曹禮靜 ，張立武

（1.重慶市榮昌區(qū)職業(yè)教育中心，重慶 榮昌 402460；2.重慶三杰眾鑫生物工程有限公司，重慶 榮昌 402460）

0 前言

在實(shí)際生產(chǎn)中，腹瀉是引起仔豬死亡的主要原因，飼養(yǎng)管理不善、細(xì)菌、病毒、寄生蟲感染等均能引起仔豬腹瀉。仔豬腹瀉是多因一果，如無實(shí)驗(yàn)室檢測確診病因和采取針對性的治療方案，將造成較高死亡率。2022年6月，四川省南充市某養(yǎng)殖場外購27日齡仔豬1356頭，該批仔豬在進(jìn)場后6 d開始零星發(fā)病，主要臨床癥狀為消瘦、精神沉郁、發(fā)燒、食欲減退、拉稀糊樣至水狀糞便、被毛被糞便污染（圖1），該場用多西環(huán)素、甲硝唑、黃芪多糖中藥提取物等藥物拌料給藥治療5 d無效并迅速波及全群，發(fā)病后4 d開始出現(xiàn)死亡病例，至發(fā)病后9 d，死亡仔豬293頭，死亡仔豬消瘦、剖檢見腸系膜和腹股溝淋巴結(jié)腫大以及間質(zhì)性肺炎。發(fā)病后10 d，該豬場送病料至作者單位，經(jīng)對常見致豬腹瀉病原實(shí)驗(yàn)室檢測，確診致病病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒北美經(jīng)典株。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷期間（發(fā)病后10-11 d），又新增死亡仔豬38頭。于發(fā)病12 d后根據(jù)實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，采取針對性治療，治療后5 d，全群仔豬痊愈，治療期間僅死亡17頭重癥病豬，現(xiàn)報(bào)道如下，供參考。

圖1 發(fā)病仔豬

1 材料與方法

1.1 血清與病料

用一次性無菌注射器經(jīng)前腔靜脈隨機(jī)采病豬血液12份，采血量3-5 mL/頭，轉(zhuǎn)入滅菌離心管中密封，于4℃冷藏2 h后，于4℃條件下3 000 rpm離心25 min，吸取上層血清，用滅菌離心管盛裝、標(biāo)記；采集死亡豬肺臟和腸道內(nèi)容物，各取樣3頭，用采樣袋盛裝、標(biāo)記。上述病料于-20℃冷凍，加冰袋、用泡沫盒密封后送樣檢測。

1.2 致病性大腸桿菌分離鑒定

將腸道內(nèi)容物用滅菌生理鹽水按質(zhì)量體積比1:5稀釋，取適量分別在LB固體培養(yǎng)平皿和麥康凱平皿上劃線，37℃培養(yǎng)24 h，取生長的單菌落分別進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢、生化鑒定和與致病性大腸桿菌O25K19、O78K80、O138因子血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，判斷是否為致病性大腸桿菌。

1.3 血清抗體檢測

病豬血清樣品12份，分別用豬偽狂犬病毒gE抗體ELISA檢測試劑盒、豬偽狂犬病毒gB抗體ELISA檢測試劑盒、豬圓環(huán)病毒抗體ELISA檢測試劑盒、豬繁殖與綜合征病毒抗體ELISA檢測試劑盒，按試劑盒操作說明，檢測相應(yīng)抗體滴度。

1.4 致仔豬腹瀉主要病毒檢測

取死亡豬肺臟3份，按《SN/T 1446-2010豬傳染性胃腸炎檢疫規(guī)范》、《SN/T 1699-2017豬流行性腹瀉檢疫技術(shù)規(guī)范》、《SN/T 5196-2020豬輪狀病毒感染檢疫技術(shù)規(guī)范》、《GB/T 35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法》，對每份病料分別進(jìn)行上述4種病毒的檢測，檢測用儀器為熒光定量PCR儀Archimed-X4，檢測用試劑盒生產(chǎn)廠家/批號為全式金/Q20126。

豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒判定：在陰陽性對照成立條件下，F(xiàn)AM通道CT值≤ 35，且具有典型的S型擴(kuò)增曲線，判為豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒核酸陽性；35＜FAM通道CT值≤40，判為可疑；FAM通道CT值＞40或無CT值，判為陰性。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒判定：在陰陽性對照成立條件下，F(xiàn)AM通道CT值≤35，且具有典型的S型擴(kuò)增曲線，判為豬繁殖與呼吸綜合征病毒北美經(jīng)典株核酸陽性；VIC通道CT值≤ 35，且具有典型的S型擴(kuò)增曲線，判為豬繁殖與呼吸綜合征病毒高致病變異株核酸陽性；35＜FAM/VIC通道CT值≤ 40，判為可疑；FAM/VIC通道無CT值，判為陰性。

