar（瑞士Biognosys公司）以默認(rèn)設(shè)置分析DIA-MS數(shù)據(jù)。Q值截止值為0.01對(duì)應(yīng)[發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤率（False discovery rate，F(xiàn)DR）為1%]過(guò)濾所有結(jié)果。對(duì)于PRM模式，使用Skyline軟件（版本3.5.0.9319）為所選的候選肽生物標(biāo)記物選擇合適的m/z前體離子→m/z片段離子躍。

1.3.8 生物信息學(xué)分析 蛋白質(zhì)分類(lèi)是基于功能注釋進(jìn)行的，使用基因本體論（Gene ontology，GO）對(duì)生物過(guò)程、分子功能和細(xì)胞定位進(jìn)行蛋白質(zhì)分類(lèi)。此外，所有選擇的蛋白質(zhì)均使用IPA軟件（美國(guó)Ingenuity Systems公司）進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

病例對(duì)照研究。采用Prism Graph Pad統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析蛋白表達(dá)差異。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 定量蛋白質(zhì)分析

對(duì)發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中所有的房水樣本進(jìn)行檢測(cè)，共發(fā)現(xiàn)636種蛋白質(zhì)，通過(guò)質(zhì)量控制分析即去除了50%的默認(rèn)蛋白質(zhì)和較高的變異系數(shù)（Coefficents of variability，CV）蛋白，獲得了506種蛋白質(zhì)用于后續(xù)的分析。對(duì)2組樣本進(jìn)行了聚類(lèi)分析，在非監(jiān)督與監(jiān)督模式下，可觀察到A、B組具有較好的聚類(lèi)趨勢(shì)。差異蛋白篩選標(biāo)準(zhǔn)：P<0.05，倍數(shù)變化>1.5。

在506種蛋白質(zhì)，倍數(shù)變化>1.5且P<0.05的蛋白有51個(gè)，A/B表示患者房水中平均蛋白水平倍數(shù)變化。其中A組上調(diào)蛋白有17個(gè)，B組上調(diào)蛋白有34個(gè)。見(jiàn)圖1。

2.2 房水蛋白的GO功能分析

本研究對(duì)鑒定出的房水蛋白采用IPA軟件分析并進(jìn)行GO功能注釋?zhuān)l(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A、B組所有差異蛋白主要參與了細(xì)胞進(jìn)程、對(duì)刺激做出反應(yīng)、代謝過(guò)程、生物調(diào)節(jié)過(guò)程、免疫調(diào)節(jié)等重要生物過(guò)程，見(jiàn)圖2。為了進(jìn)一步了解眼壓高低不同對(duì)于房水中生化途徑的影響，我們進(jìn)行了2組上調(diào)蛋白的對(duì)比分析。對(duì)比了發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A、B組差異蛋白表達(dá)，A組差異蛋白在代謝過(guò)程、多細(xì)胞組織過(guò)程、生物調(diào)節(jié)、對(duì)刺激做出反應(yīng)等生物過(guò)程中表達(dá)明顯上調(diào)；B組差異蛋白在細(xì)胞過(guò)程、生物黏附、定位等生物過(guò)程中表達(dá)明顯上調(diào)，見(jiàn)圖3。

蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)可看到差異蛋白主要與代謝性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)性疾病（阿爾茲海默癥）、脂質(zhì)代謝性疾病相關(guān)。眾所周知，阿爾茲海默癥屬于淀粉樣變性疾病的一種，見(jiàn)圖4。房水中APOA2、CFB、CHI3L1、IGFBP6、IGHA2、MEGF10、PIK3IP1、PROS1、TIMP1和ADGRL1這幾種差異性蛋白均在淀粉樣變性疾病以及阿爾茲海默癥疾病中顯現(xiàn)出相關(guān)性。其中，與阿爾茲海默癥疾病相關(guān)的差異蛋白APOA2、CFB、CHI3L1、IGHA2、PROS1和TIMP1在A組表達(dá)上調(diào)，IGFBP6、MEGF10、PIK3IP1、ADGRL1在B組表達(dá)上調(diào)，見(jiàn)圖5—6。與脂質(zhì)代謝疾病相關(guān)的差異蛋白有APOA2、ARSA、CARTPT、FBN1、NPC2，其中APOA2在A組表達(dá)上調(diào)，其余均在B組表達(dá)上調(diào)（紅色表示在A組中表達(dá)上調(diào)，綠色表示在B組中表達(dá)上調(diào)），見(jiàn)圖7。

