馬偉鳳，王亮，馬彥巧，謝媛媛，王天天，湯玉萌，陳文文，王云

（1.中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心老年醫(yī)學(xué)科，北京100091；2.北京朝陽醫(yī)院疼痛科，北京 100020）

骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis，OP）是一類以骨微結(jié)構(gòu)退化、骨量減少和骨密度下降為特征的代謝性疾病，是老年人的常見病[1]。據(jù)報(bào)道，在我國(guó)50歲以上的中老年人OP的發(fā)病率約為30%[2]。由于OP發(fā)生的骨折病例不斷增加，其高致殘率和致死率嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。目前，臨床常用的OP治療藥物為雙磷酸鹽、甲狀旁腺激素片和鈣劑等，但因其不同程度的耐藥性與不良反應(yīng)，亟需尋找新的藥物改善現(xiàn)狀[3]。骨質(zhì)疏松癥歸屬于中醫(yī)學(xué)“骨痿”“骨枯”“虛勞”范疇。人參為五加科植物人參Panax ginsengC.A.Mey.的干燥根和根莖，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“人參，味甘，微寒。主補(bǔ)五臟，安精神，定魂魄，止驚悸，除邪氣，明目，開心益智。久服，輕身延年?！贝蘖堑萚4]通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，人參具有顯著地防治骨質(zhì)疏松的藥理作用，提出人參可作為雌激素的代用品用于臨床各種骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防和治療，申請(qǐng)了國(guó)家發(fā)明專利并獲得授權(quán)。人參皂苷Rg3是提取自人參的有效活性成分，具有抗腫瘤、抗氧化活性和抗衰老等多種藥理作用[5-10]。既往有研究顯示，人參皂苷Rg3具有調(diào)控骨代謝，促進(jìn)骨重塑的作用[11]。本研究擬通過對(duì)比OP老年大鼠與青年大鼠模型，探討人參皂苷Rg3對(duì)OP老年大鼠骨代謝的影響及其可能的作用機(jī)制，旨在為人參臨床防治OP及相關(guān)藥物開發(fā)提供參考依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物10只SPF級(jí)3月齡雌性SD大鼠，體質(zhì)量220～250 g，30只23月齡SPF級(jí)雌性SD大鼠，體質(zhì)量550～600 g，購自浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（浙）2019-0001。所有大鼠飼養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境7 d，環(huán)境條件設(shè)置為溫度20～24℃，濕度（50±10）%，光暗周期為12 h/12 h。普通飼料與清潔水源充足供應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)方案已經(jīng)中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理號(hào)：No20211028KY。

1.2 藥物、試劑與儀器人參皂苷Rg3（分子式：C42H72O13，分子量：785.01328），分子結(jié)構(gòu)如圖1所示，由上海西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：SML0184。Ⅰ型前膠原羧基端前肽（PICP）和骨鈣素（BGP）酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）試劑盒（上海博湖生物科技有限公司）；兔抗βactin多克隆抗體、兔抗大鼠腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）多克隆抗體、兔抗大鼠哺乳動(dòng)物雷帕霉菌靶蛋白（mTOR）多克隆抗體、兔抗大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）多克隆抗體、兔抗大鼠磷酸化哺乳動(dòng)物雷帕霉菌靶蛋白（p-mTOR）多克隆抗體、兔抗大鼠哺乳動(dòng)物ATG6同源蛋白（Beclin-1）多克隆抗體和兔抗大鼠微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3-Ⅱ）多克隆抗體、山羊抗兔IgG（北京索萊寶科技有限公司）。viva CT40型micro-CT儀器（瑞士SCANCO Medical AG公司）；DYY-7C型電泳儀（北京六一儀器廠）；ELX-800型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek公司）。

圖1 人參皂苷Rg3分子結(jié)構(gòu)Figure 1 Molecular structure of Ginsenoside Rg3

1.3 分組與給藥將30只23月齡大鼠隨機(jī)分為模型組及人參皂苷Rg3低、高劑量組，每組10只，另將10只3月齡大鼠設(shè)為對(duì)照組。參照文獻(xiàn)研究[12-13]，人參皂苷Rg3低、高劑量組大鼠給予灌胃10、20 mg/kg人參皂苷Rg3混懸液，對(duì)照組及模型組給予灌胃等體積生理鹽水，每日1次，連續(xù)12周。

