梅世慧 朱鳴鳴 王 微 何廣霞 曾成容 張峻杰 陳 超* 王開功，2 文 明，2 周碧君，2*

(1.貴州大學動物科學學院，貴陽 550025；2.貴州大學動物疫病研究所，貴陽 550025)

據(jù)報道，近10年來我國飼料自給率將下降至85%以下，因此，解決飼料短缺問題刻不容緩。我國酒糟年產(chǎn)量巨大，每年酒糟生產(chǎn)量高達5 866萬t，其中白酒糟的產(chǎn)量達到了15萬t以上[1-2]。大量研究證明，白酒糟中含有豐富的粗蛋白質、粗脂肪、無氮浸出物等營養(yǎng)物質，還含有β-葡聚糖和甘露寡糖等免疫激活劑和活性因子[3]。但在生產(chǎn)實際中，由于酒糟含水量高、酸度高，貯藏過程中易發(fā)生霉變，難以保存，以及粗纖維含量高、不利于畜禽消化吸收等特點，大大限制了酒糟資源的利用。并且酒糟堆放時滲濾液中含有大量的高酸度污染物，會對環(huán)境造成嚴重污染[4-5]，因此，解決酒糟再利用問題具有重要意義，既能實現(xiàn)廢棄資源的再利用、減少環(huán)境污染，又能開發(fā)飼料資源。

目前，酒糟作為飼料利用的方式主要有直接利用、干燥處理、發(fā)酵處理和混合青貯4種方式，由于酒糟不易貯藏，管理不當易產(chǎn)生霉菌毒素，直接利用有導致畜禽中毒的風險；干燥處理成本較高且處理后酒糟內粗纖維含量仍然較高，不利于動物對營養(yǎng)物質的消化吸收；發(fā)酵處理和混合青貯能較好地延長酒糟營養(yǎng)物質的貯藏時間、一定程度上降低酒糟中的粗纖維含量，是目前研究酒糟飼料化利用的熱點，其中以益生菌發(fā)酵酒糟飼料研究較多[6]。

目前已有益生菌發(fā)酵啤酒糟、白酒糟的研究，但是針對白酒糟進行益生菌發(fā)酵以優(yōu)化益生菌發(fā)酵白酒糟的條件進而提高白酒糟發(fā)酵品質的研究較少。因此，本試驗選用黑曲霉、糞腸球菌、植物乳桿菌、釀酒酵母進行復合益生菌發(fā)酵白酒糟，優(yōu)化復合益生菌發(fā)酵白酒糟的發(fā)酵條件，為酒糟資源的合理利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

白酒糟由貴州省某集團股份有限公司提供，其中水分含量為48.92%，粗蛋白質含量為18.40%，酸性洗滌纖維含量為49.57%，中性洗滌纖維含量為64.94%，粗脂肪含量為9.26%，粗灰分含量為6.24%，鈣含量為0.34%，磷含量為0.65%。玉米粉、麥麩、菜籽粕購于某面粉集團有限公司。白酒糟、玉米粉、麥麩、菜籽粕統(tǒng)一保存于-20 ℃冰箱中。植物乳桿菌(ACCC11095)、黑曲霉(CICC2377)購自上海保藏生物技術中心，釀酒酵母、糞腸球菌分離鑒定保藏于貴州大學。MRS培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基購自北京索萊寶科技有限公司，YPD培養(yǎng)基由動物疫病研究所自制。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種活化及擴培

植物乳桿菌、糞腸球菌接種于MRS肉湯培養(yǎng)基，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)12 h，釀酒酵母接種于YPD肉湯培養(yǎng)基，30 ℃、220 r/min搖床培養(yǎng)24 h，作為一級種子液。按照2%的接種量將一級種子液接入相應的肉湯培養(yǎng)基進行擴培，植物乳桿菌、糞腸球菌置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，釀酒酵母置于30 ℃、220 r/min搖床，均培養(yǎng)12 h，濃度調整至1×108CFU/mL，作為二級種子液，備用。黑曲霉接種于PDA斜面培養(yǎng)基，置于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3～5 d至菌絲鋪滿整個斜面。最后利用磷酸緩沖液沖洗孢子制成孢子懸液，血球計數(shù)板調整孢子懸液濃度至1×108CFU/mL，備用。

