郭 銳，周丹娜，劉澤文，楊克禮，高 婷，袁芳艷，劉 威，李 暢，夏三林，邱振乾，田永祥*

1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜禽細(xì)菌病防治制劑創(chuàng)制重點實驗室/ 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，武漢 430064；2.畜禽病原微生物學(xué)湖北省重點實驗室，武漢 430064；3.宜城市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，湖北宜城 441400

非洲豬瘟（African swine fever，ASF）可引起不同年齡、不同品種的豬只出現(xiàn)烈性、高度出血性癥狀，病死率極高，最高可達(dá)100%，被我國列為一類動物疫病，也是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）要求必須報告的動物疫病之一。截至目前，全世界仍無有效的藥物及疫苗對非洲豬瘟進(jìn)行控制，防控只能依靠高度的生物安全措施、監(jiān)測及撲殺。非洲豬瘟在2018 年進(jìn)入中國以來，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失。目前，非洲豬瘟病毒毒株的多樣性加劇，疫情的復(fù)雜性也在加重：流行毒株仍以基因Ⅱ型野毒株為主，存在自然變異毒株、基因缺失毒株、低毒力毒株等變異毒株以及基因Ⅰ毒株。非瘟豬瘟病毒基因Ⅱ型毒株感染仍呈現(xiàn)高發(fā)病率和高病死率，但易早發(fā)現(xiàn)早確診；非洲豬瘟病毒基因Ⅰ型毒株感染嚴(yán)重影響母豬繁殖性能，引起繁殖障礙等；臨床上還存在野毒株和變異株混合感染現(xiàn)象。

根據(jù)臨床癥狀，非洲豬瘟一般可分為特急性、急性、亞急性和慢性。非洲豬瘟的癥狀如下：①特急性非洲豬瘟：突然死亡而無明顯癥狀。②急性非洲豬瘟：患病豬嗜睡喜臥，呼吸急促，食欲不振，伴有40～42 ℃高溫，通常在1～2 周內(nèi)死亡。臨床癥狀主要表現(xiàn)為胸部、腹部、尾巴、會陰和腿部皮膚發(fā)紅，眼睛和鼻子流出分泌物，腹瀉或便秘并伴有嘔吐，延長病程時出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。懷孕的母豬可以在懷孕的任何階段流產(chǎn)。③亞急性非洲豬瘟：癥狀較輕，主要病變?yōu)槌鲅脱[。豬只會有不同程度的發(fā)燒，表現(xiàn)為精神抑郁、食欲不振、肺炎或呼吸道癥狀，關(guān)節(jié)通常腫脹。病程持續(xù)數(shù)周至數(shù)月，病豬通常在7～20 d 內(nèi)死亡，死亡率為30%～70%。④慢性非洲豬瘟：臨床癥狀為輕度發(fā)熱，伴有中度或重度關(guān)節(jié)腫脹，呼吸道癥狀輕微，通常出現(xiàn)皮膚紅斑、壞死、突起。非洲豬瘟病毒通常可以存活幾個月，但很難恢復(fù)。剖析顯示肺部呈干酪狀壞死的肺炎、纖維性心包炎、病豬淋巴結(jié)腫大、局部出血癥狀。為此，國家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布了《非洲豬瘟常態(tài)化防控技術(shù)指南》，中國動物疫病預(yù)防控制中心發(fā)布了《養(yǎng)殖場非洲豬瘟病毒變異株防控技術(shù)指南》，對于每個規(guī)?；i場而言，做好生物安全，堅持ASFV 監(jiān)測依然是目前有效防控非洲豬瘟的唯一方法[1]。

1 材料與方法

1.1 試驗時間及地點

2021 年1-12 月，貴州省某集團(tuán)種豬場。

1.2 采樣方法及樣品數(shù)量

按照筆者所在實驗室擬訂的“規(guī)模化豬場非洲豬瘟監(jiān)測技術(shù)規(guī)程”，對貴州某規(guī)?；i場進(jìn)行持續(xù)12 個月的監(jiān)測，累計采樣檢測樣品共計4 421份，其中人員（1 347 份）、物資（572 份）、車輛（2 502 份）。

1.3 檢測試劑

非洲豬瘟熒光定量PCR 試劑盒購自北京億森寶公司，DNA 核酸提取試劑盒購自廈門騰基生物公司。

1.4 儀器設(shè)備

實時熒光定量PCR 儀FQD-48A 購自博日公司，移液器購自ependof 公司。

1.5 檢測方法

樣品采集后用樣品液倒入無菌的樣品保存管中，2 000 r/min 離心1 min，取上清500 μL 待檢，樣品能在24 h 內(nèi)檢測可置于4 ℃保存，如24 h 內(nèi)無法檢測的樣品則置于-20 ℃保存。DNA 核酸提取和熒光定量PCR 檢測均按照說明書操作及標(biāo)準(zhǔn)判定。