1.4 樣本采集末次給藥后大鼠禁食12 h，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，腹主動(dòng)脈采集血液，分離血清，-20℃保存。采血結(jié)束后處死大鼠，剝離大鼠股骨，去除周圍肌肉等軟組織，剪去骨干兩端，露出骨髓腔，使用預(yù)冷的PBS溶液反復(fù)沖洗骨髓腔，并收集沖出的骨髓組織裝入無菌凍存管內(nèi)，-80℃保存?zhèn)溆?。取部分股骨沖洗后放入多聚甲醛溶液中進(jìn)行脫鈣、固定。

1.5 觀察指標(biāo)與方法

1.5.1 骨顯微參數(shù)檢測(cè)取大鼠股骨樣本，使用micro-CT掃描儀檢測(cè)各組大鼠股骨骨密度（bone mineral density，BMD）和骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）。儀器調(diào)試為分辨率：18 mm；源電流：385 μA；旋轉(zhuǎn)步驟：0.7。再選取股骨遠(yuǎn)端干骺區(qū)域，檢測(cè)大鼠骨小梁數(shù)量（number of trabeculae bone，TB.N）、骨小梁厚度（trabecular bone thickness，TB.Th）和骨小梁分離度（bone trabecular separation，TB.Sp）。

1.5.2 ELISA法檢測(cè)骨代謝指標(biāo)PICP、BGP水平取出血清與PICP和BGP ELISA試劑盒，平衡至室溫后嚴(yán)格按照試劑盒說明書檢測(cè)各組大鼠血清中骨代謝指標(biāo)PICP和BGP水平。應(yīng)用酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各組樣品吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。

1.5.3 HE染色法觀察股骨組織病理變化將已完成脫鈣的股骨組織取出，梯度酒精溶液、二甲苯溶液脫水透明，使用石蠟進(jìn)行包埋，待蠟液完全凝固時(shí)修整蠟塊，應(yīng)用組織切片機(jī)制成5 μm薄片。將組織切片再次浸入二甲苯、梯度濃度酒精溶液脫蠟復(fù)水。浸入蘇木素染液5 min，流水沖洗，鹽酸酒精溶液分化5 s，氨水返藍(lán)，伊紅染液染色1 min，清水沖洗，常規(guī)脫水透明，滴加中性樹膠封存固片。于光學(xué)顯微鏡下觀察股骨組織病理變化并進(jìn)行分析。

1.5.4 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）法檢測(cè)股骨骨髓組織AMPK、mTOR mRNA表達(dá)TRIzol法提取股骨骨髓組織總RNA，檢測(cè)其濃度與純度后使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。按照試劑盒說明書配制反應(yīng)體系（20 μL）：上、下游引物各0.4 μL，SYBR Premix Ex Tap 10 μL，cDNA 1 μL，RNase free ddH2O 8.2 μL。置于PCR儀器設(shè)置參數(shù)：95℃30 s，95℃5 s，60℃30 s，收集熒光信號(hào)，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△CT法計(jì)算各樣本基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平。引物序列見表1。

表1 PCR引物序列Table 1 PCR primer sequences

1.5.5 Western Blot法檢測(cè)股骨骨髓組織中p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)提前取出裂解液室溫下融化，取適量股骨骨髓組織置于研缽內(nèi)，加入裂解液冰上靜置，取上清液后用BCA蛋白試劑盒測(cè)定蛋白含量。組裝電泳裝置，配制聚丙烯酰胺凝膠，進(jìn)行電泳，恒壓80 V電泳2.5 h。300 mA將蛋白轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。TBST緩沖液加入脫脂牛奶制備封閉液，將膜加入封閉液室溫封閉2 h，再分別加入p-AMPK、p-mTOR、Beclin-1和LC3-Ⅱ等一抗（均體積比1∶1 000稀釋），4℃孵育過夜。浸入TBST緩沖液中洗膜5 min，反復(fù)4次，加入二抗（體積比1∶5 000稀釋），室溫孵育60 min。洗膜后，加入增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑顯色后，置于凝膠成像系統(tǒng)上進(jìn)行成像。以β-actin為內(nèi)參，采用ImageJ軟件分析條帶灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參灰度值比值作為目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠骨密度比較表2結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠股骨BMD和BV/TV水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，人參皂苷Rg3低、高劑量組大鼠股骨BMD和BV/TV水平升高（P＜0.05）；與人參皂苷Rg3低劑量組比較，人參皂苷Rg3高劑量組大鼠股骨BMD和BV/TV水平升高（P＜0.05）。

