鐘紹金 ，韓珊穎 ，何小愛 ，黃裕昌 （1.上海市第六人民醫(yī)院-?？谑泄强婆c糖尿病醫(yī)院藥學部，?？?570000；.中南大學湘雅醫(yī)學院附屬?？卺t(yī)院藥學部，?？?57008；.海南省藥物研究所，?？?57011）

胰島素抵抗（insulin resistance，IR）是導致糖尿病發(fā)病的核心機制之一[1]。目前研究認為，IR的發(fā)生與肝臟的糖脂代謝異常及高炎癥反應水平相關，通過調節(jié)肝臟糖脂代謝、改善IR是糖尿病治療的有效手段[2]。過氧化物酶增殖體激活受體γ（peroxidase proliferator-activated receptor γ，PPARγ）主要表達于脂肪組織，可激活下游分子蛋白腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）并使其發(fā)生磷酸化，進而下調其下游信號分子核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）表達，抑制病理形態(tài)下細胞缺氧和復氧過程中的高炎癥反應水平，從而降低氧化應激反應，恢復糖脂代謝平衡。糖脂代謝異常是糖尿病患者的主要特征，因此，有研究者推測PPARγ/AMPK/NF-κB信號通路異常與糖尿病患者IR現(xiàn)象存在一定的聯(lián)系[3]。

余甘子為藏族藥食兩用常用藥材，是大戟科葉下珠屬植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果實，富含多糖、多酚、皂苷、維生素等多種活性成分?，F(xiàn)代研究證實，其具有保肝、調血脂、降血糖等多重作用[4]，長期服用可達到減少體質量、降糖及調脂等功效，具有改善肥胖狀態(tài)的潛力[5]。自國內學者發(fā)現(xiàn)余甘子提取物可以有效降低糖尿病模型小鼠血糖水平后，余甘子在糖尿病領域的應用逐漸受到關注，探索其降糖的藥理機制也成為研究熱點[6]。體外研究證實，余甘子醇提物中多糖成分對α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶表現(xiàn)出劑量依賴性的抑制活性，顯示出一定的降血糖和抗氧化作用[7]。余甘子提取物中的沒食子酸在細胞水平能夠影響PPARγ的表達，并調節(jié)其下游信號通路[8]。既往機制研究多集中于余甘子醇提物或提取物，而臨床應用余甘子均為水煎劑，其降糖機制有待進一步研究，同時亦缺少動物模型來驗證。本研究以余甘子水提物對IR模型大鼠進行干預，觀察其對模型大鼠糖脂代謝的影響，并從PPARγ/AMPK/NF-κB信號通路角度出發(fā)初步探索其作用機制，以期為余甘子用于防治糖尿病提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

One Touch型血糖儀購自美國強生公司；BY-R320型低速冷凍離心機購自北京白洋醫(yī)療器械有限公司；Synergy2型多功能酶標儀購自美國Bio-Tek公司；AU680型全自動生化分析儀購自貝克曼庫爾特商貿（中國）有限公司；DKB-8A型電熱恒溫水槽購自上海精宏實驗設備有限公司；7500型實時熒光定量PCR儀購自美國ABI公司；DM1000型顯微鏡購自德國Leica公司；Invitrogen E-Gel Imager型凝膠成像儀購自美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.2 主要藥品與試劑

余甘子（產(chǎn)自西藏，于2021年10月采集，經(jīng)海南省藥物研究所黃裕昌副主任藥師鑒定為大戟科葉下珠屬植物余甘子P. emblica L.的干燥果實）；鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ；批號ST1668，含量≥98%）購自美國Sigma公司；吡格列酮片（批號20200601，規(guī)格30 mg）購自杭州中美華東制藥有限公司；戊巴比妥鈉（批號P11011，純度99.03%）購自德國默克公司；Trizol試劑、逆轉錄試劑盒（批號分別為S0175112、A0185623）均購自美國Thermo Fisher Scientific公司；所有酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）所需試劑盒，包括三酰甘油（triacylglycerol，TG）測定試劑盒（批號SP230142）、總膽固醇（total cho‐lesterol，TC）測定試劑盒（批號SP240306）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）測定試劑盒（批號SP210506）、高密度脂蛋白膽固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDL-C）測定試劑盒（批號SP251316）、空腹胰島素（fasting serum insulin，F(xiàn)INS）測定試劑盒（批號SP160708）均購自武漢賽培生物科技有限公司；BCA蛋白定量試劑盒（批號P0012）購自上海碧云天生物技術有限公司；PCR引物由生工生物工程（上海）股份有限公司設計、合成；兔源PPARγ、NF-κB、AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）、β-肌動蛋白（β-actin）一抗和Alexa Fluor?488標記的山羊抗兔IgG二抗均購自美國Abcam公司。

