肖綺雯 石永杰 周強(qiáng) 黃思聰 康嘉樂 嘉紅云 彭永正

(1. 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部，廣東 廣州 510280；2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510260；3.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院輸血科，廣東 廣州 510280)

根據(jù)GLOBOCAN 2020數(shù)據(jù)，全球原發(fā)性肝癌年新發(fā)病數(shù)達(dá)905,677人，年新增死亡病例830,180人，在全球發(fā)病率中排名第五，在男性死亡率中排名第二；肝細(xì)胞肝癌(liver hepatocellular carcinoma, LIHC)是原發(fā)性肝癌的主要類型[1]。LIHC患者預(yù)后差的主要原因是復(fù)發(fā)率高，且腫瘤干細(xì)胞(Cancer stem cells, CSCs)的存在被認(rèn)為是肝癌復(fù)發(fā)的根本原因[2]。絲氨酸精氨酸蛋白激酶1(Serine arginine protein kinase 1，SRPK1)是一種mRNA前體的剪接因子，在睪丸癌、乳腺癌、前列腺癌和黑色素瘤中高表達(dá)，并促進(jìn)結(jié)腸癌、卵巢癌細(xì)胞的藥物抗性[3]，在非小細(xì)胞肺癌中能促進(jìn)CSCs表型的積累[4]。此前，我們發(fā)現(xiàn)高表達(dá)SRPK1與肝細(xì)胞癌發(fā)展相關(guān)[5]，但其機(jī)制尚未完全闡明[6]。本研究中，我們進(jìn)一步通過調(diào)控SRPK1在肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞的表達(dá)，研究SRPK1對(duì)HepG2細(xì)胞腫瘤干性影響，為以SRPK1為靶點(diǎn)的肝細(xì)胞癌治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料 HepG2細(xì)胞于廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室凍存，常規(guī)方法復(fù)蘇凍存細(xì)胞，采用體積分?jǐn)?shù)5%胎牛血清、100 mg/L鏈霉素、100 mg/L青霉素的DMEM培養(yǎng)液，置于37℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器與試劑 胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶、嘌呤霉素(美國Gibco公司)，表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、胰島素(美國PeproTech公司)，TBST緩沖液(美國Thermo Fisher公司)，ABI7500 Fast實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國applied biosystems公司)，Epics ALTRA流式細(xì)胞儀(美國Beckman Coulter公司)，桌上離心機(jī)(德國sigma公司)。B27、DMEM/F12培養(yǎng)基、總RNA抽提試劑Trizol、Optim-MEM培養(yǎng)基、轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000(美國Invitrogen公司)，反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green qPCR Master Mix(加拿大Fermentas公司)。兔抗人SRPK1(美國Abcam公司)，兔抗人GAPDH(美國Proteintech公司)，HRP-鼠二抗/HRP-兔二抗(美國Merck公司)。牛血清蛋白、熒光染料Hoechst33342、維拉帕米、碘化丙啶(美國Sigma-Aldrich公司)。調(diào)節(jié)SRPK1表達(dá)相關(guān)質(zhì)粒由廣州艾基生物技術(shù)有限公司提供，重組基因質(zhì)粒、干擾片段引物設(shè)計(jì)、合成和測序由廣州艾基生物技術(shù)完成。

1.2.2 生物信息學(xué)分析 從GEPIA2 (http://gepia2.cancer-pku.cn/)獲得TCGA中關(guān)于LIHC的數(shù)據(jù)，得到肝癌患者例數(shù)為369例，正常對(duì)照例數(shù)50例。以|Log2FC| Cutoff=0.56，p-value Cutoff=0.01為臨界參考，分析SRPK1表達(dá)在LIHC組織及正常樣本中的差異。分析SRPK1表達(dá)在LIHC患者腫瘤分期中的差異性。以肝癌患者腫瘤組織中SRPK1表達(dá)的中位數(shù)為Cutoff值，將患者分為高、低表達(dá)兩組，用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，采用 Log-rank 檢驗(yàn)比較兩組之間的生存差異。運(yùn)用 TIMER (http://cistrome.org/TIMER/)分析SRPK1表達(dá)與LIHC組織中與免疫細(xì)胞(B細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和樹突細(xì)胞)浸潤豐度的相關(guān)性。采用GSEA預(yù)測可能受SRPK1調(diào)控的信號(hào)機(jī)制。

