周婷趙威趙傳岳王麗
靈芝菌糠對白星花金龜幼蟲生長性能的影響
周婷2,趙威1,趙傳岳1,王麗1
1. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院, 山東 泰安 271018 2. 招遠(yuǎn)市農(nóng)技推廣中心, 山東 招遠(yuǎn) 265400
本試驗(yàn)探究了不同配比的靈芝菌糠對白星花金龜幼蟲的飼喂效果。以蝗蟲蟲砂作為對照,測定了不同配比的靈芝菌糠(25%、50%、75%和100%)飼喂下白星花金龜幼蟲的食料日減重、蟲體日增重、蟲砂日產(chǎn)量等指標(biāo)并計(jì)算取食率、消化率、利用率和死亡率。結(jié)果表明:25%靈芝菌糠添加組的食料日減重、蟲體日增重、蟲砂日產(chǎn)量和白星花金龜幼蟲取食率等指標(biāo)顯著優(yōu)于其它處理組;25%靈芝菌糠組和50%靈芝菌糠組與對照組的轉(zhuǎn)化率和利用率均無顯著差異。進(jìn)一步對產(chǎn)生的蟲砂進(jìn)行種子發(fā)芽指數(shù)測定得出:經(jīng)白星花金龜幼蟲轉(zhuǎn)化后,添加靈芝菌糠組的白星花金龜幼蟲蟲砂的GI值均接近或大于80%,均高于對照組,達(dá)到了堆肥完全成熟的標(biāo)準(zhǔn)。
昆蟲養(yǎng)殖; 白星花金龜; 靈芝菌糠
靈芝()是我國著名的藥用菌,隨著人們保健意識的增強(qiáng),對靈芝產(chǎn)品的需求日益增加,極大地促進(jìn)了靈芝產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。據(jù)中國食用菌協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì),2018年我國靈芝總產(chǎn)量已達(dá)16萬噸。伴隨著靈芝生產(chǎn)規(guī)模的日益擴(kuò)大,靈芝菌糠的數(shù)量也急劇增加,但目前并未得到有效利用,造成嚴(yán)重資源浪費(fèi)和環(huán)境污染,成為制約靈芝產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的瓶頸因素。靈芝菌糠中殘留的菌絲體富含多糖、氨基酸及微量元素等多種營養(yǎng)物質(zhì),其經(jīng)過微生物發(fā)酵后粗纖維含量大幅降低,同時(shí)由于菌體蛋白存在,粗蛋白質(zhì)含量有所提高,是一類亟待開發(fā)的寶貴資源[1,2]。
白星花金龜(Lewis)為昆蟲綱、鞘翅目、金龜甲總科、花金龜科、星花金龜屬的昆蟲,其幼蟲為腐食性,在自然界中以取食腐爛的秸稈、雜草及畜禽糞便等為生[3,4]。白星花金龜幼蟲為高蛋白昆蟲,具有抗菌消炎等功效[5],且該昆蟲可以將有機(jī)廢棄物轉(zhuǎn)化為有機(jī)質(zhì)含量高的顆粒狀蟲砂,在飼料、醫(yī)藥和肥料領(lǐng)域都具有重要的應(yīng)用和開發(fā)前景[6]。早期對白星花金龜?shù)难芯恐饕性谏飳W(xué)特性、發(fā)生規(guī)律及害蟲防治方面[7-11]。近年來隨著農(nóng)業(yè)有機(jī)廢棄物資源數(shù)量的不斷增加和人們對生態(tài)環(huán)境保護(hù)的重視,白星花金龜作為一種寶貴的環(huán)保昆蟲資源也被用于各種有機(jī)廢棄物的生物轉(zhuǎn)化中。研究發(fā)現(xiàn),白星花金龜對農(nóng)作物秸稈、菌糠和畜禽糞便等有機(jī)廢棄物都有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)化能力[12-16],其中以蝗蟲蟲砂的飼喂效果較好[17]。因此,本文以蝗蟲蟲砂為對照,對不同配比的靈芝菌糠與蝗蟲蟲砂飼喂白星花金龜幼蟲進(jìn)行研究,探究不同靈芝菌糠含量對其生長發(fā)育的影響并測定不同處理組白星花金龜幼蟲蟲砂的GI值,以期為菌糠的資源化利用提供一定的理論依據(jù)。