圖1.發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A、B組房水差異蛋白基因名稱(chēng)A組患者（眼壓>50 mmHg）房水中蛋白質(zhì)有17種蛋白質(zhì)水平表達(dá)上調(diào)（紅色），B組患者（眼壓<21 mmHg）房水中蛋白質(zhì)有34種蛋白質(zhì)水平表達(dá)上調(diào)（藍(lán)色）。差異表達(dá)為1.5倍變化Figure 1.The names of the differential protein genes in the aqueous humor between groups A and B found in the cohortThe expression of 17 proteins and in the aqueous humor of group A (IOP>50 mmHg) and group B patients (IOP<21 mmHg) was up-regulated (red) and upregulated (blue),respectively.The difference is expressed as a 1.5 fold change.1 mmHg=0.133 kPa.IOP,intraocular pressure.

圖2.發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A、B組所有差異蛋白的生物學(xué)過(guò)程A組：眼壓>50 mmHg；B組：眼壓<21 mmHgFigure 2.The biological process of discovering all differential proteins in the two groups A and B of the cohortGroup A: IOP>50 mmHg;group B: IOP<21 mmHg.1 mmHg=0.133 kPa.IOP,intraocular pressure.

圖3.發(fā)現(xiàn)隊(duì)列A、B組中差異蛋白生物學(xué)過(guò)程分析對(duì)比A組：眼壓>50 mmHg；B組：眼壓<21 mmHgFigure 3.Analysis and comparison of the biological process of differential proteins found in the two groups A and B of the cohortGroup A: IOP>50 mmHg;group B: IOP<21 mmHg.1 mmHg=0.133 kPa.IOP,intraocular pressure.

2.3 PRM驗(yàn)證

驗(yàn)證隊(duì)列（A組，10 個(gè)樣本；B組，15 個(gè)樣本）選取APOA2、LRP2、VASN、TIMPs進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證，研究結(jié)果顯示發(fā)現(xiàn)隊(duì)列與驗(yàn)證隊(duì)列中結(jié)果保持一致，見(jiàn)圖8。

3 討論

病理性眼壓升高是青光眼發(fā)病的首要危險(xiǎn)因素，對(duì)青光眼患者AH中蛋白質(zhì)組學(xué)的分析，有助于了解眼壓高低不同狀態(tài)下AH中差異蛋白的表達(dá)對(duì)于眼內(nèi)微環(huán)境的影響。本研究中，我們通過(guò)對(duì)發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A、B組患者AH中的蛋白組的分析，顯示其中有51 種蛋白質(zhì)存在差異表達(dá)，這些蛋白質(zhì)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)性疾病、炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝等相關(guān)的功能網(wǎng)絡(luò)重疊。本研究認(rèn)為2組不同眼壓的PAACG患者房水中發(fā)生的復(fù)雜蛋白質(zhì)組變化將為尋找青光眼特定生物學(xué)靶標(biāo)（用于疾病的預(yù)防以及相應(yīng)治療策略）提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3.1 炎癥相關(guān)性差異蛋白的生物學(xué)分析

研究證實(shí)炎癥參與青光眼的發(fā)病以及視神經(jīng)損傷[7-8]。本研究結(jié)果顯示發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A組患者房水中CHI3L1、CFB、C1RL、LYZ和CD163等差異蛋白表達(dá)上調(diào)，這些差異蛋白可通過(guò)級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活炎癥及免疫反應(yīng)途徑，進(jìn)一步造成眼內(nèi)壓的升高及視神經(jīng)損傷。

本研究中差異蛋白CHI3L1 在AD以及淀粉樣變性中均存在，CHI3L1是1種由局部產(chǎn)生及釋放的糖蛋白，可由中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、癌細(xì)胞等產(chǎn)生，CHI3L1 被認(rèn)為與急慢性炎癥反應(yīng)、細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）重塑、血管生成等過(guò)程相關(guān)。Qiu等[9]的研究發(fā)現(xiàn)CHI3L1的過(guò)表達(dá)可以促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并可以通過(guò)TGF-β信號(hào)通路參與ECM的調(diào)節(jié)，促進(jìn)纖維化。已有研究顯示在剝脫綜合征患者血清以及房水中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CHI3L1表達(dá)水平上升，并認(rèn)為其表達(dá)增高可能是纖維化過(guò)程中早期剝落物異常生成的觸發(fā)點(diǎn)[10-11]。

血管素是一種I型跨膜糖蛋白，在氧含量正常條件下，其水平較低。而在缺氧條件下血管素表達(dá)顯著增加，血管素水平升高可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移導(dǎo)致血管形成增加[12-14]。而青光眼患者在持續(xù)高眼壓狀態(tài)下，眼前節(jié)組織處于缺血缺氧狀態(tài)，并且可在部分患者虹膜上觀察到新生血管的形成。

