常海龍，王龍，卞傳飛，肖健，李保同

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 國(guó)土資源與環(huán)境學(xué)院，江西 南昌 330045)

苯并烯氟菌唑，是由先正達(dá)研制的吡唑酰胺類(lèi)殺菌劑[1]，被廣泛用于防治小麥白粉病、亞洲大豆銹病等多種病害[2-6]。嘧菌酯，是由先正達(dá)開(kāi)發(fā)研制的一種甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑[7]，可用于防治白粉病、銹病等幾乎所有的真菌病害，使用方式多樣，且對(duì)作物生長(zhǎng)較安全[8-10]。目前國(guó)內(nèi)已經(jīng)有苯并烯氟菌唑、嘧菌酯原藥和嘧菌酯與其他藥物復(fù)配制劑的常量分析方法報(bào)道，但是對(duì)苯并烯氟菌唑和嘧菌酯復(fù)配制劑的分析方法尚未見(jiàn)報(bào)道。本文采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑中有效成分的含量，方法簡(jiǎn)單高效，精確度好，適用于同時(shí)定量分析該制劑中的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

苯并烯氟菌唑標(biāo)準(zhǔn)品(≥98.0%)、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(≥98.0%)、45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯WG(苯并烯氟菌唑15%，嘧菌酯30%)，均購(gòu)自瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司。

安捷倫1260型 Ⅱ 代高效液相色譜儀；Poroshell 120 EC-C18(4.6 mm×150 mm，4-Micron)色譜柱；EX224ZH電子天平；F-060S超聲波機(jī)。

1.2 高效液相色譜條件

檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，流動(dòng)相為體積比60∶40的乙腈-0.1%磷酸水體系，柱溫30 ℃，流速1 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。

1.3 測(cè)定步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制 于50 mL容量瓶中加入用電子天平精確稱(chēng)量的苯并烯氟菌唑標(biāo)準(zhǔn)品 0.005 0 g、嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g，加入20 mL乙腈進(jìn)行溶解后用超聲波機(jī)水浴助溶5 min，待靜置冷卻至室溫后再用乙腈定容，搖勻后放置冰箱備用。

1.3.2 試樣溶液的配制 于50 mL容量瓶中加入用電子天平精確稱(chēng)量的45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑0.033 4 g(精確至0.000 1 g)，加入20 mL乙腈進(jìn)行溶解后用超聲波機(jī)水浴助溶5 min，待靜置冷卻至室溫后再用乙腈定容，搖勻后放置冰箱備用。

1.3.3 測(cè)定方法 用注射器移取0.5 mL標(biāo)樣溶液，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜注入進(jìn)樣瓶，之后按照1.2節(jié)的色譜條件，待四元泵壓力和基線(xiàn)趨于穩(wěn)定，上機(jī)檢測(cè)，連續(xù)進(jìn)樣，待相鄰2針1.3.1節(jié)的標(biāo)樣溶液的峰面積值變化低于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣→試樣→試樣→標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣。在1.2節(jié)色譜條件下，嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間為2.963 min，苯并烯氟菌唑標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間約為5.136 min。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 苯并烯氟菌唑·嘧菌酯標(biāo)樣液相色譜圖Fig.1 Liquid chromatogram of benzovindiflupyr· azoxystrobin standard sample

圖2 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑液相色譜圖Fig.2 Liquid chromatogram of benzovindiflupyr· azoxystrobin 45% WG

1.3.4 計(jì)算 平均2針標(biāo)樣和2針試樣中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的峰面積，試樣中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(W2，%)按下式計(jì)算：

其中，A1、A2分別為標(biāo)樣和試樣中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)峰面積的平均值；M1、M2為標(biāo)樣和試樣的質(zhì)量(g)；W1為標(biāo)樣溶液中苯并烯氟菌唑(或嘧菌酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 用注射器移取0.5 mL的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯標(biāo)樣溶液過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜注入進(jìn)樣瓶中，在190～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，獲得苯并烯氟菌唑和嘧菌酯的紫外吸收光譜圖(圖3)。發(fā)現(xiàn)苯并烯氟菌唑和嘧菌酯在200～240 nm處同時(shí)有較大吸收，因此綜合考慮選擇220 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，在該波長(zhǎng)下雜質(zhì)和各組分能夠很好分離。