表2 各組大鼠骨密度比較Table 2 Comparison of bone mineral density among various groups of rats （±s）

表2 各組大鼠骨密度比較Table 2 Comparison of bone mineral density among various groups of rats （±s）

注：①P＜0.05，與對(duì)照組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與人參皂苷Rg3低劑量組比較

組別對(duì)照組模型組人參皂苷Rg3低劑量組人參皂苷Rg3高劑量組鼠數(shù)/只10 10 10 10 BMD/（g·cm-2）0.39±0.05 0.22±0.02①0.29±0.03②0.37±0.03②③（BV/TV）值/%72.45±4.04 46.71±3.24①54.19±3.68②68.23±3.90②③

2.2 各組大鼠骨形態(tài)學(xué)指標(biāo)比較表3結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠TB.N和TB.Th水平降低，TB.Sp水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，人參皂苷Rg3低、高劑量組大鼠TB.N和TB.Th水平升高，TB.Sp水平降低（P＜0.05）；與人參皂苷Rg3低劑量組比較，人參皂苷Rg3高劑量組大鼠TB.N和TB.Th水平升高，TB.Sp水平降低（P＜0.05）。

表3 各組大鼠骨形態(tài)學(xué)指標(biāo)比較Table 3 Comparison of bone morphological indexes among various groups of rats （±s）

表3 各組大鼠骨形態(tài)學(xué)指標(biāo)比較Table 3 Comparison of bone morphological indexes among various groups of rats （±s）

注：①P＜0.05，與對(duì)照組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與人參皂苷Rg3低劑量組比較

組別對(duì)照組模型組人參皂苷Rg3低劑量組人參皂苷Rg3高劑量組鼠數(shù)/只10 10 10 10 TB.N/（個(gè)·mm-2）5.40±0.37 3.07±0.26①3.82±0.21②4.69±0.28②③TB.Th/μm 78.44±4.28 46.84±2.62①59.55±2.91②72.53±3.52②③TB.Sp/mm 0.24±0.03 0.38±0.04①0.31±0.03②0.25±0.02②③

2.3 各組大鼠骨代謝指標(biāo)水平比較表4結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清PICP水平升高，BGP水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，人參皂苷Rg3低、高劑量組大鼠血清PICP水平降低，BGP水平升高（P＜0.05）；與人參皂苷Rg3低劑量組比較，人參皂苷Rg3高劑量組大鼠血清PICP水平降低，BGP水平升高（P＜0.05）。

表4 各組大鼠骨代謝指標(biāo)水平比較Table 4 Comparison of levels of bone metabolic markers among various groups of rats（±s，ng·mL-1）

表4 各組大鼠骨代謝指標(biāo)水平比較Table 4 Comparison of levels of bone metabolic markers among various groups of rats（±s，ng·mL-1）

注：①P＜0.05，與對(duì)照組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與人參皂苷Rg3低劑量組比較

組別對(duì)照組模型組人參皂苷Rg3低劑量組人參皂苷Rg3高劑量組鼠數(shù)/只10 10 10 10 PICP 41.82±3.56 68.36±5.19①52.09±4.17②44.29±3.12②③BGP 13.93±1.35 6.79±0.58①9.80±0.90②12.85±1.31②③

2.4 各組大鼠股骨組織病理學(xué)表現(xiàn)比較圖2結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠股骨組織干骺端骨小梁數(shù)量明顯減少，結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，骨小梁稀疏、排列紊亂，骨小梁變薄，間隙變寬，骨髓腔內(nèi)空洞較多；人參皂苷Rg3低、高劑量組大鼠股骨組織可見骨小梁數(shù)量明顯增多，結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常，骨小梁排列緊密，骨小梁變厚，間隙恢復(fù)正常，且骨小梁之間的連接在一定程度上得到改善。

圖2 各組大鼠股骨組織病理學(xué)表現(xiàn)比較（HE染色，×10）Figure 2 HE staining results of femoral tissue in each group of rats（HE staining，×10）

2.5 各組大鼠股骨骨髓組織AMPK和mTOR mRNA表達(dá)比較表5結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠股骨骨髓組織中AMPK mRNA表達(dá)水平降低，mTOR mRNA表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，人參皂苷Rg3低、高劑量組大鼠AMPK mRNA表達(dá)水平升高，mTOR mRNA表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與人參皂苷Rg3低劑量組比較，人參皂苷Rg3高劑量組大鼠AMPK mRNA表達(dá)水平升高，mTOR mRNA表達(dá)水平降低（P＜0.05）。

