文│范雪 宋陽(yáng)（山東省龍口市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

李春蕾（山東省煙臺(tái)市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心）

奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定體系是對(duì)奶牛泌乳性能及乳成分的測(cè)定，也叫做奶牛群體改良。DHI測(cè)定在國(guó)外已形成一套較為成熟完整的體系。我國(guó)一些奶業(yè)發(fā)展較快地區(qū)的實(shí)踐也證明了這一技術(shù)的先進(jìn)性。利用DHI報(bào)告分析奶牛場(chǎng)奶牛的生產(chǎn)性能，對(duì)奶戶及整個(gè)乳品行業(yè)都有至關(guān)重要的意義。近年來(lái)，政府對(duì)奶牛良種登記和奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定工作的支持力度也越來(lái)越大，有利于我國(guó)良種奶牛的登記和基礎(chǔ)信息庫(kù)的建立，但卻大大增加了我國(guó)奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定的工作量。因此，本試驗(yàn)通過(guò)研究一次采樣與多次采樣之間的關(guān)系，希望能用一次采樣代替多次采樣，從而減輕DHI測(cè)定的工作量，減少人力物力以及奶樣的浪費(fèi)。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)動(dòng)物。選取健康狀況良好、處于正常泌乳階段、產(chǎn)犢七天后的奶牛80頭參加DHI測(cè)定。試驗(yàn)過(guò)程中，奶牛按照原有飼養(yǎng)方式飼喂，飲水方式、擠奶時(shí)間以及飼料配方等都不發(fā)生改變。試驗(yàn)動(dòng)物及場(chǎng)地由格潤(rùn)富德農(nóng)牧科技有限公司提供。

2.試驗(yàn)材料。50毫升采樣管（內(nèi)加0.03克重鉻酸鉀作為防腐劑）兩箱，采樣器，F(xiàn)oss乳成分分析儀MilkoScanTM Minor，體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，恒溫水浴箱，保鮮柜。

3.試驗(yàn)方法。

（1）采集樣品。由于該牛場(chǎng)每天擠奶兩次，本次試驗(yàn)一天采樣也是兩次，分別在6點(diǎn)和18點(diǎn)采樣。此場(chǎng)擠奶廳裝有轉(zhuǎn)盤(pán)式擠奶機(jī)，共有80個(gè)擠奶設(shè)備。采樣前先安裝采樣設(shè)備，然后按正常的擠奶程序進(jìn)行。奶牛排隊(duì)進(jìn)入擠奶轉(zhuǎn)盤(pán)，依次用溫水清洗乳頭，用消毒液對(duì)乳頭消毒，用干凈的棉布擦拭乳頭。隨著擠奶工作的進(jìn)行，不斷有奶樣進(jìn)入采樣設(shè)備。用加有0.03克重鉻酸鉀的采樣管盛取50毫升奶樣，蓋好蓋子，混合均勻。采樣結(jié)束后，要在樣品箱貼上標(biāo)簽，標(biāo)明采樣時(shí)間、地點(diǎn)、采樣人員。

（2）樣品的保存與運(yùn)輸。加有0.03克重鉻酸鉀的奶樣在15℃的條件下可以保存4天，在4℃的冷藏條件下可保存一周。采樣結(jié)束后，先放置在通風(fēng)陰涼處，防止奶樣腐敗變質(zhì)。樣品應(yīng)盡快運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)輸途中盡量保持低溫4℃，減少搖晃。本次試驗(yàn)于采樣后的第二天將奶樣運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室。

（3）檢測(cè)指標(biāo)的選擇。試驗(yàn)選取具有代表性的乳脂率、乳蛋白率、非脂固形物以及體細(xì)胞數(shù)4個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。乳脂率、乳蛋白率兩項(xiàng)指標(biāo)是通過(guò)乳成分分析儀測(cè)定的，乳脂率、乳蛋白率反應(yīng)奶牛的營(yíng)養(yǎng)狀況，也反映牛奶品質(zhì)的高低，進(jìn)而決定牛奶的銷售價(jià)格。非脂固形物是牛奶干物質(zhì)中去除乳脂的剩余部分，它也是反映牛奶品質(zhì)的重要指標(biāo)。體細(xì)胞數(shù)指每毫升牛奶中白細(xì)胞的含量，當(dāng)奶牛乳腺感染時(shí)，血細(xì)胞將進(jìn)入牛奶中，使牛奶中的細(xì)胞數(shù)增加。牛奶中體細(xì)胞的數(shù)目取決于乳腺感染的程度，乳腺感染程度高則體細(xì)胞數(shù)目多，相反，則體細(xì)胞數(shù)目少。

（4）檢測(cè)樣品。運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室的奶樣先放置在4℃的保鮮柜中，以保持奶樣的性質(zhì)，并立即組織測(cè)定工作，先測(cè)定早晨奶樣和晚上奶樣，再將早晨奶樣和晚上奶樣以1∶1的比例混合測(cè)定。

使用乳成分分析儀測(cè)定奶樣中乳脂率、乳蛋白率、非脂固形物。向恒溫水浴箱中加入適量水，把水浴溫度設(shè)定到37℃，將待測(cè)奶樣放入水浴。打開(kāi)乳成分分析儀，待達(dá)到一定溫度后開(kāi)始清洗、調(diào)零。輕微搖晃奶樣，放入吸管，按下開(kāi)始按鈕，測(cè)定乳成分，記錄數(shù)據(jù)。

