黃媛媛,王秀橋,高平,黃愛蓮

(湛江市食品藥品檢驗所,廣東 湛江 524022)

糖皮質(zhì)激素類藥物屬甾體類化合物[1],不僅可以調(diào)節(jié)糖,還可以調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)及脂肪的代謝和生物合成。在醫(yī)學(xué)治療手段中,糖皮質(zhì)激素是抗感染的藥物之一,使用含有該激素的藥物可以抑制纖維細(xì)胞的增殖生長,從而控制氧化曲普坦的形成量,可以讓皮膚變得光滑、白皙[2]。

由于其能夠抑制纖維細(xì)胞的增生,使用添加糖皮質(zhì)激素的化妝品,不僅能夠改善皮膚狀況,還能夠祛痘淡斑、美白養(yǎng)顏、去除臉部血絲等[3]。但長期使用含糖皮質(zhì)激素的化妝品會產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用甚至危害人體的身心健康。正是由于糖皮質(zhì)激素的美容美白功效,一些不法商家常常將其添加到各類化妝品中以獲取不正當(dāng)?shù)睦?。且在一些功能性化妝品中,可能有非法添加的糖皮質(zhì)激素,若不知情消費(fèi)者長期使用,后果不堪設(shè)想。糖皮質(zhì)激素是化妝品中的違禁物質(zhì)[4],但該物質(zhì)的非法添加時有發(fā)生,目前主要有GB/T 24800.2—2009以及《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中所涉及的激素種類的檢測方法[4-5]。市場上糖皮質(zhì)激素的類型較多,非法添加的情況也較為嚴(yán)重。因此,研究化妝品中糖皮質(zhì)激素的檢測方法,為政府實施衛(wèi)生監(jiān)督提供技術(shù)參考,以保障消費(fèi)者的身體健康。

1 化妝品中非法添加糖皮質(zhì)激素的危害

含激素類的化妝品對人體皮膚沒有任何好處可言,若是長期使用后果更為嚴(yán)重,不僅損害使用者的皮膚,更會損害人體的身心健康。因此,激素類化妝品應(yīng)該要杜絕使用或生產(chǎn),同時要注意避免長期使用含激素類的化妝品,保證消費(fèi)者的皮膚和身心健康安全。

從使用的短期效果來看,添加了糖皮質(zhì)激素的化妝品可以使皮膚變得光滑,白皙細(xì)膩。但是一旦長期使用上述所說“效果驚人”的化妝品,會對消費(fèi)者的皮膚、身心健康等造成破壞性的影響,如內(nèi)分泌失調(diào),導(dǎo)致紊亂,影響發(fā)育健康,使皮膚的毛囊萎縮、有色斑形成或者毛細(xì)血管擴(kuò)張,皮膚泛紅、有紅血絲等,依賴性皮炎也可能會形成。有些化妝品需要持續(xù)使用才能保持效果,當(dāng)停下后,副作用就會隨之而來,如出現(xiàn)瘙癢、皮膚紅腫、長丘疹,難以治愈。輕者只是肌膚問題沒有任何改變,激素依賴性皮炎形成就是中度損害,更甚則傷及身體健康,后果嚴(yán)重,如高血壓、精神失常、類固醇性糖尿病、消化性潰瘍、眼部并發(fā)癥等等[6-7]。

2 化妝品中糖皮質(zhì)激素的檢測方法

化妝品中糖皮質(zhì)激素的檢測方法包括分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜法、超高液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜-高分辨質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳法和免疫分析法等。

2.1 分光光度法

目前,分光光度法應(yīng)用在化妝品中甾體激素檢測較為少見而較多應(yīng)用于藥物類檢驗。分光光度法是利用甾體激素化學(xué)顯色反應(yīng)原理,但定量分析方法均存在局限性,容易被化妝品中某些成分干擾,因此在進(jìn)行激素成分的檢驗測定時,應(yīng)做好一定的前處理工作即提取待測物質(zhì),并進(jìn)行分離和純化[8]。劉軍[9]采用Liebermann-Burchard法進(jìn)行顯色反應(yīng)測定醋酸氫化可的松、醋酸可的松兩種糖皮質(zhì)激素的分光光度法,檢出限分別為0.02,0.36 mg,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.23%,回收率分別為98.17%,101.80%。

2.2 薄層色譜法

操作簡單便捷、省錢經(jīng)濟(jì)、選擇性能突出、受其他物質(zhì)干擾少是薄層色譜法的特點(diǎn),推廣較容易。其分離性能較強(qiáng),可以一一分離樣品中各種激素物質(zhì)和干擾物質(zhì),通過做出標(biāo)準(zhǔn)Rf值,再與樣品溶液跑出的斑點(diǎn)進(jìn)行比較,來確認(rèn)樣品的種類和性質(zhì),繼而判斷出樣品中該激素是否存在,限制就是定量困難[10]。但在實際日常檢驗中,使用該檢測方法測定很少,還是現(xiàn)行國標(biāo)法為主。

