額其小里 ，沈繼秀 ，羅江 ，地久此呷 ，劉圓 ， ，楊正明 ， ，李瑩 （1.西南民族大學(xué)藥學(xué)院，成都 1022；2.四川省羌彝藥用資源保護(hù)與利用技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，成都 1022；.青藏高原民族藥用資源保護(hù)與利用國家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都 1022；.涼山州食品藥品檢驗(yàn)所，四川 西昌 1000；.西南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究院，成都 1022；.西南民族大學(xué)青藏高原研究院，成都 1022）

菊三七來源于菊科植物菊三七Gynura japonica（Thunb.）Juel.的干燥塊根，又名見腫消、土三七、血當(dāng)歸、水三七、散血丹、九頭獅子草等[1―4]。菊三七首載于《滇南本草》：“土三七，味苦。治跌打損傷。生用破血，炙用補(bǔ)血”[2]。彝醫(yī)臨床多將菊三七用于治療“斯色”病、跌打淤腫、骨折、大骨節(jié)刺、瘡久不愈、腫瘤、便血、蛇蟲咬傷等[1―3]，此外，也將其用于治療咽喉炎、乳腺炎、扁桃體炎等[5]。該藥材也是中成藥跌打止痛片及四川省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑——彝藥痛風(fēng)顆粒（川藥制備字Z20220392000）的組成之一，臨床應(yīng)用廣泛。

目前，菊三七被收載于1992年版《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（中藥材第一冊）和2005年版《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（第二冊彝族藥），但前一標(biāo)準(zhǔn)中僅有1項(xiàng)顯微鑒別和1項(xiàng)理化鑒別，后一標(biāo)準(zhǔn)中僅有性狀、薄層色譜鑒別以及水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物等常規(guī)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢查項(xiàng)，缺少指標(biāo)性成分的定量檢測，專屬性不強(qiáng)，藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亟待提高。經(jīng)文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，菊三七的根及全草中主要含有生物堿類、黃酮類、核苷類、有機(jī)酸類、多糖類、三萜類、甾體及皂苷類、倍半萜及酚酸類等化學(xué)成分[6―11]。其中，千里光堿和千里光菲靈堿等生物堿類成分是菊三七的代表性活性成分，具有抗腫瘤、止血等作用[12―14]。

本研究旨在建立總生物堿、千里光堿、千里光菲靈堿的定量分析方法，完善并提高菊三七的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；然后運(yùn)用多元統(tǒng)計(jì)分析法，以其所含有的水溶性浸出物、總生物堿（以千里光堿計(jì)）、千里光堿、千里光菲靈堿含量為指標(biāo)，對不同產(chǎn)地菊三七藥材進(jìn)行綜合質(zhì)量評價(jià)，從而確保其臨床應(yīng)用的安全、有效、穩(wěn)定、可控，為菊三七的進(jìn)一步開發(fā)與合理利用提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有Waters 2695型高效液相色譜（HPLC）儀（美國Waters公司）、ME204E/02型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]、TU-1950型雙光束紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、HG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、HWS-12型數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、TGL-16型離心機(jī)（四川蜀客儀器有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

菊三七藥材共15批（編號jsq-1～jsq-15），經(jīng)西南民族大學(xué)青藏高原研究院劉圓教授和藥學(xué)院李瑩副教授鑒定均為菊科植物菊三七G. japonica （Thunb.）Juel.的塊根，15批樣品的來源信息見表1。樣品采集后，洗凈，切片，陰干，粉碎，過3號篩，干燥保存，備用。千里光堿對照品、千里光菲靈堿對照品為青藏高原民族藥用資源保護(hù)與利用國家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制（批號20200301，經(jīng)HPLC法測得其純度均不低于98%）；乙腈、磷酸均為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