供試蟲源:實(shí)驗(yàn)用蟲為白星花金龜三齡幼蟲,由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院環(huán)境生物與昆蟲資源實(shí)驗(yàn)室提供。
供試靈芝菌糠和蝗蟲蟲砂:靈芝菌糠取自聊城冠縣靈芝種植基地,主要栽培基質(zhì)為木糖醇渣;蝗蟲蟲砂取自泰安市東亞飛蝗養(yǎng)殖戶(蝗蟲食料為鮮玉米秸稈),將靈芝菌糠和蝗蟲蟲砂粉碎后過10目篩網(wǎng)備用。
實(shí)驗(yàn)材料:方形塑料養(yǎng)蟲盒(1000 mL,宿遷市百悅科技有限公司),仙桃多功能粉碎機(jī)(永康市紅太陽機(jī)電有限公司),GZX-9146 MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠),深圳無限量電子天平(精確至0.1 g),10、20、40目篩網(wǎng)等。
共設(shè)五組處理,每組處理設(shè)三個(gè)重復(fù),其中Ⅰ組飼喂100%靈芝菌糠,Ⅱ組飼喂75%靈芝菌糠+25%蝗蟲蟲砂,Ⅲ組飼喂50%靈芝菌糠+50%蝗蟲蟲砂,Ⅳ組飼喂25%靈芝菌糠+75%蝗蟲蟲砂,對照組飼喂100%蝗蟲蟲砂。實(shí)驗(yàn)前分別測定靈芝菌糠及蝗蟲蟲砂的含水量,按干重比混勻后,調(diào)節(jié)并控制含水量為60%。
每標(biāo)準(zhǔn)盒(1000 mL,17 cm×11.5 cm×6.5 cm)加入三齡幼蟲12頭,按蟲料比1:8加入配制好的食料,置于智能人工氣候箱(=25 ℃、RH=75%±5%)中培養(yǎng),每天觀察記錄幼蟲死亡情況,并及時(shí)補(bǔ)充狀態(tài)一致的蟲體,每7 d測定并記錄白星花金龜幼蟲死亡數(shù)、蟲體重量、取食食料干重以及產(chǎn)生的糞砂干重,共飼喂42 d。
各實(shí)驗(yàn)組蟲體日增重、食料日減重、蟲砂日產(chǎn)量的計(jì)算公式如下:
蟲體日增重(g/d)=(飼喂后蟲重-飼喂前蟲重)/飼喂天數(shù)
食料日減重(g/d)=(飼喂前食料干重-飼喂后食料干重)/飼喂天數(shù)
蟲砂日產(chǎn)量(g/d)=產(chǎn)生的蟲砂干重/飼喂天數(shù)
各實(shí)驗(yàn)組白星花金龜幼蟲的取食率、消化率、利用率和死亡率計(jì)算方法[12,18],如下:
取食率(%)=(添加食料干重-剩余食料干重)/添加食料干重×100
消化率(%)=(取食量-排糞量)/取食量×100
轉(zhuǎn)化率(%)=增加的體重/(取食量-排糞量)×100
利用率(%)=增加體重/取食量×100
死亡率(%)=死亡蟲數(shù)/供試蟲數(shù)×100
GI被用于評估本研究的實(shí)驗(yàn)組和對照組經(jīng)白星花金龜幼蟲轉(zhuǎn)化后獲得的蟲砂對植物的毒性。參考Li Y等的方法并稍作改進(jìn)[19],具體為:將烘干的菌糠及蟲砂樣品粉碎并稱取5 g,與蒸餾水按1:10(m/v)的比例混合,160 r/min、30 ℃震蕩24 h,之后4℃、12000 rpm離心10 min,過濾收集上清液用于植物種子發(fā)芽。使用小油菜種子做發(fā)芽實(shí)驗(yàn)的材料,采用培養(yǎng)皿內(nèi)紙上發(fā)芽的方式,將兩層9 cm濾紙置于9×9 cm培養(yǎng)皿內(nèi),均勻點(diǎn)播20粒油菜種子,加10 mL浸提液置于25 ℃恒溫箱中暗光培養(yǎng)3 d,使用蒸餾水作為對照,每個(gè)處理重復(fù)3次。按下面公式計(jì)算各處理的GI值。
