徐梅,李政權(quán),田仁奎,張顯強(qiáng)*

貴州8種杜鵑花屬植物的花粉形態(tài)及計(jì)量分析

徐梅1,李政權(quán)2,田仁奎3,張顯強(qiáng)1*

1. 貴州警察學(xué)院, 貴州 貴陽 550005 2. 貴州泰若數(shù)字科技有限公司, 貴州 貴陽 550081 3. 貴州省公安廳物證鑒定中心, 貴州 貴陽 550005

本文以貴州畢節(jié)百里杜鵑為采集地，采集馬纓杜鵑、迷人杜鵑等8種杜鵑屬為實(shí)驗(yàn)材料，通過掃描電鏡觀察花粉的形態(tài)及外壁紋飾，并利用SPSS軟件對其進(jìn)行量化分析，可為杜鵑花屬植物的分類鑒定和識別提供基礎(chǔ)的參考數(shù)據(jù)。8種杜鵑花屬植物的花粉均為四合體花粉，呈正四面體排列，具三孔溝，其中百合花杜鵑和毛杜鵑的形狀呈扁球形，其他杜鵑屬介于近球形與球形之間，表面附著粘絲情況不一。經(jīng)SPSS軟件量化，結(jié)果表明：（1）8種杜鵑屬的極軸長、赤道軸長、四合體直徑、周長、面積、萌發(fā)孔長、萌發(fā)孔寬的平均值范圍分別為（13.81～21.21）μm，（17.02～29.96）μm，（28.35～42.75）μm，（101.93～170.25）μm，（673.24～1648.76）μm2，（7.67～16.59）μm，（0.57 ～1.77）μm，P/E的范圍為0.684～0.839；（2）對極軸長、赤道軸長等指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，極軸長、四合體直徑、面積是最能影響花粉形態(tài)的指標(biāo)，萌發(fā)孔寬指標(biāo)對花粉形態(tài)無顯著影響；（3）主成分分析極軸長、四合體直徑、面積組成的因子成分可替代以上8個(gè)指標(biāo)，且貢獻(xiàn)率排名為極軸長、四合體直徑、面積，可以花粉極軸長、四合體直徑、面積因子成分作為分類鑒別的依據(jù)之一；（4）聚類分析顯示歐式距離10時(shí)可將8種植物分為3類，這與主成分分析的結(jié)果相對應(yīng)。綜上，將電鏡觀察花粉形態(tài)的定性方面與SPSS軟件定量分析結(jié)合為分類鑒別提供了參考價(jià)值。

杜鵑花屬; 花粉形態(tài); 計(jì)量分析

杜鵑花科包括5個(gè)屬，其中最大的屬就是杜鵑屬，有近千種[1]。杜鵑是常綠或落葉灌木，稀為喬木，耐寒耐旱，適應(yīng)性強(qiáng)，喜酸性土壤，多生于林下、林緣、灌叢中。杜鵑種類繁多，西南地區(qū)分布較廣，它不僅具有較大的觀賞性而且大部分為蜜源植物，具有較高的養(yǎng)蜂價(jià)值。由于杜鵑屬植物的種類繁多，形態(tài)各異，植物分類紛繁復(fù)雜，且變異性較大，因而前人從活力、分類學(xué)等不同方面對該屬植物進(jìn)行較為深入的研究[2,3]。