表1 15批菊三七樣品的來源信息

2 方法與結(jié)果

2.1 檢查

2.1.1 水分 取15批菊三七藥材粉末（過2號篩），各約2 g，按2020年版《中國藥典》（四部）“通則0832水分測定法”項(xiàng)下第二法進(jìn)行檢測[15]。每個(gè)樣本平行測定3次，取平均值。結(jié)果顯示，15批藥材的水分含量為8.88%～12.60%，平均值為10.76%，詳見表2。考慮到藥材來源的差異，本研究以略高于最高測定值設(shè)限[16]，初步擬定菊三七藥材的水分不得過13.00%。

表2 15批菊三七樣品中水分、總灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物含量測定結(jié)果（±s，n＝3，%%）

表2 15批菊三七樣品中水分、總灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物含量測定結(jié)果（±s，n＝3，%%）

編號jsq-1 jsq-2 jsq-3 jsq-4 jsq-5 jsq-6 jsq-7 jsq-8 jsq-9 jsq-10 jsq-11 jsq-12 jsq-13 jsq-14 jsq-15水分10.70±0.02 12.60±0.07 11.07±0.03 10.24±0.04 10.30±0.03 10.63±0.03 10.60±0.04 10.82±0.02 9.97±0.05 11.89±0.15 11.63±0.02 8.88±0.04 11.74±0.03 10.09±0.07 10.25±0.03總灰分6.23±0.02 4.59±0.10 6.31±0.09 7.69±0.11 9.95±0.15 8.41±0.31 11.02±0.02 8.94±0.51 7.65±0.95 9.19±0.13 8.36±0.12 7.20±0.06 4.43±0.08 5.94±0.04 5.21±0.23酸不溶性灰分1.41±0.00 0.96±0.09 1.40±0.07 1.62±0.10 3.45±0.25 1.40±0.20 2.08±0.10 1.79±0.47 1.38±0.36 1.47±0.08 0.82±0.17 0.89±0.14 1.42±0.16 0.56±0.21 0.73±0.11水溶性浸出物34.66±0.10 53.91±0.22 39.31±0.19 45.86±0.80 44.87±0.47 41.73±0.72 21.71±0.43 21.71±0.23 47.74±1.31 37.77±0.95 37.69±0.44 47.10±1.46 50.22±1.04 44.62±1.61 48.73±0.38

2.1.2 總灰分和酸不溶性灰分 取15批菊三七藥材粉末（過2號篩），各約4 g，按2020年版《中國藥典》（四部）“通則2302灰分測定法”項(xiàng)下總灰分和酸不溶性灰分測定法進(jìn)行檢測[15]。每個(gè)樣本平行測定3次，取平均值。結(jié)果顯示，15批藥材的總灰分含量為4.43%～11.02%，平均值為7.41%；酸不溶性灰分的含量為0.56%～3.45%，平均值為1.43%，詳見表2。考慮到藥材來源的差異，本研究以略高于最高測定值設(shè)限[16]，初步擬定菊三七藥材中總灰分不得過11.50%，酸不溶性灰分不得過3.70%。

2.2 水溶性浸出物含量測定

按2020年版《中國藥典》（四部）“通則2201浸出物測定法”項(xiàng)下水溶性浸出物測定法中的熱浸法進(jìn)行測定，以水作為溶劑[15]。每個(gè)樣本平行測定3次，取平均值。結(jié)果顯示，15批藥材中水溶性浸出物的含量為21.71%～53.91%，平均值為41.18%，詳見表2。考慮到藥材來源的差異，本研究以略低于最低測定值設(shè)限[16]，初步擬定菊三七藥材中水溶性浸出物不得少于20.70%。

2.3 總生物堿含量測定

采用紫外分光光度法測定菊三七中總生物堿含量，具體方法如下。

2.3.1 顯色劑的制備 稱取溴甲酚綠250 mg，置于500 mL容量瓶中，加入乙酸-醋酸鈉緩沖液（取醋酸鈉9 g，加入冰醋酸4.9 mL，加水稀釋至500 mL，即得pH為4.5的乙酸-醋酸鈉緩沖液）溶解并定容，搖勻，即得顯色劑——溴甲酚綠溶液。