GI(%)=(處理的種子發(fā)芽的平均數(shù)量×種子平均根長)/(對照的種子發(fā)芽的平均數(shù)量×種子平均根長)×100
調(diào)查數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0進(jìn)行分析,采用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行方差分析。應(yīng)用Microsoft Excel 2013記錄、整理數(shù)據(jù)和繪制表格。
在不同配比靈芝菌糠飼喂下,白星花金龜幼蟲蟲體日增重、蟲砂日產(chǎn)量和食料日減重等指標(biāo)如圖1、圖2和圖3所示。從圖中可以看出,白星花金龜幼蟲的蟲體日增重、蟲砂日產(chǎn)量和食料日減重均隨著靈芝菌糠含量增加呈遞減趨勢,蝗蟲蟲砂對照組的各項(xiàng)指標(biāo)均顯著優(yōu)于各實(shí)驗(yàn)組;在添加靈芝菌糠的實(shí)驗(yàn)組中,25%靈芝菌糠組的各項(xiàng)指標(biāo)顯著優(yōu)于其他實(shí)驗(yàn)組。蟲體日增重指標(biāo)測定發(fā)現(xiàn),25%靈芝菌糠組和對照組的蟲體日增重均隨著飼喂時(shí)間增加而表現(xiàn)出先增高再降低的趨勢,且最高值均出現(xiàn)在飼喂第14 d時(shí),分別為0.847 g/d和1.187 g/d;25%靈芝菌糠組在第28 d和第35 d的蟲體日增重與對照組無顯著差異;75%靈芝菌糠組和100%靈芝菌糠組日增重普遍較低,且在第21 d和42 d時(shí)出現(xiàn)負(fù)增長。食料日減重和蟲砂日產(chǎn)量指標(biāo)測定發(fā)現(xiàn),各實(shí)驗(yàn)組和對照組均在第7 d時(shí)最低,隨著時(shí)間的增加,兩項(xiàng)指標(biāo)均表現(xiàn)出顯著增加,對照組的食料日減重和蟲砂日產(chǎn)量分別在第21 d和第28 d達(dá)到最高,分別為7.331 g/d和4.976 g/d;25%靈芝菌糠組的食料日減重和蟲砂日產(chǎn)量均為第14 d達(dá)到最高,分別為0.776 g/d和0.727 g/d。
圖 1 不同食料對白星花金龜幼蟲蟲體日增重的影響
圖 2 不同食料對食料日減重的影響
圖 3 不同食料對蟲砂日產(chǎn)量的影響
不同食料飼喂下白星花金龜幼蟲的取食率、消化率、轉(zhuǎn)化率和利用率見表1。由表中得出,各飼喂處理間的取食率有顯著性差異(=788.614,<0.05),隨著食料中靈芝菌糠的增多,取食率呈降低趨勢;對照組消化率顯著高于添加靈芝菌糠的各組(=17.515,<0.05);添加25%靈芝菌糠的處理轉(zhuǎn)化率顯著高于對照組(=20.659,<0.05);各處理間利用率無顯著差異(=3.06,=0.092)。
表 1 不同食料對白星花金龜幼蟲取食率、消化率、轉(zhuǎn)化率、利用率的影響
注: “—”表示負(fù)值;數(shù)據(jù)為平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)誤,同列數(shù)據(jù)后附不同小寫字母者表示差異顯著 (<0.05)。
Note: Mean ± SE in the same row followed by different letters indicate significant differences (<0.05).