1.3 動物

SPF級健康SD大鼠80只，雄性，約12周齡，體質量（238.56±17.17） g，由海南省藥品檢驗所提供，實驗動物使用許可證號為SYXK（瓊）2021-0009。大鼠飼養(yǎng)于溫度20～26 ℃、相對濕度（55±15）%的安靜環(huán)境下，避免強光照射，按需飲水、攝食，均經(jīng)1周基礎飼料適應性喂養(yǎng)，再進行后續(xù)實驗。本研究經(jīng)中南大學湘雅醫(yī)學院附屬?？卺t(yī)院生物醫(yī)學倫理委員會審核批準，倫理批件號為2020-（倫審）-252。

2 方法

2.1 余甘子水提物的制備與給藥劑量

取新鮮余甘子，以清水進行清洗，去核，以果肉10倍量（mL/g）的蒸餾水浸泡0.5 h，再煎煮2次、每次1 h，過濾提取液，合并2次濾液，減壓濃縮至約100 mL體積；加入適量4%明膠水溶液，邊加熱邊攪拌，混勻后再次過濾去渣加入3倍體積的95%乙醇，作用24 h后，過濾，取濾液，濃縮至提取物相對密度為2 g/mL，保存?zhèn)溆?。使用前以蒸餾水進行稀釋。參考文獻[9]，將余甘子的成人用量（3～9 g）換算為大鼠的給藥劑量，采用800、400、200 mg/kg 3個劑量給藥，分別相當于成人最低給藥劑量的3、1.5、0.75倍等效劑量；參考文獻[10]，由吡格列酮的成人劑量換算為大鼠的給藥劑量（2.7 mg/kg）。按照大鼠5 mL/kg的體積進行灌胃。

2.2 分組、造模與給藥

將80只SD大鼠按照體質量進行隨機分組，其中10只為空白組，給予基礎飼料喂養(yǎng)；其余70只根據(jù)參考文獻[11]建立IR模型：大鼠以高糖高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)4周后，提前禁食12 h，空腹稱其體質量，于左腹下側單次注射STZ（溶劑為0.1 mol/L的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液），劑量為35 mg/kg。3 d后經(jīng)尾部取血檢測其空腹血糖（fasting plasma glucose，F(xiàn)PG）水平，測得 FPG水平＞16.7 mmol/L并持續(xù)至少10 d則認為造模成功。最終有62只大鼠造模成功，取造模成功的大鼠50只隨機分為模型組、陽性對照組和余甘子水提物高、中、低劑量組，每組各10只。余甘子水提物各劑量組大鼠給予相應濃度的余甘子水提物稀釋液，陽性對照組大鼠給予配制好的吡格列酮溶液，空白組及模型組大鼠則給予等體積的生理鹽水。所有大鼠每日灌胃1次，連續(xù)4周。

2.3 大鼠一般狀態(tài)觀察及體質量測定

于實驗開始時及開始后的每一周均觀察并記錄大鼠的精神狀態(tài)、毛發(fā)光澤度、攝食、飲水、尿量及體質量變化情況。稱體質量時，大鼠需在空腹條件下至少禁食12 h，但不禁水。

2.4 標本采集

末次灌胃后第2天，以2%戊巴比妥鈉溶液對大鼠進行腹腔注射麻醉后，經(jīng)腹主動脈采血，以3 000 r/min離心10 min，取上清液存于－80 ℃條件下，備用。取血后將大鼠處死，迅速取其肝組織適量，以生理鹽水清洗多次，之后置于液氮中凍存約30 min，取出后凍存于－80 ℃條件下，備用。另再取肝組織適量，以4%多聚甲醛固定處理24 h，用于肝組織蘇木素-伊紅（HE）染色及過碘酸-雪夫（periodic acid-Schiff，PAS）染色。