2.3.2 千里光堿對照品溶液的制備 取千里光堿對照品10.04 mg，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加入三氯甲烷定容，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取菊三七藥材粉末（過3號篩）1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，在通風(fēng)櫥中加濃氨試液2 mL，浸潤30 min后加入三氯甲烷-甲醇（4∶1，V/V，下同）溶劑25 mL，稱定質(zhì)量，超聲（頻率40 kHz，功率700 W）提取60 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，并用三氯甲烷-甲醇溶劑補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

2.3.4 測定波長的選擇 精密吸取對照品溶液和供試品溶液（jsq-15）2 mL，分別置于分液漏斗中，加入溴甲酚綠溶液和三氯甲烷各5 mL，充分振搖后靜置分層，連續(xù)萃取3次，合并三氯甲烷層，加入適量無水硫酸鈉脫水。將三氯甲烷層溶液轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻。以三氯甲烷作為空白溶液，取對照品溶液和供試品溶液在200～760 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，對照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長均為415 nm，故確定本研究的測定波長為415 nm，圖譜詳見圖1。

圖1 千里光堿對照品和菊三七供試品的光譜圖

2.3.5 線性關(guān)系考察 精密吸取千里光堿對照品溶液0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6 mL，分別置于分液漏斗中，加入溴甲酚綠溶液和三氯甲烷各5 mL，充分振搖2 min，然后靜置30 min；分取三氯甲烷層，連續(xù)萃取3次，合并三氯甲烷層，加入適量無水硫酸鈉脫水。將三氯甲烷層轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻。以三氯甲烷作為空白溶液，采用TU-1950 型雙光束紫外-可見分光光度計(jì)在415 nm波長處測定各對照品溶液的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)（Y）、對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為Y＝64.17X－0.10（r＝0.999 6）。結(jié)果顯示，千里光堿對照品溶液在0.004 8～0.012 9 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取1.2 mL千里光堿對照品溶液，按“2.3.5”項(xiàng)下方法處理后，測定其在415 nm波長處的吸光度，重復(fù)測定6次。結(jié)果顯示，千里光堿吸光度的RSD為0.40%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液（jsq-15），按“2.3.5”項(xiàng)下方法處理后，分別在室溫下放置0、15、30、45 min，然后測定其在415 nm波長處的吸光度。結(jié)果顯示，千里光堿吸光度的RSD為2.20%（n＝4），表明供試品溶液在室溫下放置45 min內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.3.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品（jsq-15）粉末6份，每份約1 g，精密稱定，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.5”項(xiàng)下方法處理后，測定其在415 nm波長處的吸光度，并采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果，千里光堿含量的RSD為1.82%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定已知含量的樣品（jsq-15）粉末6份，每份0.5 g，精密稱定，按樣品中已知成分含量1∶1的質(zhì)量比加入相應(yīng)對照品，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.5”項(xiàng)下方法處理后，測定其在415 nm波長處的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算千里光堿的含量，并計(jì)算其加樣回收率。結(jié)果顯示，6份樣品的加樣回收率為98.85%～105.75%，平均加樣回收率為102.5%（RSD為2.61%，n＝6），表明該方法準(zhǔn)確度較好。

2.3.10 樣品含量測定 取菊三七粉末（過3號篩）1 g，按“2.3.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，再按“2.3.5”項(xiàng)下方法處理后，測定其在415 nm波長處的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算千里光堿的含量并得到總生物堿含量（以千里光堿計(jì)）。結(jié)果顯示，15批樣品中總生物堿含量（以千里光堿計(jì)）為0.15%～0.39%，平均含量為0.28%，詳見表3。結(jié)合15批藥材測定結(jié)果，考慮到藥材來源的差異，本研究以最低測定值設(shè)限[16]，初步擬定菊三七中總生物堿含量以千里光堿計(jì)不得少于0.15%。