1.2.2 菌種間拮抗關系

利用十字劃線法將4株菌接種在同一培養(yǎng)皿(YPD)上，于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱有氧培養(yǎng)24 h，觀察十字交叉處是否發(fā)生菌落萎縮和消失的現(xiàn)象以判斷各菌株間拮抗關系。

1.2.3 發(fā)酵基料的優(yōu)化

固定發(fā)酵溫度為30 ℃、初始pH為5、發(fā)酵時間為3 d、接菌量為10%、菌種接種比例為1∶1∶1∶1。固定每袋發(fā)酵基料量為500 g，每組3個重復，裝入自封袋排氣后密封，最后放入恒溫培養(yǎng)箱進行發(fā)酵。以發(fā)酵后白酒糟的粗蛋白質、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量和活菌數(shù)為指標，對發(fā)酵基料進行優(yōu)化。

1)玉米粉添加量的確定。玉米粉按照0(對照)、3%、6%、9%的比例替換白酒糟，制備白酒糟發(fā)酵基料，篩選最佳玉米粉添加比例。

2)麥麩添加量的確定。根據(jù)1)的結果添加玉米粉后，麥麩按照0(對照)、1%、3%、5%的比例替換白酒糟，制備發(fā)酵基料，篩選最佳麥麩添加比例。

3)菜籽粕添加量的確定。根據(jù)1)、2)的結果添加玉米粉和麥麩后，菜籽粕按照0(對照)、6%、9%、12%的比例替換白酒糟，制備發(fā)酵基料，篩選最佳菜籽粕添加比例。

1.2.4 發(fā)酵條件的優(yōu)化

固定每袋發(fā)酵基料量為500 g，每組3個重復，裝入自封袋排氣后密封，最后放入恒溫培養(yǎng)箱進行發(fā)酵。以發(fā)酵后白酒糟的粗蛋白質、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量和pH降低值為指標,對發(fā)酵條件進行優(yōu)化。

1)發(fā)酵時間的優(yōu)化。固定菌種接種比例1∶1∶1∶1、接菌量為10%、初始pH為5、發(fā)酵溫度為30 ℃。發(fā)酵時間選擇1、3、5、7、9 d，篩選出最佳發(fā)酵時間范圍。

2)發(fā)酵溫度的優(yōu)化。固定菌種接種比例1∶1∶1∶1、接菌量為10%、初始pH為5、發(fā)酵時間為3 d。發(fā)酵溫度選擇28、30、32、35、37 ℃，篩選出最佳發(fā)酵溫度范圍。

3)初始pH的優(yōu)化。固定菌種接種比例1∶1∶1∶1、接菌量為10%、發(fā)酵溫度為30 ℃、發(fā)酵時間為3 d。初始pH選擇5、6、7、8，篩選出最佳初始pH發(fā)酵范圍。

4)接菌量的優(yōu)化。固定菌種接種比例1∶1∶1∶1、發(fā)酵溫度為30 ℃、初始pH為5、發(fā)酵時間為3 d。接菌量選擇0、6%、8%、10%、12%，篩選出最佳接菌量范圍。

5)正交試驗優(yōu)化發(fā)酵條件。根據(jù)單因素試驗結果，采用正交設計進一步對發(fā)酵初始pH(A)、接菌量(B)、發(fā)酵時間(C)進行優(yōu)化，篩選出最優(yōu)發(fā)酵條件(菌種接種比例1∶1∶1∶1)，復合益生菌發(fā)酵條件正交試驗因素水平結果見表1。

表1 復合益生菌發(fā)酵條件正交試驗因素水平表[L9(33)]Table 1 Factor level table of orthogonal test of compound probiotic fermentation conditions [L9(33)]

1.3 測定指標及方法

粗蛋白質含量按照GB/T 6432—2018《飼料中粗蛋白質的測定》中的凱氏定氮法測定；菌落計數(shù)參照GB 4789.15—2016《食品微生物學檢驗：霉菌和酵母計數(shù)》和GB 4789.35—2016《食品微生物學檢驗：乳酸菌計數(shù)》的方法；中性洗滌纖維含量按照GB/T 20806—2006《飼料中中性洗滌纖維的測定》的方法測定；酸性洗滌纖維含量按照NY/T 1459—2007《飼料中酸性洗滌纖維的測定》的方法測定；pH使用酸度計測定。硫代葡萄糖苷和植酸含量采用分光光度法測定；單寧含量采用紫外分光光度法測定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 26.0軟件進行方差分析，采用Duncan氏法進行多組樣本間差異顯著性分析。P≤0.01表示差異極顯著，P≤0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2 結果與分析