2 結(jié)果與分析

2021 年全年對4 421 份環(huán)境樣品進(jìn)行非洲豬瘟病原檢測。由表1 可知，人員樣品2、3、6、7、8 月份查出陽性，陽性率分別為7.69%、9.57%、1.91%、5.18%、8.96%；車輛樣品1、2、3、4、6、7、8、9、12 月份查出陽性，陽性率分別為0.53%、5.97%、8.36%、0.5%、4.83%、4.85%、8.05%、0.92%、1.02%；物資樣品8 月份查出陽性，陽性率為2.38%。

表1 場外環(huán)境樣品1-12 月核酸監(jiān)測陽性率 %

由表2 可知，不同用途車輛樣品中，外部運豬車檢出陽性率最高，為10.69%，其次為客戶車輛5.71%、人員物資運輸車1.88%、飼料公司料車1.02%、內(nèi)部轉(zhuǎn)豬車1.07%。

表2 不同用途車輛樣品1-12 月核酸監(jiān)測結(jié)果

對該場1 年的跟蹤監(jiān)測結(jié)果顯示，2-3 月和6-8 月ASFV 檢出率較高，從ASFV 帶毒率來看：車輛＞人員＞物資，其中，外來運豬車輛和客戶車輛風(fēng)險系數(shù)較高。筆者在進(jìn)行風(fēng)險追溯后發(fā)現(xiàn)車輛帶毒的主要原因：運輸過帶毒豬只后未徹底消毒、在公共洗消點被二次污染、運輸路途中被污染；人員帶毒主要原因：去過農(nóng)貿(mào)市場和餐館被污染、被同行人員二次污染、被乘坐車輛二次污染、被家中肉制品污染[2-3]。因此，要高度重視車輛、人員的傳播風(fēng)險，堅持監(jiān)測工作，嚴(yán)格執(zhí)行洗消流程，有條件的企業(yè)力爭創(chuàng)建非洲豬瘟無疫小區(qū)，構(gòu)建閉環(huán)生產(chǎn)鏈，大環(huán)境無疫則將大大減輕養(yǎng)殖企業(yè)的非洲豬瘟防控壓力。

3 防控經(jīng)驗分享

3.1 了解當(dāng)前非洲豬瘟流行特點

當(dāng)前非洲豬瘟變異毒株表現(xiàn)為潛伏期長、豬只帶毒時間長、傳播速度變慢、死亡率降低的慢性非洲豬瘟、溫和性非洲豬瘟，導(dǎo)致臨床早期發(fā)現(xiàn)難度增加，精準(zhǔn)剔除操作困難，一旦發(fā)現(xiàn)時，往往全群已經(jīng)大面積感染，損失慘重。弱毒株、疫苗毒開始檢測陰性，后期轉(zhuǎn)陽性，與豬群應(yīng)激關(guān)系極大；慢性非洲豬瘟、溫和性非洲豬瘟、疫苗毒往往在其他疾病發(fā)生后或應(yīng)激后又被檢測出來。野毒發(fā)現(xiàn)即清除，而弱毒株、疫苗毒因傳播慢、范圍小、檢測結(jié)果反復(fù)、死亡率低等原因，可采取疑似隔離、觀察、檢測確認(rèn)再剔除方式進(jìn)行；根據(jù)豬的種類（如母豬、育肥等）不同、疑似病例復(fù)盤可能路徑不同、發(fā)病點分布不同，采樣方式、檢測范圍、檢測頻次、剔除范圍相應(yīng)不同，剔除操作則要注意隔離、消毒，不擴(kuò)散；對疫苗毒，血液檢測相對更可靠，檢出率更高，而口、鼻、肛采樣在癥狀明顯或死亡之后往往才能檢測出來，檢出率相對較低。對慢性疑似病例，只有多次反復(fù)抗原檢測或結(jié)合抗體檢測才能確認(rèn)，可能還要用到不同廠家試劑盒加以驗證；有專家建議把qPCR 檢測Ct 值40 作為診斷參考。平時抗原、抗體定期監(jiān)測與緊急狀態(tài)擴(kuò)大監(jiān)測結(jié)合，既考慮可靠性又強調(diào)經(jīng)濟(jì)性。慢性非洲豬瘟、溫和性非洲豬瘟的出現(xiàn)，無疑增加了對非洲豬瘟檢測確診的難度，檢測成本急劇升高[4]。

