陳德斌，許均圖，陳 燕，陳冬虹

（廣州華鑫檢測技術(shù)有限公司，廣東廣州 510663）

玫瑰茄又名洛神花，是錦葵科木槿屬一年生草本植物的肉質(zhì)花萼部分。玫瑰茄花萼部分肉質(zhì)厚、汁水多、味道酸，含有豐富的維生素C、有機(jī)酸、果糖和花青素等，可用于生產(chǎn)果醬、蜜餞、果酒和果茶等。玫瑰茄具有利尿、促進(jìn)膽汁分泌、降血壓、降低血液黏度和促進(jìn)腸蠕動的功效，也屬于藥用植物。此外，玫瑰茄顏色鮮艷可用于提取天然色素。由于玫瑰茄的經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，玫瑰茄的人工種植規(guī)模日漸擴(kuò)大，但玫瑰茄易受病菌侵害導(dǎo)致根莖腐病，且在花期會受到蚜蟲、葉蟬等蟲害侵?jǐn)_，在種植過程中存在使用農(nóng)藥來抑制病蟲害提高產(chǎn)量的情況，而玫瑰茄是在花期采摘，存在一定的農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)。玫瑰茄中常見的農(nóng)藥有敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯和苯醚甲環(huán)唑等。夏會龍[1]研究了幾種干花中的農(nóng)藥殘留，而專門針對玫瑰茄農(nóng)藥殘留檢測的相關(guān)研究仍較少。本文通過參考不同植物性食品中農(nóng)藥殘留的檢測方法[2-5]，采用QuEChERS結(jié)合串聯(lián)氣質(zhì)的方法，建立了檢測玫瑰茄中敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯和苯醚甲環(huán)唑的方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與耗材

標(biāo)準(zhǔn)品：敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯、苯醚甲環(huán)唑農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（1000 μg·mL-1），上海安譜璀世，上述標(biāo)準(zhǔn)品均用乙酸乙酯分別配制成100 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，再配成10 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)（1000 μg·mL-1），上海安譜璀世，用乙酸乙酯配制成100 μg·mL-1的內(nèi)標(biāo)儲備液，再用乙酸乙酯配制成20 μg·mL-1的內(nèi)標(biāo)使用液。

試劑：乙腈、乙酸乙酯，均為HPLC級，CNW；無水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉、檸檬酸二鈉，均為分析純，阿拉??；PSA（N-丙基乙二胺）、GCB（石墨化碳黑）、C18，CNW。

1.2 儀器

氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（Thermo Fisher TRACE 1300-TSQ 9000，配EI源）；電子天平（賽多利斯BSA822-CW）；渦旋振蕩器（上海安譜EOAAHM-01）；氮?dú)獯蹈蓛x（北京八方世紀(jì)BF-2000）；高速冷凍離心機(jī)（赫西HR/T20MM）。

1.3 樣品處理

取500 g新鮮玫瑰茄，置于粉碎機(jī)中粉碎，備用。稱取制備好的新鮮玫瑰茄10 g（精確到0.01 g）到50 mL離心管中，然后在離心管中加入15 mL乙腈、5 g無水硫酸鎂、1.5 g氯化鈉、1.5 g檸檬酸鈉、0.8 g檸檬酸氫二鈉，以及1顆陶瓷均質(zhì)子，旋蓋密封離心管之后置于渦旋振蕩器中2500 r·min-1振蕩 2 min，8000 r·min-1冷凍離心5 min后，取6 mL上清液于15 mL離心管中，加入1 g無水硫酸鎂、300 mg PSA、 300 mg C18和80 mg GCB，振蕩1 min，5000 r·min-1離心5 min，準(zhǔn)確吸取上清液3 mL到10 mL離心管中，40 ℃氮吹至近干，加入10 μL的20 μg·mL-1環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)溶液，再準(zhǔn)確加入1 mL乙酸乙酯，渦旋振蕩1 min，用0.45 μm針頭式濾膜過濾復(fù)溶液，上機(jī)。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：HP-5MS UI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣：氦氣（99.999 %）；載氣流速：1.5 mL·min-1；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣口溫度：290 ℃；程序升溫：40 ℃保持1 min，以25 ℃·min-1升 溫 至180 ℃保 持1 min，以6 ℃·min-1升 溫 至 290 ℃保持4 min。

1.4.2 質(zhì)譜條件離子源：電子轟擊源（EI）；質(zhì)譜碰撞氣：高純氬氣；傳輸線溫度：290 ℃；離子源溫度：300 ℃；電離能量：70 eV；掃描模式：SRM模式（4種農(nóng)藥和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間和特征離子對信息見表1）。

2 結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

2.1.1 色譜柱的選擇

色譜柱作為色譜分離的核心部分，對整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和效率起到至關(guān)重要的作用。本研究分別對比了常用于農(nóng)藥殘留檢測的非極性色譜柱HP-5 MS UI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、弱極性色譜柱DB-1 MS UI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）和中等極性色譜柱DB-1701（30 m×0.25 mm，0.25 μm），結(jié)果表明，采用DB-1 MS UI柱進(jìn)行分析時(shí)有機(jī)磷組分會存在峰形拖尾，而采用DB-1701柱進(jìn)行分析時(shí)氯氟氰菊酯的峰形和響應(yīng)較差。最終選擇HP-5 MS UI柱，分析時(shí)各組分峰形和響應(yīng)都較為良好。