表3 15批菊三七樣品中總生物堿、千里光堿和千里光菲靈堿含量測定結(jié)果（±s，n＝3，%%）

表3 15批菊三七樣品中總生物堿、千里光堿和千里光菲靈堿含量測定結(jié)果（±s，n＝3，%%）

樣品編號jsq-1 jsq-2 jsq-3 jsq-4 jsq-5 jsq-6 jsq-7 jsq-8 jsq-9 jsq-10 jsq-11 jsq-12 jsq-13 jsq-14 jsq-15總生物堿0.25±0.01 0.27±0.01 0.28±0.02 0.18±0.02 0.32±0.02 0.23±0.02 0.26±0.03 0.33±0.02 0.39±0.03 0.28±0.03 0.23±0.01 0.34±0.02 0.15±0.00 0.31±0.01 0.35±0.02千里光堿0.02±0.32 0.04±0.62 0.04±0.21 0.01±0.11 0.05±0.96 0.03±0.49 0.03±0.61 0.03±0.34 0.02±0.08 0.02±0.02 0.02±0.01 0.02±0.02 0.01±0.01 0.01±0.01 0.02±0.01千里光菲靈堿0.04±0.40 0.06±1.37 0.02±1.10 0.01±0.12 0.05±0.53 0.05±0.50 0.02±0.25 0.04±0.06 0.03±0.32 0.04±0.00 0.03±0.01 0.02±0.00 0.02±0.01 0.02±0.00 0.02±0.01

2.4 千里光堿、千里光菲靈堿含量測定

采用HPLC法進(jìn)行測定，具體方法如下。

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為Diamon‐sil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-三乙胺緩沖液（取磷酸8 mL、三乙胺14 mL，加水稀釋至1 000 mL，用三乙胺調(diào)節(jié)pH至3.2，即得）（14∶86，V/V）；流速為1.0 mL /min；柱溫為25 ℃；檢測波長為215 nm；進(jìn)樣量為10 μL。取“2.4.2”“2.4.3”項(xiàng)下溶液，按此色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，理論板數(shù)按千里光堿、千里光菲靈堿計(jì)均不低于5 000，各待測成分峰與其相鄰峰間的分離度均大于1.5，各成分基線分離良好，空白溶劑（乙腈-三乙胺緩沖液）對千里光堿、千里光菲靈堿的測定無干擾。結(jié)果見圖2。

圖2 混合對照品及菊三七樣品的HPLC圖

2.4.2 混合對照品溶液的制備 精密稱定千里光堿對照品10 mg、千里光菲靈堿對照品12 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，備用。