使用體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定奶樣中的體細(xì)胞數(shù)。樣品在檢測(cè)前必須在水浴鍋中預(yù)熱，水浴溫度應(yīng)在41～43℃，樣品溫度應(yīng)達(dá)38～41℃。上下倒置樣品5次，混勻樣品，不要?jiǎng)×覔u晃以免產(chǎn)生氣泡。每檢測(cè)一個(gè)樣品，線路系統(tǒng)都將吸入一個(gè)氣泡，這樣可避免樣品間殘留，檢測(cè)結(jié)束后，檢測(cè)結(jié)果窗口中顯示三個(gè)數(shù)值，分別為細(xì)胞數(shù)（Kcell/ml為單位）、Q-值和當(dāng)前的斜率。

4.數(shù)據(jù)處理。把置信度設(shè)置為95%，使用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到早-混、晚-混、早與晚-混之間在乳脂率、乳蛋白率、非脂固形物和體細(xì)胞數(shù)方面的回歸關(guān)系圖表，并討論是否有線性回歸關(guān)系。

二、結(jié)果與分析

1.奶樣中各乳成分及體細(xì)胞數(shù)早上取樣與混樣之間的關(guān)系。由表1可知，經(jīng)過(guò)對(duì)早晨奶樣和混合奶樣在各乳成分和體細(xì)胞數(shù)上的回歸分析得知：混合奶樣對(duì)早晨奶樣在乳脂率、乳蛋白率、體細(xì)胞數(shù)上存在極顯著的回歸關(guān)系，回歸方程成立，依次為y＝1.70874+0.561587x，y＝0.213538+0.919992x，y＝18.98434+0.814582x；而在非脂固形物方面不存在顯著的回歸關(guān)系，回歸方程不成立。因此，通過(guò)測(cè)定早晨奶樣的乳成分及體細(xì)胞數(shù)，無(wú)法完全了解混合奶樣中的乳成分及體細(xì)胞數(shù)，可以認(rèn)為早晨奶樣無(wú)法取代混合奶樣。

表1 早上取樣與混樣之間各指標(biāo)的回歸方程數(shù)據(jù)列表

2.奶樣中各乳成分及體細(xì)胞數(shù)晚上取樣與混樣之間的關(guān)系。由表2可知，經(jīng)過(guò)對(duì)晚上奶樣和混合奶樣在各乳成分及體細(xì)胞數(shù)上的回歸分析得知：混合奶樣對(duì)晚上奶樣在乳脂率、體細(xì)胞數(shù)兩方面上存在極顯著的回歸關(guān)系，回歸方程成立，分別為y＝1.628878+0.53374x，y＝36.0694+0.759109x；在乳蛋白率和非脂固形物方面沒(méi)有顯著的回歸關(guān)系，回歸方程不成立。因此，僅通過(guò)測(cè)定晚上奶樣的各乳成分和體細(xì)胞數(shù)，無(wú)法完全了解混合奶樣的各乳成分和體細(xì)胞數(shù)，可以認(rèn)為晚上奶樣無(wú)法取代混合奶樣。

表2 晚上取樣與混樣之間各指標(biāo)的回歸方程數(shù)據(jù)列表

3.奶樣中各乳成分及體細(xì)胞數(shù)早上和晚上取樣與混樣之間的關(guān)系。由表3可知，經(jīng)過(guò)對(duì)早晨奶樣和晚上奶樣與混合奶樣在各乳成分及體細(xì)胞數(shù)上的二元線性回歸分析得知：混合奶樣對(duì)早晨奶樣和晚上奶樣在乳脂率和體細(xì)胞數(shù)上存在極顯著的回歸關(guān)系，回歸方程成立，分別為：y＝0.055347+0.490294x1+0.480307×2，y＝20.57284+0.542725x1+0.277273x2；在乳蛋白率和非脂固形物方面沒(méi)有顯著的回歸關(guān)系，回歸方程不成立。因此，僅通過(guò)測(cè)定早晨奶樣和晚上奶樣中各乳成分和體細(xì)胞數(shù)，也不能完全得知混合奶樣中各乳成分和體細(xì)胞數(shù)，也就是說(shuō)，早晨奶樣和晚上奶樣也不能取代混合奶樣。

表3 早上取樣和晚上取樣與混樣之間各指標(biāo)的回歸方程數(shù)據(jù)列表

三、討論

由以上數(shù)據(jù)顯示，在早晨奶樣-混合奶樣、晚上奶樣-混合奶樣、早上奶樣晚上奶樣-混合奶樣三組數(shù)據(jù)中，指標(biāo)乳脂率和體細(xì)胞數(shù)在三組回歸分析中都存在線性回歸關(guān)系，而乳蛋白率和非脂固形物在三組回歸分析中部分或者完全沒(méi)有回歸關(guān)系。盡管有部分指標(biāo)是存在線性回歸關(guān)系的，但是在實(shí)際工作當(dāng)中不可能單獨(dú)采一次樣來(lái)測(cè)量乳脂率和體細(xì)胞數(shù)的，把其他指標(biāo)另測(cè)得，還是需要一天采多次樣測(cè)量，這樣才能保證較高的準(zhǔn)確度。

四、結(jié)論

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)早晨奶樣-混合奶樣、晚上奶樣-混合奶樣、早上奶樣晚上奶樣-混合奶樣在乳脂率、乳蛋白率、非脂固形物和體細(xì)胞數(shù)四方面的回歸分析，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是早晨奶樣、晚上奶樣還是早上奶樣和晚上奶樣都無(wú)法取代混合奶樣，也就是說(shuō)一天中DHI測(cè)定一次取樣無(wú)法代替多次取樣。在DHI測(cè)定中，我們還需要進(jìn)行多次取樣，嚴(yán)格按照DHI測(cè)定的規(guī)定進(jìn)行操作，得到有效數(shù)據(jù)，形成正確的DHI報(bào)告，從而正確指導(dǎo)牛場(chǎng)的日常生產(chǎn)。