葉凱麗，黃詩(shī)琴，胡婷，趙艷玲

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 腎內(nèi)科，浙江 溫州 325027

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy, DN）是糖尿病最常見(jiàn)的死亡原因及常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥，目前普遍認(rèn)為慢性炎癥、氧化應(yīng)激、糖脂代謝紊亂是DN進(jìn)展的最主要因素[1-2]。研究表明[3-4]DN小鼠與正常小鼠相比腸道菌群結(jié)構(gòu)存在顯著差異，并出現(xiàn)不同程度的能量代謝異常，YANG等[5]認(rèn)為腸道微生物代謝物可作為一種特殊的信號(hào)分子通過(guò)腸道屏 障-腸黏膜進(jìn)入血液循環(huán)而影響機(jī)體重要器官的功能，包括心、腦、腎等器官，其中短鏈脂肪酸尤為重要。丁酸鹽是一種重要短鏈脂肪酸，它可通過(guò)腸道屏障進(jìn)入血液循環(huán)影響腸外器官的功能，如調(diào)控胰島素敏感性、抗炎、抗氧化等[6-7]。目前，越來(lái)越多的研究表明腸道菌群可以通過(guò)其代謝產(chǎn)物影響腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展。本研究以db/db小鼠為研究對(duì)象，從GLP-1R/AMPK途徑來(lái)探討腸道菌群代謝物丁酸鹽對(duì)2型DN小鼠腎臟的保護(hù)作用及其機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 主要儀器及試劑 羅氏血糖儀購(gòu)自德國(guó)Roche Diagnostics GmbH公司，丁酸鈉購(gòu)自上海Macklin公司（CAS號(hào)：156-54-7），蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒、過(guò)碘酸-希夫（PAS）染色試劑盒均購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司，尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）、血肌酐（serum creatinine, SCr）、甘油三酯（triglyceride, TG）、血清總膽固醇（total cholesterol, TC）試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，白細(xì)胞介素-6（interleukin-6, IL-6）酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒購(gòu)自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司；尿微量白蛋白、尿肌酐酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海撫生實(shí)業(yè)有限公司。Phospho-AMPKα（Thr172）Rabbit mAb（#2535）、AMPKα Rabbit mAb（#5831）抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司；胰高血糖素樣肽（glucagon-like peptide-1, GLP-1）受體（GLP-1R）抗體（ab218532）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 24只13周齡SPF級(jí)雄性db/db小鼠，體質(zhì)量（45±7）g，10只同周齡雄性db/m小鼠，體質(zhì)量（27±2）g，均購(gòu)自常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（蘇）2016-0010，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：202118368。所有實(shí)驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)于溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，溫度（22 ℃±2 ℃），相對(duì)濕度（55%±10%），光照/黑暗周期為12 h，小鼠可自由飲水和進(jìn)食，普通飼料喂養(yǎng)，定期更換墊料。該研究通過(guò)溫州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)（wydw2021-0336）。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)前所有小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2周，尾靜脈采血測(cè)定空腹血糖（fasting blood glucose, FBG）（禁食6 h），連續(xù)3 d測(cè)得小鼠空腹血糖≥16.7 mmol/L即認(rèn)為模型復(fù)制成功。將db/db小鼠隨機(jī)分為3組：糖尿病腎病組（DN組）、丁酸鈉500 mg·kg-1·d-1組（NaB1組）和丁酸鈉 1 000 mg·kg-1·d-1組（NaB2組），選取同周齡的10只雄性db/m小鼠為空白對(duì)照組（NC組）。根據(jù)之前研究，丁酸鈉的灌胃劑量和給藥時(shí)間在此基礎(chǔ)上確 定[6-8]。DN組和NC組各10只，NaB1和NaB2組各7只。

1.4 藥物制備及給藥 按500 mg·kg-1及1 000 mg·kg-1劑量精密稱取丁酸鈉粉末溶于適量無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液中，在振蕩器中震蕩至完全溶解，用0.22 μm微孔濾膜抽濾，現(xiàn)配現(xiàn)用，避光保存。NaB1組和NaB2組小鼠每日予0.3 mL丁酸鈉溶液灌胃，DN組和NC組小鼠予等體積的0.9%氯化鈉溶液灌胃，每天1次，灌胃持續(xù)8周后處死小鼠。