2.1 菌種間拮抗關系的結果

由圖1、2可知，劃線處株菌生長狀態(tài)良好，均未出現(xiàn)肉眼可見的菌落萎縮和消失現(xiàn)象，所以植物乳桿菌、黑曲霉、糞腸球菌、釀酒酵母各株菌間基本無拮抗作用。

圖1 菌種拮抗試驗結果Fig.1 Results of bacterial species antagonism test

2.2 發(fā)酵基料的優(yōu)化

2.2.1 玉米粉添加量對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響

由圖3可知，與對照組相比，添加玉米粉極顯著提高發(fā)酵白酒糟粗蛋白質含量(P<0.01)，極顯著降低了發(fā)酵白酒糟的中性洗滌纖維含量(P<0.01)和酸性洗滌纖維含量(P<0.01)。與對照組相比，粗蛋白質含量增長差異最顯著的為3%組，其次為6%組和9%組，但3%組和6%組粗蛋白質含量差異不顯著(P<0.05)；與對照組相比，中性洗滌纖維含量下降差異最顯著的為6%組，其次為3%組和9%組；酸性洗滌纖維含量下降差異最顯著的為6%組，其次為9%組和3%組。隨著玉米粉添加量的增加，活菌數(shù)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，當玉米粉添加量為6%時，發(fā)酵白酒糟活菌數(shù)達到最大值，極顯著高于其他組(P<0.01)。綜合考慮，復合益生菌發(fā)酵白酒糟中最佳玉米粉添加量確定為6%。

圖2 菌種拮抗試驗結果Fig.2 Results of bacterial species antagonism test

不同大寫字母表示差異極顯著(P≤0.01)，不同小寫字母表示差異顯著(P≤0.05)，無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。下圖同。Different capital letters indicate extremely significant difference (P≤0.01),different lowercase letters indicate significant difference (P≤0.05),while no letter or the same letter indicate no significant difference (P>0.05).The same as below.圖3 玉米粉添加量對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響Fig.3 Effects of corn meal addition on distiller’s grains fermented by compound probiotics

2.2.2 麥麩添加量對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響

由圖4可知，與對照組相比，添加麥麩后發(fā)酵白酒糟粗蛋白質含量差異不顯著(P>0.05)，中性洗滌纖維含量除5%組極顯著低于對照組(P<0.01)外，其余組均與對照組差異不顯著(P>0.05)，酸性洗滌纖維含量除了5%組與對照組差異不顯著(P>0.05)外，其余組均極顯著高于對照組(P<0.01)。隨著麥麩添加量的增加，活菌數(shù)呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，當麥麩添加量為5%時，發(fā)酵白酒糟活菌數(shù)達到最大值，顯著高于對照組(P<0.05)，極顯著高于1%組和3%組(P<0.01)。綜合考慮，復合益生菌發(fā)酵白酒糟中最佳麥麩添加量確定為5%。

圖4 麥麩添加量對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響Fig.4 Effects of wheat bran addition on distiller’s grains fermented by compound probiotics

2.2.3 菜籽粕添加量對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響

由圖5可知，與對照組相比，除12%組顯著提高發(fā)酵白酒糟粗蛋白質含量(P<0.05)外，剩余組粗蛋白質含量較對照組無顯著差異(P>0.05)；酸性洗滌纖維含量除12%組極顯著降低(P<0.01)外，剩余組較對照組有所提高；所有添加菜籽粕組中性洗滌纖維含量較對照組有所提高，但差異不顯著(P>0.05)。隨著菜籽粕添加量的增加，活菌數(shù)呈現(xiàn)先上升后下降再急劇上升的趨勢，當菜籽粕添加量為12%時，發(fā)酵白酒糟活菌數(shù)達到最大值，極顯著高于其他組(P<0.01)。綜合考慮，復合益生菌發(fā)酵白酒糟中最佳菜籽粕添加量確定為12%。

圖5 菜籽粕添加量對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響Fig.5 Effects of rapeseed meal addition on distiller’s grains fermented by compound probiotics