2.3 高效液相色譜法

高效液相色譜法是現(xiàn)在分離檢測分析中常用的技術(shù)方法,因其工作效率較高、分離效果好以及較為簡單快速而被關(guān)注和使用。該法的優(yōu)點(diǎn)是操作便捷簡單、測試分析時間較短,采用該方法對于檢測潑尼松龍等九種糖皮質(zhì)激素在化妝品當(dāng)中的含量十分有效。高衛(wèi)東等[11]建立了高效液相色譜法測定化妝品中地塞米松、醋酸地塞米松、醋酸潑尼松和氫化可的松等糖皮質(zhì)激素及雌激素、雄性激素和孕激素等共11種激素的分析方法。其以甲醇為提取溶劑,采用超聲提取方法來處理不同形態(tài)的化妝品樣品,以LUBEX Kromasil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分離,乙腈和水為流動相。該法的平均回收率為97.68%～108.95%,RSD為0.27%～3.2%,該法簡便準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可很好地應(yīng)用于上述化妝品中11種激素的檢測。

潑尼松、氫化可的松、地塞米松、醋酸可的松、曲安奈德和丙酸氟替卡松等是糖皮質(zhì)激素的常見種類,李娟等[12]建立了固相萃取-高效液相色譜法測定化妝品中上述6種糖皮質(zhì)激素的方法,樣品提取后,經(jīng)Oasis HLB固相萃取柱凈化,甲醇-乙腈和水作為流動相,采用Nucleodur C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),使6種糖皮質(zhì)激素得到有效分離。平均加標(biāo)回收率為81.8%～96.1%,RSD為3.3%～6.4%,檢出限為0.78～1.12 μg/L。

2.4 超高液相色譜法

周江等[13]建立了超高效液相色譜法同時測定祛痘、美白化妝品中4種糖皮質(zhì)激素倍他米松雙丙酸酯、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、氫化可的松含量的方法。提取被測物質(zhì)后,Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)分離。采用該方法測定的回收率為85.3%～102.8%,RSD為2.1%～5.0%(n=6)。該方法采用的前處理較為簡單便捷,檢測速度快,分離效果好,且靈敏度高。

2.5 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)

溫家欣等[14]提出了Captiva EMR固相萃取結(jié)合LC-MS/MS同時測定41種糖皮質(zhì)激素含量的方法。采用含1%甲酸的乙腈溶液提取目標(biāo)化合物,再將提取成分過Captiva EMR固相萃取柱凈化。分離采用Thermo Accoure PFP色譜柱(100 mm×2.1 mm,2.6 μm),乙腈溶液(含0.1%乙酸)-0.1%乙酸溶液為流動相;正離子(ESI+)掃描,選擇多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式檢測,外標(biāo)法定量。該法的樣品提取處理比較簡潔、方便、快速,萃取柱凈化效果明顯,靈敏度高,能更好地為化妝品高通量檢測提供技術(shù)支持。

楊光勇等[15]為測定化妝品中45種糖皮質(zhì)激素(GCs)含量,建立采用QuEChERS進(jìn)行前處理,再通過超高效合相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)測定的方法。分離柱為Torus 2-PIC色譜柱(100 mm×3.0 mm,1.7 μm);后經(jīng)正離子掃描、多反應(yīng)監(jiān)測模式下進(jìn)行測定,外標(biāo)法定量。該方法下測定的45種GCs的檢出限為0.05～0.10 μg/kg,定量限為0.15～0.30 μg/kg;回收率為74.4%～110.7%,RSD為2.9%～11%。該法的操作方便簡單、專屬性好、靈敏度高、綠色環(huán)保,比傳統(tǒng)方法極具優(yōu)勢,可以測定化妝品中的多種糖皮質(zhì)激素。

楊飄飄等[16]建立了采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測化妝品中氯倍他索乙酸酯的方法,五種常見的化妝品基質(zhì)適用于這種新方法:面霜、凝膠、黏土、面膜和乳液。樣品經(jīng)乙腈渦旋分散、超聲提取,然后用UPLC-MS/MS檢測,Waters CORTECS C18色譜柱(150 mm×2.1 mm,2.7 μm)分離被測物質(zhì),選擇正離子掃描(ESI)方式,模式使用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)。定量則用矩陣匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行。檢出限為0.03 μg/g,定量限為0.09 μg/g,回收率范圍為83.2%～103.2%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)范圍為1.4%～5.6%,該方法簡單、靈敏、可靠,適用于高通量定性和定量篩選以及不同基質(zhì)類型的化妝品分析。

