李 惠

(大連市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧大連 116000)

大菱鲆(Scophthalmusmaximus)是中國北方主要的海水養(yǎng)殖魚類之一，屬于鰈型目，鲆科、菱鲆屬。它天然分布于大西洋東側(cè)歐洲沿岸，自北歐南部直至北非北部均有分布，黑海和地中海也有分布，主要分布還是北海和黑海西部沿岸。全部歐洲和西亞沿岸年總捕撈量不超過1萬噸。同時，大菱鲆身體扁平近似圓形，雙眼位于身體左側(cè)，有眼側(cè)呈褐色，有點狀黑色素和少量皮刺，無眼側(cè)光滑呈白色，背鰭與臀無硬棘，頭部及尾鰭均較小，身體中部肉厚，內(nèi)臟團小，全部身體的可食用部分比牙鲆多。當(dāng)前隨著養(yǎng)殖的規(guī)?；?、集約化，養(yǎng)殖密度逐漸增大，致使大菱鲆機體的免疫力下降，頻發(fā)疾病[1]。過去養(yǎng)殖生產(chǎn)中，經(jīng)常使用抗生素類藥物預(yù)防治療養(yǎng)殖疾病，但飼料端抗生素的禁用，尋找安全、高效、綠色、低殘留、無耐藥性的飼料添加劑迫在眉睫。其中，中草藥具有來源廣泛、天然、安全、綠色的特點被研究者廣泛研究與關(guān)注[2]。中草藥具有藥理與營養(yǎng)的雙重作用，作為飼料添加劑不僅可以為動物機體提供營養(yǎng)，還能預(yù)防治療一些疾病[3]。研究表明，復(fù)方中草藥制劑可以有效抑制大菱鲆養(yǎng)殖中的源哈維氏弧菌[3]。郭萍萍等[4]研究表明，在大菱鲆養(yǎng)殖中使用0.05%的中草藥制劑可以有效提高大菱鲆機體的生長性能。但目前，關(guān)于中草藥制劑在大菱鲆機體非特異性免疫功能方面的研究結(jié)果甚少。因此，該試驗以大菱鲆為研究對象，探究不同劑量的中草藥制劑對其機體非特異性免疫力的影響，并確定中草藥制劑在大菱鲆生產(chǎn)中的最適添加水平，為中草藥制劑在大菱鲆生產(chǎn)中的科學(xué)、合理推廣與應(yīng)用提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 中草藥制劑

該研究使用的中草藥制劑由黨參(Codonopsispilosula)、茯苓(Wolfiporiacocos)、甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)、五倍子(RhuschinensisMill.)和生姜(ZingiberofficinaleRoscoe)組成，各組分的比例為6∶3∶2∶1∶1，購自大連當(dāng)?shù)刂兴幉氖袌?，以?種中草藥粉碎后，過40目篩，備用。

1.2 大菱鲆

該研究選取大小均勻、健康的大菱鲆，體重為(20.10±0.05)g，由大連水產(chǎn)養(yǎng)殖集團有限公司提供。

1.3 試驗方法

試驗選擇120尾體重相近、健康的大菱鲆按照單因素試驗設(shè)計，分成4組，每組30尾大菱鲆。對照組大菱鲆投喂基礎(chǔ)飼料，試驗1組大菱鲆投喂基礎(chǔ)飼料+0.5%的中草藥制劑，試驗2組大菱鲆投喂基礎(chǔ)飼料+1.0%的中草藥制劑，試驗3組大菱鲆投喂基礎(chǔ)飼料+1.5%的中草藥制劑。試驗周期為4周。試驗結(jié)束檢測各組大菱鲆血清非特異性免疫指標(biāo)。試驗大菱鲆的基礎(chǔ)飼料原料構(gòu)成和營養(yǎng)成分含量見表1。