1.5 發(fā)病仔豬治療

根據(jù)上述檢測結(jié)果，制定相應(yīng)的治療方案如下：（1）帶豬對圈舍用聚維酮碘溶液消毒2 h后，將全群病豬轉(zhuǎn)移至另外一棟經(jīng)消毒處理的空置保育舍，每個(gè)保育床約20頭，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理（圈舍每日消毒2次、清掃1次，圈舍通道口搭建臨時(shí)紫外線消毒室、設(shè)消毒腳墊）；（2）在飼料中按說明書用量添加泰樂菌素和強(qiáng)力霉素連續(xù)飼喂5 d控制細(xì)菌繼發(fā)感染；（3）全群豬肌注轉(zhuǎn)移因子2 mL+豬干擾素α30萬U/頭，每天1次，連用3 d；（4）對個(gè)別發(fā)燒超過40℃的豬肌注30%安乃近注射液5 mL/頭，僅用1次；（5）用溫的補(bǔ)液鹽水按體積質(zhì)量比3:1稀釋治療仔豬腹瀉中藥散（重慶三杰眾鑫生物工程有限公司研制），以治療仔豬腹瀉中藥散質(zhì)量計(jì)，全群病豬灌服8-10 g/頭，每天1次，連用3 d。

2 結(jié)果

2.1 致病性大腸桿菌分離鑒定

3份死亡豬腸道內(nèi)容物在LB固體培養(yǎng)平皿和麥康凱平皿上培養(yǎng)，生長的單菌落經(jīng)革蘭氏染色鏡檢、生化鑒定和致病性大腸桿菌O25K19、O78K80、O138因子血清凝集試驗(yàn)，排除了致病性大腸桿菌。

2.2 血清抗體檢測

12份病豬血清樣品的豬偽狂犬病毒gE抗體、豬偽狂犬病毒gB抗體、豬圓環(huán)病毒抗體、豬繁殖與綜合征病毒抗體結(jié)果見表1。結(jié)果說明該批仔豬的偽狂犬病毒陰性，但偽狂犬病毒抗體陽性率偏低，存在被感染風(fēng)險(xiǎn)；豬圓環(huán)病毒抗體陽性率較高，可抵御豬圓環(huán)病毒感染；豬繁殖與綜合征病毒抗體陽性率高且離散度大，提示該抗體的產(chǎn)生可能來源于豬繁殖與綜合征病毒野毒感染而非疫苗接種，但有待于豬繁殖與綜合征病毒核酸檢測的進(jìn)一步確認(rèn)。

表1 抗體檢測結(jié)果

2.3 致仔豬腹瀉主要病毒檢測

3份死亡豬肺臟的豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒高致病變異株均為陰性，豬繁殖與呼吸綜合征病毒北美經(jīng)典株均為陽性（表2）。

表2 熒光定量PCR檢測結(jié)果

2.4 發(fā)病仔豬治療

開始治療前，剩余豬的數(shù)量是1 025頭，全群豬精神沉郁、水樣腹瀉、采食量。與治療當(dāng)日比較，治療后1 d開始，全群豬精神狀態(tài)、糞便形態(tài)、采食量逐日好轉(zhuǎn)或提升，死亡率逐步下降，至治療后3-5 d，全群豬各項(xiàng)指標(biāo)基本恢復(fù)正常，無豬死亡（表3）。觀察至60日齡，全群豬均未復(fù)發(fā)腹瀉和未再死亡，豬發(fā)育良好（圖2）。

圖2 觀察至60日齡的豬狀態(tài)

表3 治療結(jié)果

3 討論

豬繁殖與呼吸綜合征病毒有2個(gè)血清型，即美洲型和歐洲型，我國分離到的毒株為豬繁殖與呼吸綜合征病毒美洲型及其變異株，該病毒對酸、堿都較敏感，尤其很不耐堿，一般的消毒劑對其都有作用，斷奶仔豬染病后，主要表現(xiàn)為厭食、嗜睡、咳嗽、呼吸困難，有些豬雙眼腫脹，出現(xiàn)結(jié)膜炎、腹瀉、關(guān)節(jié)炎、耳朵變紅、皮膚有斑點(diǎn)等。豬繁殖與呼吸綜合征的診斷依賴于血清抗體核酸檢測，臨床上沒有特效藥物用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒病治療，只能采取消毒和退燒、抗病毒、止瀉、防細(xì)菌繼發(fā)感染等對癥治療的辦法加以控制。

在本發(fā)病豬場中，通過剖檢病死豬、采集腸道做組織切片觀察，發(fā)現(xiàn)腸道上皮絨毛幾乎完全脫落，腸道已基本失去消化、吸收功能，飼料在腸道內(nèi)不能被消化吸收，進(jìn)一步造成了代謝性腹瀉，從而加重了仔豬脫水，進(jìn)而導(dǎo)致死亡。基于實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果和發(fā)病仔豬的臨床癥狀、病理變化，采取了對圈舍和病豬消毒的方式來減少環(huán)境中的病毒載量，對個(gè)別發(fā)燒嚴(yán)重的豬肌注安乃近注射液退燒，在飼料中添加抗生素控制細(xì)菌繼發(fā)感染，用轉(zhuǎn)移因子、豬干擾素肌注增強(qiáng)機(jī)體抵抗力、非特異性地抑制病毒復(fù)制從而達(dá)到減少機(jī)體的病毒載量，用口服補(bǔ)液鹽水稀釋治療仔豬腹瀉中藥散。上述綜合方案到達(dá)了緩解癥狀、控制繼發(fā)感染、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抑制病原、清熱燥濕、瀉火解毒、利水消腫、生肌收口、收斂止痢、修復(fù)受損傷的腸道上皮細(xì)胞，達(dá)到快速止瀉的目的，產(chǎn)生了較好的治療效果，全群豬采食量逐步上升至正常水平，停止腹瀉和死亡。