不同食料飼喂下白星花金龜幼蟲的死亡率見表2,由表中得出,Ⅰ組的蟲體死亡率最高,為14.5%,顯著高于其他組;Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的蟲體死亡率與對照組無顯著差異,其中Ⅲ組的蟲體死亡率為零(=5.58,<0.05)。
表 2 不同食料對白星花金龜死亡率的影響
注: 數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤,同列數(shù)據(jù)后附不同小寫字母者表示差異顯著 (<0.05)。
Note: Mean ± SE in the same row followed by different letters indicate significant differences (<0.05).
不同食料飼喂白星花金龜幼蟲轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的蟲砂色澤和質(zhì)地存在明顯差異(圖4),隨著靈芝菌糠含量的增加,蟲砂色澤逐漸加深,質(zhì)地也越來越緊實(shí)。
圖 4 不同食料飼喂白星花金龜產(chǎn)生的蟲砂(a、b、c、d和e依次為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和CK組的蟲砂)
通過測定GI值對靈芝菌糠、蝗蟲蟲砂和不同食料組產(chǎn)生的白星花金龜幼蟲蟲砂分別進(jìn)行了植物毒性評價(jià),結(jié)果見圖5。經(jīng)白星花金龜幼蟲轉(zhuǎn)化后的蟲砂的GI值均比轉(zhuǎn)化前的靈芝菌糠和蝗蟲蟲砂有所提高,且隨著靈芝菌糠添加量的增加,GI值呈現(xiàn)逐漸增加趨勢,添加靈芝菌糠組的蟲砂的GI值均接近或高于80%,均高于對照組,其中25%和50%靈芝菌糠組蟲砂的GI值均接近80%,分別為79.71%和79.89%;50%和100%靈芝菌糠組蟲砂的GI值均高于80%,分別為85.21%和99.13%,飼喂100%靈芝菌糠產(chǎn)生的蟲糞砂GI值顯著高于其他處理(=21.706,<0.05)。
圖 5 種子發(fā)芽指數(shù)測定
本研究以不同配比靈芝菌糠飼喂白星花金龜幼蟲并評價(jià)了其飼喂效果,進(jìn)一步通過GI實(shí)驗(yàn)評價(jià)了白星花金龜幼蟲蟲砂的植物毒性,為菌糠的資源化高效利用提供一定的理論依據(jù)。
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蟲體增重、取食食料干重以及產(chǎn)生的蟲砂干重等指標(biāo)均以對照組為最優(yōu),且隨著靈芝菌糠添加量的增加呈現(xiàn)下降趨勢,推測是由于靈芝菌糠中含有三萜等苦味物質(zhì)或基質(zhì)降解程度不夠,導(dǎo)致白星花金龜幼蟲適口性較差,進(jìn)而影響了其取食。從蟲體死亡率數(shù)據(jù)得出,25%及50%靈芝菌糠組的白星花金龜幼蟲死亡率與對照無顯著差異,且50%靈芝菌糠組的蟲體死亡率為零,在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)對照組和25%靈芝菌糠組的蟲體死亡原因主要為綠僵菌、白僵菌等病原菌感染,而75%和100%靈芝菌糠組的蟲體死亡原因多為蟲體取食量少而饑餓致死或被其他幼蟲分食,病原菌感染情況較少,推測是因?yàn)殪`芝菌糠中含有多種活性成分,適量添加可增強(qiáng)昆蟲的免疫力進(jìn)而提高其抗病能力。這與研究報(bào)道的靈芝菌糠提取物可提高肉雞、奶牛等動(dòng)物的抗氧化性和免疫功能的研究結(jié)果較一致[20-22]。
通過計(jì)算取食率、消化率、轉(zhuǎn)化率、利用率等指標(biāo)得出,各處理間取食率均存在顯著性差異,對照組消化率顯著高于其他添加靈芝菌糠的處理,添加25%靈芝菌糠的轉(zhuǎn)化率顯著高于對照組,各處理間利用率無顯著性差異。經(jīng)計(jì)算白星花金龜幼蟲每取食1 kg 25%靈芝菌糠的食料可產(chǎn)生683.4 g蟲砂,蟲體增重64.7 g,通過與楊誠等[13]研究比較得出,白星花金龜幼蟲對50%和25%靈芝菌糠組的取食率均優(yōu)于玉米秸稈。菌糠中富含纖維素、半纖維素以及相應(yīng)的活性酶等物質(zhì),吳和龍[23]在研究菌草靈芝菌糠多糖對瘤胃微生物發(fā)酵及菌群影響時(shí)發(fā)現(xiàn),用靈芝菌糠代替20%粗飼料喂山羊,可以提高瘤胃微生物發(fā)酵水平,提高纖維素降解率,提高飼料利用率,表明添加一定比例的靈芝菌糠對動(dòng)物生長有促進(jìn)作用,與本研究的結(jié)果較為一致。
