王晨堯，張 昕，司 霞，朱瑞芳，曹 妍，馮耀清，韓世范，*

1.山西醫(yī)科大學(xué)護理學(xué)院，山西 030001；2.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院；3.山西醫(yī)學(xué)期刊社有限責(zé)任公司

非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease， NAFLD）是一種與胰島素抵抗和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝損傷[1]。大多數(shù)非酒精性脂肪性肝病病人伴有多種病理學(xué)表現(xiàn)，2020年初，一項國際專家共識建議將其改為代謝相關(guān)脂肪性肝?。╩etabolic associated fatty liver disease，MAFLD)[2]。MAFLD 患 病 率 較 高且呈年輕化發(fā)展趨勢，使得MAFLD 防治工作面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。飲食干預(yù)對MAFLD 的防治具有重要作用。受飲食特點及飲食習(xí)慣制約，MAFLD 病人對傳統(tǒng)飲食干預(yù)的依從性較低。飲食護理是護士日常工作中的一項重要內(nèi)容，護士有責(zé)任對護理對象進行安全的飲食推薦及飲食指導(dǎo)。面對MAFLD 防治工作的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，選擇一種簡單易行的飲食方式尤為重要。我國古代就有關(guān)于藥食兩用植物的研究，人們常利用藥食兩用植物進行膳食補充、飲食調(diào)味、營養(yǎng)保健等[3]。沙棘是一種國家公認(rèn)的傳統(tǒng)藥食同源植物，含有多種人體必需但不能自身合成的活性化合物[4]，由其再加工所制成的新型食品沙棘醋飲內(nèi)含豐富的沙棘功能因子沙棘黃酮和沙棘總有機酸，沙棘黃酮作為有效活性成分，具有降血脂、減輕體重、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤、降血糖等藥理學(xué)功能[5]；而沙棘有機酸則具有增強毛細血管抗凝、緩解藥物毒性、預(yù)防應(yīng)激反應(yīng)、促進細胞代謝、改善肝臟功能等作用[6]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，沙棘醋飲聯(lián)合苦蕎醋飲可改善脂肪肝分級[7]。為進一步明確沙棘醋飲的功效性及安全性，本研究選取美國癌癥研究所（ICR）小鼠和Sprague-Dawley（SD）大鼠為試驗對象，并參照相關(guān)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)[8-9]，進行急性經(jīng)口毒性試驗和28 d 經(jīng)口毒性試驗，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 對象與方法

1.1 試驗對象 ①急性經(jīng)口毒性試驗：ICR 小鼠40只，清潔級，體重18～24 g，雌雄各半。②28 d 經(jīng)口毒性試驗：SD 大鼠80 只，清潔級，體重50～100 g，雌雄各半。受試動物由山西醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供，合格證編號：SCXK（晉）2019-0004。維持飼料由斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2019-0010。受試動物飼養(yǎng)于屏障實驗環(huán)境，合格證號：SYXK（晉）2019-0007，溫度控制在20～26 ℃，相對濕度控制在40%～70%。ICR 小鼠按組分性別分籠飼養(yǎng)，每籠5～6 只，SD 大鼠單籠飼養(yǎng)。2 d 更換1 次墊料，7 d 更換1 次鼠籠。晝夜明暗交替時間為12 h/12 h，受試動物飼喂基礎(chǔ)飼料、可自由獲取飲用水。所有受試動物在正式試驗前均需3 d 適應(yīng)性飼養(yǎng)。

1.2 試驗樣品 沙棘醋飲的定型產(chǎn)品為淡黃色液體，瓶裝。生產(chǎn)批次：20200604；生產(chǎn)商：山西梁汾醋業(yè)有限公司；生產(chǎn)許可證號：SC10314070112628。

1.3 主要儀器與設(shè)備 烏拉坦溶液、解剖器械、載玻片、堿性磷酸酶測定試劑盒（批號：20211014）、血清清蛋白檢測試劑盒（批號：20211018）、總蛋白檢測試劑盒（批號：20210111）等。試劑盒均由雷杜生命科學(xué)股份有限公司提供。DM1000 LED 顯微鏡、D3024R 離心機、ME203E/02 電子天平、Chemray800 全自動生化分析儀及全自動血液分析儀等。