1.2.3 過表達(dá)SRPK1的HepG2細(xì)胞株構(gòu)建 轉(zhuǎn)染前24 h，在500 μL無雙抗完全培養(yǎng)基中接種0.5～2×105個(gè)細(xì)胞/孔，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞融合度為80%～90%。按50 μL Opti-MEM稀釋0.8 μg質(zhì)粒(pcDNA3.1-HOMO-SRPK1及pcDNA3.1-HOMO-Vector)，50 μL Opti-MEM 稀釋2 μL LipofectamineTM2000，混合溶液，輕輕吹吸3～5次混勻，室溫靜置20 min。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成后立即加入到24孔細(xì)胞板中，100 μL/孔，37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6 h左右，換成含5%胎牛血清的培養(yǎng)基，37℃，5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)。如此連續(xù)轉(zhuǎn)染3 d，每天上下午各1次，共6次。轉(zhuǎn)染結(jié)束后(第4天)用0.5 μg/mL嘌呤霉素篩選細(xì)胞，2周后待細(xì)胞生長穩(wěn)定、無明顯的死亡細(xì)胞時(shí)收獲細(xì)胞。以轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-HOMO-SRPK1的細(xì)胞株為SRPK1組，pcDNA3.1-HOMO-Vector空白轉(zhuǎn)染細(xì)胞為Vector組。

1.2.4 干擾表達(dá)SRPK1的HepG2細(xì)胞株構(gòu)建 HOMO-SRPK1-shRNA序列為GAACAACACATTAGCCAACTT。培養(yǎng)皿與先用0.1%明膠鋪底，37℃ 孵箱靜置 30 mim 后，將細(xì)胞數(shù)約 3.5×106個(gè)的293T細(xì)胞鋪于含明膠的培養(yǎng)皿上培養(yǎng)24 h后轉(zhuǎn)染。采用PIK 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝系統(tǒng)。20 μg的pLKO.1-U6-EF1a-copGFP-T2A-puro-SRPK1-shRNA與20 μg包裝質(zhì)粒PIK混勻分別加入2 M CaCl2、380 μL TE緩沖液，充分混勻后，向管子中繼續(xù)逐滴加入480 μL HEPES緩沖液，將混合液分散滴入培養(yǎng)基中，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。6 h后用SA緩沖液輕柔洗滌細(xì)胞2次，加入含5%FBS的 DMEM培養(yǎng)基。換液后置于細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染2～3 d后，每隔6 h收取一次病毒液，儲(chǔ)存于-80℃冰箱，連續(xù)收取2 d。HepG2細(xì)胞鋪板步驟同1.2.3，解凍病毒液，向3 mL病毒液中加入 3 mL 5% FBS DMEM培養(yǎng)基、6 μL 聚凝胺(1∶1000)，混勻，吸掉細(xì)胞培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入混好的病毒液3 mL繼續(xù)培養(yǎng)4 h，換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)2 h，接著繼續(xù)加入病毒液繼續(xù)感染細(xì)胞，4 h后換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜。連續(xù)感染3 d，每天上、下午各1次，共6次，篩選細(xì)胞步驟同1.2.3。以轉(zhuǎn)染shRNA的細(xì)胞株為shRNA組，Scramble空白轉(zhuǎn)染細(xì)胞為Scramble組。

1.2.5 Western blot檢測各組HepG2細(xì)胞SRPK1蛋白水平 用蛋白裂解液裂解轉(zhuǎn)染后的各組細(xì)胞，提取總蛋白。BCA法進(jìn)行蛋白定量，按30 μg/孔蛋白進(jìn)行10% SDS-PAGE凝膠電泳，濕轉(zhuǎn)PVDF膜后用5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，一抗(兔抗人SRPK1)4℃封閉過夜，然后用TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min，加二抗(1∶2000)室溫孵育1 h后，TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min，用ECL化學(xué)發(fā)光試劑曝光。

1.2.6 體外成球?qū)嶒?yàn) 配制干細(xì)胞培養(yǎng)基50 mL：50x B27 1 mL、100 μg/μL表皮生長因子 10 μL、100 μg/μL成纖維細(xì)胞生長因子 10 μL、10% 牛血清蛋白2 mL、1 mg/mL胰島素 250 uL、DMEM/F12 46.73 mL。SA緩沖液清洗細(xì)胞、消化、干細(xì)胞培養(yǎng)基垂懸、計(jì)數(shù)，以約2×103個(gè)/孔劑量接種HepG2細(xì)胞于低吸附6孔板，每孔約加總量2mL干細(xì)胞培養(yǎng)基，第7天計(jì)算細(xì)胞SFE(SFE=直徑大于75 μm的細(xì)胞球個(gè)數(shù)/2000×100%)。