表5 各組大鼠股骨骨髓組織AMPK和mTOR mRNA表達(dá)水平比較Table 5 Comparison of mRNA expression levels of AMPK and mTOR in femoral bone marrow tissue among various groups of rats （±s）

表5 各組大鼠股骨骨髓組織AMPK和mTOR mRNA表達(dá)水平比較Table 5 Comparison of mRNA expression levels of AMPK and mTOR in femoral bone marrow tissue among various groups of rats （±s）

注：①P＜0.05，與對(duì)照組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與人參皂苷Rg3低劑量組比較

組別對(duì)照組模型組人參皂苷Rg3低劑量組人參皂苷Rg3高劑量組鼠數(shù)/只10 10 10 10 AMPK mRNA相對(duì)表達(dá)量1.14±0.12 0.37±0.04①0.63±0.06②0.85±0.09②③mTOR mRNA相對(duì)表達(dá)量0.28±0.02 0.95±0.10①0.59±0.05②0.33±0.02②③

2.6 各組大鼠股骨骨髓組織AMPK和mTOR活化水平比較表6、圖3結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠股骨骨髓組織中p-AMPK/AMPK比值降低，p-mTOR/mTOR比值升高（P＜0.05）；與模型組比較，人參皂苷Rg3低、高劑量組大鼠p-AMPK/AMPK比值升高，p-mTOR/mTOR比值降低（P＜0.05）；與人參皂苷Rg3低劑量組比較，人參皂苷Rg3高劑量組大鼠p-AMPK/AMPK比值升高，p-mTOR/mTOR比值降低（P＜0.05）。

表6 各組大鼠股骨骨髓組織p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR比值比較Table 6 Comparison of ratios of p-AMPK/AMPK and p-mTOR/mTOR in femoral bone marrow tissue among various groups of rats （±s）

表6 各組大鼠股骨骨髓組織p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR比值比較Table 6 Comparison of ratios of p-AMPK/AMPK and p-mTOR/mTOR in femoral bone marrow tissue among various groups of rats （±s）

注：①P＜0.05，與對(duì)照組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與人參皂苷Rg3低劑量組比較

組別對(duì)照組模型組人參皂苷Rg3低劑量組人參皂苷Rg3高劑量組鼠數(shù)/只10 10 10 10 p-AMPK/AMPK比值0.87±0.07 0.31±0.04①0.61±0.07②0.85±0.09②③p-mTOR/mTOR比值0.26±0.02 0.89±0.09①0.56±0.06②0.31±0.03②③

圖3 股骨骨髓組織AMPK和mTOR及其磷酸化蛋白Western Blot電泳圖Figure 3 Western Blot electrophoretogram of AMPK and mTOR as well as their phosphorylated proteins in femoral bone marrow tissue

2.7 各組大鼠股骨骨髓組織自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ水平比較表7、圖4結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，模型組大鼠股骨骨髓組織中Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與模型組比較，人參皂苷Rg3低、高劑量組大鼠Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與人參皂苷Rg3低劑量組比較，人參皂苷Rg3高劑量組大鼠Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。

圖4 股骨骨髓組織Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白Western Blot電泳圖Figure 4 Western Blot electrophoretogram of Beclin-1 and LC3-Ⅱproteins in femoral bone marrow

表7 各組大鼠股骨骨髓組織自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平比較Table 7 Comparison of the protein expression levels of the autophagy proteins Beclin-1 and LC3-II in femoral bone marrow tissue among various groups of rats（±s）

表7 各組大鼠股骨骨髓組織自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平比較Table 7 Comparison of the protein expression levels of the autophagy proteins Beclin-1 and LC3-II in femoral bone marrow tissue among various groups of rats（±s）

注：①P＜0.05，與對(duì)照組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與人參皂苷Rg3低劑量組比較

組別對(duì)照組模型組人參皂苷Rg3低劑量組人參皂苷Rg3高劑量組鼠數(shù)/只10 10 10 10 Beclin-1蛋白相對(duì)表達(dá)量0.78±0.08 0.24±0.03①0.49±0.04②0.83±0.07②③LC3-Ⅱ蛋白相對(duì)表達(dá)量0.73±0.07 0.33±0.03①0.54±0.05②0.87±0.09②③