1.4 試驗方法

1.4.1 急性經(jīng)口毒性試驗 選用清潔級ICR 小鼠40只，雌雄各半。將其隨機分為劑量組與對照組，每組20 只，雌雄各半。按照人體推薦攝入量的100 倍將沙棘醋飲以冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的4/7 后灌胃。正式試驗前ICR 小鼠禁食6 h，自由飲水。灌胃前逐只稱量并記錄空腹體重。劑量組：將處理后的沙棘醋飲按20 mL/kg 分2 次灌胃，間隔時間為6 h，灌胃后需禁食1～2 h，其余時間常規(guī)飼養(yǎng)。對照組：給予等量蒸餾水灌胃。第2 次灌胃后連續(xù)觀察14 d，并記錄ICR小鼠中毒表現(xiàn)及死亡情況，每天固定時間逐只測量ICR 小鼠體重。

1.4.2 28 d 經(jīng)口毒性試驗 選用清潔級SD 大鼠80只，雌雄各半。將其隨機分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、對照組 4 組，每組20 只，雌雄各半。高劑量組：按照人體推薦攝入量的100 倍將沙棘醋飲以冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的2/7 后進行灌胃。中劑量組：按照人體推薦攝入量的50 倍將沙棘醋飲以冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的4/7 后進行灌胃。低劑量組：按照人體推薦攝入量的25 倍使用沙棘醋飲進行灌胃。對照組：給予等量蒸餾水灌胃。每日09：00 按照10 mL/kg 灌胃，其余時間自由攝食及飲水。連續(xù)灌胃28 d（4 周）。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 急性經(jīng)口毒性試驗 觀察期每天需觀察ICR小鼠的日常活動、攝食飲水情況、是否出現(xiàn)中毒癥狀，是否出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。若ICR 小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的中毒癥狀，人道處死小鼠并進行病理學(xué)檢查。ICR 小鼠中毒表現(xiàn)的觀察包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)及軀體運動、自主神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等。試驗結(jié)束后對所有ICR 小鼠稱重并進行解剖檢查，肉眼觀察并記錄病理學(xué)變化。準(zhǔn)確稱量ICR 小鼠各臟器重量（g）并計算心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃的臟器系數(shù)（臟器系數(shù)=臟器重量/動物體重×100%），出現(xiàn)病理學(xué)改變時需詳細記錄變化特征并進行組織病理學(xué)檢查。

1.5.2 28 d 經(jīng)口毒性試驗 試驗期間至少每天觀察1次動物的一般臨床表現(xiàn)，并記錄出現(xiàn)中毒的體征、程度及死亡情況。觀察內(nèi)容包括被毛、皮膚、眼、分泌物、排泄物、自主活動等。每周記錄SD 大鼠體重，每周固定時間測定2 次SD 大鼠攝食量。根據(jù)SD 大鼠體重及攝食量計算SD 大鼠食物利用率。食物利用率（%）為同期體重增長量與同期攝食量的比值。末次灌胃后，SD大鼠需禁食16 h（禁食期間不限制飲水）。在血液學(xué)檢查及血生化檢查前進行SD 大鼠空腹體重的測量，血液學(xué)檢查包括紅細胞計數(shù)、血細胞比容、血紅蛋白濃度、血小板計數(shù)、白細胞計數(shù)、淋巴細胞百分比、中性粒細胞百分比。血生化檢查包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素（UREA）、肌酐（Cr）、血糖（GLU）、總蛋白（TP）、血清清蛋白（ALB）、膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）。SD 大鼠死亡后進行解剖檢查，取心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃組織，稱量臟器重量（g）并計算心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃的臟器系數(shù)，肉眼觀察每只SD 大鼠的解剖器官大體病理學(xué)變化，將高劑量組和對照組SD 大鼠的心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃的組織切片置于光學(xué)顯微鏡下觀察，若在高劑量組和對照組中發(fā)現(xiàn)病變，則需對中劑量組和低劑量組進行組織病理學(xué)檢查。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 28.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析及Dunnett 檢驗分析，定性資料以頻數(shù)表示，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 急性經(jīng)口毒性試驗

