謝范英
(寧德市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所,福建寧德 352100)
菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過(guò)處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等)培養(yǎng)后,所得每g(mL)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)[1]。它是食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中最常見(jiàn)的微生物檢測(cè)項(xiàng)目,常被用作判定食品生產(chǎn)的衛(wèi)生質(zhì)量和食品被微生物污染的程度[2-4]。
目前,國(guó)內(nèi)食品中菌落總數(shù)檢測(cè)的方法主要是GB 4789.2—2016中的標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法(Standard Plate Count,SPC),但該方法的實(shí)驗(yàn)步驟較為煩瑣,檢測(cè)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng),且準(zhǔn)確性易受培養(yǎng)基質(zhì)量、配制水平及實(shí)驗(yàn)人員差異等的影響。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,為滿足快速檢測(cè)市場(chǎng)的需求,越來(lái)越多食品微生物快速測(cè)定方法和產(chǎn)品被研究開(kāi)發(fā)出來(lái),菌落總數(shù)測(cè)試片是其中一種快速檢測(cè)產(chǎn)品[4-6]。國(guó)外有不少學(xué)者采用菌落總數(shù)測(cè)試片法(Easy Plate,EP)代替平板法,部分檢測(cè)機(jī)構(gòu)如加拿大食藥局的MFHPB-33-2001采用3M菌落測(cè)試片對(duì)食品和食品配料中的菌落總數(shù)進(jìn)行測(cè)定,美國(guó)官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)(Association of Oきcial Agricultural Chemists,AOAC)官方方法989.10用EP對(duì)乳制品中的菌落總數(shù)進(jìn)行測(cè)定[7-9]。而國(guó)內(nèi)的GB 4789.2—2022也增加了使用菌落測(cè)試片檢測(cè)菌落總數(shù)的內(nèi)容。雖然國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上使用較多的是美國(guó)3M、日本NISSUI等進(jìn)口的菌落總數(shù)測(cè)試片,但近年來(lái)隨著我國(guó)越來(lái)越重視食品安全,國(guó)內(nèi)越來(lái)越來(lái)越多的生物公司致力于研發(fā)相關(guān)的食品安全檢測(cè)產(chǎn)品,為食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)和相關(guān)企業(yè)提供了更多的選擇。
本文選擇3株標(biāo)準(zhǔn)菌株[大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、蠟樣芽孢桿菌CMCC(B)63303]作為質(zhì)控菌株,采用國(guó)內(nèi)外兩種菌落總數(shù)測(cè)試片和SPC分別對(duì)6類食品進(jìn)行菌落測(cè)定,并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析,為食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)和相關(guān)企業(yè)選擇合適的檢測(cè)產(chǎn)品提供一定的參考。
市場(chǎng)和超市隨機(jī)購(gòu)買(mǎi)6類食品,共60批,分別為糕點(diǎn)10批、水產(chǎn)制品10批、肉制品10批、調(diào)味品10批、方便食品10批以及膨化食品10批;標(biāo)準(zhǔn)菌株:大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、蠟樣芽孢桿菌CMCC(B)63303。
平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(北京陸橋,210428);3M PetrifilmTM6406菌落總數(shù)測(cè)試片(美國(guó)3M公司,33HRJ5/33JLE3);MicroFast?AC菌落總數(shù)測(cè)試片(美正生物,20220422);腦心浸液肉湯(北京陸橋,210118)。
生物安全柜(上海力申,Hfsafe-1500E);高壓滅菌鍋(日本TOMY,F(xiàn)LS-1000);拍擊式均質(zhì)器(iMiX公司,LC10063038);電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒,DHP-9272)。
1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株菌懸液的制備
分別從大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923和蠟樣芽孢桿菌CMCC(B)63303的磁珠保藏管中挑取磁珠于腦心浸液肉湯中,在 36 ℃下培養(yǎng)24 h得到菌懸液,用生理鹽水稀釋至合適的濃度。
1.3.2 培養(yǎng)基制備與樣液制備
平板計(jì)數(shù)瓊脂按照北京陸橋產(chǎn)品的使用說(shuō)明進(jìn)行配制;食品樣液依據(jù)GB 4789.2—2016進(jìn)行處理。
1.3.3 SPC試驗(yàn)和EP試驗(yàn)
SPC操作過(guò)程依據(jù)GB 4789.2—2016進(jìn)行;EP試驗(yàn)依據(jù)相關(guān)產(chǎn)品的使用說(shuō)明進(jìn)行操作[3M菌落總數(shù)測(cè)試片培養(yǎng)(48±3)h,MicroFast?AC菌落總數(shù)測(cè)試片培養(yǎng)24~48 h]。
1.3.4 統(tǒng)計(jì)分析方法