2.4.3 供試品溶液的制備 取不同批次菊三七藥材粉末（過3號篩）各1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加濃氨試液2 mL浸潤1 h，精密加入三氯甲烷30 mL，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流120 min，再次稱定質(zhì)量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液10 mL，40 °C減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 線性關(guān)系考察 精密量取“2.4.2”項(xiàng)下混合對照品溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、5.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，備用。分別精密吸取上述不同濃度梯度的線性工作液及對照品母液各10 μL，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜峰。以峰面積為縱坐標(biāo)（A）、對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到千里光堿的回歸方程為A＝1.00×107X－4 896.3（r＝0.999 8），千里光菲靈堿的回歸方程為A＝1.00×107X－110.8（r＝0.999 7），可知千里光堿和千里光菲靈堿分別在質(zhì)量濃度為0.002～0.200、0.002～0.240 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對照品溶液10 μL，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，重復(fù)進(jìn)樣測定6次，并記錄峰面積。結(jié)果顯示，千里光堿峰面積的RSD為1.24%（n＝6），千里光菲靈堿峰面積的RSD為0.77%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（jsq-15），在室溫下放置0、4、8、12、24 h，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，千里光堿峰面積的RSD為1.25%（n＝5），千里光菲靈堿峰面積的RSD為0.91%（n＝5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品（jsq-15）6份，每份1 g，精密稱定，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，然后按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果顯示，千里光堿含量的RSD為1.89%（n＝6），千里光菲靈堿含量的RSD為1.36%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一樣品（jsq-15）6份，每份0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，按樣品中已知成分含量1∶1的質(zhì)量比加入相應(yīng)對照品，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，然后按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，千里光堿的加樣回收率為96.00%～98.50%，平均值為97.49%（RSD為1.00%，n＝6）；千里光菲靈堿的加樣回收率為98.29%～101.33%，平均值為99.91%（RSD為1.11%，n＝6），表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.4.9 樣品中千里光堿、千里光菲靈堿含量測定及限量擬定 取15批藥材，分別按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品中2個(gè)成分的含量。結(jié)果顯示，15批樣品中千里光堿含量在0.01%～0.05%之間，平均值為0.02%；千里光菲靈堿的含量在0.01%～0.06%之間，平均值為0.03%，詳見表3。結(jié)合15批樣品的實(shí)際測得值，考慮到藥材來源的差異，本研究以最低測定值設(shè)限[16]，初步擬定菊三七藥材中千里光堿、千里光菲靈堿含量均不得少于0.01%。

2.5 多元統(tǒng)計(jì)分析

2.5.1 聚類熱圖分析 以水分（X1）、總灰分（X2）、酸不溶性灰分（X3）、水溶性浸出物（X4）、總生物堿（以千里光堿計(jì)，X5）、千里光堿（X6）、千里光菲靈堿（X7）含量為指標(biāo)，利用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)歸一化分析，并采用Heml 1.0軟件進(jìn)行聚類熱圖分析[17]。結(jié)果顯示，15批樣品可分為4類：第1類為jsq-1、jsq-2，這2批樣品的總灰分含量較低；第2類為jsq-3、jsq-5、jsq-7、jsq-8，這4批樣品的水溶性浸出物含量較低，千里光堿含量較高；第3類為jsq-4、jsq-6、jsq-10、jsq-11、jsq-13，這5批樣品的總生物堿（以千里光堿計(jì)）和千里光堿含量均較低；第4類為jsq-9、jsq-12、jsq-14、jsq-15，這4批樣品的總生物堿（以千里光堿計(jì)）含量較高，水分含量較低，詳見圖3。結(jié)果提示，不同產(chǎn)地菊三七藥材的各指標(biāo)均存在一定差異，即使相同產(chǎn)地的藥材也不一定能聚為一類。

圖3 15批菊三七樣品的聚類熱圖分析結(jié)果

2.5.2 主成分分析 采用SPSS 21.0軟件對水分（X1）、總灰分（X2）、酸不溶性灰分（X3）、水溶性浸出物（X4）、總生物堿（以千里光堿計(jì)，X5）、千里光堿（X6）、千里光菲靈堿（X7）含量進(jìn)行主成分分析（principal component analy‐sis，PCA）。結(jié)果顯示，特征值＞1的主成分有3個(gè)，其累計(jì)方差貢獻(xiàn)率達(dá)78.35%，基本可以客觀反映菊三七的品質(zhì)信息。其中，總灰分和酸不溶性灰分含量對主成分1的貢獻(xiàn)率較大；水分和千里光菲靈堿含量對主成分2的貢獻(xiàn)率較大；水溶性浸出物和總生物堿（以千里光堿計(jì)）含量對主成分3的貢獻(xiàn)率較大。各指標(biāo)的公因子方差均不低于0.665（水分的公因子方差最大，為0.874；酸不溶性灰分的公因子方差最小，為0.665）。