2.1.1 ICR 小鼠一般臨床表現(xiàn) 將處理后的沙棘醋飲以20 mL/kg 灌胃后，對照組及劑量組小鼠生長情況良好，其日常活動、常規(guī)狀態(tài)及各臟器組織均未發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象。14 d 觀察期內(nèi)所有ICR 小鼠皮毛光潔、自主活動正常，常規(guī)狀態(tài)未見異常，各系統(tǒng)和器官未見異常，無死亡情況出現(xiàn)，未能測出半數(shù)致死量（LD50）。

2.1.2 兩組ICR 小鼠體重比較 兩組小鼠生長發(fā)育狀況良好，雌雄小鼠的體重隨時間推移均有所增長，劑量組第1 天、第7 天、第14 天ICR 小鼠的體重與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 兩組ICR 小鼠體重比較（±s） 單位：g

表1 兩組ICR 小鼠體重比較（±s） 單位：g

性別雄性只數(shù)10 10第1 天19.03±2.43 19.60±1.80-0.595雌性組別對照組劑量組t 值P對照組劑量組t 值P 10 10 0.559 18.87±1.22 19.39±1.08-1.012 0.325第7 天29.89±2.34 28.36±1.28 1.813 0.087 23.35±1.20 23.11±0.77 0.531 0.602第14 天32.78±2.53 31.28±1.45 1.629 0.121 25.33±1.21 25.08±0.63 0.581 0.569

2.1.3 兩組ICR 小鼠臟器系數(shù)比較 人道處死所有ICR 小鼠進行解剖檢查，其心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃等主要器官肉眼觀察均未見異常。對ICR 小鼠的主要臟器稱重并計算其臟器系數(shù)，結(jié)果顯示，劑量組主要器官的臟器系數(shù)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果見表2。

表2 兩組ICR 小鼠臟器系數(shù)比較（±s）

表2 兩組ICR 小鼠臟器系數(shù)比較（±s）

性別雄性只數(shù)10 10心臟系數(shù)（%）0.68±0.15 0.75±0.20-0.933雌性組別對照組劑量組t 值P對照組劑量組t 值P 10 10空腹體重（g）32.33±2.32 30.94±1.51 1.587 0.130 25.41±1.62 25.10±0.79 0.543 0.594 0.363 0.73±0.15 0.71±0.07 0.248 0.807肝臟系數(shù)（%）6.03±0.41 5.71±0.72 1.205 0.244 5.94±0.36 5.65±0.28 1.983 0.063脾臟系數(shù)（%）0.48±0.05 0.42±0.08 1.680 0.110 0.55±0.14 0.46±0.11 1.583 0.131腎臟系數(shù)（%）1.63±0.15 1.56±0.23 0.789 0.440 1.29±0.09 1.28±0.08 0.513 0.614胃系數(shù)（%）1.00±0.08 0.94±0.07 1.692 0.108 1.12±0.11 1.05±0.17 1.013 0.324

2.2 28 d 經(jīng)口毒性試驗

2.2.1 SD 大鼠一般臨床表現(xiàn) 各組SD 大鼠生長情況良好，日?；顒蛹俺Ｒ?guī)狀態(tài)均未表現(xiàn)出異常，各系統(tǒng)及器官均未發(fā)現(xiàn)中毒特征，在整個試驗過程中無SD大鼠發(fā)生中毒、死亡現(xiàn)象。

2.2.2 沙棘醋飲對SD 大鼠體重的影響 試驗過程中，各組大鼠的體重均有增長，各劑量組第1 天、第1周、第2 周、第3 周、第4 周的體重與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見表3。

