湯 明， 方春田， 王 燕， 張 仙， 喻 欣

(1.湖北省洪湖市人民醫(yī)院， 湖北 洪湖 433200 2.湖北省婦幼保健院婦科， 湖北 武漢 430070)

卵巢癌(Ovarian cancer，OC)是女性中第七大最常見的癌癥，全球每年約新增239,000病例。盡管隨著手術(shù)治療及化療藥物的發(fā)展使OC患者生存率得到了提高，但晚期OC患者的5年生存率依然較低[1]。因此，尋找更多的分子靶點以促進對OC患者的診斷及預(yù)后勢在必行。據(jù)報道，微小RNA(miRNA)在多種癌癥中異常表達可能通過參與多個步驟的調(diào)控，有望成為OC的治療靶點[2]。Xie等[3]研究表明OC組織中miR-942水平顯著降低。環(huán)狀RNA(circRNA)是各種癌癥生長和轉(zhuǎn)移中許多生物學(xué)過程的重要介質(zhì)。大量研究證實circRNA在OC中異常表達，在OC中具有診斷和預(yù)后價值[4]。Sheng等[5]研究表明circKIF4A在卵巢癌組織中高表達，敲低circKIF4A可以抑制卵巢癌中的細胞增殖和遷移。miR-942-5p、circKIF4A在卵巢癌中的表達均有報道，但二者與卵巢癌的臨床病理特和預(yù)后尚處于研究中?；诖?，本研究通過檢測卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p和circKIF4A的表達情況，探討二者與臨床參數(shù)的關(guān)系以及對預(yù)后的影響?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2015年1月至2017年1月在本院進行手術(shù)的卵巢癌患者154例為研究對象，收集卵巢癌患者的癌組織及癌旁正常組織進行研究。納入標準：①卵巢癌診斷參考中華醫(yī)學(xué)會制定標準[6]，且經(jīng)過手術(shù)病理確診；②術(shù)前均沒有接受過放療或化療；③患者及家屬均知情同意。排除標準：①合并有卵巢、子宮手術(shù)史患者；②合并有重大疾病、凝血障礙及子宮肌瘤、內(nèi)膜異位癥等疾病；③臨床資料不完整者。本研究經(jīng)我院道德倫理委員會批準通過，樣品采集均取得研究對象的知情和同意。

1.2方 法:qRT-PCR法檢測組織中miR-942-5p、circKIF4A水平:使用Trizol試劑(貨號R0016；Beyotime，上海)從組織中提取RNA。接下來，使用特定的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Takara，大連)合成互補DNA(cDNA)。qRT-PCR在ABI 7900HT Systems(Applied Biosystems，美國)上使用miScript SYBR Green PCR Kit(Qiagen，Germany)在以下熱循環(huán)條件下運行：95℃ 10min，然后是95℃ 5s、60℃ 10s和72℃ 10s，共設(shè)40個循環(huán)。miR-942-5p、circKIF4A的表達分別以U6、GAPDH為內(nèi)參。使用2-ΔΔCt方法計算miR-942-5p、circKIF4A相對表達水平。

1.3隨訪:定期隨訪主要通過門診或電話進行，詢問并記錄患者的生存時間和生存率，隨訪開始時間從出院起計算，截止時間為2022年1月，終點事件為患者死亡。

2 結(jié) 果

2.1卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p、circKIF4A的表達:卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p表達水平低于癌旁組織，circKIF4A在卵巢癌患者癌組織中表達較癌旁組織中高(P<0.05)，見表1。

表1 癌組織及癌旁組織中miR-942-5p circKIF4A表達水平比較

2.2卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p、circKIF4A表達的相關(guān)性:卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p、circKIF4A表達呈明顯負相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(r=-0.312，P<0.05)，見圖1。

圖1 癌組織中miR-942-5p、circKIF4A表達相關(guān)性分析

2.3miR-942-5p、circKIF4A表達與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系:circKIF4A、miR-942-5p的表達與卵巢癌患者的年齡、病理類型、WHO組織學(xué)分級、腫瘤直徑、浸潤程度無關(guān)，與TNM分期、分化程度、腫瘤分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無腹水有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 癌組織中miR-942-5p circKIF4A的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.4Kaplan-Meier生存分析:所有患者均進行隨訪，無失訪病例，隨訪期間死亡97例，miR-942-5p、circKIF4A均以在癌組織中相對表達水平的中位數(shù)為臨界值，超出該范圍判定為高表達，低于該范圍定義為低表達。其中miR-942-5p高表達者共80例，低表達者74例。circKIF4A高表達者共78例，低表達者76例。繪制5年生存曲線，Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示，circKIF4A高表達組患者5年累積生存率26.92%(21/78)顯著低于低表達組47.37%(36/76)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Log rank χ2=6.651，P=0.010)；miR-942-5p高表達組患者5年累積生存率46.25%(37/80)顯著高于低表達組患者27.03%(20/74)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Log rank χ2=9.978，P=0.000)，見圖2。