隨著孢粉學(xué)的發(fā)展，從大量的花粉資料顯示，植物系統(tǒng)分類的根本依據(jù)之一就是從花粉形態(tài)特征出發(fā)，但花粉形態(tài)特征只能從定性方面去確定，定量方面確定的報(bào)道極少。此前就有劉林等[4]對藏東南18種杜鵑屬植物花粉形態(tài)進(jìn)行比較，指出花粉形態(tài)及大小、萌發(fā)孔溝、外壁紋飾等特征，可以作為植物分類研究及系統(tǒng)發(fā)育研究的輔助手段。郝佳波等[5]對木蘭科16種含笑屬植物的花粉形態(tài)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)極軸長這一性狀比赤道軸長和/(軸比)更具有種間分類的價(jià)值。Wrońska-Pilarek D等[6]從黑櫻草花粉形態(tài)及變異進(jìn)行研究，分析了花粉粒的8個(gè)定量特征和3個(gè)定性特征，這些特征可以作為區(qū)分樣本組的輔助手段，其還指出花粉粒性狀與采集地點(diǎn)的地理位置有顯著的相關(guān)關(guān)系。本文利用掃描電子顯微鏡和對SPSS軟件對8種杜鵑屬進(jìn)行花粉形態(tài)觀察和統(tǒng)計(jì)分析，從定性與定量的雙重角度研究杜鵑屬植物資源分類的情況，進(jìn)而用統(tǒng)計(jì)分析的方法去佐證花粉形態(tài)特征在分類學(xué)上的實(shí)用性，為杜鵑花科的分類學(xué)研究提供孢粉學(xué)證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料處理

該文的實(shí)驗(yàn)材料均來自貴州畢節(jié)百里杜鵑自然保護(hù)區(qū)，共采集8種植物花粉，每種采集1至2個(gè)樣本并編號分類。將花藥從樣本取出放至FAA固定液中固定16h- 20 h，將固定好的材料轉(zhuǎn)至不同濃度下的乙醇進(jìn)行梯度脫水，具體脫水梯度為50%→65%→80%→95%→100%,各級脫水時(shí)間為1.5 h。脫水后的材料經(jīng)自然陰干后用無菌刀對花藥切割取出花粉，花粉放至粘有導(dǎo)電膠的樣品臺上，后經(jīng)離子濺射儀噴金（E-1010）、鍍膜處理，然后通過電子掃描電鏡(日立SU-3500)進(jìn)行觀測。

1.2 方法

通過電子掃描電鏡(日立SU-3500)對8個(gè)樣本觀測，每個(gè)樣本選取15?；ǚ郏瑢﹄婄R觀測下的不同倍數(shù)花粉拍照保存。選出清晰品相好的花粉區(qū)域照片經(jīng)Photoshop進(jìn)行處理(主要是處理花粉粒與花粉粒之間的粘絲)，用Imagepro-plus對處理后的花粉照片進(jìn)行測量分析，測量出每種花粉的極軸長、赤道軸長、四合體直徑、周長、面積、萌發(fā)孔長、萌發(fā)孔寬共7個(gè)指標(biāo)。用SPSS軟件對以上7個(gè)定量指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)性分析是根據(jù)皮爾遜公式評估的。通過SPSS軟件對極軸長、赤道軸長、/、四合體直徑、周長、面積、萌發(fā)孔長、萌發(fā)孔寬8個(gè)定量指標(biāo)的平均值進(jìn)行主成分分析和聚類分析，通過主成分分析法可以從多指標(biāo)向少數(shù)綜合指標(biāo)的轉(zhuǎn)換。聚類方法采用組間連接，聚類單元之間的遺傳距離以平方歐式距離計(jì)算，聚類圖選用譜系圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 花粉形態(tài)特征

