孫述好，胡男，黃紫薇，潘雨佳，李應東

(1.丹東市漁業(yè)發(fā)展服務中心，遼寧丹東 118017；2.沈陽農業(yè)大學動物科學與醫(yī)學學院，遼寧沈陽 110866)

晝夜節(jié)律屬于生物節(jié)律的一種，也稱日節(jié)律，小到藍藻，大到人類，幾乎在所有生物體內被發(fā)現(xiàn)，并調節(jié)睡眠、食物攝入、體溫、激素水平和許多其他生物過程[1]。晝夜節(jié)律對于控制生理和行為功能至關重要，使生物體能夠適應和預測環(huán)境中的時間變化[2]。

抗氧化酶活性是動物生理健康的重要指標，反映了動物抵抗外界環(huán)境的能力。在機體內，丙二醛(MDA)是常用的細胞膜脂過氧化指標，能造成各種酶和細胞膜結構的損傷[3]?？寡趸烙到y(tǒng)中，超氧化物歧化酶(SOD)是體內清除自由基的首要物質，平衡體內氧化和抗氧化作用。此外，過氧化氫酶(CAT)和還原型谷胱甘肽(GSH)等多種酶被動員起來，以降低生物體對活性氧損傷作用的敏感性，它們共同作用于機體，使其免受自由基毒害。

大鱗副泥鰍(Paramisgurnusdabryanus)隸屬于鯉形目、鰍科、副泥鰍屬，為底棲小型魚類，是中國特種淡水養(yǎng)殖品種，具有環(huán)境適應性強、養(yǎng)殖周期短、營養(yǎng)豐富等特點[4]。大鱗副泥鰍的皮膚是主要的抗氧化和呼吸組織。因此，該試驗以大鱗副泥鰍為實驗對象，探究其皮膚抗氧化酶活性的晝夜節(jié)律，以期為生產實踐提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用大鱗副泥鰍購買于沈陽市渾南區(qū)泥鰍養(yǎng)殖池塘，運回沈陽農業(yè)大學水產養(yǎng)殖實驗室進行暫養(yǎng)?？寡趸富钚栽噭┖匈徺I于南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗設計

試驗開始前在養(yǎng)殖缸(300L)內加入高錳酸鉀消毒，排凈后加入100L水，曝氣24hrs。選取300尾(5g±0.3g)體質健康的大鱗副泥鰍，分別放入三個養(yǎng)殖桶中，每桶100尾，室內自然光照條件下暫養(yǎng)10d，水溫16±0.5℃。暫養(yǎng)期間8:00時和17:00時各投喂1次，投喂量為總質量的1%，投喂1h后換水25%。取樣前2d停止投喂。

1.3 測定指標及方法

在24hrs內每4hrs取樣一次(00: 00時，04: 00時，08: 00時，12: 00時，16: 00時和20: 00時)，每次取樣每個養(yǎng)殖桶隨機取2尾，解剖后取皮膚組織，保存于-20℃冰箱待測。主要檢測皮膚組織中總抗氧化能力(T-AOC)、SOD、GST、GSH-Px、MDA和CAT。實驗嚴格按照試劑盒說明進行操作。

1.4 數據處理

所有數據均采用SPSS26.0軟件進行單因素方差分析(One Way ANOVA)，所有分析的顯著性水平設定為P<0.05，數據表示為平均值±標準誤差。所有圖像均在Microsoft Excel中以散點圖的形式生成。

2 結果

結果顯示，大鱗副泥鰍的抗氧化酶活性呈現(xiàn)明顯的晝夜節(jié)律。其中T-SOD和GSH-Px在04: 00時出現(xiàn)峰值，顯著高于谷值(P<0.05)。GST和T-AOC在00: 00出現(xiàn)峰值，CAT在08: 00時出現(xiàn)峰值，顯著高于谷值(P<0.05)。同時，MDA的峰值出現(xiàn)在12: 00時，谷值出現(xiàn)在04: 00時，差異性顯著(P<0.05)。

注：每個時間點代表平均值±標準差(n=5)。白色和黑色條分別表示白天和黑夜。NOTE：Each time point represents mean ±S.E.M. (n=5). White and black bars indicate day and night.圖1 皮膚組織抗氧化酶活性的晝夜節(jié)律Figure 1. Circadian rhythm of antioxidant enzyme activity in skin

3 討論與分析

水生生物通過內部晝夜節(jié)律和外部環(huán)境周期的同步變化，調節(jié)內分泌和代謝水平，從而適應環(huán)境生存。皮膚作為大鱗副泥鰍防御體系的第一道屏障，在抗氧化防御體系中發(fā)揮著重要作用。在夜間，大鱗副泥鰍的各種抗氧化酶活性均有提高，說明其在夜晚具有更高的抗氧化能力。眾所周知，光照是產生晝夜節(jié)律的重要因素。有報道指出，光照與魚類的生長和生理狀態(tài)密切相關，如增重率、生長率和抗氧化狀態(tài)[5-6]，這與該試驗結果一致。此外，MDA在機體內的含量過高會產生中毒反應，甚至死亡。該試驗中，皮膚MDA含量在光照后迅速升高，12:00時出現(xiàn)峰值。據此推測，這與物種的生活習性相關。大鱗副泥鰍生活在水體的底層，夜間是其活動的高峰期，而長時間暴露在明亮環(huán)境中會造成不必要的生理壓力，從而導致抗氧化酶活性降低。相類似的結果也在牛蛙和小龍蝦研究中有過報道[7-8]。

4 結論

該研究證實了大鱗副泥鰍皮膚組織的抗氧化酶活存在明顯晝夜節(jié)律變化，相比之下，夜間抗氧化能力顯著高于白天。后續(xù)研究會對大鱗副泥鰍皮膚抗氧化酶的周年節(jié)律變化進行測定，進一步闡釋其節(jié)律變化情況。綜上所述，該研究結果豐富了大鱗副泥鰍的基礎生理學數據，也對未來的養(yǎng)殖生產實踐提供理論依據。