圖3 苯并烯氟菌唑·嘧菌酯紫外吸收光譜圖Fig.3 UV absorption spectrum of benzovindiflupyr·azoxystrobin

2.1.2 流動(dòng)相的選擇 通過(guò)反復(fù)測(cè)試不同體積比的乙腈-水/0.1%磷酸水、甲醇-水/0.1%磷酸水體系來(lái)選擇合適的流動(dòng)相，并測(cè)試柱溫和流速對(duì)峰面積以及保留時(shí)間的影響。

經(jīng)過(guò)測(cè)試發(fā)現(xiàn)，柱溫對(duì)待測(cè)樣品峰面積以及保留時(shí)間的影響較小，不對(duì)其進(jìn)行單獨(dú)討論；不同的流速對(duì)出峰時(shí)間的影響為：流速越小，苯并烯氟菌唑和嘧菌酯保留時(shí)間越長(zhǎng)；當(dāng)乙腈溶液作為有機(jī)相時(shí)，組分與雜質(zhì)分離效果更好，雜峰更少，有效成分的峰面積更大，峰形更好；以乙腈+水體系為流動(dòng)相，峰形會(huì)出現(xiàn)拖峰情況，為了得到更好的分離效果和峰形，將水相更換為0.1%磷酸水，并對(duì)其體積比進(jìn)行優(yōu)化。

最終確定色譜條件為：220 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)，30 ℃ 的柱溫，體積比為60∶40的乙腈-0.1%磷酸水體系，流速1 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。

2.2 分析方法的線(xiàn)性相關(guān)性

制備質(zhì)量濃度梯度為0.01，0.1，1，5，10，50，100(0.02，0.2，2，10，20，100，200)mg/L的苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)標(biāo)樣溶液。在上述高效液相色譜條件下，用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。以苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)標(biāo)樣溶液的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，苯并烯氟菌唑(嘧菌酯)標(biāo)樣溶液的色譜峰面積(y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖(圖4、圖5)。

苯并烯氟菌唑在0.01～100 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線(xiàn)性回歸方程為y=35.114x-2.822 5，R2=0.999 9；嘧菌酯在0.02～200 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線(xiàn)性回歸方程為y=41.967x-7.984 7，R2=0.999 9。該方法可用于分析和檢測(cè)45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑。

圖4 苯并烯氟菌唑標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.4 Standard curve of benzovindiflupyr

圖5 嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.5 Standard curve of azoxystrobin

2.3 分析方法的精密度

從同一45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑中取5個(gè)樣品，在上述色譜條件下，待四元泵壓力和基線(xiàn)趨于穩(wěn)定后進(jìn)樣測(cè)定，通過(guò)計(jì)算得到45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)(見(jiàn)表1)。苯并烯氟菌唑和嘧菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為6.86%和5.32%，變異系數(shù)為0.46%和 0.18%，變異系數(shù)均符合CIPAC的要求(<1.71%)，證明該方法精密度高。

表1 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑精密度測(cè)定Table 1 Precision determination of benzovindiflupyr·azoxystrobin 45% WG

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度

采用加標(biāo)回收法，準(zhǔn)確稱(chēng)取5份已知含量的45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑試樣置于容量瓶中，分別加入一定量的苯并烯氟菌唑和嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品，按照上述色譜方法分析，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。苯并烯氟菌唑的回收率為98.97%～100.12%，平均回收率為99.49%；嘧菌酯回收率為98.36%～99.95%，平均回收率為99.18%。

表2 45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑準(zhǔn)確度測(cè)定Table 2 Accuracy determination of benzovindiflupyr·azoxystrobin 45% WG

3 結(jié)論

(1)使用Poroshell 120 EC-C18色譜柱，以體積比為60∶40乙腈-0.1%磷酸水體系為流動(dòng)相，流速為 1 mL/min，柱溫為30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，建立了一種能夠同時(shí)測(cè)定45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯WG中有效成分的高效液相色譜分析方法。

(2)檢測(cè)結(jié)果表明，該方法操作簡(jiǎn)便，能使苯并烯氟菌唑和嘧菌酯有效分離，線(xiàn)性關(guān)系良好，精密度和準(zhǔn)確度高，適用于45%苯并烯氟菌唑·嘧菌酯水分散粒劑的定量分析。