2.1.2 溶劑的選擇

本實(shí)驗(yàn)對樣品處理過程中的提取溶劑和復(fù)溶溶劑進(jìn)行了對比和選擇。通過查閱資料，可知敵敵畏、氯氟氰菊酯、苯醚甲環(huán)唑水溶性均較差，僅氧化樂果能溶于水，故本研究主要對比了QuEChERS提取方法中常用的乙腈、丙酮、乙酸乙酯作為提取溶劑和復(fù)溶溶劑時(shí)的提取效率。結(jié)果表明，以乙腈和丙酮作為提取溶劑時(shí)，4種農(nóng)藥的整體提取效率均較高，而采用乙酸乙酯作為提取溶劑的時(shí)候，提取過程易發(fā)生乳化現(xiàn)象，且極性成分的提取效率低。考慮到丙酮與水難以分離，且丙酮作為管制試劑難以獲取，購買手續(xù)復(fù)雜，最終選取乙腈作為提取溶劑。在選擇復(fù)溶溶劑時(shí)，綜合考慮了復(fù)溶溶劑的溶解效率及其對各組分出峰峰形、結(jié)果響應(yīng)以及環(huán)境友好等方面的影響，最終選擇乙酸乙酯作為復(fù)溶溶劑。

表1 玫瑰茄中4種農(nóng)藥和環(huán)氧七氯的保留時(shí)間及特征離子對

2.1.3 QuEChERS凈化過程的優(yōu)化

在QuEChERS方法中，QuEChERS凈化劑的選擇對實(shí)驗(yàn)的回收率有很大影響，所以選擇合適的凈化劑是QuEChERS凈化的核心，而凈化劑的選擇基于樣品基質(zhì)的性質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)的樣品基質(zhì)是玫瑰茄，玫瑰茄中富含有機(jī)酸、果糖、花青素，果核中又含有豐富的油脂，樣品基質(zhì)非常復(fù)雜。在凈化劑的使用上選擇了無水硫酸鎂、PSA、C18和GCB，其中無水硫酸鎂可以去除有機(jī)相中的水分，PSA可以有效去除果酸等有機(jī)酸和一些極性色素及糖類，C18主要通過非極性相互作用吸附非極性物質(zhì)如油脂等，GCB可以吸附類固醇、花青素等色素。

在凈化劑的使用量上，本實(shí)驗(yàn)通過查閱參考相關(guān)文獻(xiàn)[6-9]，預(yù)估6 mL樣品提取液中，無水硫酸鎂、PSA、C18、GCB的用量分別為1 g、300 mg、300 mg、150 mg，但考慮到GCB對平面結(jié)構(gòu)的組分有吸附作用，可能會導(dǎo)致氯氟氰菊酯和苯醚甲環(huán)唑的回收率偏低。QuEChERS凈化中通常采用加入甲苯來提高平面結(jié)構(gòu)組分的回收率，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，加入甲苯確實(shí)可以提升氯氟氰菊酯和苯醚甲環(huán)唑的回收率，但同時(shí)敵敵畏的回收率降到了40 %以下，故采用甲苯加入法來提升平面結(jié)構(gòu)組分的回收率在本實(shí)驗(yàn)中不可行。由于玫瑰茄提取液的顏色呈亮紅色，并非像葉菜類提取液那樣呈墨綠色，所以考慮通過減少GCB使用量來保證氯氟氰菊酯和苯醚甲環(huán)唑的回收率的同時(shí)，去除提取液中的色素。實(shí)驗(yàn)通過對比 50 mg、80 mg、110 mg、140 mg的GCB使用量下 4種農(nóng)藥組分在0.05 mg·kg-1的加標(biāo)回收率和凈化后提取液的顏色，最終選擇了80 mg的GCB使用量。不同GCB使用量下農(nóng)藥回收率和色素去除效果見表2。

2.2 方法學(xué)分析

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍

以空白樣品提取液配制敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯和苯醚甲環(huán)唑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，系列標(biāo)液中各組分濃度均為0 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、 0.20 mg·L-1、0.50 mg·L-1、1.00 mg·L-1和2.00 mg·L-1。 4種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)均在0.995以上。4種農(nóng)藥和內(nèi)標(biāo)的典型譜圖見圖1。

2.2.2 檢出限

采用建立的方法，根據(jù)玫瑰茄空白樣品的平均基線噪聲值，按照3倍信噪比計(jì)算4種農(nóng)藥檢出限，結(jié)果見表3。

2.2.3 回收率與精密度

在玫瑰茄空白基質(zhì)中，分別添加濃度為 0.01 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、1.00 mg·kg-1的4種 農(nóng)藥，每個(gè)添加濃度做6個(gè)平行樣品，按所建立的方法進(jìn)行測定，測得玫瑰茄樣品中4種農(nóng)藥的加標(biāo)回收率以及精密度見表3，4種農(nóng)藥殘留的加標(biāo)回收率在79.5%～108.1%，各加標(biāo)水平的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于10%。

3 結(jié)論

本研究采用QuEChERS結(jié)合串聯(lián)氣質(zhì)的方法，建立了玫瑰茄中敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯、苯醚甲環(huán)唑的檢測方法，研究結(jié)果表明該方法操作簡便、分析成本低、處理效率高，適用于玫瑰茄中敵敵畏、氧化樂果、氯氟氰菊酯、苯醚甲環(huán)唑的 測定。

表2 不同GCB使用量下農(nóng)藥回收率和色素去除效果

圖1 4種農(nóng)藥和環(huán)氧七氯的典型譜圖

表3 玫瑰茄中4種農(nóng)藥的定量限、回收率和精密度