謝范英
(寧德市產品質量檢驗所,福建寧德 352100)
菌落總數(shù)是指食品檢樣經過處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等)培養(yǎng)后,所得每g(mL)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)[1]。它是食品衛(wèi)生檢驗中最常見的微生物檢測項目,常被用作判定食品生產的衛(wèi)生質量和食品被微生物污染的程度[2-4]。
目前,國內食品中菌落總數(shù)檢測的方法主要是GB 4789.2—2016中的標準平板計數(shù)法(Standard Plate Count,SPC),但該方法的實驗步驟較為煩瑣,檢測時間相對較長,且準確性易受培養(yǎng)基質量、配制水平及實驗人員差異等的影響。隨著生物技術的不斷發(fā)展,為滿足快速檢測市場的需求,越來越多食品微生物快速測定方法和產品被研究開發(fā)出來,菌落總數(shù)測試片是其中一種快速檢測產品[4-6]。國外有不少學者采用菌落總數(shù)測試片法(Easy Plate,EP)代替平板法,部分檢測機構如加拿大食藥局的MFHPB-33-2001采用3M菌落測試片對食品和食品配料中的菌落總數(shù)進行測定,美國官方分析化學師協(xié)會(Association of Oきcial Agricultural Chemists,AOAC)官方方法989.10用EP對乳制品中的菌落總數(shù)進行測定[7-9]。而國內的GB 4789.2—2022也增加了使用菌落測試片檢測菌落總數(shù)的內容。雖然國內市場上使用較多的是美國3M、日本NISSUI等進口的菌落總數(shù)測試片,但近年來隨著我國越來越重視食品安全,國內越來越來越多的生物公司致力于研發(fā)相關的食品安全檢測產品,為食品檢測機構和相關企業(yè)提供了更多的選擇。
本文選擇3株標準菌株[大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、蠟樣芽孢桿菌CMCC(B)63303]作為質控菌株,采用國內外兩種菌落總數(shù)測試片和SPC分別對6類食品進行菌落測定,并對檢測結果進行分析,為食品檢測機構和相關企業(yè)選擇合適的檢測產品提供一定的參考。
市場和超市隨機購買6類食品,共60批,分別為糕點10批、水產制品10批、肉制品10批、調味品10批、方便食品10批以及膨化食品10批;標準菌株:大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、蠟樣芽孢桿菌CMCC(B)63303。
平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(北京陸橋,210428);3M PetrifilmTM6406菌落總數(shù)測試片(美國3M公司,33HRJ5/33JLE3);MicroFast?AC菌落總數(shù)測試片(美正生物,20220422);腦心浸液肉湯(北京陸橋,210118)。
生物安全柜(上海力申,Hfsafe-1500E);高壓滅菌鍋(日本TOMY,F(xiàn)LS-1000);拍擊式均質器(iMiX公司,LC10063038);電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒,DHP-9272)。
1.3.1 標準菌株菌懸液的制備
分別從大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923和蠟樣芽孢桿菌CMCC(B)63303的磁珠保藏管中挑取磁珠于腦心浸液肉湯中,在 36 ℃下培養(yǎng)24 h得到菌懸液,用生理鹽水稀釋至合適的濃度。
1.3.2 培養(yǎng)基制備與樣液制備
平板計數(shù)瓊脂按照北京陸橋產品的使用說明進行配制;食品樣液依據(jù)GB 4789.2—2016進行處理。
1.3.3 SPC試驗和EP試驗
SPC操作過程依據(jù)GB 4789.2—2016進行;EP試驗依據(jù)相關產品的使用說明進行操作[3M菌落總數(shù)測試片培養(yǎng)(48±3)h,MicroFast?AC菌落總數(shù)測試片培養(yǎng)24~48 h]。
1.3.4 統(tǒng)計分析方法
將測試所得數(shù)據(jù)用SPSS 22.0軟件進行分析,采用t檢驗確定EP和SPC檢測結果的差異是否有統(tǒng)計學意義,P<0.05時表示有統(tǒng)計學意義,即差異顯著。