2.5 血清脂代謝指標檢測

取“2.4”項下血清適量，常規(guī)解凍后與相應試劑盒工作液充分混勻，37 ℃孵育5～10 min，用酶標儀進行測定。采用葡萄糖氧化酶法檢測血清中TG水平，檢測波長為510 nm；采用酶法檢測血清中TC水平，檢測波長為510 nm；采用直接法檢測血清中LDL-C、HDL-C水平，檢測波長為546 nm。

2.6 血清胰島素相關指標檢測及計算

取“2.4”項下血清適量，常規(guī)解凍后采用ELISA法測定血清FINS水平，嚴格遵從試劑盒說明書進行操作，并計算胰島素抵抗指數(shù)（insulin resistance index，IRI）及胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitivity index，ISI）。IRI＝FBG×FINS/22.5，ISI＝1/（FBG×FINS），其中ISI為非正態(tài)分布，以其自然對數(shù)為最終結果。

2.7 肝組織病理形態(tài)觀察

采用HE染色法進行觀察。包埋切片：取“2.4”項下經(jīng)固定處理的肝臟，進行常規(guī)石蠟包埋切片，切片厚度4 μm。脫蠟：切片經(jīng)溫箱適當烤干后，投入二甲苯中脫蠟處理5～10 min，待蠟徹底溶解后，再移入100%、90%、80%、70%乙醇分別處理約2 min，之后清水洗去乙醇，最后以蒸餾水處理2 min。HE染色順序：蘇木素染液染色5 s，1%鹽酸-乙醇溶液分化30 s，流水沖洗至返藍（約5 min）；伊紅染液染色5 s，再經(jīng)80%、90%、100%乙醇梯度脫水后，移入二甲苯中透明處理約5 min。封固：迅速擦去組織外圍的二甲苯，滴入樹膠，以干凈的蓋玻片蓋在樹膠上，調整蓋玻片位置，待封固并晾干后，于顯微鏡下觀察肝組織的病理形態(tài)變化并拍照。

2.8 肝組織中糖原表達情況觀察

采用PAS染色法進行觀察。取“2.7”項下脫蠟后的肝組織切片，以蒸餾水沖洗1～2 min后，用0.5%過碘酸浸泡氧化處理10 min，蒸餾水再沖洗3次，每次至少5 min；置于雪夫試劑中顯色處理15 min，經(jīng)流水沖洗3次，每次約5 min；蘇木素復染2 min，1%鹽酸-乙醇溶液分化30 s，流水沖洗至返藍（約5 min），再通過乙醇梯度洗脫，透明和封固處理同“2.7”項下。最后，經(jīng)顯微鏡觀察并拍照后，用Image-Pro Plus 6.0軟件分析肝組織中糖原染色面積（以像素點計）。肝組織糖原經(jīng)PAS染為紫紅色，染色面積數(shù)值越大，提示糖原密度越大、含量越高。

2.9 肝組織中PPARγ、NF-κB及p-AMPK蛋白表達檢測

采用Western blot法進行檢測。取“2.4”項下肝組織適量，剪碎并經(jīng)裂解處理后，于2～8 ℃條件下以12 000 r/min離心12 min，吸取上層清液，通過BCA蛋白定量試劑盒測定總蛋白含量。再取蛋白30 μg，行凝膠電泳（開始為80 V電泳，待蛋白分層后調為120 V，直至目的蛋白分離），經(jīng)220 mA轉膜處理2 h，之后轉移至硝酸纖維素酶膜上，以5%脫脂牛奶室溫封閉處理2 h，分別加入PPARγ、NF-κB、AMPK、p-AMPK、β-actin一抗（內參β-actin稀釋5 000倍，其他一抗稀釋1 000倍），于4 ℃孵育過夜；第2天以三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽溶液清洗10 min，重復3次，再加入IgG二抗（稀釋2 000倍），室溫下孵育1 h；再次重復上述清洗步驟，經(jīng)ECL化學發(fā)光試劑顯色處理，進行蛋白電泳系統(tǒng)及凝膠成像，以PPARγ、NF-κB與內參β-actin條帶灰度值的比值表示這2種蛋白的表達水平，以p-AMPK與AMPK條帶灰度值的比值表示p-AMPK蛋白的表達水平。