表3 沙棘醋飲對SD 大鼠體重的影響（±s） 單位：g

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P 10 10 10 10第1 天73.41±5.81 78.64±6.20 78.82±5.65 76.65±7.28 1.609 0.204 78.36±7.34 78.44±5.85 80.18±8.77 78.08±5.91 0.183 0.907第1 周136.16±6.00 146.96±14.37 147.30±9.79 141.61±17.32 1.732 0.178 126.40±7.08 135.43±15.53 135.62±8.78 137.15±12.63 1.815 0.162第2 周205.05±18.21 211.65±18.88 221.91±13.22 219.29±23.29 1.663 0.192 171.75±7.99 175.01±14.34 177.64±11.13 182.68±18.07 1.185 0.329第3 周272.11±27.38 278.53±30.90 286.61±19.74 274.02±23.67 0.627 0.602 203.15±9.10 206.70±17.99 200.96±11.65 214.70±20.35 1.522 0.225第4 周348.49±28.32 344.95±43.40 347.14±25.50 366.42±27.75 0.953 0.426 228.83±11.90 233.33±19.23 225.58±14.86 238.95±21.39 1.131 0.350

2.2.3 沙棘醋飲對SD 大鼠攝食量的影響 分析各組大鼠同期攝食量，結(jié)果表明各劑量組第1 周、第2 周、第3 周、第4 周的攝食量與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見表4。

表4 沙棘醋飲對SD 大鼠攝食量的影響（±s） 單位：g

表4 沙棘醋飲對SD 大鼠攝食量的影響（±s） 單位：g

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P 10 10 10 10第1 周120.26±6.01 119.56±6.48 124.50±4.46 121.10±3.39 1.748 0.175 112.29±8.28 114.38±10.26 115.06±4.94 118.10±3.16 1.112 0.357第2 周162.91±9.78 161.12±6.93 167.59±8.96 168.33±5.24 1.976 0.135 139.53±4.66 135.71±6.18 133.71±7.11 137.30±6.98 1.523 0.225第3 周186.53±7.82 182.19±9.32 183.42±9.85 187.23±8.46 0.741 0.535 157.97±4.36 159.14±7.48 153.18±6.23 157.01±7.90 1.514 0.227第4 周210.53±8.29 206.45±13.02 207.83±5.83 213.75±7.79 1.247 0.307 168.94±7.68 171.89±2.40 167.19±6.75 167.26±6.19 1.302 0.289

2.2.4 沙棘醋飲對SD 大鼠食物利用率的影響 分析各組大鼠同期食物利用率，結(jié)果表明，各劑量組第1周、第2 周、第3 周、第4 周的食物利用率與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見表5。

表5 沙棘醋飲對SD 大鼠食物利用率的影響（±s） 單位：%

表5 沙棘醋飲對SD 大鼠食物利用率的影響（±s） 單位：%

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P 10 10 10 10第1 周52.18±5.70 56.88±9.86 54.80±8.94 53.50±8.83 0.558 0.646 43.16±4.94 49.24±8.34 48.02±4.87 49.10±5.17 2.277 0.096第2 周41.99±6.39 39.99±7.31 44.41±3.90 46.14±4.23 2.291 0.095 32.49±2.34 29.19±4.98 31.33±5.35 33.12±3.47 1.687 0.187第3 周34.43±4.73 36.47±6.47 35.17±3.14 30.84±6.27 2.052 0.124 19.53±3.51 20.03±3.50 16.80±2.22 20.33±3.90 2.329 0.091第4 周35.42±3.20 32.11±5.19 31.39±3.96 34.74±2.45 2.628 0.065 15.23±2.42 16.38±2.88 14.69±3.60 15.83±4.04 0.492 0.690

2.2.5 沙棘醋飲對SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 與對照組相比，低劑量組雄性大鼠的白細胞計數(shù)偏高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但仍在正常范圍[（4.10～29.65）×109/L][10]，因此不具有臨床意義。各劑量組的其余血液學(xué)指標(biāo)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。沙棘醋飲對SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響見表6。