2.3 發(fā)酵條件的優(yōu)化

2.3.1 發(fā)酵時間對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響

由圖6可知，隨著發(fā)酵時間的延長，復合益生菌發(fā)酵白酒糟中的粗蛋白質含量、pH降低值呈現(xiàn)先增長后下降的趨勢，其中在發(fā)酵第5天時，粗蛋白質含量達到最高點，其次為第7天，且發(fā)酵第5天與第7天粗蛋白質含量差異不顯著(P>0.05)。在發(fā)酵第7天時，pH降低值達到最高點，其次為第5天，且發(fā)酵第7天與第5天的pH降低值差異不顯著(P>0.05)。中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量均呈現(xiàn)先下降再上升的趨勢，其中在發(fā)酵第7天時，中性洗滌纖維含量達到最低點，其次為第5天，且發(fā)酵第7天與第5天中性洗滌纖維含量差異不顯著(P>0.05)。在發(fā)酵第5天時，酸性洗滌纖維含量達到最低點。綜合考慮，復合益生菌發(fā)酵白酒糟最佳發(fā)酵時間確定為5 d。

圖6 發(fā)酵時間對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響Fig.6 Effects of fermentation time on distiller’s grains fermentation by compound probiotics

2.3.2 發(fā)酵溫度對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響

由圖7可知，不同溫度發(fā)酵組中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量差異不顯著(P>0.05)。但隨著發(fā)酵溫度的升高，復合益生菌發(fā)酵白酒糟的粗蛋白質含量呈現(xiàn)先下降后升高的趨勢，其中在37 ℃時粗蛋白質含量達到最高點，其次為28 ℃，且28 ℃組與37 ℃組粗蛋白質含量差異不顯著(P>0.05)。復合益生菌發(fā)酵白酒糟后的pH降低值呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，其中在30 ℃時pH降低值達到最高點，其次為28 ℃，且28 ℃組與30 ℃組pH降低值差異不顯著(P>0.05)。綜合考慮，復合益生菌發(fā)酵白酒糟最佳發(fā)酵溫度確定為28 ℃。

圖7 發(fā)酵溫度對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響Fig.7 Effects of fermentation temperature on distiller’s grains fermented by compound probiotics

2.3.3 初始pH對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響

由圖8可知，隨著發(fā)酵初始pH降低值的提高，復合益生菌發(fā)酵白酒糟的粗蛋白質含量、pH降低值、酸性洗滌纖維含量呈直線下降趨勢，其中當初始pH 5時。粗蛋白質含量、pH降低值達到最高點，當初始pH 8時，酸性洗滌纖維含量達到最低點。隨著發(fā)酵初始pH的提高，中性洗滌纖維含量呈先下降后上升的趨勢，其中當初始pH 6時，中性洗滌纖維含量達到最低點，其次為初始pH 5組，且初始pH 6組與初始pH 5組中性洗滌纖維含量差異不顯著(P>0.05)。綜合考慮，復合益生菌發(fā)酵白酒糟最佳發(fā)酵初始pH確定為5。

圖8 初始pH對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響Fig.8 Effects of initial pH on distiller’s grains fermented by compound probiotics

2.3.4 接菌量對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響

由圖9可知，隨著接菌量的提高，復合益生菌發(fā)酵白酒糟的粗蛋白質含量、pH降低值大體呈先上升后下降再上升后下降的趨勢，其中當接菌量為6%時，粗蛋白質含量達到最高點，其次為10%組，且6%組與10%組中性洗滌纖維含量差異不顯著(P>0.05)。當接菌量為10%時，pH降低值達到最高點，其次為6%組，且6%組與10%組pH降低值差異顯著(P<0.05)。隨著接菌量的提高，復合益生菌發(fā)酵白酒糟的中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量呈先下降后上升的趨勢，其中當接菌量為8%時，中性洗滌纖維含量達到最低點，其次為10%組，且8%組與10%組中性洗滌纖維含量差異不顯著(P>0.05)。當接菌量為6%時，酸性洗滌纖維含量達到最低點，其次為8%組、10%組，且6%組與8%組、10%組酸性洗滌纖維含量差異不顯著(P>0.05)。綜合考慮，復合益生菌發(fā)酵白酒糟最佳發(fā)酵接菌量確定為10%。