1.5 實(shí)驗(yàn)取材及測(cè)定 實(shí)驗(yàn)結(jié)束前24 h，小鼠禁食不禁水，收集24 h尿液后處死，留取小鼠尿液標(biāo)本低溫高速離心后取上清液于-80 ℃保存。摘除小鼠眼球取血，室溫靜置2 h后離心取上清液，用于生化分析；小鼠心臟灌流后取腎組織，部分進(jìn)行石蠟包埋用于HE、PAS染色，部分組織-80 ℃冷凍保存用于Western blot檢測(cè)和RT-qPCR實(shí)驗(yàn)。

1.6 小鼠一般情況、體質(zhì)量及腎臟質(zhì)量 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察各組小鼠的精神狀態(tài)、飲食飲水量、尿量、行為學(xué)變化等情況，每?jī)芍鼙O(jiān)測(cè)小鼠體質(zhì)量變化并計(jì)算平均值，繪制各組小鼠體質(zhì)量變化的趨勢(shì)圖；去除小鼠腎臟包膜后稱量小鼠腎臟質(zhì)量，并計(jì)算腎肥大指數(shù)（腎肥大指數(shù)=腎質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）。

1.7 小鼠血糖及尿白蛋白肌酐比值（urine albumin creatine ratio, UACR）測(cè)定 羅氏血糖儀檢測(cè)各組小鼠給藥前（0w）及灌胃8周后尾靜脈空腹血糖濃度，并繪制血糖柱形圖；收集小鼠24 h尿液，4 ℃離心取上清液。按照制造商的說(shuō)明，分別用尿微量白蛋白試劑盒、尿肌酐試劑盒檢測(cè)小鼠尿白蛋白、尿肌酐水平，并計(jì)算尿白蛋白和肌酐的比值，即UACR=尿白蛋白/尿肌酐。

1.8 小鼠血液生化分析及腎組織IL-6濃度測(cè)定 眼 球取血后分離血清，使用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)血清樣本中的BUN、SCr、TG、TC、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase, ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase, AST）水平。分別取30 mg腎組織加入到200 μL PBS溶液里面，充分勻漿后離心收集上清液，用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定上清液總蛋白水平；同時(shí)按照ELISA試劑盒的說(shuō)明測(cè)定腎組織中的IL-6水平，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并求得上清液IL-6水平，組織上清液IL-6水平=IL-6數(shù)值/相應(yīng)蛋白濃度。

1.9 Western blot檢測(cè) 取適量腎組織在含有磷酸酶及蛋白酶抑制劑混合物的RIPA裂解緩沖液中剪碎后勻漿，離心提取蛋白上清液，置于-80 ℃冷凍保存。按BCA蛋白定量試劑盒說(shuō)明方法操作并繪制標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線，依據(jù)樣本OD值計(jì)算出樣本蛋白濃度并配制蛋白體系。SDS-PAGE電泳分離樣品[每個(gè)樣品取等量蛋白上樣（40 μg）]，轉(zhuǎn)移至PVDF膜，用5% BSA溶液封閉2 h后TBST洗滌，將PVDF膜與不同的一抗在4 ℃條件下孵育過(guò)夜。TBST洗膜后與特異性HRP偶聯(lián)的二抗室溫孵育2 h，洗去二抗，隨后用Omni-ECLTM超靈敏化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒顯影條帶，然后通過(guò)Image-Lab軟件測(cè)量條帶強(qiáng)度并進(jìn)行光密度分析。以β-actin為內(nèi)參計(jì)算蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.10 RT-qPCR檢測(cè) 取適量腎組織按照TRIzol法提取腎臟組織總RNA，按照Prime ScriptTMRT Master mix試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，并配制RT-qPCR反應(yīng)體系。其循環(huán)反應(yīng)條件如下：95 ℃ 30 s， 95 ℃ 5 s和60 ℃ 30 s，反應(yīng)40個(gè)循環(huán)。以GADPH為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCT方法定量分析小鼠腎組織中PGC-1α、MFN1及OPA1 mRNA的表達(dá)。引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，引物序列見(jiàn)表1。