以上述3個(gè)主成分代替7個(gè)指標(biāo)所表達(dá)的信息進(jìn)行綜合評價(jià)，得到各主成分得分（分別記為 F1、F2、F3）[18]。各主成分得分與方差貢獻(xiàn)率的乘積之和即為綜合得分（F），即F＝35.582F1+23.960F2+18.809F3。F值越大，說明菊三七藥材中各待測成分的綜合含量越高，即菊三七藥材的品質(zhì)越好。結(jié)果顯示，F(xiàn)值大小的排序?yàn)閖sq-5＞jsq-2＞jsq-10＞jsq-6＞jsq-8＞jsq-3＞jsq-7＞jsq-9＞jsq-1＞jsq-15＞jsq-11＞jsq-12＞jsq-13＞jsq-14＞jsq-4。

2.5.3 熵權(quán)逼近理想排序法分析 以水分（X1）、總灰分（X2）、酸不溶性灰分（X3）、水溶性浸出物（X4）、總生物堿（以千里光堿計(jì)，X5）、千里光堿（X6）、千里光菲靈堿（X7）含量為評價(jià)指標(biāo)，采用客觀賦權(quán)的變異系數(shù)法測定各指標(biāo)的權(quán)重。在賦權(quán)過程中，指標(biāo)觀測值差異越大，表明該指標(biāo)越重要，其權(quán)重也就越大[19]。結(jié)果顯示，X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7的權(quán)重分別為0.040、0.123、0.227、0.107、0.108、0.202、0.193。

采用熵權(quán)逼近理想排序法（technique for order preference by similarity to an ideal solution，TOPSIS）法對各指標(biāo)的數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理，根據(jù)各指標(biāo)的權(quán)重計(jì)算樣品中各指標(biāo)的最優(yōu)值和最劣值。其中，最優(yōu)值為各評價(jià)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)化最大值，最劣值為各評價(jià)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)化最小值。按各指標(biāo)與最優(yōu)值的接近程度（Ci值）大小進(jìn)行排序，Ci值越大表明藥材品質(zhì)越佳，反之則表明藥材品質(zhì)越劣[20]。結(jié)果顯示，菊三七Ci值的大小順序?yàn)閖sq-2＞jsq-6＞jsq-5＞jsq-10＞jsq-1＞jsq-8＞jsq-9＞jsq-11＞jsq-15＞jsq-12＞jsq-7＞jsq-3＞jsq-14＞jsq-4＞jsq-13。

3 討論

3.1 現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)與本研究制定標(biāo)準(zhǔn)的比較

本研究所用的15批藥材均采集自四川省。本研究根據(jù)測定結(jié)果，以略高于測定結(jié)果的最大值設(shè)限，規(guī)定水分限度不得過13.00%，該標(biāo)準(zhǔn)低于《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定（16%）[1]；并規(guī)定總灰分的限度不得過11.50%，也高于《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定（7%），表明本研究中15批藥材所含灰化后遺留的不揮發(fā)性無機(jī)鹽類成分以及表面附著的無機(jī)鹽類成分和微量氧化硅的含量較高。同時(shí)，本研究根據(jù)略低于測定結(jié)果的最低值設(shè)限，規(guī)定菊三七樣品中水溶性浸出物的含量不得少于20.70%，高于《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定（13%）[1]。浸出物含量與藥材質(zhì)量密切相關(guān)，該結(jié)果提示，本研究中15批藥材的品質(zhì)均較佳。此外，本研究在已有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，增加了總生物堿（以千里光堿計(jì)）的紫外含量測定以及千里光堿與千里光菲靈堿的HPLC含量測定方法，并初步擬定了其含量限度，可更加有效地控制菊三七的藥材質(zhì)量。