1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測SP細(xì)胞比例 用胰蛋白酶消化各組HepG2細(xì)胞，在含2%胎牛血清的DMEM中以1×106個(gè)細(xì)胞/mL重懸，然后在37℃預(yù)孵育30 min。加入熒光染料Hoechst33342，終濃度為6 μg/mL；其中空白對(duì)照組再加入維拉帕米，終濃度50 μmol/mL。37℃避光水浴90 min，每10 min旋轉(zhuǎn)一次。置冰上10 min終止染色，計(jì)數(shù)細(xì)胞；離心后，用4℃含2% 胎牛血清的 PBS洗滌細(xì)胞并重懸浮，將分選組調(diào)整濃度到1×107/mL以上，用2 μg/mL碘化丙啶來識(shí)別死亡細(xì)胞，400目紗網(wǎng)過濾細(xì)胞。上流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分析。Hoechst染料在375nm紫外光激發(fā)，450/40帶通收集藍(lán)光，695/40帶通下收集紅光。碘化丙啶在488 nm藍(lán)光處激發(fā)，575/26帶通下收集紅光。以Hoechst染料紅光值為X軸，Hoechst染料藍(lán)光值為Y軸作二維散點(diǎn)圖，將低Hoechst紅及低Hoechst藍(lán)且維拉帕米組缺失的區(qū)域設(shè)定為SP細(xì)胞的閾值，數(shù)據(jù)采用Summit 5.2軟件進(jìn)行分析。

1.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測干性基因mRNA相對(duì)表達(dá)量 采用TRizol試劑盒提取各組細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。采用SYBR Green qPCR Master Mix試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，反應(yīng)體系共10 μL，包括上游引物(20 μmol/L)0.25 μL，下游引物(20 μmol/L)0.25 μL，2×SYBRGreenmix 5 μL，cDNA 0.2 μL，ddH2O 4.3 μL?；靹蚝笏矔r(shí)離心，置PCR儀中反應(yīng)。引物序列見表1。反應(yīng)條件：95℃ 60 s；94℃ 30 s，50℃30 s，72℃ 45 s，40個(gè)循環(huán)；72℃10 min。4℃保存。以GAPDH為內(nèi)參，檢測癌細(xì)胞干性基因Nanog、Oct4、CD133、Bmi1的mRNA相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果以2-△△Ct表示。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列表Table 1 Primers sequences of Real-time PCR

2 結(jié)果

2.1 SRPK1與LIHC疾病進(jìn)展及免疫細(xì)胞浸潤豐度的關(guān)系 根據(jù)從 GEPIA2獲得的數(shù)據(jù)提示，LIHC組織中SRPK1表達(dá)明顯升高(P<0.01)，見圖1A。該表達(dá)在期癌癥的各個(gè)分期中也存在差異(F=3.59，P=0.0139)，見圖1B。高表達(dá)SRPK1患者的生存率明顯低于低表達(dá)患者(HR=1.5，P=0.024)，見圖1C。在LIHC組織中，SRPK1的表達(dá)水平與B細(xì)胞(r=0.318,P<0.001)、CD8+T細(xì)胞(r=0.159,P=0.003)、CD4+T(r=0.317,P<0.001)、巨噬細(xì)胞(r=0.396,P<0.001)、中性粒細(xì)胞(r=0.364,P<0.001)和樹突細(xì)胞(r=0.338,P<0.001)明顯相關(guān)，見圖1D。

2.2 調(diào)節(jié)HepG2細(xì)胞內(nèi)SRPK1蛋白表達(dá) 經(jīng)廣州艾基生物技術(shù)公司測序驗(yàn)證，質(zhì)粒序列與基因庫一致。我們構(gòu)建了SRPK1過表達(dá)的穩(wěn)定株和抑表達(dá)穩(wěn)定株，Western Blot結(jié)果所示， SRPK1組SRPK1蛋白相對(duì)表達(dá)量高于Vector組(t=10.81，P<0.01)，shRNA組蛋白相對(duì)表達(dá)量低于Scramble組(t=10.81，P<0.01)，見圖2。我們所構(gòu)建的細(xì)胞株能夠穩(wěn)定地過表達(dá)或者抑表達(dá)SRPK1的表達(dá)，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖2 調(diào)節(jié)HepG2細(xì)胞SRPK1蛋白表達(dá)Figure 2 Regulation of SRPK1 expression in HepG2 cells注：A.重組基因質(zhì)粒圖譜；B.shRNA干擾基因質(zhì)粒圖譜；C.重組基因、shRNA測序驗(yàn)證；D.WB驗(yàn)證HepG2細(xì)胞SRPK1蛋白表達(dá)。①P<0.01

