劉木洪，周曉橦，覃亮*

（1.云浮市厚德中藥飲片有限公司，廣東云浮 527300；2.肇慶學(xué)院 食品與制藥工程學(xué)院，廣東肇慶 526061）

小兒氨酚黃那敏顆粒是一種口感好、副作用小的小兒感冒慣用藥，有效成分包括馬來酸氯苯那敏、人工牛黃、對乙酰氨基酚[1]。馬來酸氯苯那敏可治愈流淚、鼻塞、打噴嚏等感冒病狀，人工牛黃可消除內(nèi)熱、鎮(zhèn)驚、祛痰[2]。氨基經(jīng)過乙酰化形成的對乙酰氨基酚使用起來更安全[3]，能被人體迅速吸收，對血小板的功能以及凝血效果基本沒有影響，不傷害胃腸道和腎，刺激很小且沒有腎毒性，臨床上常用于醫(yī)治發(fā)熱、頭痛、痛經(jīng)等癥狀[4]。

《中華人民共和國藥典（2020年版）》選用紫外-可見分光光度法測定對乙酰氨基酚的含量[5]，該方法專屬性不強(qiáng)[6]，不能完全排除對乙酰氨基酚以外其他成分對含量測定的干擾，局限性大。為完善其含量測定的方法，本文選擇采用操作簡單可行，結(jié)果專屬性、準(zhǔn)確度更高，能快速定性、定量的反相高效液相色譜法來測定對乙酰氨基酚含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

LC-20AT高效液相色譜儀，日本島津公司；BT125D電子天平，德國Sartorius公司；5800上超聲清洗器，必能信超聲（上海）有限公司；GM-0.5B無油隔膜真空泵，天津市津騰實驗設(shè)備有限公司。

1.2 藥品與試劑

對乙酰氨基酚（批號：100018-201610，提供給HPLC法測定，使用前無需要干燥，需要在10～30 ℃保存，含量為99.9%），中國食品藥品檢定研究院；馬來酸氯苯那敏（批號：100047-201507，供給HPLC法測定，供給含量測定用，需要遮光，需要在10～30℃保存，含量為99.7%），中國食品藥品檢定研究院；小兒氨酚黃那敏顆粒：批號200306，江西香雪和明制藥有限公司；批號20210201，廣東彼迪彼兒康藥業(yè)有限公司；批號210108，山西同達(dá)青蘋果藥業(yè)有限公司；批號201211，黃山精致藥業(yè)南京同仁堂有限公司；批號210404，貴州省科暉制藥廠；批號202102072，吉林萬通藥業(yè)集團(tuán)梅河藥業(yè)股份有限公司；批號201110，廣東宏遠(yuǎn)集團(tuán)藥業(yè)有限公司。

甲醇，色譜純，≥99.9%，貨號M116118，阿拉?。ㄉ虾＃┥萍脊煞萦邢薰荆凰疄槌兯?。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

選擇甲醇∶水=40∶60作為流動相；色譜柱CAPCELL PAK C18MG（250 mm×4.6 mm，5 μm）為固定相；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；柱溫選擇25 ℃；檢測波長 275 nm[6]。

1.3.2 溶液配制

對照品溶液的配制：準(zhǔn)確稱量0.010 82 g對乙酰氨基酚對照品，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶，用超純水定容。陰性對照品同法制備。

供試樣品溶液的配制：每個廠家取20袋顆粒劑，精密稱定，記錄每個廠家20袋顆粒劑總重并計算每個廠家供試樣品的平均裝量，取供試樣品倒入研體，用研體研磨成細(xì)粉。精密稱量小兒氨酚黃那敏顆粒（大約含有10 mg對乙酰氨基酚）轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶，超純水定容，轉(zhuǎn)移5 mL溶液到50 mL容量瓶并定容，使用續(xù)濾液進(jìn)樣。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別精密量取5 mL 對照品溶液轉(zhuǎn)移到10 mL、20 mL、50 mL、100 mL、500 mL容量瓶，用超純水定容，以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 精密度實驗

選同一濃度對照品溶液，按1.3.2描述的進(jìn)行配制溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。

