何浩 *，梁軍，許銀玉，吳海智，胡艷君，田雄

1.湖南省產(chǎn)商品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院（長(zhǎng)沙 410007）；2.廣電計(jì)量檢測(cè)（湖南）有限公司（長(zhǎng)沙 410000）

泛酸（pantothenic）又名“遍多酸”，又稱維生素B5，是一種水溶性維生素，因?yàn)樵谧匀恢袕V泛存在，故俗稱“泛酸”。泛酸具有右旋光性，對(duì)酸、堿和熱都不穩(wěn)定。泛酸的主要生理功能是構(gòu)成輔酶A和酰基載體蛋白，并通過它們?cè)诖x中發(fā)揮作用，參與體內(nèi)碳水化合物、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)代謝。人類因膳食引起的單純泛酸缺乏癥十分少見，個(gè)別見于嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良及使用代謝拮抗劑的患者，表現(xiàn)為煩躁不安、食欲減退、消化不良、腹痛、疲倦無力、手足麻木和刺痛等。泛酸毒性很低，人體對(duì)其有很好的耐受性，偶爾可產(chǎn)生輕度腹瀉。泛酸在自然界中有廣泛的食物來源，主要是肝、腎、蛋黃、肉類和全谷食品。泛酸的缺乏，可能導(dǎo)致阿爾茨海默癥[1-2]。中國(guó)居民膳食營(yíng)養(yǎng)素參考攝入量速查手冊(cè)（2013版）對(duì)各年齡階段以及孕婦、乳母特殊人群泛酸攝入量給出了具體的建議[3]。GB 10765—2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰兒配方食品》[4]、GB 10766—2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 較大嬰兒配方食品》[5]、GB 10767—2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 較大嬰兒配方食品》[6]、GB 10769—2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒谷類輔助食品》[7]、GB 22570—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 輔助營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充品》[8]、GB 24154—2015《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)食品通則》[9]、GB 25596—2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品通則》[10]、GB 29922—2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品通則》[11]、GB 31601—2015《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 孕婦及乳母營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充品》[12]等食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)泛酸規(guī)定了最小含量或者范圍。文章綜述了檢測(cè)食品中泛酸含量的不同檢測(cè)方法，比較了各自的優(yōu)勢(shì)和不足，也為今后泛酸的檢測(cè)提供借鑒。

1 微生物法

泛酸是植物乳桿菌生長(zhǎng)所必須的營(yíng)養(yǎng)素，在一定控制條件下，將植物乳桿菌液接種至含有試樣液的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)一段時(shí)間后測(cè)定透光率，根據(jù)泛酸含量與透光率的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出試樣中泛酸含量[13]，該方法的優(yōu)點(diǎn)是適用范圍廣、適合于所有食品的檢測(cè)，缺點(diǎn)是檢測(cè)周期長(zhǎng)、過程繁瑣、準(zhǔn)確定量較為困難，不適合大批量樣品的檢測(cè)[14]。AOAC Official Method 992.07《Pantothenic Acid in Milk-Based Infant Formula Microbiological Turbidimetric Method》[15]中規(guī)定了微生物法檢測(cè)食品中泛酸的具體步驟。AOAC Official Method 945.74《Pantothenic Acid in Vitamin Preparations Microbiological Methods》[16]中也規(guī)定了微生物法檢測(cè)食品中泛酸的方法。王晶等[17]比較了新舊國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)微生物法檢測(cè)泛酸含量的差異，結(jié)果表明，新舊方法的結(jié)果精密度接近，泛酸結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。黃鐘標(biāo)等[18]比較了國(guó)標(biāo)微生物法和微孔試劑盒法測(cè)定泛酸的差異，結(jié)果表明，試劑盒法重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高，且相對(duì)于國(guó)標(biāo)法而言，操作步驟簡(jiǎn)單、檢驗(yàn)周期短，可以快速有效地測(cè)定嬰幼兒乳粉中維生素B5的含量。趙平等[19]比較了GB 5009.210—2016第一法微生物法[13]和GB 5413.17—2010第一法微生物法[20]，結(jié)果表明，兩個(gè)國(guó)標(biāo)的微生物法只是提取方法不同，但是兩種方法的精密度都很高，加標(biāo)回收率都能達(dá)到要求。李興霖等[21]結(jié)合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法和試劑盒法的優(yōu)點(diǎn)，建立了一種快速檢測(cè)嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的方法。該方法操作簡(jiǎn)單、方便快捷，準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性好，試驗(yàn)菌株活力穩(wěn)定，不確定因素干擾小，污染少，成本低廉，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。趙平等[22]采用微孔板式微生物法對(duì)嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量進(jìn)行測(cè)定。該方法采用微孔板法將合適濃度的植物乳桿菌液接種至含有試樣液與培養(yǎng)液的無菌微孔板中，培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定吸光度，根據(jù)泛酸含量與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出試樣中泛酸的含量。李全霞等[23]綜述了微生物法測(cè)定水溶性維生素（包括泛酸）的應(yīng)用情況及研究進(jìn)展。田浩等[24]比較了國(guó)標(biāo)法和商品化試劑盒法測(cè)定泛酸含量的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)國(guó)標(biāo)微生物法操作復(fù)雜，方法建立難度大，缺乏經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)成功率較低，建議開發(fā)小型試驗(yàn)儀器提高試驗(yàn)成功率。