先前已有研究報(bào)道補(bǔ)體因子B（Complement factor B，CFB）在組織缺血及免疫過(guò)程中表達(dá)上調(diào)[15]，本研究中發(fā)現(xiàn)隊(duì)列的A組患者房水中的CFB水平升高，可能與持續(xù)高眼壓狀態(tài)下，組織缺血引起細(xì)胞因子上調(diào)有關(guān)。CD163通常作為巨噬細(xì)胞的抗炎性標(biāo)志物，參與細(xì)胞保護(hù)、組織修復(fù)重塑以及纖維化過(guò)程。Margeta等[16]研究對(duì)比了青光眼與正常對(duì)照組眼球解剖結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)CD163在經(jīng)典流出途徑小梁網(wǎng)和Schlemm管周?chē)磉_(dá)明顯上升，與對(duì)照組相比，早期及晚期青光眼視神經(jīng)中CD163+巨噬細(xì)胞顯著增加，并形成軸突浸潤(rùn)。

3.2 神經(jīng)保護(hù)性相關(guān)差異蛋白的生物學(xué)分析

圖4.蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖Figure 4.Network analysis diagram of differential proteins and diseases

圖5.淀粉樣變性相關(guān)的差異蛋白在2組中的表達(dá)Figure 5.Different proteins related to amyloidosis in the two groups of proteins

圖6.阿爾茲海默癥相關(guān)的差異蛋白在2組中的表達(dá)Figure 6.Different proteins related to Alzheimer's disease in the two groups of proteins

圖7.脂質(zhì)代謝相關(guān)的差異蛋白在2組中的表達(dá)Figure 7.Different proteins related to lipid metabolism in the two groups of proteins

氧化應(yīng)激刺激是中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變的重要發(fā)病機(jī)理，神經(jīng)保護(hù)因子可通過(guò)抵抗氧化應(yīng)激過(guò)程來(lái)保護(hù)神經(jīng)元免受侵害。Jeon等[17]的研究表明IGFBP-6是重要的神經(jīng)元存活因子，可以保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞免受H2O2的氧化應(yīng)激刺激。VGF神經(jīng)生長(zhǎng)因子是一種神經(jīng)分泌的營(yíng)養(yǎng)因子，具有神經(jīng)保護(hù)作用。Takeuchi等[18]的研究顯示在視神經(jīng)擠壓發(fā)生后的5～7 d內(nèi)VGF神經(jīng)生長(zhǎng)因子的表達(dá)可能隨著神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活化而上調(diào)。本研究中發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A組VGF神經(jīng)生長(zhǎng)因子的表達(dá)降低，這一改變可能是造成青光眼視神經(jīng)損傷的原因之一。

糖蛋白非轉(zhuǎn)移性黑色素瘤蛋白B（Glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B，GPNMB）主要在小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，是一種跨膜的蛋白。小膠質(zhì)細(xì)胞的活化是許多神經(jīng)退行性疾病的特征性表現(xiàn)，已有研究報(bào)道多種神經(jīng)退行性疾病中發(fā)現(xiàn)GPNMB水平的升高[19]。GPNMB可通過(guò)激活神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分泌至細(xì)胞外并負(fù)調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)來(lái)抑制炎癥反應(yīng)和阻止神經(jīng)元變性[20-21]。由此可見(jiàn)，增加GPNMB的水平可能是未來(lái)潛在的治療靶標(biāo)。

3.3 脂代謝相關(guān)差異蛋白的生物學(xué)分析

IPA途徑分析顯示，發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A組蛋白質(zhì)上調(diào)主要與免疫、炎癥途徑（LXR/RXR激活、急性期反應(yīng)信號(hào)傳導(dǎo)）、動(dòng)脈硬化等信號(hào)傳導(dǎo)途徑相關(guān)。其中LXR及RXR為核受體，參與脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)及將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸，本研究中CARTPT、FBN1、NPC2，APOA2、LRP2等差異蛋白與脂質(zhì)代謝相關(guān)[22-23]。

圖8.驗(yàn)證隊(duì)列中A、B組患者房水中TIMP1、VASN、APOA2、LRP2的濃度比較A組：眼壓>50 mmHg；B組：眼壓<21 mmHgFigure 8.Comparison of the concentrations of TIMP1,VASN,APOA2,and LRP2 in the aqueous humor of patients in groups A and B in the validation cohortGroup A: IOP>50 mmHg;group B: IOP<21 mmHg.a,compared with patients in group A,P<0.05.1 mmHg=0.133 kPa.IOP,intraocular pressure.