如圖1所示，8種杜鵑花的花粉形態(tài)呈正四面體排列，四合體具有三孔溝，單?；ǚ圯喞时馇蛐位蚪橛诮蛐闻c球形之間（圖1，表1）。花粉粒表面出現(xiàn)不同程度的粘絲。在掃描電鏡的觀測下，外壁紋飾大多為突起或呈顆粒狀的圖案，外壁輪廓線呈微波浪形，極少數(shù)為腦紋狀紋飾：由腦紋的彎曲短條紋組成，輪廓線為低平的波浪線?；ǚ哿３尸F(xiàn)大、中、小不同程度的顆粒、裂紋等不同紋飾。花粉粒四分體因種類的不同導(dǎo)致飽滿程度各異，大多數(shù)的花粉呈現(xiàn)出活力飽滿的狀態(tài)，但極少數(shù)的花粉粒表現(xiàn)出皺縮的形態(tài)，花粉粒的4個(gè)面有不同程度的凹陷，有些花粉粒已經(jīng)呈干癟、皺縮狀，這是由于花粉粒失去了活力[2]，王玉國等[10]研究的花粉形態(tài)也出現(xiàn)類似情況，如馬纓杜鵑、毛杜鵑、比利時(shí)杜鵑（西鵑）已經(jīng)有不同程度的向內(nèi)凹陷。本文對花粉的描述性術(shù)語遵循Erdtman G等[7]孢粉學(xué)手冊和王開發(fā)等[8]孢粉學(xué)概論的專業(yè)術(shù)語。

圖 1 花粉形態(tài)的電鏡觀察

注：1.映山紅；2.百合花杜鵑；3.馬纓杜鵑；4.迷人杜鵑；5.腺果杜鵑；6.大白杜鵑；7.毛杜鵑；8.比利時(shí)杜鵑（西鵑）。

a.為花粉整體，百合花杜鵑（2）和大白杜鵑（6）標(biāo)尺為30 μm,其余均為20 μm；b.外壁紋飾，標(biāo)尺均為10 μm.

2.2 花粉大小特征

8種花粉極軸長、赤道軸長、四合體直徑、周長、面積、萌發(fā)孔長、萌發(fā)孔寬的平均值范圍分別為（13.81～21.21）μm，（17.02～29.96）μm，（28.35～42.75）μm，（101.93～170.25）μm，（673.24～1648.76）μm2，（7.67～16.59）μm，（0.57～1.77）μm，P/E的范圍為0.684～0.839，見表1。8種杜鵑花的大小以四合體直徑的長度來劃分，根據(jù)王開發(fā)等[8]描述的孢粉大小可將其大小劃分為中等等級（25～50）μm，8種花粉的四合體直徑范圍為（28.35～42.75）μm，在周英蘭等[9]研究的杜鵑花四合體直徑范圍內(nèi)，其研究的四合體直徑范圍為(24.8～60.1) μm，基本是吻合的，但8種花粉的大小仍存在著差異。在觀測到的8種杜鵑花中，毛杜鵑的大多數(shù)指標(biāo)數(shù)據(jù)都比較小，比利時(shí)杜鵑（西鵑）的四合體直徑、面積、萌發(fā)孔長、萌發(fā)孔寬平均值是最大的。從表1各項(xiàng)指標(biāo)可以看出，8種不同花粉形態(tài)指標(biāo)之間均存在差異。

表 1 花粉形態(tài)特征

2.3 統(tǒng)計(jì)分析

2.3.1 相關(guān)性分析花粉形態(tài)的7個(gè)定量指標(biāo)之間的相關(guān)性分析結(jié)果見表2，從表中可以看出，萌發(fā)孔寬與其他指標(biāo)無顯著相關(guān)性，極軸長與其他指標(biāo)有顯著或極顯著的相關(guān)性（除了萌發(fā)孔寬），赤道軸長與萌發(fā)孔寬、周長無相關(guān)性，與其他4個(gè)指標(biāo)都有極顯著的相關(guān)性，四合體直徑與極軸長、赤道軸長、面積、萌發(fā)孔長有極顯著或顯著的相關(guān)性，周長與極軸長有顯著的相關(guān)性，面積與極軸長、赤道軸長、四合體直徑、萌發(fā)孔長有極顯著或顯著的相關(guān)性，萌發(fā)孔長與極軸長、赤道軸長、四合體直徑、面積有極顯著或顯著的相關(guān)性。綜上所述，其中極軸長、四合體直徑、面積是最能影響花粉形態(tài)的指標(biāo)，萌發(fā)孔寬指標(biāo)對花粉形態(tài)無顯著影響。