2.3 SRPK1對(duì)HepG2細(xì)胞干性的影響 SRPK1組SFE高于Vector組(t=9.35，P<0.01)，shRNA組低于Scramble組(t=3.01，P=0.04)，見圖3A。SRPK1組SP細(xì)胞比例高于Vector組(t=7.72，P<0.01)，shRNA組SP細(xì)胞比例低于Scramble組(t=5.22，P<0.01)，見圖3B。體外成球能力和SP細(xì)胞比例是腫瘤細(xì)胞干性表型的重要體現(xiàn)。結(jié)果揭示SRPK1參與HepG2細(xì)胞腫瘤干性調(diào)節(jié)，過表達(dá)SRPK1基因顯著提高了HepG2細(xì)胞的干性特征。

圖3 SRPK1對(duì)HepG2細(xì)胞干性的影響Figure 3 The effect of SRPK1 on tumor stemness in HepG2 cells注：A.各組細(xì)胞體外成球能力；B.各組SP細(xì)胞比例。①P<0.01，② P<0.05

2.4 SRPK1對(duì)HepG2細(xì)胞干性相關(guān)基因的影響 SRPK1組Nanog、Oct4、CD133、Bmi1 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于Vector組(P<0.05)，Scramble組高于shRNA組(P<0.05)，見圖4。結(jié)果表明HepG2細(xì)胞的4個(gè)干性標(biāo)志基因受SRPK1表達(dá)調(diào)節(jié)，其中變化最大的基因?yàn)锽mi1。

圖4 SRPK1對(duì)HepG2細(xì)胞干性基因的影響Figure 4 The effect of SRPK1 on tumor stemness relative genes in HepG2 cells

2.5 SRPK1可能促進(jìn)HepG2細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化 目前，有報(bào)道稱Wnt/β-catenin通路是誘導(dǎo)CSC表型的積累的關(guān)鍵途徑。用GSEA軟件分析了肝癌數(shù)據(jù)庫中SRPK1的表達(dá)可能調(diào)控的信號(hào)機(jī)制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SRPK1表達(dá)在Wnt/β-catenin通路活化的樣本中高富集(P<0.05)，見圖5。

圖5 SRPK1與Wnt/β-catenin通路的相關(guān)性Figure 5 Correlation of SRPK1 and Wnt/β-catenin pathway activation

3 討論

LIHC仍然是目前一個(gè)嚴(yán)重的世界健康問題，高復(fù)發(fā)率是其治療的重大挑戰(zhàn)[7]；新的治療靶點(diǎn)和標(biāo)志物一直在不停研發(fā)當(dāng)中[8-9]。目前學(xué)界對(duì)于促癌基因推動(dòng)細(xì)胞癌變的作用主要集中研究6種能力：CSCs表型的積累，細(xì)胞增殖，化療敏感性，逃避程序性死亡，組織侵襲和轉(zhuǎn)移，以及持續(xù)的血管生成[6]。CSCs是存在于腫瘤組織中的一小部分細(xì)胞亞群，具有自我更新以及多向分化潛能等干細(xì)胞特性。SP細(xì)胞可以有效地作為鑒別肝癌CSCs的標(biāo)志物，并通過上調(diào)干性基因和腫瘤形成來啟動(dòng)腫瘤發(fā)生，肝癌細(xì)胞中SP細(xì)胞越多，其轉(zhuǎn)移能力和腫瘤形成能力越強(qiáng)[10-12]。肝CSCs促進(jìn)肝細(xì)胞癌高侵襲性、耐藥、易復(fù)發(fā)、易轉(zhuǎn)移、預(yù)后差等惡性特點(diǎn)[13]，因此，直接靶向肝CSCs被認(rèn)為是改善LIHC患者預(yù)后的一種有效的治療策略[2,14-15]。SRPK1是剪接因子蛋白激酶家族成員之一，是一類保守的真核激酶，能使絲氨酸/精氨酸蛋白磷酸化，刺激mRNA前體的可變剪接加工過程，并通過調(diào)控哺乳動(dòng)物胚胎干細(xì)胞的泛素信號(hào)通路，確保了神經(jīng)發(fā)育基因表達(dá)的正確調(diào)控[16]。調(diào)節(jié)SRPK1表達(dá)可通過NF-kappaB通路有效改善結(jié)腸癌的化療耐藥[17]，以SRPK1作為靶點(diǎn)的方案被證明對(duì)白血病治療有效[18]，特異性抑制SRPK1抗癌藥物的開發(fā)已取得一定進(jìn)展[19]。在既往對(duì)SRPK1促瘤能力的研究中發(fā)現(xiàn)，SRPK1可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖[20]。本研究通過對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，結(jié)果顯示SRPK1在LIHC組織中表達(dá)顯著高于正常組織，高表達(dá)SRPK1患者總生存率顯著低于低表達(dá)患者。同時(shí)，通過TIMER數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)SRPK1表達(dá)與LIHC組織中多種免疫細(xì)胞浸潤正相關(guān)。LIHC組織中腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞通常呈高浸潤狀態(tài),且浸潤水平與多項(xiàng)臨床病理特征和預(yù)后密切相關(guān)[21]。結(jié)果再次證明SRPK1在HCC中與腫瘤發(fā)展及患者的不良預(yù)后高度相關(guān)[5]。