圖9 接菌量對復合益生菌發(fā)酵白酒糟的影響Fig.9 Effects of inoculation amount on fermented distiller’s grains by compound probiotics

2.3.5 正交試驗結果

在單因素試驗基礎上，設計關于初始pH、接菌量、發(fā)酵時間3個因素的L9(33)正交試驗，以優(yōu)化復合益生菌發(fā)酵白酒糟的發(fā)酵條件，結果見表2。

由表2可知，影響粗蛋白質含量的因素為：B>C>A，影響中性洗滌纖維含量的因素為：C>A>B；影響酸性洗滌纖維含量的因素為：A>B>C；影響pH降低值的因素為：A>B>C。以粗蛋白質、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量和pH降低值為指標時，得出的最優(yōu)發(fā)酵條件分別為：A2B1C2、A2B1C3、A2B2C1、A3B3C2。

表2 正交試驗結果與分析Table 2 Orthogonal test results and analysis

2.3.6 正交試驗驗證結果

由于A2B1C2、A3B3C2包含在表2中，所以只需要進行A2B1C3和A2B2C1組合試驗即可確定最優(yōu)發(fā)酵條件，結果見表3。4個優(yōu)化組合中，A2B2C1組合粗蛋白質含量最高且中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量最低，A3B3C2組合pH降低值最高。綜合考慮，最終選擇了A2B2C1(即初始pH為6、接菌量為8%、發(fā)酵時間為5 d)為復合益生菌發(fā)酵白酒糟的最優(yōu)發(fā)酵條件，其粗蛋白質含量高于其余3組，中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量低于其余3組，pH降低值適中。

表3 復合益生菌發(fā)酵白酒糟的最優(yōu)發(fā)酵條件篩選Table 3 Screening of optimal fermentation conditions for distiller’s grains fermentation by compound probiotics

2.3.7 優(yōu)化前后白酒糟品質的比較

由表4可知，與優(yōu)化前白酒糟相比，經(jīng)復合益生菌優(yōu)化發(fā)酵后的白酒糟，粗蛋白質含量提高34.46%，中性洗滌纖維含量降低35.28%，酸性洗滌纖維含量降低54.02%。同時，白酒糟基料內菜籽粕抗營養(yǎng)因子硫代葡萄糖苷和植酸含量經(jīng)復合益生菌優(yōu)化發(fā)酵后分別降低22.92%和 22.19%。

表4 白酒糟優(yōu)化前后比較Table 4 Comparison of distiller’s grains before and after optimization

3 討 論

3.1 發(fā)酵基料對白酒糟的影響

微生物正常生長繁殖、代謝及合成產(chǎn)物都需供給相應的營養(yǎng)，酒糟氮源含量豐富，但缺乏含碳物質，結合生產(chǎn)實際，本研究選用玉米粉和麥麩作為酒糟內補充碳源。菜籽粕是油菜籽加工后的副產(chǎn)品，粗蛋白質含量高達35%～45%，每年約產(chǎn)700萬t[7]。然而，由于菜籽粕中含有硫代葡萄糖苷、植酸、單寧、粗纖維等抗營養(yǎng)因子，限制了菜籽粕的開發(fā)利用，目前利用微生物發(fā)酵以降解菜籽粕中的毒性物質為研究熱點[8]。因此，本試驗在添加玉米粉和麥麩的基礎上，向酒糟內添加一定量的菜籽粕，以求進一步提高酒糟發(fā)酵品質，同時降低菜籽粕中的抗營養(yǎng)因子。本試驗利用復合益生菌發(fā)酵白酒糟后發(fā)現(xiàn)，隨著發(fā)酵基料的變化，白酒糟內各項指標發(fā)生變化，大體趨勢為隨著活菌數(shù)的增加，白酒糟內粗蛋白質含量升高，中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量降低。張玉誠[9]利用復合益生菌發(fā)酵白酒糟，研究發(fā)現(xiàn)在白酒糟內加入10%麩皮和5%玉米粉時粗蛋白質含量從16.32%提高到24.34%，粗纖維含量從34.90%降解至20.06%。范恩帝等[10]研究釀酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母、植物乳桿菌等復合益生菌對白酒糟的影響，發(fā)現(xiàn)當麩皮添加量為10%時，酒糟粗蛋白質含量提高最多，當添加量為20%時，酒糟粗纖維含量降解率最高。宋善丹等[11]利用米曲霉、黑曲霉和酵母菌發(fā)酵白酒糟，發(fā)現(xiàn)當麥麩添加量達25%時，粗蛋白質含量增加22.32%，中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量分別為25.23%和28.45%。本試驗條件下，當玉米粉、麥麩和菜籽粕添加量分別為6%、5%和12%時，白酒糟的粗蛋白質含量由18.40%提高到23.68%，中性洗滌纖維含量由64.94%降低至53.63%，酸性洗滌纖維含量由49.57%降低至23.40%，與張玉誠[9]、范恩帝等[10]、宋善丹等[11]研究結果一致，且麥麩添加量與張玉誠[9]相比較低，進一步降低了發(fā)酵成本。本試驗條件下，發(fā)酵基料內菜籽粕硫代葡萄糖苷含量降低22.92%，植酸含量降低22.19%，降解效果明顯，但單寧含量由735.18 nmol/g增加到904.77 nmol/g。單寧含量過高時主要會影響飼料的適口性，降低飼料利用率，但適量單寧能防止反芻動物瘤胃中膨脹病的發(fā)生[12]，本試驗發(fā)酵基料內菜籽粕添加量僅為12%，且單寧含量在菜籽粕中較低，因此，發(fā)酵過程中單寧含量升高對白酒糟發(fā)酵飼料影響較小。但是本研究未對比各組基料發(fā)酵前后營養(yǎng)指標的變化情況，無法確定是發(fā)酵過程中益生菌起主要作用還是各組基料配方組合不同而影響各組營養(yǎng)指標的變化，因此存在不足之處，需要進一步試驗確定。