植物毒性是有機(jī)質(zhì)對種子萌發(fā)、植物生長和土壤環(huán)境均存在不利影響。GI是評價(jià)植物毒性最敏感的參數(shù)之一。通常50%的GI表示堆肥基本上不含植物毒素,大于80%的GI表示堆肥完全成熟且不含植物毒素。本研究中,我們分別測定了不同處理組產(chǎn)生的白星花金龜幼蟲蟲砂的GI值。結(jié)果如圖5所示,從圖中可以得出,靈芝菌糠和蝗蟲蟲砂原料的GI均大于50%,分別為72.35%和64.51%。不同處理組獲得的白星花金龜蟲砂的GI均大于50%,其中100%靈芝菌糠組和75%靈芝菌糠組的飼料產(chǎn)生的蟲砂GI均大于80%,分別達(dá)到99.13%和85.21%,較原料有了大幅提高,而50%和25%菌糠處理產(chǎn)生的蟲砂GI分別為79.89%和79.71%,接近80%,基本達(dá)到完全腐熟不含植物毒素的標(biāo)準(zhǔn)?;认x蟲砂對照組蟲砂GI為69.53%,達(dá)到了基本腐熟的標(biāo)準(zhǔn)。這些數(shù)據(jù)表明,經(jīng)白星花金龜轉(zhuǎn)化靈芝菌糠可增加其腐熟程度,降低植物毒性。
[1] 吳端欽,唐守偉,王延周,等.菌糠飼料化開發(fā)及其在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].中國畜牧雜志,2015,51(24):75-78,83
[2] 許錦聰,何祥波,苗景,等.常見菌糠營養(yǎng)特性及棉酚含量分析[J].飼料工業(yè),2018,39(14):29-34
[3] 鄭洪源,劉建平,南懷林,等.白星花金龜子食性研究[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2005(3):23-24,54
[4] Li YM, Fu T, Geng LL,. Protaetia brevitarsis larvae can efficiently convert herbaceous and ligneous plant residues to humic acids [J]. Waste Management, 2019,83:79-82
[5] 張慶鎬,樸奎善,李基俊,等. 蠐螬礦物元素和維生素含量分析[J].微量元素與健康研究,2002(1):30-31
[6] 劉福順,馮曉潔,席國成,等.白星花金龜幼蟲蟲糞對櫻桃蘿卜生長情況的影響[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2018,57(4):44-46,50
[7] 陳日曌,何康來,尹姣,等.白星花金龜主要習(xí)性及其群集為害玉米行為機(jī)制的初步研究[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006(3):240-243
[8] 趙仁貴,陳日曌.白星花金龜生活習(xí)性觀察[J].中國植保導(dǎo)刊,2008(6):19-20
[9] 劉政,王少山,孫艷,等.白星花金龜發(fā)育起點(diǎn)溫度和有效積溫的研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,21(3):198-201
[10] 郝雙紅,李廣澤,張濤,等.白星花金龜行為學(xué)觀察及其信息素的誘蟲效果[J].中國生物防治,2005(2):124-126
[11] 何笙,周澤容,吳趙平,等.白星花金龜發(fā)生與防治技術(shù)研究初報(bào)[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2006(6):314-316
[12] 張倩.取食平菇菌糠的白星花金龜生物學(xué)研究[D].泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2015
[13] 楊誠,劉玉升,徐曉燕,等.白星花金龜幼蟲對酵化玉米秸稈取食效果的研究[J].環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào),2015,37(1):122-127
[14] 劉玉升,張大鵬.基于白星花金龜幼蟲轉(zhuǎn)化玉米秸稈的微循環(huán)農(nóng)牧場模式研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(31):85-87
[15] 孫晨可.“小麥秸稈—大球蓋菇—白星花金龜”循環(huán)模式研究[D].泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2018
[16] Wei PP, Li YM, Lai DQ,. Protaetia brevitarsis larvae can feed on and convert spent mushroom substrate fromandcultivation [J]. Waste Management, 2020,114:234-239
[17] 張廣杰.白星花金龜對有機(jī)廢棄物的轉(zhuǎn)化技術(shù)研究[D].泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2019