2.10 統(tǒng)計學方法

3 結果

3.1 余甘子水提物對大鼠一般狀態(tài)及體質量的影響

灌胃結束后，各組大鼠的一般狀態(tài)出現(xiàn)明顯差異?？瞻捉M大鼠活潑好動，精神良好，飲食及二便正常，體毛順滑有光澤，整體狀態(tài)較好，體質量為（348.70±18.22）g。與空白組比較，模型組大鼠活動減少，精神萎靡，多飲、多食、多尿現(xiàn)象明顯，體毛粗糙無光澤，出現(xiàn)掉毛現(xiàn)象，整體狀態(tài)差，體質量[（264.54±13.61）g]顯著降低（P＜0.05）。與模型組比較，余甘子水提物高劑量組大鼠狀態(tài)明顯更佳，中劑量組大鼠狀態(tài)稍次之，而低劑量組大鼠狀態(tài)幾乎無改善；余甘子水提物高、中劑量組大鼠體質量[（292.07±14.28）、（283.07±14.45） g]均顯著升高（P＜0.05），而低劑量組大鼠體質量[（268.66±14.21） g]相較于模型組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3.2 余甘子水提物對大鼠血清脂代謝指標的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，余甘子水提物高、中劑量組及陽性對照組大鼠血清中TC、TG、LDLC水平顯著降低（P＜0.05）。結果見表1。

表1 各組大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較（±s，n＝10，mmol/L）

表1 各組大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比較（±s，n＝10，mmol/L）

a：與空白組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05

組別空白組模型組陽性對照組余甘子水提物高劑量組余甘子水提物中劑量組余甘子水提物低劑量組F P LDL-C 0.65±0.08 1.24±0.21a 0.95±0.19b 0.92±0.17b 1.04±0.19b 1.21±0.22 14.523＜0.001 TC 1.18±0.24 3.17±0.60a 2.24±0.41b 2.31±0.41b 2.57±0.51b 3.16±0.63 23.127＜0.001 TG 0.62±0.10 1.76±0.23a 1.26±0.17b 1.19±0.15b 1.49±0.23b 1.80±0.31 45.068＜0.001 HDL-C 0.88±0.15 0.83±0.16 0.93±0.17 0.90±0.17 0.89±0.15 0.86±0.16 0.458 0.806

3.3 余甘子水提物對大鼠IR的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清中FINS水平和IRI顯著升高（P＜0.05），ISI顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，余甘子水提物高、中劑量組及陽性對照組大鼠血清中FINS水平和IRI顯著降低（P＜0.05），ISI顯著升高（P＜0.05）。結果見表2。

表2 各組大鼠血清中FINS水平和IRI、ISI比較（±s，n＝10）

表2 各組大鼠血清中FINS水平和IRI、ISI比較（±s，n＝10）

a：與空白組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05

組別空白組模型組陽性對照組余甘子水提物高劑量組余甘子水提物中劑量組余甘子水提物低劑量組F P ISI－4.51±0.13－6.05±0.11a－5.66±0.09b－5.69±0.10b－5.72±0.09b－6.11±0.14 266.052＜0.001 FINS/（mU/L）16.14±1.67 22.88±1.83a 19.24±1.72b 20.26±1.71b 20.87±1.76b 22.43±1.80 19.573＜0.001 IRI 4.08±0.51 18.97±2.21a 12.85±1.20b 13.16±1.28b 14.47±1.41b 18.06±2.10 115.681＜0.001

3.4 余甘子水提物對大鼠肝組織病理形態(tài)的影響

空白組大鼠肝小葉結構保持完整，細胞排列規(guī)則，形態(tài)正常，未見脂質沉積；與空白組比較，模型組大鼠肝小葉結構明顯出現(xiàn)紊亂，肝細胞多發(fā)變形、腫大、排列紊亂，且有許多脂質沉積和脂肪空泡；與模型組比較，余甘子水提物高、中劑量組及陽性對照組大鼠肝小葉結構排列更加規(guī)整，肝細胞形態(tài)、大小基本正常，脂質沉積相對較少，未出現(xiàn)明顯脂肪空泡，但余甘子水提物低劑量組大鼠肝組織病理形態(tài)變化改善不明顯。結果見圖1。