表1 目的基因引物序列

1.11 腎臟組織病理學(xué)評(píng)價(jià) 將石蠟包埋后的腎臟組織4 μm切片后置于60 ℃的烘箱2 h，經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化后用蘇木素、伊紅染液行常規(guī)HE染色，高倍鏡（×400）下觀察腎臟病理形態(tài)變化；脫蠟水化后腎臟切片依次使用氧化劑、Schiff染色液、蘇木素染色液和分化液處理行PAS染色，每張切片高倍鏡（×400）下隨機(jī)選擇5～10個(gè)視野，應(yīng)用image-pro plus 6.0軟件測(cè)定并計(jì)算，腎小球系膜基質(zhì)相對(duì)面積=腎小球內(nèi)PAS陽(yáng)性染色面積/腎小球毛細(xì)血管袢總面積×100%。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件及Graphpad prism 9.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和繪制圖片。計(jì)量資料用±s進(jìn)行描述。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)和Dunnett’s T3法檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 丁酸鈉對(duì)小鼠一般情況、體質(zhì)量和腎質(zhì)量的影響 NC組小鼠一般狀況良好，毛色正常、反應(yīng)靈敏；DN組均表現(xiàn)為典型的DN癥狀，包括多飲、多食、多尿，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍或行動(dòng)緩慢；經(jīng)丁酸鈉治療8周后小鼠多飲多食多尿癥狀改善，活動(dòng)較前增多。灌胃期間每2周監(jiān)測(cè)一次小鼠體質(zhì)量，DN組、NaB1組和NaB2組小鼠體質(zhì)量均顯著高于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與DN組比，NaB1組及NaB2組小鼠體質(zhì)量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1。與NC組比，DN組、NaB1組和NaB2組小鼠腎臟質(zhì)量增加，腎肥大指數(shù)減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與DN組比，NaB1組和NaB2組腎質(zhì)量及腎肥大指數(shù)減小；且這種差異在NaB2組更加明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

圖1 丁酸鈉降低db/db小鼠體質(zhì)量

表2 丁酸鈉對(duì)DN小鼠腎質(zhì)量的影響（±s）

表2 丁酸鈉對(duì)DN小鼠腎質(zhì)量的影響（±s）

與NC組比：aP＜0.05；與DN組比：bP＜0.05

組別 n 腎質(zhì)量（g） 腎肥大指數(shù)（%）NC組 10 0.20±0.02 7.64±0.84 DN組 10 0.28±0.04a 6.05±1.39a NaB1組 7 0.23±0.05ab 5.25±1.36ab NaB2組 7 0.21±0.02ab 4.83±0.61ab

2.2 丁酸鈉對(duì)小鼠UACR、血糖及腎組織IL-6水平的影響 與DN組比，NaB1組及NaB2組小鼠UACR值下降顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但兩治療組之間的UACR值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。DN組血糖明顯高于NC組，經(jīng)丁酸鈉8周灌胃治療后，NaB1組及NaB2組小鼠血糖濃度下降顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且與NaB1組比，NaB2組血糖下降更加明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。連續(xù)給予8周丁酸鈉溶液灌胃治療，檢測(cè)小鼠腎組織IL-6的變化，DN組小鼠腎臟IL-6水平較NC組顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；經(jīng)丁酸鈉8周治療后，NaB1組及NaB2組的腎臟IL-6水平較DN組下降，且與NaB1組比，NaB2組IL-6水平下降顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖2。

圖2 各組UACR、血糖濃度及腎臟IL-6水平

2.3 丁酸鈉對(duì)小鼠血液BUN、SCr、TC、TG等指標(biāo)的影響 與DN組比，NaB1組及NaB2組的ALT、AST水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示這兩種劑量下的丁酸鈉對(duì)兩治療組小鼠的肝功能無(wú)明顯損傷作用。NC組小鼠血BUN、SCr與DN組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；經(jīng)過(guò)8周治療后兩治療組均出現(xiàn)不同程度的下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。DN組小鼠TC和TG值高于NC組（P＜0.05），經(jīng)8周丁酸鈉治療后，兩治療組小鼠血TC、TG值下降但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 丁酸鈉對(duì)各組小鼠血液生化指標(biāo)的影響（±s）

表3 丁酸鈉對(duì)各組小鼠血液生化指標(biāo)的影響（±s）

與NC組比：aP＜0.05；與DN組比：bP＜0.05

項(xiàng)目 NC組（n=10） DN組（n=10） NaB1組（n=7） NaB2組（n=7）TC（mmol/L） 1.92± 0.53 3.46± 1.32a 3.06± 0.44a 2.87± 1.20 TG（mol/L） 0.65± 0.27 1.77± 0.66a 1.63± 0.51a 1.41± 0.43a BUN（mmol/L） 7.06± 1.33 11.51± 2.77a 7.91± 1.10b 6.91± 1.00b SCr（umol/L） 29.04± 6.91 129.63±18.67a 103.36±11.61ab 106.44± 6.18ab ALT（U/L） 27.81± 6.56 63.87±23.06a 45.39±13.52a 46.96±17.26a AST（U/L） 49.12±14.55 94.50±31.18a 74.02±18.57 79.84±20.83