圖2 不同miR-942-5p、circKIF4A表達的Kaplan-Meier生存曲線

2.5影響卵巢癌患者生存狀況的COX回歸分析:以是否死亡為因變量，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期、腫瘤分級、腹水、miR-942-5p、circKIF4A為自變量，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期、circKIF4A高表達、miR-942-5p低表達均是影響卵巢癌患者生存狀況的危險因素(P<0.05)，見表3。

表3 影響卵巢癌患者生存狀況的COX回歸分析

3 討 論

卵巢癌在婦科腫瘤中致死率最高，是女性癌癥死亡的第五大原因[7]。由于OC患者在腫瘤發(fā)生早期通常不會出現(xiàn)明顯癥狀，且到目前為止，還沒有早期診斷和治療OC的有效方法[8]。因此，大多數(shù)OC患者直到晚期才被診斷出患有卵巢癌，錯過了最佳的治療機會，且有超過70%的晚期OC患者會在手術(shù)后復(fù)發(fā)，導(dǎo)致其預(yù)后較差[9]。因此，急需選擇更加有效可靠的指標評估卵巢癌患者病情及預(yù)后。

miRNAs是內(nèi)源性和進化上保守的小型非編碼RNA。最近的證據(jù)表明，miRNA在卵巢癌疾病發(fā)展中發(fā)揮重要作用[10]。研究顯示miR-942-5p的異常表達在多種腫瘤中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。如長鏈非編碼RNA的linc00675可通過調(diào)節(jié)miR-942抑制結(jié)腸癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移[11]。在肝細胞癌中，miR-942-5p表達異常升高，與臨床特征和預(yù)后密切相關(guān)[12]。在本研究中，卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p表達較癌旁組織中降低，提示miR-942-5p水平降低可能參與調(diào)控卵巢癌的發(fā)生；進一步通過與患者臨床病理特征比較分析，結(jié)果顯示miR-942-5p表達與疾病的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤分級、有無腹水密切相關(guān)，提示miR-942-5p表達異常與卵巢癌的臨床分期密切相關(guān)，臨床可通過判斷患者miR-942-5p的表達情況為疾病的分期及診斷提供一定參考依據(jù)。生存分析結(jié)果顯示miR-942-5p高表達組患者5年累積生存率顯著高于低表達組患者，提示miR-942-5p低表達可能與卵巢癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)相關(guān)，有可能成為評估卵巢癌患者預(yù)后不良的潛在指標之一。

circRNA是一類具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的新型內(nèi)源性非編碼RNA，與線性RNA相比，circRNA在哺乳動物組織中更豐富，且無帽尾[13]。circRNA曾經(jīng)被認為是基因不正確轉(zhuǎn)錄的副產(chǎn)物，現(xiàn)在被認為是多種生物內(nèi)過程的重要調(diào)控因子，包括癌癥的發(fā)生和發(fā)展[13]。Huo等[14]發(fā)現(xiàn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤中circKIF4A的表達顯著增加，敲低circKIF4A基因降低了膠質(zhì)瘤細胞的集落形成能力、遷移和侵襲能力，并減慢腫瘤生長速度。蒙秋等[15]研究表明circKIF4A在卵巢癌組織中表達升高，可能通過負向調(diào)控miR-384的表達從而促進卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。在本研究中，患者癌組織中circKIF4A表達與癌旁組織相比明顯升高，提示circKIF4A可能在卵巢癌疾病中發(fā)揮了促癌基因的作用。circKIF4A表達也與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、腫瘤分級、有無腹水有關(guān)，提示circKIF4A與患者病情嚴重程度密切相關(guān)，可能通過增強腫瘤細胞的侵襲力以及附著力參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程；研究進一步得到miR-942-5p和circKIF4A的表達呈負相關(guān)，提示二者之間可能存在靶向關(guān)系，circKIF4A可能充當(dāng)miR-942-5p的海綿分子，負向調(diào)控miR-942-5p的表達，從而促進卵巢癌的發(fā)展進程，其具體作用機制有待進一步深入研究。生存分析結(jié)果顯示circKIF4A高表達組患者5年累積生存率顯著低于低表達組，提示circKIF4A高水平表達與卵巢癌疾病惡化及預(yù)后不良密切相關(guān)。研究進一步發(fā)現(xiàn)分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、circKIF4A高表達、miR-942-5p低表達均是影響卵巢癌患者生存預(yù)后的獨立危險因素，提示臨床表現(xiàn)circKIF4A高表達、miR-942-5p低表達的患者，應(yīng)該在術(shù)后給與更嚴密的隨訪觀察，必要時給予輔助治療，改善患者預(yù)后。

綜上所述，卵巢癌患者癌組織中miR-942-5p呈低表達，circKIF4A呈高表達，二者表達，與卵巢癌疾病的發(fā)生、發(fā)展進程密切相關(guān)，聯(lián)合檢測二者對評估臨床卵巢癌患者的生存預(yù)后具有重要意義，二者有可能作為卵巢癌分子治療的新的潛在靶點。但本研究尚存在不足之處，circKIF4A、miR-942-5p在卵巢癌疾病中的具體作用機制有待進一步完善實驗方案進行深入研究。