2.6 液相色譜-高分辨質(zhì)譜法

徐振東等[17]建立了化妝品中41種糖皮質(zhì)激素的分析方法,采用了基于在線凈化液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜技術(shù)。提取被測樣品中的物質(zhì),通過Cyclone P在線凈化柱凈化,C18柱分離,以Full Scan/dd MS2模式進(jìn)行檢測。該法的加標(biāo)回收率為71.3%～108.5%,RSD為2.7%～7.9%。該法樣品的前處理過程簡潔快捷,上手快速,實驗結(jié)果檢測效率高,檢測速度快,對測定和快速篩查化妝品中的糖皮質(zhì)激素適用。

楊飄飄等[18]依據(jù)GB/T 24800.2—2009,在化妝品糖皮質(zhì)激素的測定過程中,發(fā)現(xiàn)了一種與標(biāo)準(zhǔn)中倍他米松醋酸酯具有相同子離子的疑似糖皮質(zhì)激素。在沒有標(biāo)準(zhǔn)品的情況下,使用高分辨質(zhì)譜(UHPLC-LTQ/Orbitrap MS)確定了該物質(zhì)的精確相對分子質(zhì)量及分子式,并結(jié)合該物質(zhì)與類似化合物進(jìn)行的一系列解析驗證,結(jié)果證實了待驗證物質(zhì)確實是預(yù)先猜測的結(jié)果。提取物質(zhì)后,HLB固相萃取柱凈化,色譜柱為Waters Acquity UPLC BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm),經(jīng)正離子掃描后;采用多反應(yīng)監(jiān)測模式分離可疑物,再通過(UHPLC-LTQ/Orbitrap MS)確證可疑物質(zhì)。該法發(fā)現(xiàn)了新型的糖皮質(zhì)激素——氯倍他索乙酸酯,該物質(zhì)是標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中并未提及檢測的激素物質(zhì)。因此,現(xiàn)有的檢驗方法未能全面覆蓋檢測組分,導(dǎo)致檢測組分不全,促使檢測機(jī)構(gòu)和單位快速建立篩查方法,該法可實現(xiàn)對未知化合物的快速篩查定性。

2.7 毛細(xì)管電泳法

孫雪婷等[19]建立了在線富集檢測化妝品中6種糖皮質(zhì)激素的分析方法,主要采用反向微乳毛細(xì)管電色譜電動進(jìn)樣聯(lián)用場放大堆積。這6 種激素的富集倍數(shù)為100～186倍。使用該方法的檢出限為20～60 μg/L,添加50 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)加入量時,回收率85.9%～103.8%,RSD均小于5.8%。該法樣品用量少、操作過程簡單、經(jīng)濟(jì)快速,具有良好的靈敏度和分離度。

為測定化妝品中倍他米松、潑尼松龍、氫化可的松和潑尼松這4種糖皮質(zhì)激素,郭成方等[20]建立了微乳毛細(xì)管電動色譜(MEEKC)在線富集-大體積進(jìn)樣(LVSI)與非勻強(qiáng)電場掃集(REFS)聯(lián)用的方法。富集倍數(shù)在最優(yōu)條件下為853～933倍,檢出限為4～8 μg/L。回收率為93.7%～103.8%,RSD≤4.4%。該方法重現(xiàn)性好,前處理簡單方便,靈敏度在一定程度上有所提高,可用于化妝品中糖皮質(zhì)激素的痕量分離測定。

2.8 免疫分析法

ELISA的反應(yīng)機(jī)理,即抗體抗原的特異性免疫反應(yīng)。該法的優(yōu)點(diǎn)是與之前的單個免疫分析相比,檢測通量得到極大的提高,同時樣本量的需求有所減低,一定程度上節(jié)約了時間和操作成本,這可作為一種快速檢測技術(shù)在實驗室當(dāng)中進(jìn)行廣泛應(yīng)用。目前應(yīng)用在化妝品中糖皮質(zhì)激素的研究較少。譚攀等[21]研究建立了應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析法測定地索奈德的方法。通過該法原理,檢測的靈敏度有所提高。對化妝品、保健食品的回收率為82%～105%。同樣其他糖皮質(zhì)激素藥物免疫檢測靈敏度可用該法提升,能有效快速篩查食品和化妝品中的地索奈德。

3 總結(jié)與展望

化妝品作為人民生活中不可缺失的一部分,其安全問題也極度受到關(guān)注,為確保消費(fèi)者的使用安全,消除安全隱患,檢測其違禁添加的物質(zhì)極為重要,也是市場監(jiān)督中最重要的一環(huán)。目前,化妝品中糖皮質(zhì)激素含量的檢測方法有很多,但各方法都有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),選擇檢測方法時應(yīng)關(guān)注樣品類型、檢測需求及其效益性。因此,對于化妝品中可能存在的非法添加物糖皮質(zhì)激素的含量及其種類,檢測方法和手段應(yīng)當(dāng)結(jié)合樣品的相關(guān)性質(zhì)、實驗室條件、儀器、成本及工作需求來挑選,做到更好地監(jiān)督、監(jiān)管化妝品的使用安全、維護(hù)消費(fèi)者身心利益。