2.4 丁酸鈉對(duì)DN小鼠腎臟病理的影響 與NC組比較，肉眼見(jiàn)DN組小鼠腎組織體積明顯增大。對(duì)各組小鼠腎組織進(jìn)行HE及PAS染色，DN組小鼠出現(xiàn)典型的DN病理改變，表現(xiàn)為腎小球腫脹肥大，腎小管上皮排列紊亂且伴有管腔擴(kuò)張，基底膜增厚，系膜基質(zhì)相對(duì)面積增加，NaB1和NaB2組小鼠的腎小球面積減小，腎小管擴(kuò)張程度減輕，系膜基質(zhì)糖原沉積面積減小，且在NaB2治療組減少更加顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖3。

圖3 各組小鼠腎組織病理改變

2.5 丁酸鈉對(duì)腎臟GLP-1R、p-AMPK/AMPK蛋白的表達(dá)的影響 DN組小鼠中的p-AMPK/AMPK比值明顯低于NC組、NaB1組及NaB2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）；且與NaB1組比，NaB2組P-AMPK/AMPK蛋白水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。GLP-1R 蛋白在NC組、NaB1組及NaB2組中均有豐富的表達(dá)，在DN組小鼠中可見(jiàn)蛋白表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且與NaB1組比，GLP-1R蛋白在NaB2組顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖4。

圖4 各組p-AMPK/AMPK及GLP-1R蛋白表達(dá)水平

2.6 丁酸鈉對(duì)腎組織PGC-1α、MFN2及OPA1 mRNA表達(dá)的影響 與NC組比，DN組腎小球PGC-1α、MFN2及OPA1 mRNA明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療8周后，NaB1組及NaB2組的PGC-1α、MFN2及OPA1 mRNA水平明顯上升；且NaB2組PGC-1α、MFN2及OPA1 mRNA水平升高更加顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)圖5。

圖5 各組小鼠PGC-1α、MFN2及OPA1 mRNA表達(dá)水平

3 討論

DN是糖尿病常見(jiàn)的慢性微血管并發(fā)癥之一，研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)生發(fā)展可能與GLP-1作用受抑制有關(guān)。DN發(fā)生時(shí)腸道內(nèi)分泌L細(xì)胞釋放的GLP-1減少[9]，同時(shí)機(jī)體內(nèi)NF-κB及其介導(dǎo)的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活，導(dǎo)致各種炎癥因子在體內(nèi)蓄積，尤其是IL-6[10]。有研究證實(shí)小鼠發(fā)生DN時(shí)，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞上的GLP-1R通過(guò)泛素化或血管緊張素II介導(dǎo)的降解機(jī)制被激活，導(dǎo)致GLP-1R降解增多，GLP-1不能與GLP-1R結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)功能[11]。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)在DN小鼠中，血糖血脂和炎癥因子IL-6水平顯著升高，腎功能受損，腎臟GLP-1R蛋白表達(dá)顯著降低。

相關(guān)研究報(bào)道丁酸鹽不僅能上調(diào)腸道細(xì)胞緊密連接蛋白1（recombinant tight junction protein 1, TJP1）的表達(dá)，改善腸道黏膜屏障功能，還能進(jìn)一步降低慢性腎臟病患者血液中IL-1、TNF-α的水平，減輕腎臟的氧化應(yīng)激和纖維化損傷，降低尿白蛋白排泄，改善腎功能[8，12-13]，同時(shí)還抑制了組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase inhibitor,HDAC）活性。除此之外，丁酸與細(xì)胞表面G蛋白偶聯(lián)蛋白41（GPR41）和GPR43結(jié)合促進(jìn)遠(yuǎn)端回腸及結(jié)腸L細(xì)胞分泌釋放GLP-1，從而提高機(jī)體對(duì)GLP-1R敏感性，發(fā)揮降血糖、抗炎及抗氧化作用。本研究中，經(jīng)丁酸鹽治療后小鼠的一般情況改善，血糖、體質(zhì)量及UACR顯著下降，SCr、BUN和腎組織IL-6水平降低，但小鼠肝功能無(wú)明顯損傷，表明丁酸鹽能減輕DN小鼠體質(zhì)量，降低血糖濃度，抑制DN小鼠發(fā)生發(fā)展過(guò)程中伴隨的炎癥反應(yīng)，減輕腎組織損傷。還發(fā)現(xiàn)與500 mg·kg-1·d-1丁酸鈉治療量相比， 1 000 mg·kg-1·d-1丁酸鈉治療量在降低DN小鼠血糖濃度及腎組織IL-6水平方面療效更加顯著，或許為尋找適宜丁酸鈉治療濃度提供了證據(jù)。