1.3.5 供試品含量的測定

精密稱量不同廠家不同批號供試樣品（約含對乙酰氨基酚10 mg），按照1.3.2描述配制溶液，記下色譜圖，用外標(biāo)法計算對乙酰氨基酚含量。

1.3.6 重復(fù)性實驗

平行稱定6份小兒氨酚黃那敏顆粒（吉林萬通藥業(yè)集團(tuán)梅河藥業(yè)股份有限公司，批號202102072），按照1.3.2配制溶液，每份重復(fù)進(jìn)樣2次。

1.3.7 穩(wěn)定性實驗

對同一份供試樣品，按照1.3.2描述的方法進(jìn)行溶液配制，分別在放置1 h、6 h、12 h、24、h和48 h后進(jìn)樣2次。

1.3.8 加標(biāo)回收率實驗

對1.3.5項下測出含量的6份供試樣品，按照1.3.2方法在50 mL容量瓶中定容。

準(zhǔn)確稱量0.010 93 g對乙酰氨基酚對照品，轉(zhuǎn)移到20 mL容量瓶，用超純水定容，移取1 mL到未定容的50 mL容量瓶中，按照供試、對照溶液濃度比1∶1制備。計算出每份對應(yīng)的含量、平均回收率、RSD值。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性實驗

實驗結(jié)果見圖1，對照品溶液濃度在1.080 92～54.045 90 μg/mL，對乙酰氨基酚對照品峰面積與其濃度呈現(xiàn)直線型線性關(guān)系，線性方程為Y=14 578.970 57X-2 030.228 12，R2=0.999 979 3。

圖1 對乙酰氨基酚對照品線性曲線色譜圖

2.2 精密度實驗

實驗結(jié)果見圖2，對照品溶液保留時間為3.667～3.680 min，相應(yīng)峰面積在155 070～156 595，濃度在10.675～10.780 μg/mL，測定濃度較接近，可得精密度RSD=0.258 1%（n=6），說明選擇使用的色譜系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣時響應(yīng)值的精密度較好。

圖2 對乙酰氨基酚對照品精密度色譜圖

2.3 供試樣品的含量

對不同廠家顆粒劑中對乙酰氨基酚含量進(jìn)行測定，對乙酰氨基酚平均含量在98.253 5%～101.762 1%（見表1），差距較小，表明生產(chǎn)廠家不同，不影響含量測定，因此本文選擇萬通藥業(yè)生產(chǎn)的顆粒劑作為相關(guān)實驗的供試樣品。

表1 不同廠家供試樣品中的對乙酰氨基酚含量

在同一保留時間內(nèi)，采用同一色譜系統(tǒng)分離得到同一種物質(zhì)，即對乙酰氨基酚，其含量分別為101.155 9%、100.622 7%、99.891 0%和100.090 6%（見表2），表明供試樣品含量穩(wěn)定，可進(jìn)行供試樣品相關(guān)實驗。

2.4 重復(fù)性實驗

由表3可知，保留時間在3.690～3.699 min時，測得供試品濃度在10.286～10.694 μg/mL，對乙酰氨基酚含量為99.289 2%～101.731 3%，RSD值為0.777 6%，實驗重復(fù)性較好，可進(jìn)行加標(biāo)回收率實驗。

表3 供試樣品中的對乙酰氨基酚重復(fù)性含量

2.5 穩(wěn)定性實驗

由表4可知，保留時間在3.692～3.702 min時，測得供試樣品中對乙酰氨基酚含量在100.572 7%～102.521 2%，平均含量為101.447 1%，含量RSD值為0.536 4%。表明在48 h內(nèi)，供試樣品的對乙酰氨基酚含量檢測數(shù)據(jù)變化較小，穩(wěn)定性較好。

表4 供試樣品穩(wěn)定性實驗結(jié)果

2.6 加標(biāo)回收率實驗

由表5可知，保留時間在3.685～3.705 min時，供試樣品的加標(biāo)回收率在100.576 3%～104.505 2%，平均回收率為102.573 6%，RSD值為1.168 9%，符合平均回收率數(shù)據(jù)要求的92%～105%，RSD值小于1.5[5]。表明該方法對對乙酰氨基酚含量測定產(chǎn)生影響較小，操作簡單可行。

表5 供試樣品的加標(biāo)回收率

3 結(jié)論

HPLC法專屬性良好，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性高，操作簡單便捷，可作為小兒氨酚黃那敏顆粒中對乙酰氨基酚含量測定的檢測新方法。