[18] 楊柳,張廣杰,徐韜,等. 白星花金龜幼蟲對不同農(nóng)業(yè)有機(jī)廢棄物的轉(zhuǎn)化力研究[J].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2019,42(3):189-193
[19] Ryden P, Efthymiou MN, M Tindyebwa TAM,. Bioethanol production from spent mushroom compost derived from chaff of millet and sorghum [J]. Biotechnology for biofuels, 2017(10):195
[20] 邢瑞虎,郭艷麗,何玉鵬,等.靈芝菌培養(yǎng)物對肉雞生長性能、抗氧化性能和免疫功能的影響[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2013,48(6):29-33,39
[21] 鄭丹,師靜,林占熺.鮮菌草與靈芝菌絲發(fā)酵菌質(zhì)對奶牛免疫機(jī)能及抗氧化能力的影響[J].中國奶牛,2017(7):46-49
[22] 彭彥淳,范思遠(yuǎn),李曉慧,等.靈芝液體發(fā)酵物對肉雞生產(chǎn)性能、免疫功能和抗氧化性能的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2021(2):107-112
[23] 吳和龍.菌草靈芝菌糠多糖對瘤胃微生物發(fā)酵及菌群的影響[D].福州:福建農(nóng)林大學(xué),2014
Effects of the Spent Substrate ofon the Growth Performance ofLewis Larvae
ZHOU Ting2, ZHAO Wei1, ZHAO Chuan-yue1, WANG Li1
1.271018,2.265400,
In this study, the feeding effects of different proportions of the spent substrate of(SSGL) onLewis Larvae (PBLL) were studied. Usingdung-sand as control, the daily feed weight loss, daily weight gain, daily yield of frass and the mortality of PBLL feeding on different proportions of SSGL (25%, 50%, 75% and 100%) were determined, and the feeding rate, digestive rate, utilization rate were calculated. The results showed that the daily feed weight loss, daily weight gain, daily yield of insect were all obviously better in 25% SSGL added group than other groups, although lower than the control group. There was no significant difference in conversion rate and utilization rate among the 25% SSGL added group, the 50% SSGL added group and the control group. Germination index (GI) of the frass was determined and the results showed that the GI value of the frass generated in SSGL added groups were close or higher than 80%, indicating the frass were basically well-rotted.
Insect feeding;Lewis; spent substrate of
S433.5
A
1000-2324(2022)06-0868-06
2022-01-12
2022-03-07
冠縣鄉(xiāng)村振興科技合作基金(GXJJ2020-04);山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系食用菌創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目(SDAIT-07-06)
周婷(1997-),女,碩士,主要研究方向:菌糠資源利用. E-mail:1764474915@qq.com
Author for correspondence. E-mail:haoyou0102@163.com
10.3969/j.issn.1000-2324.2022.06.009