既往研究報(bào)道，SRPK1能促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌腫瘤干細(xì)胞表型的獲得[4]，也是多種消化系統(tǒng)腫瘤的致癌基因和潛在的治療靶點(diǎn)，但SRPK1對(duì)肝癌細(xì)胞干性表型的影響目前缺乏報(bào)道[6]。為了探討SRPK1對(duì)肝癌細(xì)胞腫瘤干性的影響，課題組通過前期研究[5]選取中等表達(dá)SRPK1的HepG2細(xì)胞，構(gòu)建了不同SRPK1表達(dá)的細(xì)胞模型。通過一系列體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，過表達(dá)SRPK1明顯增強(qiáng)HepG2細(xì)胞在體外的成球能力，也增加了癌細(xì)胞群中SP+細(xì)胞的比例，而在抑制SRPK1表達(dá)后則觀察到相反的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。Nanog和Oct4是干細(xì)胞自我更新及保持未分化特性的關(guān)鍵因子，具有使終端分化細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期進(jìn)行增殖的能力[22]。CD133高表達(dá)可明顯提高腫瘤細(xì)胞的成球能力，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸和對(duì)抗程序性凋亡而獲得更明顯的干細(xì)胞表型[23]。Bmi1基因參與肝癌細(xì)胞干性功能的維持[24]。我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)SRPK1會(huì)促使HepG2細(xì)胞Nango、Oct4、CD133以及Bmi1的表達(dá)增高，而抑制SRPK1表達(dá)后，4個(gè)腫瘤干性基因表達(dá)相應(yīng)降低。

Wnt/β-catenin通路的過度活化可以直接促進(jìn)腫瘤的干性獲得、耐藥及免疫逃逸[25]，Gong等[4]對(duì)非小細(xì)胞肺癌研究指出，Wnt/β-catenin通路是SRPK1誘導(dǎo)CSC表型的積累的關(guān)鍵途徑。本次GSEA分析顯示SRPK1高表達(dá)與Wnt/β-catenin通路活化呈正相關(guān)，預(yù)測SRPK1在體外促進(jìn)HepG2細(xì)胞干性的獲得可能與Wnt/β-catenin通路的活化有關(guān)。

綜上所述，SRPK1在體外可促進(jìn)HepG2細(xì)胞腫瘤干性的獲得，結(jié)論與SRPK1對(duì)其他類型腫瘤(肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等)的作用一致，機(jī)制可能與Wnt/β-catenin通路活化有關(guān)，研究結(jié)果為以SRPK1作為肝細(xì)胞肝癌的治療靶點(diǎn)提供了新的理論依據(jù)。但本研究具有一定局限性，首先流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HepG2細(xì)胞自身SP亞群所占比例較低，因此以SRPK1為治療靶點(diǎn)抑制干性作為LIHC的治療方向仍然待進(jìn)一步論證，我們計(jì)劃在往后研究中以SP亞群比例更高的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并結(jié)合裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，增加本研究結(jié)論的說服力。其次，本次研究未通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)確證Wnt/β-catenin通路在SRPK1促進(jìn)HepG2細(xì)胞干性獲得過程中的作用，我們下一步將針對(duì)該通路的作用靶點(diǎn)進(jìn)行更具體的分子機(jī)制分析。

4 結(jié)論

SRPK1與LIHC發(fā)展緊密聯(lián)系，其高表達(dá)既預(yù)示腫瘤的不良預(yù)后，也促進(jìn)肝癌細(xì)胞干性表型的獲得，機(jī)制可能通過與Wnt/β-catenin通路激活相關(guān)。