將測(cè)試所得數(shù)據(jù)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行分析,采用t檢驗(yàn)確定EP和SPC檢測(cè)結(jié)果的差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05時(shí)表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,即差異顯著。
金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌及蠟樣芽孢桿菌在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)如圖1~圖3所示。金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌在平板計(jì)數(shù)瓊脂上均呈白色點(diǎn)狀,金黃色葡萄球菌所形成的菌落更?。唤瘘S色葡萄球菌和大腸埃希氏菌在3M菌落總數(shù)測(cè)試片和MicroFast?AC菌落總數(shù)測(cè)試片均形成紅色邊緣清晰的點(diǎn)狀菌落。而蠟樣芽孢桿菌在平板計(jì)數(shù)瓊脂上的菌落形態(tài),部分是圓形或近圓形的白色菌落,部分則是不規(guī)則的、邊緣不整齊的,甚至有向外延伸趨勢(shì)的菌落;在3M菌落總數(shù)測(cè)試片上形成了紅色圓形、邊緣稍模糊的菌落;在MicroFast?AC菌落總數(shù)測(cè)試片上形成的紅色菌落邊緣模糊、不規(guī)則,有的甚至有很長(zhǎng)的拖尾。
圖1 金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)
圖2 大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)
圖3 蠟樣芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)
60批 樣 品 分 別 采 用SPC、3M測(cè) 試 片 和MicroFast?AC測(cè)試片進(jìn)行菌落總數(shù)的測(cè)定,對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3M測(cè)試片與SPC測(cè)定的結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理得到tAB=0.145,PAB=0.885,PAB>0.05, 表明這兩種方法的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異;MicroFast?AC測(cè)試片與SPC測(cè)定的結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理得到tAC=0.202,PAC=0.840,PAC>0.05,表明這兩種方法的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異。
對(duì)6類樣品中的每一類樣品用上述3種方法檢測(cè),對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果見(jiàn)表1。對(duì)于每一類別樣品,3M測(cè)試片、MicroFast?AC測(cè)試片與SPC測(cè)定的結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理,均得到P>0.05,這6類樣品采用兩種測(cè)試片與SPC測(cè)定結(jié)果均無(wú)顯著性差異。
SPC、3M測(cè)試片和MicroFast?AC測(cè)試片檢測(cè)菌落總數(shù)的各項(xiàng)指標(biāo)比較如表2所示。對(duì)于簡(jiǎn)便性和工作量,SPC前期需配制培養(yǎng)基、滅菌等準(zhǔn)備程序,后期還要清洗,且實(shí)驗(yàn)步驟較為煩瑣,操作時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng),增加了工作量;而EP由于其培養(yǎng)基系統(tǒng)是預(yù)先制備好的,省去了大量煩瑣的準(zhǔn)備工作,且操作更為簡(jiǎn)便,增加了實(shí)驗(yàn)的效率;但3M測(cè)試片在檢測(cè)時(shí)需要壓板摁壓,MicroFast?AC測(cè)試片則不需要,因此操作起來(lái)更為簡(jiǎn)便。對(duì)于培養(yǎng)時(shí)間和空間,雖然3種方法都需要培養(yǎng)48 h,但EP培養(yǎng)時(shí)所需的空間小,相對(duì)于SPC大大節(jié)約了空間成本。對(duì)于計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,SPC在檢測(cè)如糕點(diǎn)等樣品時(shí),常因?yàn)橛行┚鷷?huì)蔓延而無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)數(shù),而EP能夠抑制菌落的蔓延,且菌落呈現(xiàn)紅色,更易于判讀和計(jì)數(shù);3M測(cè)試片在菌落辨識(shí)度上明顯優(yōu)于MicroFast?AC測(cè)試片。對(duì)于檢測(cè)成本,EP的成本比SPC高出很多,兩種測(cè)試片的成本相差不大。
表1 3種檢測(cè)方法對(duì)不同類別樣品菌落計(jì)數(shù)結(jié)果的比較分析
表2 3種檢測(cè)方法檢測(cè)菌落總數(shù)的各項(xiàng)指標(biāo)比較
①3M測(cè)試片在菌落辨識(shí)度上優(yōu)于MicroFast?AC測(cè)試片和平板計(jì)數(shù)瓊脂,對(duì)于復(fù)雜基質(zhì)樣品的檢測(cè),結(jié)果更易于判讀和計(jì)數(shù)。②采用3M測(cè)試片和MicroFast?AC測(cè)試片測(cè)得的結(jié)果與SPC測(cè)得的結(jié)果無(wú)顯著差異。③EP在簡(jiǎn)便性、工作量及檢測(cè)空間等方面要優(yōu)于SPC,但是檢測(cè)成本也較高。
雖然EP的成本比SPC高出很多,但EP的檢測(cè)結(jié)果與SPC無(wú)顯著差異,且EP可以省去很多繁雜的前期準(zhǔn)備工作和后期清理工作,操作更簡(jiǎn)便,可節(jié)省大量的培養(yǎng)空間,對(duì)于短期大批量的微生物檢測(cè)工作,EP具有明顯優(yōu)勢(shì)。食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)和相關(guān)企業(yè)可考慮操作簡(jiǎn)便性、檢測(cè)空間、成本及檢驗(yàn)結(jié)果的判讀等多方面因素,選擇合適的檢測(cè) 方法。