圖1 各組大鼠肝組織病理形態(tài)觀察顯微圖（HE染色，×400）

3.5 余甘子水提物對大鼠肝組織糖原表達的影響

空白組大鼠肝組織中糖原位于細胞質，染色均勻、密度高，染色面積為0.384±0.010。與空白組比較，模型組大鼠肝組織糖原表達密度較低，糖原染色明顯更少，且呈不均勻分布，可見大量脂滴，染色面積（0.192±0.005）顯著減?。≒＜0.05）。與模型組比較，余甘子水提物高、中劑量組及陽性對照組大鼠肝組織中糖原表達更加明顯，染色增多，分布相對均勻，內部脂滴明顯更少，染色面積（分別為 0.306±0.008、0.268±0.011、0.299±0.007）顯著增加（P＜0.05），且余甘子水提物高、中劑量組的糖原染色面積比較差異也有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而余甘子水提物低劑量組糖原表達不明顯，染色面積（0.206±0.005）相較于模型組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結果見圖2。

圖2 各組大鼠肝組織中糖原表達顯微圖（PAS染色，×400）

3.6 余甘子水提物對大鼠肝組織中PPARγ、NF-κB及p-AMPK蛋白表達的影響

與空白組比較，模型組大鼠肝組織中PPARγ和p-AMPK蛋白表達水平顯著降低（P＜0.05），NF-κB蛋白表達水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，余甘子水提物高、中劑量組及陽性對照組大鼠肝組織中PPARγ和p-AMPK蛋白表達水平顯著升高（P＜0.05），NF-κB蛋白表達水平顯著降低（P＜0.05）。結果見圖3、表3。

表3 各組大鼠肝臟組織中PPARγ、NF-κB及p-AMPK蛋白表達水平比較（±s，n＝10）

表3 各組大鼠肝臟組織中PPARγ、NF-κB及p-AMPK蛋白表達水平比較（±s，n＝10）

a：與空白組比較，P＜0.05；b：與模型組比較，P＜0.05

組別空白組模型組陽性對照組余甘子水提物高劑量組余甘子水提物中劑量組余甘子水提物低劑量組F p PPARγ/β-actin 0.89±0.14 0.31±0.06a 0.71±0.11b 0.66±0.11b 0.61±0.10b 0.33±0.05 51.516＜0.001 NF-κB/β-actin 0.48±0.09 0.91±0.13a 0.64±0.11b 0.66±0.12b 0.70±0.11b 0.86±0.12 19.944＜0.001 p-AMPK/AMPK 0.90±0.15 0.36±0.06a 0.74±0.11b 0.71±0.10b 0.59±0.10b 0.39±0.07 44.054＜0.001

圖3 各組大鼠肝組織中PPARγ、NF-κB及p-AMPK蛋白表達電泳圖

4 討論

4.1 IR模型大鼠造模評估

飲食中的高糖高脂易導致2型糖尿病及IR的發(fā)生[12]。發(fā)生IR的患者對葡萄糖的利用能力降低，其脂質水平會應激性變化來應對碳水化合物的損耗，故通過測定脂質水平是了解糖尿病人群IR情況的可行方法[13]。本實驗中模型組大鼠的活動明顯減少，精神萎靡，多飲、多食、多尿現(xiàn)象明顯，體毛粗糙無光澤，即出現(xiàn)了“三多一少”糖尿病典型癥狀。同時，模型組大鼠血清中TC、TG及LDL-C水平顯著升高，提示其脂質代謝出現(xiàn)異常；而血清中FINS水平和IRI顯著升高，ISI顯著降低，提示出現(xiàn)了IR現(xiàn)象。模型組大鼠肝小葉結構明顯出現(xiàn)紊亂，肝細胞多發(fā)變形、腫大、排列紊亂，且有許多脂質沉積和脂肪空泡；肝組織中糖原染色面積顯著減小。這說明本研究所用的高糖高脂飲食合并小劑量STZ注射的造模方法完全符合2型糖尿病典型特點并出現(xiàn)了明顯的IR，提示造模成功。

