米會敏，孫麗，蔡媛

寶雞市中心醫(yī)院病理科，陜西 寶雞 721000

結(jié)直腸癌是發(fā)生于結(jié)腸的消化道惡性腫瘤，好發(fā)于直腸和乙狀結(jié)腸交界處，以40～50歲發(fā)病率最高，其發(fā)病率居胃腸道腫瘤的第3位[1]。結(jié)直腸癌發(fā)病隱匿，臨床癥狀不典型，多數(shù)患者確診時已進(jìn)展至中晚期，延誤了最佳的治療時機(jī)，導(dǎo)致治療效果受限，患者的預(yù)后較差，因此早發(fā)現(xiàn)、早診斷結(jié)直腸癌對降低患者的病死率有重要意義[2]。晚期結(jié)直腸癌患者的生存率僅為50%，主要是由于缺乏合理的評估體系，使臨床決策缺少決定性證據(jù)[3]。目前結(jié)直腸癌的病因和發(fā)病機(jī)制尚不清楚，近年來研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌與原癌基因活化、腫瘤抑制基因失活有關(guān)，提示結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中存在復(fù)雜的分子事件[4]。相關(guān)研究顯示，三磷酸腺苷酶家族蛋白3A（ATPase family AAA domain containing 3A，ATAD3A）、缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）均與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及不良預(yù)后有關(guān)[5]。本研究探討ATAD3A、HIF-1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月至2021年8月寶雞市中心醫(yī)院收治的結(jié)直腸癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移診斷和綜合治療指南（V2016）》[6]中關(guān)于結(jié)直腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理檢查確診為結(jié)直腸癌；②均首次接受結(jié)直腸癌根治術(shù)治療；③溝通能力良好；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近1個月內(nèi)有炎癥病史；②術(shù)前行新輔助化療導(dǎo)致病理組織改變；③存在活動性細(xì)菌或真菌感染；④存在精神疾病，無法配合治療；⑤肝腎功能異常及重要臟器嚴(yán)重疾病等。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入118例結(jié)直腸癌患者，其中男70例，女48例；年齡23～75歲，平均（48.22±5.12）歲；體重指數(shù)（body mass index，BMI）16～26 kg/m2，平均（20.01±1.22）kg/m2；結(jié)腸癌68例，直腸癌50例；腫瘤直徑2～8 cm，平均（5.51±0.35）cm；臨床分期：Ⅰ期 40例，Ⅱ期28例，Ⅲ期30例，Ⅳ期20例；浸潤深度：淺肌層88例，深肌層30例；有神經(jīng)侵犯45例，無神經(jīng)侵犯73例；有脈管受累60例，無脈管受累58例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移80例；分化程度：高分化50例，中低分化68例。另同期選取100例結(jié)直腸良性病變患者，其中男60例，女40例；年齡25～76歲，平均（48.30±5.02）歲；BMI為17～25 kg/m2，平均（20.12±1.29）kg/m2。兩組患者性別、年齡、BMI比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測ATAD3A、HIF-1表達(dá)情況

取118例結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織和100例結(jié)直腸良性病變患者的良性病變組織，石蠟包埋切片，烤箱烘烤90 min，浸入二甲苯中，脫蠟10 min，逐級放入100%、90%、70%乙醇及純水中浸泡5 min，3%過氧化氫孵育10 min，沖洗3次，浸泡在0.01 mmol/L的乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）抗原修復(fù)液中，高溫高壓修復(fù)3 min，靜置30 min，反復(fù)沖洗3次，滴加山羊血清封閉20 min，分別加入一抗ATAD3A抗體（稀釋濃度1∶150）、HIF-1抗體（稀釋濃度1∶50），4 ℃在冰箱孵育過夜，PBS沖洗3次，二抗孵育完成后沖洗3次，鹽酸乙醇分化，其余免疫組化步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，觀察顯色情況，滴加蘇木素復(fù)染1 min，沖洗、脫水，中性樹脂封片，由2名病理醫(yī)師在光學(xué)顯微鏡下觀察，雙盲法判定結(jié)果。依據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行結(jié)果判定：無著色計(jì)0分，淡黃色染色計(jì)1分，棕黃色染色計(jì)2分，棕褐色染色計(jì)3分；無陽性細(xì)胞計(jì)0分，陽性細(xì)胞所占比例＜25%計(jì)1分，陽性細(xì)胞所占比例25%～75%計(jì)2分，陽性細(xì)胞所占比例＞75%計(jì)3分；將染色強(qiáng)度評分和陽性細(xì)胞所占比例評分相加，＞2分判定為陽性，≤2分判定為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)性分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ATAD3A、HIF-1表達(dá)情況的比較

結(jié)直腸癌組織中ATAD3A、HIF-1陽性表達(dá)率均明顯高于良性病變組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 結(jié)直腸癌組織和良性病變組織中ATAD3A、HIF-1陽性表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征結(jié)直腸癌患者結(jié)直腸癌組織中ATAD3A、HIF-1表達(dá)情況的比較

