王 誠，董桂紅，何榮彥，范秋蘋，翟桂玉，劉德娟

（1.山東健源生物科技有限公司，山東泰安 271000；2.山東省畜牧總站，山東濟南 250100；3.泰安市動物疫病預(yù)防控制中心，山東泰安 271000）

近年來隨著人民生活品質(zhì)不斷提升，我國對牛羊肉和奶制品等畜產(chǎn)品的需求量大幅度增長，給畜牧業(yè)帶來了巨大的挑戰(zhàn)。畜牧業(yè)飼料主要以粗飼料和精料為主，目前飼料供給不足，粗飼料的產(chǎn)量和質(zhì)量急需提高，玉米、大豆等大量依賴進(jìn)口，飼料價格上漲，養(yǎng)殖成本增加，這些嚴(yán)重制約了畜牧業(yè)的生產(chǎn)與發(fā)展。因此充分開發(fā)利用我國的飼草資源和木本植物資源，研究新型飼料資源已成為畜牧業(yè)飼料研究的一大課題[1,2]。

紫花苜蓿是多年生飼草作物，因適應(yīng)能力強，耐寒耐旱，分布非常廣泛，而且產(chǎn)草量大，粗蛋白、干物質(zhì)等營養(yǎng)成分較高，因此成為重要的青貯原料[3]。但苜蓿在大規(guī)模應(yīng)用時有以下兩個限制因素：①傳統(tǒng)牧草加工過程中，采用曬干或烘干方法會導(dǎo)致營養(yǎng)成分大量流失，飼用價值降低，而且費時費力，增加人工和成本[4]；②苜蓿本身可溶性糖含量較低、含水量高、緩沖能高、表面附著乳酸菌數(shù)量少，單獨青貯時易造成好氧菌大量繁殖，腐敗變質(zhì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，難以制備優(yōu)質(zhì)青貯飼料。因此苜蓿青貯時必須要采用一定的青貯技術(shù)，眾多研究表明采用混合青貯的方法能顯著提高發(fā)酵品質(zhì)，比如在苜蓿青貯過程中添加糖蜜、玉米粉、酒糟或可溶性糖含量較高的禾本科植物等，或者在苜蓿原料中添加對發(fā)酵有利的青貯添加劑，如乳酸菌、纖維素酶、甲酸等來制備優(yōu)質(zhì)的青貯飼料[3-5]。

飼料桑是多年生木本植物，與“牧草之王”的紫花苜蓿相比，具有粗蛋白、碳水化合物含量高、纖維素含量低、氨基酸種類豐富的特點，同時含有谷甾醇、異槲皮苷、黃酮類等多種生物活性物質(zhì)，具有抗菌消炎、提高畜禽動物免疫力等功能[6,7]。因此桑葉可用來制備優(yōu)質(zhì)青貯飼料，青貯后不僅便于儲存，還可以大幅度降低桑葉中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，顯著提高桑葉青貯的營養(yǎng)品質(zhì)，有利于畜禽的消化和吸收[8]。

因此，該試驗通過研究不同比例紫花苜蓿與飼料桑制備的混合青貯在發(fā)酵指標(biāo)和營養(yǎng)成分上的差異和變化，篩選出紫花苜蓿與飼料桑制備優(yōu)質(zhì)混合青貯的適宜比例，為擴大苜蓿與飼料桑青貯的應(yīng)用，緩解畜牧業(yè)飼料短缺，尋找新型飼料資源提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

布氏乳桿菌和植物乳桿菌均由山東健源生物科技有限公司自主分離，經(jīng)發(fā)酵、冷凍干燥制得高活性菌粉，二者混合比例為1∶1，活菌數(shù)為2.0×1010CFU/g。

試驗時間為：2021 年7 月5 日至2022 年8 月19日，苜蓿與飼料桑種植于山東省泰安市管理區(qū)試驗地，將飼料桑的枝葉與刈割后的苜蓿晾曬24h，用鍘草機將其切碎至3～5cm 備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 青貯飼料制備