表6 沙棘醋飲對SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±s）

表6 沙棘醋飲對SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±s）

各劑量組與對照組比較，① P＜0.05。

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P 10 10 10 10紅細胞計數(shù)（×1012/L）7.09±0.42 6.97±0.70 7.11±0.29 7.10±0.64 0.159 0.923 7.14±0.21 7.52±0.75 7.26±0.84 7.07±0.38 1.082 0.369血紅蛋白（g/L）217.90±10.80 219.60±9.18 220.00±9.79 215.50±14.10 0.338 0.798 215.40±10.69 222.00±29.00 215.20±13.51 214.20±15.72 0.369 0.776血細胞比容（%）46.46±2.69 45.34±1.86 46.46±1.74 45.48±2.71 0.702 0.557 47.00±2.09 49.54±5.89 47.37±4.09 47.75±2.68 0.805 0.499血小板計數(shù)（×109/L）899.90±92.23 855.40±184.92 871.20±95.01 760.10±139.67 2.060 0.123 775.90±114.12 796.50±131.00 833.50±166.93 796.10±221.77 0.215 0.885白細胞計數(shù)（×109/L）13.84±2.21 14.80±2.75 15.54±3.16①12.61±1.81 2.501 0.075 11.89±3.70 11.52±2.22 12.01±2.09 11.21±1.31 0.214 0.886淋巴細胞百分比（%）72.82±5.84 71.67±5.46 73.95±6.84 74.16±4.10 0.414 0.744 78.99±2.80 77.51±5.50 78.76±3.46 77.23±4.16 0.461 0.711中性粒細胞百分比（%）10.98±2.34 11.34±1.58 10.82±2.85 13.30±2.35 2.435 0.081 8.70±1.53 8.36±1.81 8.81±1.76 10.37±2.29 2.290 0.095

2.2.6 沙棘醋飲對SD 大鼠肝臟功能相關(guān)指標(biāo)的影響 各劑量組肝臟功能指標(biāo)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果見表7。

表7 沙棘醋飲對SD 大鼠肝臟功能相關(guān)指標(biāo)的影響（-±s）

表7 沙棘醋飲對SD 大鼠肝臟功能相關(guān)指標(biāo)的影響（-±s）

性別雄性只數(shù)10 10 10 10 ALT（U/L）42.86±8.43 50.56±7.52 48.57±5.76雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P 10 10 10 10 AST(U/L)146.99±29.74 187.29±26.98 176.86±24.02 166.12±44.51 2.839 0.052 163.05±25.56 157.79±24.83 148.07±25.13 169.35±23.73 1.315 0.285 ALB（g/L）32.81±1.97 35.03±1.75 33.92±2.50 33.47±2.89 1.624 0.201 36.29±2.80 37.00±2.65 34.75±1.79 36.13±1.79 1.658 0.193 44.51±11.83 1.684 0.188 38.69±3.97 42.50±1.93 40.31±3.30 39.35±4.05 2.356 0.088 ALP（U/L）294.68±76.85 311.36±48.19 297.20±50.31 269.83±49.06 0.906 0.448 176.90±30.85 167.29±35.94 177.86±38.80 195.58±51.45 0.870 0.466 TP（g/L）48.99±4.18 52.52±4.17 50.28±6.68 48.00±5.34 1.409 0.256 52.45±6.22 55.24±1.99 50.64±4.82 51.48±3.51 2.044 0.125

2.2.7 沙棘醋飲對SD 大鼠腎臟功能指標(biāo)及其他生化指標(biāo)的影響 各劑量組腎臟功能指標(biāo)及其他生化指標(biāo)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果見表8。

表8 沙棘醋飲對SD 大鼠腎臟功能指標(biāo)及其他生化指標(biāo)的影響（±s）

表8 沙棘醋飲對SD 大鼠腎臟功能指標(biāo)及其他生化指標(biāo)的影響（±s）

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P 10 10 10 10 TC（mmol/L）1.57±0.37 1.50±0.27 1.74±0.43 1.73±0.41 1.037 0.388 1.93±0.30 1.80±0.32 1.89±0.49 1.99±0.33 0.451 0.718 TG(mmol/L)0.86±0.29 0.76±0.23 0.74±0.26 0.89±0.32 0.696 0.561 0.43±0.13 0.36±0.08 0.49±0.13 0.42±0.14 1.745 0.175 Cr(μmol/L)36.71±4.04 38.18±3.26 36.73±6.97 33.32±4.29 1.805 0.164 38.43±4.58 40.53±2.03 38.83±5.54 37.45±6.31 0.693 0.563 UREA(mmol/L)4.60±0.50 4.62±0.55 4.77±0.67 4.50±0.86 0.285 0.836 4.87±0.71 4.77±0.69 4.18±0.54 4.36±0.68 2.467 0.078 GLU(mmol/L)9.92±2.49 8.34±1.77 8.95±1.32 9.47±2.82 0.982 0.412 9.90±1.42 9.02±2.05 9.34±2.84 8.32±2.91 0.760 0.524