2 液相色譜法

Rakua等[25]研究了液相色譜-DAD檢測(cè)器檢測(cè)膳食補(bǔ)充品中9種常見的水溶性維生素。GB/T 22246—2008《保健食品中泛酸鈣的測(cè)定》[26]規(guī)定了營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑類保健食品中泛酸鈣的測(cè)定方法。根據(jù)泛酸鈣溶于水，對(duì)酸和堿不穩(wěn)定，但在中性條件下很穩(wěn)定的特性，試樣中的泛酸鈣用水在超聲波振蕩下提取、定容、離心后上清液過濾膜，用反相C18柱分離，在200 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)，外標(biāo)法定量。曾金林等[27]建立了HPLC法測(cè)定嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)米粉中泛酸含量的方法。樣品加淀粉酶水解后，調(diào)節(jié)pH，加沉淀劑后離心，取上清液分析。用C18柱分離，用DAD檢測(cè)器在200 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)待測(cè)物。Santos等[28]建立了蔬菜中水溶性維生素和脂溶性維生素的連續(xù)提取分析的方法，并測(cè)定了貨架期內(nèi)維生素含量變化的情況。紀(jì)世彬[29]建立了復(fù)合維生素B片中5種維生素的檢測(cè)方法。該方法按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版[30]四部通則0931第三法檢測(cè)，其方法和條件與食品中泛酸檢測(cè)較為相似，因?yàn)楸＝∈称坊|(zhì)沒有食品基質(zhì)復(fù)雜，目標(biāo)物經(jīng)提取后過濾膜即可直接進(jìn)樣分析，不用除雜等過程。杜晶晶等[31]分析了高效液相色譜法測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中泛酸的不確定度分析的方法，該方法考察了國(guó)標(biāo)液相法測(cè)泛酸的不確定因素，確定影響高效液相色譜法測(cè)定嬰幼兒乳粉中泛酸的不確定度來源。結(jié)果表明影響測(cè)定結(jié)果不確定度的因素主要有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合過程2個(gè)方面，提取液定容體積和樣品稱量對(duì)不確定度影響較小。尹爍等[32]建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定乳制品中泛酸和生物素的方法。樣品經(jīng)硫酸鈉沉淀蛋白后，采用C18柱分離，檢測(cè)波長(zhǎng)為200 nm，以保留時(shí)間定性，峰面積定量。林春曉等[33]建立了利用HPLC方法測(cè)定復(fù)方羅布麻片I中包括泛酸在內(nèi)的7種化藥組分的含量的方法，該方法分離度、檢出限和重現(xiàn)性較好，且在儀器上分析時(shí)間僅20 min。