4.2 余甘子水提物對IR模型大鼠IR的改善作用

余甘子含有豐富的多糖類、多酚類、鞣質類、黃酮類和三萜類等藥用成分，兼具藥用價值高和安全性好的特點[14]。既往基礎研究發(fā)現(xiàn)，余甘子成分中水溶性沒食子酸、沒食子酸甲酯對白細胞介素6、腫瘤壞死因子α、單核細胞趨化蛋白1等多種炎癥因子具有劑量依賴性和選擇性的抑制作用[15]，并且還能通過減輕氧化應激反應，抑制高糖環(huán)境下胰島細胞的凋亡[16]；王銳[7]研究證實，水溶性余甘子多糖在體外可明顯抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性，且兼具抑菌作用[17]。本研究中，余甘子水提物連續(xù)給藥完成后，余甘子水提物高、中劑量組大鼠相較于模型組大鼠精神狀態(tài)明顯好轉，“三多一少”現(xiàn)象明顯改善，血清中TC、TG及LDL-C水平，以及FINS水平和IRI均顯著降低，ISI顯著升高；肝小葉結構排列更加規(guī)整，肝細胞形態(tài)、大小基本正常，脂質沉積相對較少，未出現(xiàn)明顯脂肪空泡，肝組織PAS染色面積顯著增加。這說明余甘子水提物到一定劑量后能保護肝細胞，發(fā)揮降脂、改善IR的作用。另外，本研究所用為余甘子水提物，與余甘子臨床應用的水煎煮液相近，這可能是臨床中應用余甘子水煎物治療糖尿病的原因。

4.3 余甘子水提物對IR模型大鼠PPARγ/AMPK/NF-κB信號通路的調節(jié)作用

脂肪酸代謝紊亂和糖脂代謝損傷間關系密切。脂肪組織功能障礙時，多余的脂肪通過增加肝、胰腺、腎等非脂肪組織中額外的脂肪存儲，在IR的發(fā)展中發(fā)揮關鍵作用[18]。PPARγ為核受體超家族成員，為配體激活型轉錄因子，主要表達于脂肪組織，其適量表達可維持脂肪細胞的正常分化，在人體的生理代謝及正常發(fā)育中起著關鍵作用，是人體中物質代謝、氧化應激、炎癥反應的重要調節(jié)因子，與肥胖、IR、糖尿病等代謝性疾病關系密切[19]。PPARγ調整糖脂代謝可能體現(xiàn)在以下方面[20]：（1）通過誘導脂肪細胞分化，調節(jié)與脂肪酸代謝及轉運相關基因的轉錄。（2）PPARγ的活性與脂肪含量呈正相關，其不僅可調節(jié)脂質形成，還能維持血脂、血糖穩(wěn)態(tài)。（3）在輔因子的作用下，PPARγ通過系列反應進行調節(jié)，加速活化下游的AMPK，促使多種抗氧化酶表達增加，進而清除多余的自由基以弱化應激氧化反應的程度。AMPK蛋白對糖脂代謝具有明確的調節(jié)作用，尤其是AMPK磷酸化后引起的p-AMPK蛋白表達水平上調，已被廣泛認可能夠改善IR；同時，基礎研究亦顯示，p-AMPK蛋白表達水平上調后，能夠抑制其下游信號分子NF-κB的表達，抑制病理狀態(tài)下細胞缺氧和復氧過程中的炎癥反應，從而進一步調節(jié)IR[21]。

本研究中，與模型組比較，余甘子水提物高、中劑量組大鼠灌胃結束后肝組織中PPARγ和p-AMPK蛋白表達水平顯著升高，NF-κB蛋白表達水平顯著降低，提示其可能通過PPARγ/AMPK/NF-κB信號通路調節(jié)IR模型大鼠脂質代謝，進而改善其IR。既往細胞水平研究顯示，余甘子提取物中的沒食子酸可上調PPARγ mRNA的表達，降低NF-κB mRNA的活性，抑制脂多糖誘發(fā)的炎癥反應[8]。而本研究通過IR大鼠模型證實，余甘子水提物亦可以調節(jié)PPARγ/AMPK/NF-κB信號通路，上調PPARγ蛋白的表達，調節(jié)脂肪酸代謝，促使下游的AMPK磷酸化為p-AMPK，進一步抑制其下游信號分子NF-κB表達，抑制炎癥反應并改善肝糖原代謝。

綜上所述，中、高劑量的余甘子水提物可能通過激活PPARγ/AMPK/NF-κB信號通路，改善糖脂代謝紊亂、肝功能和IR的發(fā)生發(fā)展。然而，余甘子水提物中活性成分包括鞣質、多酚等多種物質，本研究并未對水提物進行主要活性成分鑒定，這是本研究的不足之處，亦是未來進一步研究的方向。