2.2.8 沙棘醋飲對SD 大鼠各臟器系數(shù)的影響 試驗結(jié)束后對80只SD 大鼠進行檢查，解剖后肉眼觀察心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃等主要臟器，其顏色、大小、形態(tài)結(jié)構(gòu)等均未見異常。各劑量組大鼠的心臟、肝臟、腎臟、脾臟和胃的臟器系數(shù)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。沙棘醋飲對SD 大鼠臟器系數(shù)的影響見表9。

表9 沙棘醋飲對SD 大鼠各臟器系數(shù)的影響（±s）

表9 沙棘醋飲對SD 大鼠各臟器系數(shù)的影響（±s）

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對照組F 值P 10 10 10 10空腹體重（g）349.59±32.30 342.21±47.52 338.92±34.68 365.95±28.37 1.093 0.365 226.23±13.24 224.06±15.80 220.27±17.06 229.96±18.03 0.631 0.600心臟系數(shù)（%）0.38±0.04 0.36±0.02 0.36±0.03 0.36±0.03 1.061 0.378 0.39±0.04 0.38±0.04 0.41±0.04 0.40±0.03 1.077 0.371肝臟系數(shù)（%）3.28±0.26 3.37±0.13 3.38±0.26 3.51±0.21 1.822 0.161 3.47±0.39 3.35±0.14 3.48±0.54 3.54±0.24 0.472 0.703脾臟系數(shù)（%）0.22±0.04 0.22±0.03 0.23±0.03 0.25±0.05 0.906 0.448 0.22±0.03 0.23±0.02 0.22±0.02 0.22±0.04 0.162 0.921腎臟系數(shù)（%）0.73±0.07 0.72±0.02 0.73±0.06 0.75±0.05 0.562 0.644 0.76±0.07 0.72±0.05 0.77±0.04 0.75±0.06 1.877 0.151胃系數(shù)（%）0.53±0.05 0.53±0.03 0.52±0.03 0.52±0.03 0.429 0.734 0.56±0.01 0.56±0.04 0.57±0.03 0.58±0.02 1.066 0.375

2.2.9 組織病理學(xué)檢查 試驗結(jié)束取高劑量組及對照組雌雄兩種性別SD 大鼠的心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃進行組織病理學(xué)檢查，鏡下觀察其顯微形態(tài)。①心臟切片顯示：心臟被膜完整，心肌細胞完整排列，心間質(zhì)正常。②肝臟切片顯示：肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，被膜完整，未出現(xiàn)炎性浸潤、點狀壞死、出血、空泡變性等異常改變。 ③腎臟切片顯示：腎小管與腎小球結(jié)構(gòu)正常，被膜完整，皮質(zhì)與髓質(zhì)部未出現(xiàn)管型、顆粒變性、蛋白質(zhì)滲出等異常改變。④脾臟切片顯示：脾小梁結(jié)構(gòu)正常，被膜完整，未出現(xiàn)炎性浸潤、結(jié)締組織增生等異常改變。⑤胃部切片顯示：各層結(jié)構(gòu)清楚，胃黏膜上層結(jié)構(gòu)完整，黏膜下層未見異常，未出現(xiàn)黏膜下出血、水腫、萎縮、增生等異常改變。