該研究采用單因素試驗，紫花苜蓿與飼料桑按照鮮重比10∶0（CK 組)、7∶3（A 組)、5∶5（B 組)、3∶7（C 組)混合，共計4 組，每組重復(fù)3 次。將1kg 待青貯原料與1.0×107CFU/g 復(fù)合乳酸菌混合均勻，裝入規(guī)格為24cm×40cm 的聚乙烯袋中，壓實抽真空后封口，置于室溫陰涼處厭氧發(fā)酵45d 后開袋，現(xiàn)場檢測混合青貯的感官品質(zhì)并進(jìn)行發(fā)酵指標(biāo)、營養(yǎng)成分測定。

1.2.2 青貯發(fā)酵指標(biāo)及營養(yǎng)成分的測定

（1)青貯飼料感官評價

依據(jù)德國農(nóng)業(yè)協(xié)會（DLG)青貯感官相關(guān)的評定標(biāo)準(zhǔn)，對紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A的色澤、質(zhì)地和氣味進(jìn)行評定分級，并分為優(yōu)、良、中、下4 個等級[9]。

（2)青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)測定

采用精密pH 計測定混合青貯的pH，苯酚-次氯酸比色法測定氨態(tài)氮含量，計算氨態(tài)氮/總氮，采用高效液相色譜儀檢測乳酸含量，氣相色譜儀檢測乙酸、丙酸和丁酸含量[10]。

（3)青貯飼料營養(yǎng)成分測定

參照《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》相關(guān)檢測方法，分別采用65℃烘干48h 方法和凱氏定氮法檢測混合青貯中干物質(zhì)和粗蛋白含量[11]。采用范氏法測定中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量[10,12]。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)通過Excel 2010 初步整理并計算平均值與標(biāo)準(zhǔn)差，再使用SPSS 26.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA)和多重比較（Duncan′s)，P＜0.05 表示差異顯著[12]。

2 結(jié)果

2.1 紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A感官評價

由表1 可知，各試驗組青貯的色澤、質(zhì)地和氣味各方面表現(xiàn)良好，感官等級為優(yōu)等，A 組的感官評分最高為19 分，而CK 組苜蓿單獨青貯質(zhì)地略黏稠，部分莖葉結(jié)構(gòu)受損，有微弱的丁酸臭味。說明紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A能夠顯著提高青貯整體感官品質(zhì)，且紫花苜蓿與飼料桑比例為7∶3 時混合青貯感官評分最高。

表1 紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A的感官評定

2.2 紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A的發(fā)酵品質(zhì)

由表2 可知，與紫花苜蓿單獨青貯相比，三組混合青貯的乳酸、乙酸含量顯著增加（P＜0.05)，pH、丁酸、氨態(tài)氮/總氮含量顯著降低（P＜0.05)。其中乳酸含量分別增加了0.58%、0.53%和0.46%；乙酸含量分別增加了0.59%、0.55%和0.47%；pH 分別降低了0.39、0.36 和0.26；氨態(tài)氮/總氮含量分別降低了1.25%、1.15%和0.97%；A 組的丁酸含量未檢出，B組和C 組的丁酸含量分別降低了0.08%和0.05%；A組和B 組的丙酸含量分別增加了0.11%和0.10%，與CK 組差異顯著（P＜0.05)，C 組混合青貯的丙酸含量增加了0.08%，與CK 組差異不顯著。以上數(shù)據(jù)表明，紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A的發(fā)酵品質(zhì)要顯著優(yōu)于紫花苜蓿單獨青貯，當(dāng)紫花苜蓿與飼料桑比例為7∶3時混合青貯發(fā)酵品質(zhì)最好。

2.3 紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A營養(yǎng)成分分析

由表3 可知，隨飼料桑添加比例的增加，A 組、B 組與C 組混合青貯的粗蛋白含量顯著高于CK 組（P＜0.05)，干物質(zhì)、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量顯著低于CK 組（P＜0.05)。其中三組混合青貯的粗蛋白含量分別提高了2.95%、3.32%和3.59%；干物質(zhì)含量分別降低了2.86%、6.44%和9.48%；中性洗滌纖維含量分別降低了4.12%、4.91 和5.65%；酸性洗滌纖維含量分別降低了3.47%、4.43%和4.95%。三組混合青貯之間的粗蛋白含量無顯著性差異，C 組的干物質(zhì)、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量顯著低于A組（P＜0.05)。結(jié)果表明采用不同比例紫花苜蓿與飼料桑制備的混合青貯各營養(yǎng)成分有不同程度的變化，添加飼料桑能夠明顯改善混合青貯的營養(yǎng)品質(zhì)。