3.2 發(fā)酵條件對白酒糟的影響

不同生長條件會對微生物的生長繁殖、代謝產(chǎn)物的合成和積累產(chǎn)生直接影響。發(fā)酵溫度和pH會影響微生物的酶活性、生長代謝速度及其對各類營養(yǎng)元素的吸收[13]；發(fā)酵時間和接種量會影響活菌數(shù)目進而影響發(fā)酵效果，發(fā)酵時間過長甚至會增加染菌機會[14]。司維江等[15]利用混菌發(fā)酵白酒糟的最佳發(fā)酵條件為38 ℃、55%含水量發(fā)酵5 d，該條件下白酒糟的真蛋白質含量顯著提升。李虓等[16]利用3株枯草芽孢桿菌發(fā)酵白酒糟，最優(yōu)發(fā)酵條件為接種量5%、34 ℃發(fā)酵5 d，發(fā)酵后粗蛋白質含量提高82.80%。劉鵬[17]利用混菌發(fā)酵白酒糟的最佳發(fā)酵條件為初始含水量40%，初始pH 5.5，發(fā)酵時間5 d，酒糟粗蛋白質含量提高了48.83%。本試驗利用黑曲霉、糞腸球菌、植物乳桿菌、釀酒酵母固態(tài)發(fā)酵白酒糟，利用單因素試驗和正交試驗進行優(yōu)化，最終確定最優(yōu)發(fā)酵條件為初始pH為6、接種量為8%、發(fā)酵時間為5 d，與發(fā)酵前白酒糟基料相比，粗蛋白質含量提高15.93%，中性洗滌纖維含量降低29.81%，酸性洗滌纖維含量降低28.04%，與司維江等[15]、李虓等[16]、劉鵬[17]研究結果一致。該條件下，發(fā)酵白酒糟中粗蛋白質含量為24.74%，中性洗滌纖維含量為42.03%，酸性洗滌纖維含量為22.79%，pH降低為0.745。

4 結 論

復合益生菌發(fā)酵白酒糟能有效改善白酒糟的發(fā)酵品質，結合粗蛋白質、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量、活菌數(shù)等指標綜合分析得出：

① 本試驗條件下，復合益生菌發(fā)酵白酒糟的最優(yōu)發(fā)酵基料組合為77%白酒糟+6%玉米粉+5%麩皮+12%菜籽粕。

② 最優(yōu)發(fā)酵條件為發(fā)酵初始pH 6、接種量8%、發(fā)酵時間5 d。該發(fā)酵條件有效改善白酒糟的發(fā)酵品質，有效降低發(fā)酵基料中菜籽粕的硫代葡萄糖苷、植酸含量，為白酒糟及菜籽粕的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。