付立波 王一冰 朱妮娜 王紫怡

(長(zhǎng)春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130032)

三七有效成分提取物三七皂苷可修復(fù)受損的神經(jīng)元〔1〕，而三七皂苷有R1、R2、R4、R6 等物質(zhì)〔2〕。丹參根及根莖有活血化瘀、安神養(yǎng)血、清心除煩等功能〔3，4〕，丹參中主要成分是丹參酮，丹參酮可阻止男性激素產(chǎn)生，減少皮脂產(chǎn)生，減輕由細(xì)菌引發(fā)的炎癥疾病〔5〕，具有活血化瘀、改善微循環(huán)的作用，并且丹參酮對(duì)多種革蘭陽性球菌抗菌感染有良好的抑制作用〔6，7〕，因此市場(chǎng)需求量大，開發(fā)利用價(jià)值高〔8，9〕。我們前期〔10，11〕研究發(fā)現(xiàn)，單體三七水煮液對(duì)大鼠有鎮(zhèn)痛作用，而與丹參合劑對(duì)雄性正常大鼠和炎癥大鼠痛覺變化的影響研究，在國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道，為了進(jìn)一步驗(yàn)證三七與丹參中藥合劑對(duì)大鼠的痛覺調(diào)節(jié)作用，本試驗(yàn)采用灌胃及行為藥理學(xué)等方法，觀察與記錄不同濃度的三七與丹參合劑對(duì)大鼠痛覺變化的影響，為三七與丹參合劑在臨床上鎮(zhèn)痛應(yīng)用提供理論依據(jù)，同時(shí)也為臨床中藥在鎮(zhèn)痛方面的研究與開發(fā)提供了新的思路。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8只雄性大鼠購(gòu)于吉林大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心，每個(gè)大鼠單獨(dú)飼養(yǎng)，自由進(jìn)食喝水，正常光照，溫度21～25℃。

1.2藥品 主要成分為丹參與三七膠囊，購(gòu)于長(zhǎng)春市康愛大藥房。將丹參與三七膠囊稱量后置于瓷缸中，隔水加熱制備成母液，之后用母液來配制20.95、41.90、62.85 mg/ml的丹參與三七的合劑。

1.3主要儀器 智能熱板儀(型號(hào)為YLS-3E)、電子壓痛儀(型號(hào)為YLS-6B)，均由安徽省正華生物儀器設(shè)備有限公司提供；灌胃針(型號(hào)為：810216)由上海化科實(shí)驗(yàn)器材有限公司提供。

1.4大鼠疼痛實(shí)驗(yàn)

1.4.1正常大鼠疼痛實(shí)驗(yàn) 在進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)之前對(duì)雄性正常大鼠進(jìn)行為時(shí) 7 d的熱板和壓板致痛適應(yīng)性訓(xùn)練。適應(yīng)性訓(xùn)練后第1天8只大鼠灌胃生理鹽水，用熱板與壓板測(cè)痛儀測(cè)定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min后爪縮爪反應(yīng)潛伏期(HWL)，作為對(duì)照組數(shù)據(jù)。適應(yīng)性訓(xùn)練后第2天8只大鼠灌胃20.95 mg/ml三七與丹參合劑，用熱板與壓板測(cè)痛儀測(cè)定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min HWL，作為低劑量組數(shù)據(jù)。適應(yīng)性訓(xùn)練后第3天8只大鼠灌胃41.90 mg/ml三七與丹參合劑，同上方法測(cè)定灌胃后不同時(shí)間點(diǎn)HWL，作為中劑量組數(shù)據(jù)。適應(yīng)性訓(xùn)練后第4天8只大鼠灌胃62.85 mg/ml三七與丹參合劑，同上方法測(cè)定灌胃后不同時(shí)間點(diǎn)HWL，作為高劑量組數(shù)據(jù)。

1.4.2炎癥大鼠疼痛實(shí)驗(yàn) 在進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)前3～4 h，在每只大鼠的左側(cè)足皮下注射新配制的2%鹿角菜溶液作為致炎劑，每只每次注射 0.1 ml。大鼠在注射致炎劑后，腳掌腫脹變紅，尾巴開始變黑，幾天后個(gè)別大鼠還會(huì)有斷尾現(xiàn)象。致炎劑長(zhǎng)時(shí)間放置會(huì)變性，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)值產(chǎn)生影響，每次致炎時(shí)都應(yīng)重新配置。正常大鼠疼痛實(shí)驗(yàn)后第1天，炎癥大鼠建模后，8只大鼠灌胃生理鹽水，用熱板與壓板測(cè)痛儀測(cè)定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min HWL，作為Y-對(duì)照組數(shù)據(jù)。第2天8只大鼠灌胃20.95 mg/ml三七與丹參合劑，用熱板與壓板測(cè)痛儀測(cè)定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min HWL，作為Y-低劑量組數(shù)據(jù)。適應(yīng)性訓(xùn)練后第3天8只大鼠灌胃41.90 mg/ml三七與丹參合劑，同上方法測(cè)定灌胃后不同時(shí)間點(diǎn)HWL，作為Y-中劑量組數(shù)據(jù)。適應(yīng)性訓(xùn)練后第4天8只大鼠灌胃62.85 mg/ml三七與丹參合劑，同上方法測(cè)定灌胃后不同時(shí)間點(diǎn)HWL，作為Y-高劑量組數(shù)據(jù)。