表3 紫花苜蓿與飼料桑混合青貯的營養(yǎng)成分測定結(jié)果

3 討論

3.1 紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A對感官品質(zhì)的影響

紫花苜蓿與飼料桑混合青貯的感官品質(zhì)主要采用物理學(xué)評價方法，對色澤、質(zhì)地和氣味三個方面進(jìn)行評分。從試驗結(jié)果看，試驗組的青貯感官品質(zhì)要顯著優(yōu)于苜蓿單獨青貯，可能原因是紫花苜蓿中可溶性糖含量低，單獨青貯時乳酸菌發(fā)酵進(jìn)程較慢，導(dǎo)致有害菌增殖，引起部分青貯腐敗，也證明了紫花苜蓿難以單獨青貯的特點。添加飼料桑后，青貯中可溶性糖含量有所提高，乳酸菌快速繁殖使pH 降低，抑制了有害菌的增殖，從而改善混合青貯的整體感官品質(zhì)。

3.2 紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A對發(fā)酵品質(zhì)的影響

該研究主要將pH 值、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸和氨態(tài)氮含量作為衡量青貯發(fā)酵品質(zhì)的指標(biāo)，pH 值越低說明青貯發(fā)酵品質(zhì)越好，乳酸是降低pH 的主要物質(zhì)，乙酸有利于降低pH 且延長有氧穩(wěn)定性，少量丙酸能有效抑制霉菌和酵母菌繁殖。該研究中除CK組，其余各組的pH 均在4.2 以下，表明青貯發(fā)酵效果較好。各試驗組的乳酸和乙酸含量顯著高于CK組，丁酸含量顯著低于CK 組，這與萬江春、李龍興等[13,14]的研究結(jié)果基本一致，主要因為飼料桑中可溶性糖含量較高，能夠促進(jìn)乳酸菌快速繁殖，植物乳桿菌大量產(chǎn)生乳酸，布氏乳桿菌生成乳酸和乙酸等物質(zhì)，有效抑制梭菌、酵母菌等繁殖活動[15,16]。

氨態(tài)氮含量用來指示青貯中粗蛋白質(zhì)的分解程度，其含量越低代表蛋白分解越少，發(fā)酵品質(zhì)越好[9,17]。各試驗組的氨態(tài)氮含量顯著低于CK 組，主要原因是混合青貯中乳酸菌迅速繁殖，產(chǎn)生乳酸降低了pH，抑制了梭菌、酵母菌、霉菌的增殖和蛋白酶的活性，減少了粗蛋白的分解[18]。但隨著飼料桑添加比例增大，青貯中粗蛋白含量升高，氨態(tài)氮的生成量會相對增多，所以C 組的氨態(tài)氮含量顯著高于A 組，這與付錦濤等[19]的研究結(jié)果一致。

3.3 紫花苜蓿與飼料?；旌锨噘A對營養(yǎng)成分的影響

各試驗組的CP 含量顯著高于CK 組，而干物質(zhì)、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量均顯著低于CK組，隨著飼料桑添加比例增大，混合青貯的干物質(zhì)、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量逐漸降低，粗蛋白含量逐漸上升，這與眾多混合青貯研究的結(jié)果一致[20-22]，原因是飼料桑相對于紫花苜蓿具有粗蛋白含量高、纖維含量低的特點。因此，采用紫花苜蓿和飼料?；旌锨噘A，既解決了紫花苜蓿單獨青貯效果不佳的問題，又能改善混合青貯營養(yǎng)品質(zhì)，提高青貯飼料的消化率和利用率。

4 結(jié)論

將紫花苜蓿與飼料桑進(jìn)行混合青貯，顯著提高了青貯飼料的整體感官品質(zhì)和發(fā)酵品質(zhì)，明顯改善了混合青貯的營養(yǎng)品質(zhì)，綜合考慮混合青貯的發(fā)酵品質(zhì)和營養(yǎng)品質(zhì)，以苜蓿與飼料桑鮮重比7∶3 為宜。