3 討論

隨著年齡的增長(zhǎng)，受多種因素干擾，骨形成與骨吸收之間平衡失調(diào)，導(dǎo)致過多的骨質(zhì)流失[14]。本研究選用23月齡的雌性大鼠作為研究模型，模擬老年人骨質(zhì)流失狀態(tài)，觀察人參皂苷Rg3對(duì)骨質(zhì)疏松癥（OP）老年大鼠骨密度與骨代謝過程的影響。HE染色結(jié)果顯示，與對(duì)照組青年大鼠比較，模型組老年大鼠結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，骨小梁稀疏、排列紊亂，骨小梁變薄，間隙變寬，分離度較高，骨髓腔內(nèi)空洞較多。micro-CT掃描儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，模型組老年大鼠股骨組織BMD與BV/TV水平降低，且TB.N和TB.Th水平降低，TB.Sp水平升高，與模型組老年大鼠病理結(jié)果相符。表明老年大鼠出現(xiàn)骨質(zhì)流失情況，骨微結(jié)構(gòu)受到嚴(yán)重破壞，提示OP模型建立成功。給予不同劑量的人參皂苷Rg3治療后老年大鼠股骨組織BMD和BV/TV水平均呈上升趨勢(shì)，呈現(xiàn)劑量依賴式，表明人參皂苷Rg3可提升OP老年大鼠骨密度，顯著促進(jìn)OP老年大鼠骨形成。檢測(cè)大鼠血清中骨代謝指標(biāo)PICP、BGP水平發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rg3低、高劑量組血清PICP水平降低，BGP水平升高。PICP是反映骨轉(zhuǎn)換率的主要標(biāo)志物，也是公認(rèn)的骨吸收重要指標(biāo)；BGP是骨形成指標(biāo)[15]。表明人參皂苷Rg3可以顯著降低老年大鼠的骨膠原代謝水平，使其高轉(zhuǎn)換的狀態(tài)逐漸降低，并促進(jìn)骨形成，以保持骨代謝的動(dòng)態(tài)平衡。

自噬是細(xì)胞維持穩(wěn)態(tài)的重要機(jī)制，細(xì)胞通過自噬降解殘余蛋白和老化細(xì)胞器為其他生理活動(dòng)提供能量，自噬常被認(rèn)為是不良刺激和微環(huán)境失衡狀態(tài)下細(xì)胞的自我保護(hù)過程[16-18]。mTOR蛋白是一種非典型的絲/蘇氨酸蛋白激酶，是調(diào)控細(xì)胞自噬水平的重要通路之一[19]。研究表明，AMPK/mTOR信號(hào)通路在骨代謝過程中發(fā)揮著重要作用。在參與骨代謝中，mTOR作為AMPK的下游信號(hào)因子，受到AMPK水平的調(diào)控。在營(yíng)養(yǎng)不足等應(yīng)激條件下，AMPK感應(yīng)到能量狀態(tài)的改變，進(jìn)而以磷酸化的形式被激活，負(fù)反饋調(diào)節(jié)下游因子mTOR的活性。p-mTOR作為關(guān)鍵靶蛋白，對(duì)自噬水平進(jìn)行調(diào)控[20]。本研究結(jié)果顯示，模型組老年大鼠股骨骨髓組織AMPK基因與蛋白表達(dá)水平均降低，且mTOR基因與蛋白表達(dá)水平升高，結(jié)合大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ水平也呈降低趨勢(shì)，表明OP老年大鼠體內(nèi)AMPK/mTOR信號(hào)通路活性受到影響，自噬水平降低。當(dāng)給予人參皂苷Rg3治療后，OP老年大鼠股骨骨髓組織AMPK基因與蛋白表達(dá)水平均升高，且mTOR基因與蛋白表達(dá)水平降低，自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ水平也逐漸升高，表明人參皂苷Rg3能夠調(diào)節(jié)骨髓組織AMPK/mTOR信號(hào)通路，促進(jìn)骨細(xì)胞自噬，發(fā)揮積極的OP治療作用。

綜上所述，人參皂苷Rg3能夠提高OP老年大鼠骨密度，改善骨微結(jié)構(gòu)，促進(jìn)骨形成，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)AMPK/mTOR信號(hào)通路，提高骨細(xì)胞自噬發(fā)揮骨保護(hù)作用有關(guān)。