金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌及蠟樣芽孢桿菌在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)如圖1~圖3所示。金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌在平板計數(shù)瓊脂上均呈白色點狀,金黃色葡萄球菌所形成的菌落更小;金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌在3M菌落總數(shù)測試片和MicroFast?AC菌落總數(shù)測試片均形成紅色邊緣清晰的點狀菌落。而蠟樣芽孢桿菌在平板計數(shù)瓊脂上的菌落形態(tài),部分是圓形或近圓形的白色菌落,部分則是不規(guī)則的、邊緣不整齊的,甚至有向外延伸趨勢的菌落;在3M菌落總數(shù)測試片上形成了紅色圓形、邊緣稍模糊的菌落;在MicroFast?AC菌落總數(shù)測試片上形成的紅色菌落邊緣模糊、不規(guī)則,有的甚至有很長的拖尾。
圖1 金黃色葡萄球菌標準菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)
圖2 大腸埃希氏菌標準菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)
圖3 蠟樣芽孢桿菌標準菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)
60批 樣 品 分 別 采 用SPC、3M測 試 片 和MicroFast?AC測試片進行菌落總數(shù)的測定,對測定結果進行統(tǒng)計學分析。3M測試片與SPC測定的結果經統(tǒng)計處理得到tAB=0.145,PAB=0.885,PAB>0.05, 表明這兩種方法的測定結果無顯著性差異;MicroFast?AC測試片與SPC測定的結果經統(tǒng)計處理得到tAC=0.202,PAC=0.840,PAC>0.05,表明這兩種方法的測定結果無顯著性差異。
對6類樣品中的每一類樣品用上述3種方法檢測,對檢測結果進行統(tǒng)計學分析,結果見表1。對于每一類別樣品,3M測試片、MicroFast?AC測試片與SPC測定的結果經統(tǒng)計處理,均得到P>0.05,這6類樣品采用兩種測試片與SPC測定結果均無顯著性差異。
SPC、3M測試片和MicroFast?AC測試片檢測菌落總數(shù)的各項指標比較如表2所示。對于簡便性和工作量,SPC前期需配制培養(yǎng)基、滅菌等準備程序,后期還要清洗,且實驗步驟較為煩瑣,操作時間相對較長,增加了工作量;而EP由于其培養(yǎng)基系統(tǒng)是預先制備好的,省去了大量煩瑣的準備工作,且操作更為簡便,增加了實驗的效率;但3M測試片在檢測時需要壓板摁壓,MicroFast?AC測試片則不需要,因此操作起來更為簡便。對于培養(yǎng)時間和空間,雖然3種方法都需要培養(yǎng)48 h,但EP培養(yǎng)時所需的空間小,相對于SPC大大節(jié)約了空間成本。對于計數(shù)的準確性,SPC在檢測如糕點等樣品時,常因為有些菌會蔓延而無法準確計數(shù),而EP能夠抑制菌落的蔓延,且菌落呈現(xiàn)紅色,更易于判讀和計數(shù);3M測試片在菌落辨識度上明顯優(yōu)于MicroFast?AC測試片。對于檢測成本,EP的成本比SPC高出很多,兩種測試片的成本相差不大。
表1 3種檢測方法對不同類別樣品菌落計數(shù)結果的比較分析
表2 3種檢測方法檢測菌落總數(shù)的各項指標比較
①3M測試片在菌落辨識度上優(yōu)于MicroFast?AC測試片和平板計數(shù)瓊脂,對于復雜基質樣品的檢測,結果更易于判讀和計數(shù)。②采用3M測試片和MicroFast?AC測試片測得的結果與SPC測得的結果無顯著差異。③EP在簡便性、工作量及檢測空間等方面要優(yōu)于SPC,但是檢測成本也較高。
雖然EP的成本比SPC高出很多,但EP的檢測結果與SPC無顯著差異,且EP可以省去很多繁雜的前期準備工作和后期清理工作,操作更簡便,可節(jié)省大量的培養(yǎng)空間,對于短期大批量的微生物檢測工作,EP具有明顯優(yōu)勢。食品檢測機構和相關企業(yè)可考慮操作簡便性、檢測空間、成本及檢驗結果的判讀等多方面因素,選擇合適的檢測 方法。