3 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

Gentili等[34]建立了電噴霧-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法來測(cè)定食品中水溶性維生素。該方法在正離子模式下，不到10 min就完成所有目標(biāo)物的分離和檢測(cè)。泛酸鈣的檢出限可以達(dá)到納克級(jí)別，在前處理過程中避免分析物暴露在光、空氣和熱環(huán)境中是保證回收率的關(guān)鍵。Gill等[35]建立了嬰幼兒奶粉和液態(tài)奶中泛酸的檢測(cè)方法。該方法13C153N1-泛酸鈣作為內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)法定量，消除了前處理過程對(duì)回收率造成的影響。Phinney等[36]建立了穩(wěn)定同位素稀釋/液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，可以同時(shí)測(cè)定嬰兒配方奶粉中5種脂溶性維生素的方法。宮明明[37]研究了SPE-UPLC-MS/MS分析植物運(yùn)動(dòng)型飲料中多種水溶性維生素含量。該方法采用Oasis HLB固相萃取柱凈化，取得了較好的回收率。任強(qiáng)強(qiáng)等[38]建立了UHILIC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定復(fù)方三維右旋泛酸鈣糖漿中5種維生素的含量。該方法采用Waters ACQUITYBEH-HILIC Amide色譜柱，多種維生素在5 min內(nèi)的得到有效分離，利用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）定量。薛霞等[39]建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，來測(cè)定蜂蜜中五種水溶性維生素含量。該方法采用HLB固相萃取柱凈化，HSS T3色譜柱分離，電噴霧離子源正離子模式，多方應(yīng)模式檢測(cè)，外標(biāo)法定量。渠巖等[40]研究了超高效液相色譜-同位素稀釋質(zhì)譜法測(cè)定配方奶粉中泛酸。該方法采用高速離心除雜，HSS T3色譜柱分離，內(nèi)標(biāo)法定量。孫宇等[41]研究了超高效液相色譜-同位素稀釋質(zhì)譜法測(cè)定食品中的泛酸。黎小蘭等[42]研究了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)特殊醫(yī)學(xué)配方食品中泛酸含量，特殊醫(yī)學(xué)配方食品基質(zhì)復(fù)雜，該方法采用酸堿沉淀法沉淀蛋白質(zhì)后上機(jī)檢測(cè)，取得了較好的效果。

4 其他分析方法

Kristel等[43]研究了穩(wěn)定同位素稀釋-LC/MS-TOF法測(cè)定營(yíng)養(yǎng)酵母中多種維生素。該方法比較了不同酸提取方法的優(yōu)缺點(diǎn)。胡雯雯[44]研究了定量毛細(xì)管電泳分析復(fù)合維生素B片中5種維生素。李丹鳳等[45]研究了膠束電動(dòng)色譜法測(cè)定五維他口服溶液中維生素B1，B2，B6，煙酰胺，泛酸鈣與苯甲酸鈉。孫叢叢等[46]比較了國(guó)標(biāo)微生物法和試劑盒法的差異。研究顯示，兩種檢測(cè)方法對(duì)嬰幼兒乳粉泛酸檢測(cè)無明顯差異。試劑盒法方便、快捷，檢測(cè)周期短，更適于企業(yè)實(shí)驗(yàn)室大量實(shí)驗(yàn)樣本的檢測(cè)。

5 結(jié)語與展望

泛酸是嬰幼兒食品和保健食品中的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。通過比較檢測(cè)泛酸含量的不同方法發(fā)現(xiàn)：微生物法是發(fā)展最早、適用范圍最廣的方法，但由于前處理復(fù)雜、步驟繁瑣、檢測(cè)周期長(zhǎng)且結(jié)果重現(xiàn)性不好，不利于大批量樣品的檢測(cè)；液相色譜法前處理較為簡(jiǎn)單，設(shè)備普及率較高，適合于基質(zhì)較為簡(jiǎn)單的普通食品和保健食品的檢測(cè)；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢出限低，抗干擾能力強(qiáng)，適合大批量的樣品檢測(cè)，特別適合特殊醫(yī)用配方奶粉等基質(zhì)較為復(fù)雜的樣品的檢測(cè)，但缺點(diǎn)是儀器昂貴、設(shè)備普及率不高；試劑盒法對(duì)前處理要求低，處理簡(jiǎn)單，檢測(cè)成本低，可大批量檢測(cè)，但檢測(cè)結(jié)果需經(jīng)儀器方法進(jìn)一步驗(yàn)證。因此，應(yīng)根據(jù)檢測(cè)需求和檢測(cè)條件科學(xué)選擇檢測(cè)方法。