3 討論

3.1 沙棘醋飲對改善MAFLD 分級的作用 MAFLD是與目前已知代謝功能障礙相關(guān)的肝病的新定義[2]，在我國患病率高達29.2%[11]。采取結(jié)構(gòu)化的干預(yù)方案從而改變病人生活方式是MAFLD 治療的首要方法與基石[12]，尤其是飲食干預(yù)對MAFLD 的預(yù)防與治療具有重要意義[13]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，通過連續(xù)服用沙棘醋飲、苦蕎醋飲組合3 個月可有效改善MAFLD的脂肪肝分級情況，部分受試者服用沙棘醋飲、苦蕎醋飲組合后睡眠質(zhì)量提升、便秘改善、血壓降低、疲勞緩解[7]。沙棘醋飲中含有豐富的沙棘黃酮和沙棘有機酸等功能因子，其中沙棘總黃酮的含量較高，可以改善肝功能，發(fā)揮護肝作用[14]。Xiao 等[15]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對沙棘黃酮改善高脂血癥的機制進行探討，結(jié)果表明，沙棘黃酮可以促進膽固醇代謝，抑制膽固醇合成，加快脂肪酸氧化，從而改善高脂血癥。Jiao 等[16]通過動物實驗研究沙棘黃酮對高脂血癥大鼠的降血脂作用及抗氧化活性，結(jié)果表明，沙棘黃酮能顯著降低高膽固醇飲食大鼠肝臟氧化。一項針對沙棘活性成分調(diào)節(jié)肝星狀細胞活化和肝纖維化的研究表明，沙棘果實中的活性物質(zhì)可顯著減輕肝損傷和炎癥程度，并以劑量依賴性方式恢復(fù)肝功能[17]。

3.2 沙棘醋飲急性經(jīng)口毒性試驗結(jié)果分析 急性經(jīng)口毒性試驗是檢測與評價受試物毒性作用中最基本、最重要的一項試驗[18]。本研究以沙棘醋飲對ICR 小鼠的作用探究其毒性強度，主要對ICR 小鼠的一般臨床表現(xiàn)、體重情況及臟器系數(shù)進行分析。①一般臨床表現(xiàn)：觀察期內(nèi)ICR 小鼠生長良好，日?；顒雍统Ｒ?guī)狀態(tài)未見異常，各系統(tǒng)和器官未見異常，無死亡情況出現(xiàn)。說明人體推薦攝入量100 倍的沙棘醋飲并未對ICR 小鼠產(chǎn)生毒性效應(yīng)。②體重情況：在動物研究中，體重是衡量動物生長健康和代謝狀態(tài)的重要指標(biāo)[19]，觀察期間劑量組與對照組ICR 小鼠生長發(fā)育狀況均良好，劑量組第1 天、第7 天、第14 天的體重與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。說明人體推薦攝入量100 倍的沙棘醋飲并未對ICR 小鼠體重產(chǎn)生不良影響。③臟器系數(shù)：動物臟器系數(shù)可以反映并評估受試物對受試動物臟器的損傷情況[20]。觀察期間ICR 小鼠心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃等主要器官未觀察到異常變化，臟器形態(tài)、顏色、質(zhì)地均正常，劑量組主要器官的臟器系數(shù)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。說明人體推薦攝入量100 倍的沙棘醋飲對ICR小鼠各主要臟器無損害作用。總體來看，在本試驗條件下，沙棘醋飲對ICR 小鼠沒有產(chǎn)生急性毒性作用，為進一步的毒性試驗提供了參考依據(jù)，為初步確定沙棘醋飲的安全劑量奠定了基礎(chǔ)。