表1 試驗大菱鲆的基礎(chǔ)飼料原料構(gòu)成和營養(yǎng)成分含量

1.3 大菱鲆日常養(yǎng)殖管理

正式試驗開始前，所有大菱鲆放在水族箱中馴養(yǎng)14d，適應(yīng)環(huán)境后進行正式試驗。養(yǎng)殖期間，大菱鲆每日投喂2次飼料，分別在早上8:30和晚上18:00投喂，投喂量約為大菱鲆體重的2.5%。每日換水量約為1/3。24hrs供氧，水溫約為16℃，pH值約為8.2，溶解氧大于7mg/L，氨氮含量小于0.5mg/L。

1.4 檢測指標(biāo)

試驗結(jié)束后，每組挑選10尾大菱鲆采集尾靜脈血液，4000轉(zhuǎn)離心5mins后，收集上層血清用于檢測溶菌酶、免疫球蛋白M、補體C3、補體C4、過氧化氫酶等指標(biāo)。檢測方法參考南京建成生物工程研究所的試劑盒說明書。

1.5 數(shù)據(jù)分析

大菱鲆非特異性免疫指標(biāo)數(shù)據(jù)采用SPSS26進行顯著性及兩兩比較分析，P<0.05表示數(shù)據(jù)差異顯著。

2 結(jié)果

不同劑量的中草藥制劑對大菱鲆機體非特異性免疫指標(biāo)的影響見表2，由表2數(shù)據(jù)可知，試驗2組大菱鲆血清中的溶菌酶、補體C3和過氧化氫酶水平顯著高于對照組(P<0.05)，而試驗1組和試驗3組大菱鲆血清中的溶菌酶、補體C3和過氧化氫酶水平有比對照組提高的趨勢，但未達到顯著性水平(P>0.05)。結(jié)果表明，在大菱鲆生產(chǎn)中使用1.0%的中草藥制劑可以有效提高大菱鲆機體的非特異性免疫功能。

表2 不同劑量的中草藥制劑對大菱鲆機體非特異性免疫指標(biāo)的影響

3 討論

魚類機體中的非特異性免疫系統(tǒng)是其抵御病原微生物入侵的第一道防線，其功能的強弱關(guān)系魚類機體的健康狀態(tài)及生長性能。中草藥中含有多種生物活性成分，如生物堿、多酚、黃酮及氨基酸等，可以通過調(diào)節(jié)動物機體的免疫功能促進機體生長發(fā)育。該試驗中，試驗2組大菱鲆血清中的溶菌酶、補體C3和過氧化氫酶水平顯著高于對照組，試驗1組和試驗3組大菱鲆血清中的溶菌酶、補體C3和過氧化氫酶水平有提高的趨勢，但未達到顯著性水平，結(jié)果表明，在大菱鲆生產(chǎn)中使用1.0%的中草藥制劑可以有效提高大菱鲆機體的非特異性免疫功能，但中草藥制劑的添加量不易過大，添加量過高導(dǎo)致機體免疫力略微降低，可能是超出了大菱鲆機體的耐受力。高學(xué)政等[5]等研究發(fā)現(xiàn)，在大菱鲆飼料中添加1.0%的中草藥制劑可以有效提高血清中溶菌酶活性及補體C3含量，且改善了大菱鲆的增重率、特定生長率、餌料系數(shù)、肝體比、臟體比等生長性能數(shù)據(jù)。中草藥制劑改善魚類機體的免疫功能與其富含的活性成分有關(guān)，中草藥中的生物活性成分可以提高魚類機體內(nèi)吞噬細(xì)胞的功能，提高殺菌能力，抵抗細(xì)菌、病毒等對機體的危害，提高魚類機體的抗應(yīng)激能力及抗病力，改善機體健康，進而提高機體的免疫功能。

4 結(jié)論

該試驗條件下，在大菱鲆養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用適量的中草藥制劑可以提高大菱鲆血清中溶菌酶、補體C3和過氧化氫酶水平，提高了機體的非特異性免疫功能，且中草藥在大菱鲆飼料中的最適添加水平為1.0%。