不同性別、BMI、臨床分期、浸潤深度、神經(jīng)侵犯情況、脈管受累情況結(jié)直腸癌患者結(jié)直腸癌組織中ATAD3A、HIF-1陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；腫瘤直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中低分化結(jié)直腸癌患者結(jié)直腸癌組織中ATAD3A、HIF-1的陽性表達(dá)率分別高于腫瘤直徑＜5 cm、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為高分化患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征結(jié)直腸癌患者結(jié)直腸癌組織中ATAD3A、HIF-1表達(dá)情況的比較（n=118）

2.3 ATAD3A、HIF-1表達(dá)的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，ATAD3A的表達(dá)與HIF-1的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.412，P＜0.05）。

3 討論

結(jié)直腸癌的病因尚不明確，可能與高脂肪飲食、肥胖率增加、結(jié)腸腺瘤有一定關(guān)系，機(jī)體免疫力低下和局部慢性炎癥可能是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因[7]。隨著臨床對結(jié)直腸癌研究的不斷深入，有研究認(rèn)為，結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展過程中可能存在一系列抑癌基因突變、原癌基因活化等分子事件，且伴有惡性腫瘤生物學(xué)行為及組織形態(tài)學(xué)改變，最終導(dǎo)致結(jié)直腸癌[8]。目前，臨床結(jié)直腸癌的靶向藥物只有少數(shù)幾種生物制劑，但受個體差異影響，部分患者無法從中獲益，因此，有必要開展結(jié)直腸癌方面的研究，發(fā)現(xiàn)更多有意義的潛在治療靶點(diǎn)。

線粒體是人體細(xì)胞中能量來源的細(xì)胞器，主要通過氧化應(yīng)激信號通路、生物學(xué)代謝重編程等參與惡性腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移過程[9]。ATAD3A可參與細(xì)胞內(nèi)基因組轉(zhuǎn)錄、蛋白水解等多個生物過程。既往有研究證實(shí)，ATAD3A是維持線粒體正常功能的因子，其表達(dá)缺失會損害線粒體功能，進(jìn)而抑制細(xì)胞生長[10]。缺氧是腫瘤微環(huán)境的基本特征，由于惡性腫瘤細(xì)胞生長速度較快，供血不足容易使瘤體處于低氧狀態(tài)[11]。越來越多的研究證實(shí)，腫瘤細(xì)胞生長速度增快導(dǎo)致的局部缺氧在腫瘤環(huán)境中較常見[12-13]。

本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中ATAD3A、HIF-1陽性表達(dá)率均明顯高于良性病變組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；腫瘤直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中低分化結(jié)直腸癌患者結(jié)直腸癌組織中ATAD3A、HIF-1的陽性表達(dá)率分別高于腫瘤直徑＜5 cm、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為高分化的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；進(jìn)一步Pearson相關(guān)分析顯示，ATAD3A的表達(dá)與HIF-1的表達(dá)呈正相關(guān)。表明ATAD3A、HIF-1均與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，提示ATAD3A、HIF-1的陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為密切相關(guān)，與相關(guān)研究報(bào)道的結(jié)果一致[14-15]。

有研究證實(shí)，ATAD3A會破壞非小細(xì)胞肺癌線粒體的正常網(wǎng)狀形態(tài)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖生長[16]。結(jié)直腸癌細(xì)胞中也有相同現(xiàn)象，ATAD3A過表達(dá)后，結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)，抑制ATAD3A的表達(dá)細(xì)胞增殖能力顯著減弱。腫瘤的快速生長需要大量能量供應(yīng)，ATAD3A在線粒體氧化磷酸化中發(fā)揮了重要作用，能夠明顯促使腫瘤細(xì)胞生長[17]。結(jié)直腸癌早期，細(xì)胞微環(huán)境處于非缺氧狀態(tài)，隨著腫瘤組織的不斷生長，腫瘤細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子基因活化增強(qiáng)。HIF-1蛋白可促使腫瘤細(xì)胞形成，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但其促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的具體分子機(jī)制尚需繼續(xù)深入研究證實(shí)[18-19]。由此可見，ATAD3A、HIF-1可作為結(jié)直腸癌惡性程度的重要監(jiān)測指標(biāo)，可為尋找結(jié)直腸癌的有效治療靶點(diǎn)提供有力證據(jù)。隨著HIF-1對ATAD3A調(diào)控作用的深入研究，有望為結(jié)直腸癌的治療開辟新途徑。但本研究未進(jìn)行大樣本研究，且研究的時間間隔較短，故需要后續(xù)進(jìn)行多中心、大樣本及較長的時間跨度或多時間段的進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，ATAD3A、HIF-1在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)，腫瘤直徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度為中低分化結(jié)直腸癌患者結(jié)直腸癌組織中ATAD3A、HIF-1的陽性表達(dá)率較高，可作為結(jié)直腸癌患者潛在的治療靶點(diǎn)。