3.2 總生物堿、千里光堿和千里光菲靈堿含量測定方法的建立與優(yōu)化

在菊三七總生物堿（以千里光堿計(jì)）測定方法的建立過程中，筆者考察了不同提取溶劑[三氯甲烷、70%乙醇、70%甲醇、三氯甲烷-甲醇（4∶1，V/V）]的提取效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同提取溶劑的提取效果差別較大，其中以三氯甲烷-甲醇（4∶1，V/V）的提取效果最好，因此本研究以其為提取溶劑。同時(shí)，本研究還考察了不同超聲提取時(shí)間（30、60、90、120 min）對總生物堿提取效果的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著提取時(shí)間的延長，總生物堿的提取率呈先升后降的趨勢，因此本研究選定超聲時(shí)間為60 min。此外，本研究還考察了1∶25、1∶50、1∶75、1∶100（g/mL）4種料液比對總生物堿提取效果的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)料液比為1∶25（g/mL）時(shí)總生物堿的提取率最高，故本研究最終確定料液比為1∶25（g/mL）。在千里光堿、千里光菲靈堿HPLC含量測定方法的建立過程中，筆者分別考察了不同提取方法（回流提取、超聲提?。⒉煌崛r(shí)間（30、60、120、150 min）和不同料液比[1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60（g/mL）]對其含量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用回流提取方法時(shí)提取效果更優(yōu)，且在回流提取120 min、料液比為1∶30（g/mL）時(shí)，千里光堿和千里光菲靈堿的含量均可達(dá)到最高，因此確定了本研究中的檢測條件。

3.3 多元統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果對比與分析

編號為jsq-4、jsq-5、jsq-6、jsq-7的樣品均采集自涼山彝族自治州普格縣螺髻山鎮(zhèn)，但本研究聚類熱圖分析結(jié)果顯示，編號為jsq-4與jsq-6的樣品聚為一類，而編號為jsq-5、jsq-7的樣品卻聚為另一類。經(jīng)分析熱圖可知，編號為jsq-5、jsq-7的樣品中總灰分、酸不溶性灰分、千里光堿含量均高于編號為jsq-4、jsq-6的樣品。以上結(jié)果表明，編號為jsq-4、jsq-5、jsq-6、jsq-7的樣品雖來源于同一產(chǎn)地，但其化學(xué)成分組成及成分比例具有較大差異，這可能是導(dǎo)致其未被聚為一類的原因。

PCA和TOPSIS分析結(jié)果均顯示，質(zhì)量相對較好的4個(gè)樣品分別為jsq-2、jsq-5、jsq-6、jsq-10，其分別采集自涼山彝族自治州甘洛縣林雜村、涼山彝族自治州普格縣螺髻山鎮(zhèn)馬廠坪村、涼山彝族自治州普格縣螺髻山鎮(zhèn)波洛坪村和攀枝花市米易縣埡口鎮(zhèn)回箐村；質(zhì)量相對較差的3個(gè)樣品為jsq-4、jsq-13、jsq-14，其分別采集自涼山彝族自治州普格縣螺髻山鎮(zhèn)甘爾村、涼山彝族自治州金陽縣放馬坪中心村和攀枝花市米易縣埡口鎮(zhèn)回箐村的另一采集地。在2種評價(jià)結(jié)果中排名第一的樣品分別為jsq-2、jsq-5，分別采集自涼山彝族自治州甘洛縣林雜村和涼山彝族自治州普格縣螺髻山鎮(zhèn)馬廠坪村，這2批藥材的差異在于采集地不同、海拔不同。

綜上，本研究建立了總生物堿（以千里光堿計(jì)）、千里光堿、千里光菲靈堿的定量分析方法，并初步擬定了各指標(biāo)的限度，提高和完善了菊三七的現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。此外，本研究采用3種多元統(tǒng)計(jì)分析法對15批菊三七藥材進(jìn)行綜合品質(zhì)評價(jià)，發(fā)現(xiàn)涼山彝族自治州甘洛縣林雜村、涼山彝族自治州普格縣螺髻山鎮(zhèn)馬廠坪村等地產(chǎn)的樣品質(zhì)量相對較好，涼山彝族自治州普格縣螺髻鎮(zhèn)山甘爾村、涼山彝族自治州金陽縣放馬坪中心村等產(chǎn)地的樣品質(zhì)量相對較差。