1.5疼痛測(cè)試

1.5.1熱板法 實(shí)驗(yàn)前將熱板儀器預(yù)熱到 52℃，一只手握住大鼠的身體，另一只手捏住大鼠腿部關(guān)節(jié)部位使其腿完全伸直，將模型大鼠后爪放置熱板上，當(dāng)其后爪完全與熱板面充分接觸時(shí)，打開開關(guān)，待大鼠感到疼痛主動(dòng)回縮后爪時(shí)，關(guān)閉開關(guān)，此時(shí)記錄的數(shù)據(jù)作為大鼠的HWL。

1.5.2壓板法 使用壓力測(cè)痛儀對(duì)大鼠進(jìn)行壓力測(cè)試。將大鼠爪的關(guān)節(jié)處置于壓力測(cè)痛儀測(cè)痛區(qū)域，打開開關(guān)，待大鼠感到明顯疼痛后爪往回收縮時(shí)，關(guān)閉開關(guān)停止計(jì)時(shí)，記錄大鼠HWL。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1灌胃丹參和三七合劑對(duì)正常大鼠HWL的影響 低、中、高劑量組灌胃5、10、15、20、30 min時(shí)熱板及壓板試驗(yàn)HWL均顯著高于對(duì)照組(P<0.05);中、高劑量組灌胃45 min時(shí)壓板試驗(yàn)HWL均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。說明丹參和三七合劑對(duì)正常大鼠有鎮(zhèn)痛作用，且在灌胃后5 min時(shí)效果最佳。見表1。

表1 正常大鼠熱板與壓板HWL比較

2.2灌胃丹參和三七合劑對(duì)炎癥大鼠HWL的影響 Y-低、中、高劑量組灌胃5、10、15、20、30 min時(shí)熱板及壓板試驗(yàn)HWL均顯著高于Y-對(duì)照組(P<0.05);Y-中、高劑量組灌胃45 min時(shí)壓板試驗(yàn)HWL均顯著高于Y-對(duì)照組(P<0.05)。說明丹參和三七合劑對(duì)炎癥大鼠有鎮(zhèn)痛作用，且在灌胃后5 min時(shí)效果最佳。見表2。

表2 炎癥模型大鼠HWL比較

3 討 論

本研究結(jié)果表明，三七與丹參合劑對(duì)大鼠具有一定的消炎鎮(zhèn)痛效果，并且5～30 min的效果較佳，45 min時(shí)藥效基本消除。

阿片類藥物是如今臨床用于鎮(zhèn)痛的核心藥物。數(shù)據(jù)顯示，90%以上的患者在使用阿片類藥物的過程中均會(huì)出現(xiàn)便秘，便秘也會(huì)隨著藥劑量增加而嚴(yán)重，并且低劑量阿片藥品會(huì)引起呼吸頻率的下降，在增加劑量后潮氣會(huì)減少，一次給予較大劑量的阿片藥物時(shí)可出現(xiàn)呼吸暫停、惡心、嘔吐、腹脹、多汗、眩暈、憂慮、抑郁、皮膚瘙癢、口干等癥狀〔14～16〕。有研究表明，三七總皂苷與電針效應(yīng)相似，具有明顯鎮(zhèn)痛、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，并且三七總皂苷可能是阿片樣肽受體的激動(dòng)劑而不具有成癮的副作用〔12〕。在臨床上，經(jīng)常用阿司匹林、布洛芬等作為止疼藥物，但副作用較大，三七一直作為金瘡藥的主要成分，有止血、散淤、止痛的功能，安全性好〔13〕。

丹參可以抑制體內(nèi)中樞神經(jīng)，降低神經(jīng)反應(yīng)能力，起到鎮(zhèn)痛的作用。實(shí)驗(yàn)證明給大鼠注射丹參溶液后，在大鼠受刺激后的丘腦后核放電明顯減少，這說明丹參對(duì)中樞有抑制作用〔17，18〕。以往研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸、川木通、蒲黃、北五味子等草本植物均可參與大鼠的痛覺調(diào)節(jié)作用〔19～22〕。本實(shí)驗(yàn)采用灌胃及行為藥理學(xué)等方法，觀察與記錄不同濃度的丹參與三七合劑對(duì)雄性正常及炎癥大鼠痛覺變化的影響，探究與對(duì)比中草藥合劑與單一中草藥鎮(zhèn)痛的效果，也為臨床中藥在鎮(zhèn)痛方面的研究與開發(fā)提供了新的思路，同時(shí)為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)用中草藥代替阿片類藥品鎮(zhèn)痛提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)與理論依據(jù)。