表 2 觀測指標(biāo)之間的相關(guān)性

注：“**”和“*”分別表示在0.01水平（雙側(cè)）和0.05水平（雙側(cè)）上顯著相關(guān)。

2.3.2 主成分分析對花粉形態(tài)的8個(gè)定量指標(biāo)進(jìn)行主成分分析，旋轉(zhuǎn)方法為凱撒正態(tài)化最大方差法，分析結(jié)果見圖2。從圖中可以看出提取的2個(gè)主成分累積的貢獻(xiàn)率為83.4%，即這2個(gè)主成分集中了8個(gè)原始指標(biāo)83.4%的信息。此外，圖2顯示極軸長、四合體直徑、面積組成的因子成分可替代以上8個(gè)指標(biāo)，且貢獻(xiàn)率排名為極軸長、四合體直徑、面積，表明極軸長在所有的指標(biāo)中所起的作用是最大的。此目的是表示主成分與每個(gè)杜鵑屬的關(guān)系，因此我們可以從定量的角度通過主成分鑒別每一個(gè)孢粉屬。

圖 2 旋轉(zhuǎn)后的空間成分分布圖

2.3.3 聚類分析利用SPSS軟件對花粉8個(gè)定量特征進(jìn)行聚類分析，在歐式距離10處，將所有的杜鵑屬分為3個(gè)組群。毛杜鵑和比利時(shí)杜鵑（西鵑）單獨(dú)為一組，而第二組包括所有杜鵑資源,并分為兩個(gè)亞組：A亞組為百合花杜鵑，大白杜鵑；B亞組為映山紅，腺果杜鵑，馬纓杜鵑，迷人杜鵑。

比較譜系圖分類結(jié)果與花粉形態(tài)特征極軸長、四合體直徑、面積三個(gè)指標(biāo)數(shù)據(jù)，單獨(dú)為一組的毛杜鵑極軸長、四合體直徑、面積分別為13.81 μm，28.35 μm，673.24 μm2。在8種杜鵑屬指標(biāo)數(shù)據(jù)中最小。單獨(dú)為一組的比利時(shí)杜鵑（西鵑）極軸長、四合體直徑、面積分別為21.21 μm，42.75 μm，1320.17 μm2，在8種杜鵑屬指標(biāo)數(shù)據(jù)中最大。這與主成分分析的結(jié)果相對應(yīng)，進(jìn)一步印證極軸長、四合體直徑、面積綜合因子成分從定量上作為鑒別每一個(gè)孢粉屬的有利依據(jù)。

圖 3 基于花粉形態(tài)特征的杜鵑資源譜系圖

3 討論與結(jié)論

3.1 花粉的形態(tài)特征

通過對8種杜鵑屬植物的花粉形態(tài)特征進(jìn)行掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，馬纓杜鵑、毛杜鵑、比利時(shí)杜鵑（西鵑）處于花蕾膨大期[11]，花粉形狀初具四合體，每分體呈現(xiàn)不同程度的凹陷。對每種杜鵑屬植物的各項(xiàng)指標(biāo)測定，其具有不同程度的差異，其中/、形狀等指標(biāo)與前人研究的結(jié)果有差異。周英蘭[9]、劉林[4]、王玉國[10]等研究的杜鵑屬植物花粉形狀基本為近球形或球形，且其并未測定/值，由王開發(fā)的孢粉學(xué)概論描述，花粉形態(tài)的確定是由/值確定，因而周英蘭[9]、劉林[4]、王玉國[10]等研究的杜鵑屬植物形狀是否正確有待考究。該文中測定/值范圍（0.684～0.839）與Sarwar AKMG等[12]研究的結(jié)果大致一致，百合花杜鵑和毛杜鵑的形狀為扁球形，其他杜鵑屬介于近球形與球形之間。