3.2 提高豬群健康度

哈爾濱獸醫(yī)研究所仇華吉研究員指出提升豬群“酒量”（感染閾值）的觀點，也是指要提高健康度，那么如何評價豬群健康度？可以根據(jù)以下指標(biāo)進(jìn)行大致評估：豬群的精神狀態(tài)、采食量；皮膚、黏膜的完整性；紅細(xì)胞和血紅蛋白水平；出現(xiàn)便秘、淚斑、鐵銹線、難產(chǎn)母豬的比例；老弱病殘和亞健康豬的比例；發(fā)情率、受胎率、健仔率、仔豬成活率和育成率的比例等。只有提高豬群整體健康度，才能有效抵御病毒的侵襲，主要措施有：①保證優(yōu)良豬舍環(huán)境，針對自身豬舍情況進(jìn)行改造，做到環(huán)境干燥、溫度適宜、良好通風(fēng)、降低豬群密度等方面；②提供含有豐富營養(yǎng)的飼料，蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪、維生素和微量元素等都是能增強免疫力的營養(yǎng)元素，提供符合飲用標(biāo)準(zhǔn)的飲水也是保證健康的重要措施；③抗應(yīng)激管理，提升非特異性免疫力。從事生產(chǎn)流程入手減少豬群的應(yīng)激，當(dāng)各階段豬群處于應(yīng)激期時全群投放中藥、益生菌、抗菌肽、多維等功能性添加劑。

3.3 有效降低豬場環(huán)境病毒的載量

國外學(xué)者研究數(shù)據(jù)顯示，豬只感染非瘟病毒需要一定的病毒量，不同的感染途徑所需最低感染的病毒量不同，如非洲豬瘟的感染劑量通過口和鼻分別為105 HAD50/mL 和102.9 HAD50/mL。因此，在防控非洲豬瘟?xí)r的一個重要工作就是盡量減少豬只所處環(huán)境中的病毒載量，具體措施如下：①控制好五流（水料流、車輛流、人員流、動物流和物品流）、知己彼、拔病牙。通過“控五流”盡量堵住病毒不進(jìn)入豬場。②有效消毒，正確規(guī)范的洗消殺工作對于消滅場內(nèi)殘留的病原和防止病原的傳播至關(guān)重要，建議進(jìn)行“立體式”洗消殺操作，包括場地洗消、飲水消毒和空氣消毒。通過“有效消毒”的方式，殺滅可能進(jìn)入豬場的病原。③重視消滅“蚊蠅老鼠”，蚊蠅雖小，但卻是最極具危險且難以防范的非瘟傳播媒介。吸血昆蟲如果吸食了病豬的血液，可以保留24 h 的傳播能力，在其活動采食范圍內(nèi)將成為非洲豬瘟病毒傳播的機械載體，更有報告說蒼蠅可以飛到2.3 km 外的地方傳播流感病毒，由此可推理蒼蠅傳播非瘟病毒的距離之遠(yuǎn)。

3.4 重視硬件生物安全改造

目前，大部分豬場基本的防非硬件設(shè)施已經(jīng)完善，但在生產(chǎn)操作過程中會出現(xiàn)不適用、閑置等問題，當(dāng)出現(xiàn)這種現(xiàn)象時一定要立即改造，遵循“制度管人+硬件管人”的原則，在生物安全防控中不能完全依靠人性的自覺，更要設(shè)施管控，實現(xiàn)“不該去的區(qū)域去不了，洗消流程時間未到人離不開”。

4 結(jié) 語

目前，由于非洲豬瘟病毒的變異流行特點發(fā)生變化，很多養(yǎng)殖戶認(rèn)為非洲豬瘟病毒難防，但是只要在場內(nèi)外環(huán)境和生產(chǎn)管理過程中構(gòu)建好豬場的生物安全體系，提高豬群健康度，綜合防控重要傳染病，做好豬場內(nèi)外環(huán)境監(jiān)測，守好外圍防線，便可以有效阻斷非洲豬瘟病毒傳播途徑。因此，外環(huán)境監(jiān)測在防控非洲豬瘟等動物疫病以及制定防控措施中起到了關(guān)鍵的作用，一方面能夠早發(fā)現(xiàn)環(huán)境病毒并溯源，另一方面洗消措施更有針對性，抓住防控關(guān)鍵點將生物安全措施落到實處。