3.3 沙棘醋飲28 d 經(jīng)口毒性試驗分析 28 d 經(jīng)口毒性試驗作為食品安全性毒理學(xué)評價的重要內(nèi)容之一，旨在為確定食用安全劑量提供參考。本研究主要對SD 大鼠的一般臨床表現(xiàn)、體重及攝食情況、血液學(xué)指標(biāo)、血生化指標(biāo)、臟器系數(shù)及組織病理學(xué)進行分析。①一般臨床表現(xiàn)：試驗過程中各組SD 大鼠的生長情況良好，日?；顒蛹俺Ｒ?guī)狀態(tài)均無異常表現(xiàn)，各系統(tǒng)及器官均未發(fā)現(xiàn)中毒特征，無中毒、死亡現(xiàn)象。說明人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲并未對SD 大鼠產(chǎn)生毒性效應(yīng)。②體重及攝食情況：體重及食物利用率是毒理學(xué)安全性評價和試驗動物生長評價中客觀且易于判斷的指標(biāo)[21]。試驗過程中各組SD 大鼠的體重均有增長，各劑量組第1 天、第1 周、第2 周、第3 周、第4 周體重與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，個別SD 大鼠體重增長異常，可能與灌胃初期SD 大鼠易出現(xiàn)抗拒現(xiàn)象，灌胃方式產(chǎn)生的機械因素對SD 大鼠心理狀況產(chǎn)生一定影響[22]，灌胃初期SD 大鼠不適感易造成心理壓力有關(guān)。隨著SD 大鼠體重增加及灌胃周期延長，初期不良反應(yīng)消失。SD 大鼠體重變化受個體因素、飼養(yǎng)環(huán)境等影響，結(jié)合一般指標(biāo)及統(tǒng)計分析結(jié)果，認(rèn)為人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲對SD 大鼠體重的變化未產(chǎn)生不良影響。食物利用率變化情況可以反映受試動物的消化吸收情況。各劑量組第1 周、第2 周、第3 周、第4 周攝食量及食物利用率與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。提示，人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲對SD 大鼠的攝食量和食物利用率未產(chǎn)生影響。③血液學(xué)指標(biāo)：血液在促進新陳代謝和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面起著重要作用，血液成分變化在一定程度上反映了組織的病理學(xué)改變[23]。分析各組SD 大鼠的血液學(xué)指標(biāo)，結(jié)果顯示，低劑量組雄性大鼠的白細胞計數(shù)偏高，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，分析具體數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)其符合文獻報道的正常范圍，結(jié)合臟器解剖觀察及組織病理學(xué)檢查綜合分析認(rèn)為低劑量組雄性大鼠的白細胞計數(shù)升高不具有臨床意義。各劑量組其余血液學(xué)指標(biāo)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。提示人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25倍的沙棘醋飲對SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)未產(chǎn)生影響。④血生化指標(biāo)：肝臟是機體代謝臟器，ALT、AST、TP、ALB 及ALP 反映了肝臟功能基本狀況，其中，ALT 是肝臟損傷的敏感指標(biāo)[24]。各劑量組肝臟功能指標(biāo)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。腎臟主要功能是清除代謝產(chǎn)物并維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。腎臟容易受代謝產(chǎn)物損害，因其具有較強的代償作用，腎臟損害早期不易被發(fā)現(xiàn)。Cr、UREA 作為反映腎臟功能的指標(biāo)，各劑量組與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。其余代謝相關(guān)指標(biāo)無異常。說明人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲對SD 大鼠血生化指標(biāo)暫無不良影響。⑤臟器系數(shù)：臟器系數(shù)改變能夠充分反映受試物對該臟器的毒性作用。各劑量組SD大鼠的心臟、肝臟、腎臟、脾臟和胃的臟器系數(shù)與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。⑥組織病理學(xué)：顯微鏡下觀察高劑量組與對照組心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃部的組織切片，結(jié)果顯示，組織學(xué)切片均無病變，組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)完整。提示人體推薦攝入量100倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲對SD 大鼠各主要臟器無損害作用。總體來看，沙棘醋飲經(jīng)口安全性較高，不具有短期毒性。

4 小結(jié)

本研究通過急性經(jīng)口毒性試驗和28 d 經(jīng)口毒性試驗對沙棘醋飲的安全性進行初步研究，結(jié)果表明沙棘醋飲無急性與短期毒性效應(yīng)和毒作用特征，初步驗證沙棘醋飲安全無毒。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)模式影響下，“藥食同源”思想與“醫(yī)養(yǎng)結(jié)合”理念相契合，藥食同源食品逐漸得到人們的認(rèn)可與推崇[25]。針對沙棘醋飲的安全性研究及功效性研究尤為重要。服用沙棘醋飲作為一種促進健康、改善代謝的新型養(yǎng)生方式，為防治糖脂代謝異常提供了新思路。沙棘醋飲的安全性研究為沙棘醋飲的日常飲食推薦提供了試驗證據(jù)，后續(xù)還可繼續(xù)進行沙棘醋飲的遺傳毒性試驗、生殖毒性試驗等研究。