3.2 統(tǒng)計(jì)分析

選用8種定量指標(biāo)對花粉粒進(jìn)行了特性研究。對所研究指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明，四合體直徑、面積兩個(gè)指標(biāo)在每種杜鵑花之間具有顯著性。相關(guān)性分析顯示，有22個(gè)相關(guān)系數(shù)顯著，其中極軸長、四合體直徑、面積是最能影響花粉形態(tài)的指標(biāo)，萌發(fā)孔寬指標(biāo)對花粉形態(tài)無顯著影響。主成分分析顯示，極軸長、四合體直徑、面積對應(yīng)的散點(diǎn)在組內(nèi)呈現(xiàn)相互聚集的情況，表現(xiàn)出相似性，而其他指標(biāo)對應(yīng)的散點(diǎn)較分散，表現(xiàn)出差異性。通過主成分分析法對8個(gè)指標(biāo)進(jìn)行降維，從而得到極軸長、四合體直徑、面積成分指標(biāo)來實(shí)現(xiàn)杜鵑屬植物的區(qū)分。聚類分析顯示，在歐氏距離為10處，毛杜鵑和比利時(shí)杜鵑（西鵑）與其他杜鵑植物聚類不同，其各自聚為一類，兩者之間表現(xiàn)出很大的差異類別，可作為甄別、鑒定杜鵑屬植物種屬的參考方法。

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Pollen Morphology and Quantitative Analysis of Eight Species ofin Guizhou

XU Mei1, LI Zheng-quan2, TIAN Ren-kui3, ZHANG Xian-qiang1*

1., Guiyang 550005,2., Guiyang 550081,3.,550005,

Eight species ofsuch asandFranch were collected as experimental materials in Bijie, Guizhou. The morphology and outer wall decoration of pollen were observed by SEM, and the quantitative analysis was carried out by SPSS software, which can provide basic reference data for the classification and identification of. The pollens of eight species ofare all tetrazygous pollens with tetrahedral arrangement and three furrows.andare oblate spherical in shape, while otherare between subspherical and spherical, with different adhesion and adhesion on the surface. Quantified by SPSS software, the results show that: (1) The average values of polar axis length, equatorial axis length, pollen diameter, perimeter, area, germinal apertures length, and germinal apertures width of the eightwere (13.81-21.21) μm, (17.02-29.96) μm, (28.35-42.75) μm, (101.93-170.25) μm, (673.24-1648.76) μm2, (7.67-16.59) μm, (0.57-1.77) μm, respectively. P/E range is 0.684-0.839. (2) The correlation analysis of the polar axis length and equatorial axis length showed that the polar axis length, the diameter and the area of the tetrazygote were the most influential indicators of pollen morphology, while the germinal apertures width had no significant effect on pollen morphology. (3) The results of PCA showed that the factor components composed of polar axis length, tetrazygote diameter and area could replace the above eight indexes, and the contribution rates were ranked as polar axis length, tetrazygote diameter and area, indicating that polar axis length, tetrazygote diameter and area factor components could be used as one of the basis for classification and discrimination. (4) Cluster analysis showed that eight species could be divided into three groups at Euclidean distance of 10, which corresponded to the results of PCA. In conclusion, the combination of qualitative aspects of pollen morphology observed by electron microscopy and quantitative analysis by SPSS software provides reference value for classification and identification.

; pollen morphology; statistical analysis

Q944.6

A

1000-2324(2022)06-0925-05

2022-05-02

2022-06-13

貴州省教育廳青年科技人才成長項(xiàng)目:貴州有毒蜜源植物調(diào)查及其花粉顯微形態(tài)觀測研究(黔教合KY字[2021]283)

徐梅(1990-),女,碩士研究生,講師,研究方向:計(jì)算物理、生物物理. E-mail:xumei684719@163.com

Author for correspondence. E-mail:zhangxianqiang@126.com

10.3969/j.issn.1000-2324.2022.06.018