APOA2比APOA1的疏水性強(qiáng)，對(duì)脂蛋白代謝以及載脂蛋白穩(wěn)定性有更強(qiáng)的調(diào)節(jié)性,而脂蛋白的構(gòu)象改變可增加淀粉樣變性的敏感度，在Yang等[24]構(gòu)建的小鼠動(dòng)物模型中APOA2在淀粉樣變性中起著至關(guān)重要的作用。

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白受體2（Lipoprotein receptor-related protein 2，LRP2）是調(diào)節(jié)神經(jīng)元生長(zhǎng)和修復(fù)的重要細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)介質(zhì)，具有促進(jìn)軸突的存活、軸突生長(zhǎng)的作用，既往有研究報(bào)道LRP2的突變及缺失可能導(dǎo)致眼壓升高、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞密度降低以及視神經(jīng)的軸突病變[25-27]。

FBN1的正常表達(dá)對(duì)維持房水正常流出具有重要的功能作用，F(xiàn)BN1與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白1（Latent transforming growth factor β-binding protein 1，LTBP-1）之間的相互作用對(duì)于ECM中潛在的TGF-β復(fù)合物穩(wěn)定起重要影響作用，F(xiàn)BN1 的表達(dá)下調(diào)嚴(yán)重影響復(fù)合物的穩(wěn)定，導(dǎo)致TGF-β的活化[28]，致使房水流出減少。

有研究觀察表明CARTPT在神經(jīng)興奮調(diào)節(jié)行為中起著積極作用，一些研究把CARTPT認(rèn)定為人類(lèi)內(nèi)源性抗抑郁藥物，相較健康對(duì)照組腦脊液中CARTPT水平，重度抑郁癥患者顯著降低[29-30]。而青光眼作為一種身心性疾病，與正常健康對(duì)照組相比，青光眼患者患抑郁的風(fēng)險(xiǎn)顯著增高[31-32]。本研究結(jié)果顯示，發(fā)現(xiàn)隊(duì)列中A組患者房水中CARTPT表達(dá)顯著低于B組。

3.4 其他

基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases，M M P）可以降解E C M，減輕房水流出阻力，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑（Tissue inhibitors of metalloproteinase，TIMP）作為MMP的非選擇性抑制劑，可以通過(guò)1:1與MMP結(jié)合從而抑制其活性[33-34]。有研究報(bào)道，與白內(nèi)障對(duì)照組相比，無(wú)論是POAG還是PACG患者，房水中均顯示TIMPs含量增加，MMP/TIMP比例失衡[35]。本研究中可以看到A組房水中TIMP1水平高于B組，表明在高眼壓持續(xù)狀態(tài)下，房水中TIMPs的表達(dá)上調(diào)導(dǎo)致ECM重塑，增加房水的流出阻力，形成惡性循環(huán)，眼壓進(jìn)一步升高。

綜上所述，PAACG眼壓升高可能與免疫炎癥反應(yīng)以及小梁網(wǎng)細(xì)胞外基質(zhì)重塑相關(guān)，青光眼可能與阿爾茲海默癥等神經(jīng)退行性疾病一樣具有相似的神經(jīng)損傷病理機(jī)制，除此之外，神經(jīng)保護(hù)性蛋白的缺失可能會(huì)進(jìn)一步加重視神經(jīng)損傷。本研究也存在一些不足之處，我們對(duì)眼壓高低不同的PAACG患者房水差異蛋白進(jìn)行了初步探討，但出于倫理及安全考慮未能夠?qū)⒖骨喙庋鬯幬飳?duì)房水蛋白的影響排除在外，后續(xù)我們可通過(guò)相關(guān)的動(dòng)物模型及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)展開(kāi)進(jìn)一步深入的探究。

利益沖突申明本研究無(wú)任何利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明李君一：參與選題、設(shè)計(jì)及相關(guān)文獻(xiàn)的分析和總結(jié)；撰寫(xiě)論文；根據(jù)編輯部的意見(jiàn)進(jìn)行修改。袁福杰：參與選題、設(shè)計(jì)及相關(guān)文獻(xiàn)的分析和總結(jié)。劉科琳：參與選題、設(shè)計(jì)和修改論文的結(jié)果結(jié)論。王英：參與選題、設(shè)計(jì)及相關(guān)文獻(xiàn)的分析和總結(jié)，修改論文中關(guān)鍵性結(jié)果、結(jié)論，根據(jù)編輯部的修改意見(jiàn)進(jìn)行核修