AMPK是細(xì)胞重要的能量感受器，能調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝[14]。既往的大量研究證實(shí)DN小鼠存在能量代謝失衡，腎臟中AMPK磷酸化水平在不同程度上被抑制，應(yīng)用5-氨基咪唑-354-甲酰胺-1-β-d-呋喃核糖核苷（AICAR）或白藜蘆醇等AMPK激動(dòng)劑可以減輕DN小鼠尿蛋白和腎臟纖維化，減少腎細(xì)胞凋亡并改善腎臟肥大[15-16]。研究發(fā)現(xiàn)DN組小鼠p-AMPK/AMPK蛋白表達(dá)顯著降低，補(bǔ)充丁酸鹽治療后小鼠p-AMPK/AMPK蛋白表達(dá)增加，因此推測(cè)丁酸鹽與AMPK激動(dòng)劑有類似的效果，能促進(jìn)AMPK磷酸化從而影響腎臟功能，但具體的通路和機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

線粒體是生物發(fā)生合成、脂肪酸氧化和能量代謝的重要場(chǎng)所，KANG等[17]證實(shí)DN時(shí)脂肪酸氧化過(guò)程被抑制，腎小球PGC-1α mRNA表達(dá)明顯減少，而PPAR與PGC-1α是影響脂肪酸吸收氧化相關(guān)蛋白轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵[18]。OPA1蛋白及用于編碼線粒體的融合基因MFNl、MFN2作為PGC-1α的重要下游因子對(duì)線粒體功能維持至關(guān)重要，研究表明PGC-1α表達(dá)下降可導(dǎo)致線粒體功能障礙和結(jié)構(gòu)異常，同時(shí)生成過(guò)量的活性氧作用于生物膜及大分子物質(zhì)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，從而促進(jìn)DN的進(jìn)展。丁酸鹽可在一定條件下活化AMPK，AMPK具有促進(jìn)下游因子PGC-1α合成的功能，從而調(diào)控PGC-1α及其下游信號(hào)因子進(jìn)而影響線粒體的功能，且這種效應(yīng)可以被AMPK抑制劑Compound C抑制[19]。為了研究丁酸鹽對(duì)線粒體功能的影響，進(jìn)一步分析了線粒體內(nèi)融合基因表達(dá)，本研究發(fā)現(xiàn)PGC-1α mRNA和線粒體融合基因MFN2和OPA1 mRNA表達(dá)在DN小鼠中受到抑制，而在丁酸鹽治療組中小鼠PGC-1α、MFN2和OPA1 mRNA表達(dá)抑制得到一定程度的緩解。推測(cè)丁酸鹽可能是通過(guò)AMPK/PGC-1α信號(hào)通路恢復(fù)損傷線粒體的功能，增加線粒體代謝產(chǎn)物，干預(yù)機(jī)體代謝，減少腎臟脂肪酸堆積，減輕腎組織損傷。

DN小鼠中普遍存在腸道菌群失衡，主要表現(xiàn)為產(chǎn)丁酸的細(xì)菌的減少，機(jī)體內(nèi)丁酸含量下降，本研究證實(shí)補(bǔ)充外源性的丁酸鹽能抑制DN小鼠炎癥反應(yīng)，促進(jìn)GLP-1R蛋白合成，激活A(yù)MPK信號(hào)通路改善線粒體結(jié)構(gòu)及能量代謝障礙，表明丁酸鈉可作為連接“腸-腎”軸的重要介質(zhì)參與DN發(fā)生發(fā)展，同時(shí)還探究了丁酸鈉對(duì)腎臟起保護(hù)作用的適宜濃度，為治療DN提供新證據(jù)及思路。